Name: 4d microscopy: unraveling caenorhabditis elegans embryonic development using nomarski microscopy
Uploaded: 2020-10-08T13:00:00
Duration: 8 min 38 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about 4D Microscopy: Unraveling Caenorhabditis elegans Embryonic Development Using Nomarski Microscopy at JoVE.com

लेखक Rioja Salud फाउंडेशन (Fondos FEDER) और स्पेनिश Ministerio de Ciencia, Innovación y Universidades (MCIU) (Grant PGC2018-094276-B-I00) से समर्थन स्वीकार करना चाहते हैं। Cristina Romero Aranda AECC (Asociación Española Contra el Cáncer) से एक फैलोशिप द्वारा वित्त पोषित है।

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लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है।

आधुनिक जीव विज्ञान में प्रमुख चुनौतियों में से एक बहुकोशिकीय जीवों के विकास को समझना है। C. elegans विकासशील भ्रूण में सेल प्रसार और सेल भेदभाव के बीच ठीक समन्वय का अध्ययन करने के लिए सबसे उपयुक्त मॉडल में से एक के रूप में उभरा है। ऑप्टिकल दृष्टिकोण से, इसका पारदर्शी शरीर और इसका छोटा आकार इस सूत्रकृमि को डीआईसी माइक्रोस्कोपी के लिए एक आदर्श नमूना बनाता है। इसी तरह की विशेषताओं वाले अन्य जीवों को भी 4 डी माइक्रोस्कोपी विश्लेषण 11,12,13,14,15,16 के अधीन किया गया है।
उन विकासात्मक अध्ययनों के लिए, या तो आगे या रिवर्स आनुवांशिकी द्वारा जीन निष्क्रियता भ्रूणजनन में इसकी भागीदारी के लिए एक सुराग प्रदान करती है। एक बार जब एक जीन विकास में भूमिका निभाने के लिए साबित हो जाता है, तो अगला कदम सही शरीर योजना की स्थापना में अपनी सटीक भूमिका को परिभाषित करना है। Immunostaining अधिकांश मॉडलों के लिए चयनित दृष्टिकोण है। यह तकनीक सेल भेदभाव या विशिष्ट मार्करों की अभिव्यक्ति में समस्याओं को स्पष्ट करती है। हालांकि, इस दृष्टिकोण की एक प्रमुख सीमा यह है कि यह केवल विकास में एक निश्चित बिंदु पर एक या अधिक मार्करों की अभिव्यक्ति का एक स्थिर दृश्य प्रदान करता है। विकास के दौरान इन मार्करों का एक गतिशील दृश्य केवल अलग-अलग समय बिंदुओं पर विभिन्न भ्रूणों को धुंधला करके प्राप्त किया जा सकता है। इसके अलावा, इस तरह के निश्चित नमूनों में सेल वंश पुनर्निर्माण संभव नहीं है।
4 डी माइक्रोस्कोपी भ्रूण विकास का अध्ययन करने के लिए एक पूरक दृष्टिकोण है। यह तकनीक एक सेल स्तर के संकल्प पर विकास गतिशीलता का खुलासा करती है। भ्रूण में कोई भी दोष जैसे कि स्पिंडल अभिविन्यास, सेल माइग्रेशन, एपोप्टोसिस, सेल भाग्य विनिर्देश, आदि में समस्याएं एक 4 डी फिल्म में दिखाई देंगी जिसे शोधकर्ता द्वारा आगे और पीछे की ओर देखा जा सकता है, मात्रा और स्कोर किया जा सकता है। इस तकनीक का उपयोग करते हुए, भ्रूण में लगभग प्रत्येक कोशिका का पालन उस क्षण तक किया जा सकता है जब भ्रूण स्थानांतरित होना शुरू हो जाता है। भ्रूण केवल दृश्य प्रकाश और नोमार्स्की ऑप्टिक्स के साथ 4 डी माइक्रोस्कोपी के अधीन होते हैं, जो फोटोडैमेज का सामना नहीं करते हैं। फ्लोरोसेंट स्कैन को रिकॉर्डिंग के भीतर भी इंटरकैलेटेड किया जा सकता है ताकि यह पता लगाया जा सके कि जीन कब और कहां व्यक्त किया जाता है। भ्रूण जो महत्वपूर्ण फोटोडैमेज से पीड़ित होते हैं, उन्हें सेल चक्र विस्तार द्वारा पहचाना जाता है जो एक मानक डब्ल्यूटी वंश भ्रूण की तुलना में मजबूत यूवी विकिरण का कारण बनता है। उस मामले में, फोटोडैमेज को यूवी लैंप तीव्रता को कम करके और कैमरे की संवेदनशीलता या एक्सपोजर समय को बढ़ाकर कम किया जा सकता है। रूपात्मक विशेषताएं और आणविक मार्कर किसी भी उत्परिवर्ती के भ्रूण विकास को स्पष्ट करने में मदद कर सकते हैं।
एक 4 डी माइक्रोस्कोपी प्रणाली की स्थापना प्रयोगशाला में लागू करना आसान है और, कुछ अभ्यास के बाद, सेल गतिशीलता और सेल संस्कृतियों के वंश अनुरेखण और माइक्रोस्कोप क्षेत्र में प्रत्येक सेल के संकल्प स्तर पर पारदर्शी नमूनों को जीवित करने का एक बेजोड़ विश्लेषण सक्षम बनाता है। डीआईसी छवियों पर सेल वंश अनुरेखण अभी भी हाथ से संसाधित किया जाता है। यह समय लेने वाला है और, हालांकि सॉफ़्टवेयर वंश त्रुटियों का पता लगाता है जैसे कि एक ही सेल को चिह्नित करने वाली विभिन्न वंश शाखाएं, गलतियां संभव हैं। जबकि जीएफपी-लेबल कोशिकाओं का स्वचालित पता लगाना अच्छी तरह से विकसित किया गया है2, अचिह्नित कोशिकाओं और दृश्यमान प्रकाश छवियों के आधार पर पूरक वंश अनुरेखण सॉफ्टवेयर अभी भी प्रारंभिक चरण में है और पूर्ण भ्रूण विश्लेषण के लिए वास्तव में उपयोगी नहीं है। किसी भी संदेह के बिना, दृश्यमान प्रकाश माइक्रोस्कोपी के क्षेत्र में छवि पहचान प्रणालियों का आवेदन इस क्षेत्र में एक महान प्रगति लाएगा।

4 डी माइक्रोस्कोपी एक मल्टीफोकल टाइम-लैप्स रिकॉर्डिंग सिस्टम है जो शोधकर्ताओं को स्थानिक रूप से और समय के साथ जैविक नमूने की सेल गतिशीलता को पंजीकृत करने और मापने की अनुमति देता है। सेल संस्कृतियों, खमीर या जीवित ऊतकों को 4 डी विश्लेषण के अधीन किया जा सकता है लेकिन यह तकनीक विशेष रूप से जीवित भ्रूण के विकास का विश्लेषण करने के लिए उपयुक्त है। इस विश्लेषण का संकल्प भ्रूण की हर एक कोशिका के स्तर तक पहुंचता है। प्रत्येक सेल विभाजन का पता लगाया जा सकता है, और समय के साथ सेल आंदोलनों का पता लगाया जा सकता है। कोशिकाओं के भाग्य का मूल्यांकन उस स्थिति और आकार के अनुसार किया जाता है जो कोशिकाएं प्राप्त करती हैं। नोमार्स्की ऑप्टिक्स का उपयोग ऑर्थोगोनल रूप से ध्रुवीकृत प्रकाश बीम का उपयोग करके बिना दाग वाले पारदर्शी नमूनों के विपरीत को बढ़ाता है जो फोकल प्लेन में हस्तक्षेप करते हैं। परिणामी छवियां तीन आयामी दिखाई देती हैं, जो एक तरफ प्रकाशित होती हैं।
नाभिक का स्वत: पता लगाने और सेल वंशों के उत्पादन के लिए कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी और जीएफपी ट्रांसजेनिक जानवरों के उपयोग पर आधारित अन्य तरीकों कोविकसित किया गया है। उन प्रणालियों का लाभ स्पष्ट है: सॉफ़्टवेयर समय की अवधि में प्रत्येक नाभिक को मैन्युअल रूप से चिह्नित करने की आवश्यकता को बहुत अधिक ओवरराइड करता है (हालांकि देर से चरणों के दौरान कुछ मैनुअल पर्यवेक्षण की आवश्यकता होती है)। हालांकि, सेल आकार या झिल्ली गतिशीलता में परिवर्तन से जुड़ी सेलुलर प्रक्रियाएं, जैसे कि सेल भेदभाव, प्रवासन, एपोप्टोसिस या लाश निगलने के दौरान होने वाली प्रक्रियाएं, फ्लोरोसेंट-लेबल वाली नाभिक छवियों में एक काली पृष्ठभूमि के रूप में छिपी रहती हैं।
इसके विपरीत, 4 डी नोमार्स्की माइक्रोस्कोपी (जिसे डीआईसी माइक्रोस्कोपी, डिफरेंशियल इंटरफेरेंस कंट्रास्ट माइक्रोस्कोपी भी कहा जाता है) नाभिक और सेल आकार दोनों परिवर्तनों को दिखाता है जो जंगली प्रकार या उत्परिवर्ती जानवरों के विकास के दौरान होते हैं। यह मानक माइक्रोस्कोप का उपयोग करके सेल वंश ट्रेसिंग की अनुमति देता है, केवल संचारित प्रकाश को नियोजित करता है। विशिष्ट अभिव्यक्ति पैटर्न दिखाने के अलावा ट्रांसजेनिक जानवरों का उपयोग करने की कोई सामान्य आवश्यकता नहीं है, जिस मामले में फ्लोरोसेंट स्कैन को इंटरकैलेटेड किया जा सकता है। इसलिए, यह गतिशील सेल प्रक्रियाओं जैसे भ्रूणजनन या एपोप्टोसिस पर काम करने वाली कई प्रयोगशालाओं के लिए इष्टतम दृष्टिकोण हो सकता है जिसे डीआईसी माइक्रोस्कोपी 3,4,5,6,7 के तहत हाइलाइट किया जा सकता है।
कई लचीले और उपयोगकर्ता के अनुकूल कार्यक्रम माइक्रोस्कोपिक छवियों को कैप्चर करने और रिकॉर्ड किए गए नमूने में सेल वंश, 3 डी मॉडल, सेल माइग्रेशन पथ, आदि के पुनर्निर्माण के लिए उपलब्ध हैं। एक मानक प्रयोग में, छवियों को फोकल विमानों की एक श्रृंखला में अधिग्रहित किया जाता है, एक स्थिर दूरी पर, जिसकी संख्या नमूना मोटाई पर निर्भर करती है। विश्लेषण के अस्थायी संकल्प स्कैन आवृत्ति में वृद्धि के द्वारा अनुकूलित किया जा सकता है। कंप्यूटर भंडारण क्षमता के अलावा रिकॉर्डिंग की अवधि के लिए वस्तुतः कोई सीमा नहीं है। उदाहरण के लिए, C. elegans भ्रूण विकास विश्लेषण के लिए, हम नियमित रूप से 30 फोकल विमानों (1 माइक्रोन-चरण प्रत्येक) पर छवियों को प्राप्त करते हैं, 12 घंटे के लिए हर 30 सेकंड में।
इन प्रणालियों को कई जानवरों के भ्रूण के विश्लेषण पर लागू किया गया है जैसे कि केनोरहाबडिटिस एलिगन्स 8,9,10, ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर11, अन्य नेमाटोड भ्रूण12,13, टार्डीग्रेड14,15 और यहां तक कि शुरुआती माउस भ्रूण16। एकमात्र आवश्यकता माइक्रोस्कोप के तहत स्लाइड तैयारी पर विकसित करने में सक्षम एक पारदर्शी भ्रूण होना है।
संक्षेप में, डीआईसी आधारित 4 डी माइक्रोस्कोपी 1) छोटे, पारदर्शी जानवरों के भ्रूण विकास का विश्लेषण करने के लिए विशेष रूप से उपयोगी है: सेल वंश, सेल माइग्रेशन पथों का पता लगाना, 3 डी मॉडल उत्पन्न करना, आदि; 2) जीन अभिव्यक्ति पैटर्न को परिभाषित करना; 3) सेल संस्कृति गतिशीलता का अध्ययन, खमीर से मानव कोशिकाओं के लिए; 4) ऊतक गतिशीलता या भ्रूण के टुकड़ों का विश्लेषण; 5) कोशिका मृत्यु कैनेटीक्स और लाश निगलने की मात्रा; और 6) भ्रूण विकास ता्मक विशेषताओं के आधार पर तुलनात्मक फाइलोजेनी विश्लेषण करना। यदि इनमें से किसी भी विषय (या समान वाले) में रुचि है, तो 4 डी माइक्रोस्कोपी का उपयोग किया जा सकता है।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Caenorhabditis elegans (N2)</td>
			<td>GCG (Caenorhabditis Genetics Center)</td>
			<td>N2</td>
			<td>WT C. elegans strain. Can be requested at GCG (Caenorhabditis Genetics Center): https://cgc.umn.edu/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caenorhabditis elegans (VZ454)</td>
			<td>GCG (Caenorhabditis Genetics Center)</td>
			<td>VZ454</td>
			<td>gsr-1(tm3574) C. elegans mutant strain. Can be requested at GCG (Caenorhabditis Genetics Center): https://cgc.umn.edu/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Lineage Tracing software</td>
			<td>SIMI</td>
			<td>Simi BioCell</td>
			<td>This is the software to reconstruct the embryo cell lineage. For a detailed explanation check at: http://www.simi.com/en/products/cell-research/simi-biocell.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope camera</td>
			<td>Hamamatsu</td>
			<td>Orca-R2</td>
			<td>Miscroscope camera for both transmitted and UV light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope control software</td>
			<td>Caenotec</td>
			<td>Time to Live</td>
			<td>This software controls the microscope to perform the 4D image capture. Can be requested at: Caenotec Prof. Ralf Schnabel 
			Kleine Dorfstr. 9 38312 B&#246;r&#223;um, Germany, Ph: ++49 151 11653356 r.schnabel(at)tu-bs.de</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope control software</td>
			<td>Micro-manager</td>
			<td>Micro-manager</td>
			<td>This software controls the microscope to perform the 4D image capture. Can be downloaded at: https://micro-manager.org/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Motorized microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica DM6000</td>
			<td>Motorized upright microscope to perform 4D microscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard equipment in a Molecular Biology lab.</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>MZ16FA</td>
			<td>Steromicroscope to manipulate nematodes and prepare embryos.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

4d microscopy: unraveling caenorhabditis elegans embryonic development using nomarski microscopy

4 डी माइक्रोस्कोपी विभिन्न जानवरों में भ्रूण विकास प्रक्रिया को उजागर करने के लिए एक अमूल्य उपकरण है। पिछले दशकों में, Caenorhabditis elegans विकास का अध्ययन करने के लिए सबसे अच्छे मॉडल में से एक के रूप में उभरा है। ऑप्टिकल दृष्टिकोण से, इसका आकार और पारदर्शी शरीर इस नेमाटोड को डीआईसी (डिफरेंशियल इंटरफेरेंस कंट्रास्ट या नोमार्स्की) माइक्रोस्कोपी के लिए एक आदर्श नमूना बनाता है। यह लेख सी एलिगन्स नेमाटोड को बढ़ाने, उनके भ्रूण को तैयार करने और बढ़ाने, 4 डी माइक्रोस्कोपी और सेल वंश ट्रेसिंग करने के लिए एक प्रोटोकॉल दिखाता है। विधि नोमार्स्की छवियों के मल्टीफोकल टाइम-लैप्स रिकॉर्ड और विशिष्ट सॉफ़्टवेयर के साथ विश्लेषण पर आधारित है। यह तकनीक सेलुलर स्तर पर भ्रूण विकासात्मक गतिशीलता का खुलासा करती है। उत्परिवर्ती में किसी भी भ्रूण दोष, जैसे कि स्पिंडल अभिविन्यास, सेल माइग्रेशन, एपोप्टोसिस या सेल भाग्य विनिर्देश में समस्याएं, कुशलतापूर्वक पता लगाया जा सकता है और स्कोर किया जा सकता है। भ्रूण की लगभग हर एक कोशिका का पालन उस क्षण तक किया जा सकता है जब भ्रूण स्थानांतरित होना शुरू हो जाता है। 4 डी डीआईसी माइक्रोस्कोपी द्वारा सी एलिगन्स भ्रूण के पूर्ण सेल वंश का पता लगाना श्रमसाध्य है, लेकिन विशिष्ट सॉफ़्टवेयर का उपयोग इस कार्य को बहुत सुविधाजनक बनाता है। इसके अलावा, इस तकनीक को प्रयोगशाला में लागू करना आसान है। 4 डी माइक्रोस्कोपी एक बहुमुखी उपकरण है और भ्रूण के विकास का एक अद्वितीय विश्लेषण करने की संभावना को खोलता है।

जीन जीएसआर -1 के लिए एक सी एलिगेंस उत्परिवर्ती के भ्रूण विकास को चिह्नित करने के लिए, जो एंजाइम ग्लूटाथियोन रिडक्टेस को एन्कोड करता है, जो कम ग्लूटाथियोन (जीएसएच) को पुनर्जीवित करने के लिए आवश्यक है और नेमाटोड में रेडॉक्स होमियोस्टैसिस को बनाए रखने में शामिल है, हमने जीएसआर -1 (टीएम 3574) विलोपन उत्परिवर्ती की 4 डी माइक्रोस्कोपी का प्रदर्शन किया जो एक प्रारंभिक भ्रूण गिरफ्तारी फेनोटाइप18 का कारण बनता है। दोनों WT और संतुलित gsr-1 (tm3574) उत्परिवर्ती C. elegans सूत्रकृमि NGM प्लेटों पर उगाए गए थे जो खाद्य स्रोत17 के रूप में ई कोलाई OP50 के साथ बीजित थे। जीएसआर -1 (टीएम 3574) कीड़े को दो पीढ़ियों के लिए 20 डिग्री सेल्सियस पर विषमयुग्मजी के रूप में उगाया गया था और फिर होमोजीगस कीड़े (जो मातृ भार के लिए वयस्कता के लिए धन्यवाद तक बढ़ने में सक्षम हैं) को भ्रूण विश्लेषण से पहले एक रात भर के इनक्यूबेशन के लिए 25 डिग्री सेल्सियस में स्थानांतरित कर दिया गया था। संक्षेपण से बचने के लिए कार्डबोर्ड बक्से के भीतर वर्म प्लेटों को इनक्यूबेट किया गया था (चित्रा 1)। ग्रैविड नेमाटोड को युवा भ्रूण निकालने के लिए खुला काट दिया गया था।
समान परिस्थितियों में उत्परिवर्ती बनाम रूढ़िवादी डब्ल्यूटी के भ्रूण विकास की तुलना करने के लिए, एक डब्ल्यूटी (नियंत्रण के रूप में) और एक जीएसआर -1 (टीएम 3574) भ्रूण को एक दूसरे के बगल में एक ही तैयारी पर रखा गया था। 4 डी माइक्रोस्कोपी वर्कफ़्लो एक मानक motorized सीधा माइक्रोस्कोप डीआईसी प्रकाशिकी के साथ outfitted पर चलाया गया था. माइक्रोस्कोप नियंत्रण कार्यक्रम पर चयनित रिकॉर्डिंग पैरामीटर थे: 1 माइक्रोन दूरी पर 30 फोकल विमानों के जेड-स्टैक प्रत्येक, प्रत्येक जेड-स्टैक की शुरुआत के बीच 30 सेकंड के अंतराल और 1500 जेड-स्टैक (रिकॉर्डिंग के 12.5 घंटे)। रिकॉर्डिंग तापमान को 25 डिग्री सेल्सियस (कमरे में और माइक्रोस्कोप चरण दोनों में) में समायोजित किया गया था (चित्रा 2)।
एक बार रिकॉर्डिंग पूरी हो जाने के बाद, छवियों की फ़ाइल को खोला गया था, और वीडियो विंडो (चित्रा 4) में दिखाए गए सेल नाभिक पर क्लिक करके वंश अनुरेखण सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके सेल वंश का पुनर्निर्माण किया गया था। ट्रेस किए गए जीएसआर -1 (टीएम 3574) उत्परिवर्ती भ्रूण सेल वंश की तुलना पृष्ठभूमि में दर्शाए गए सी एलिगन्स डब्ल्यूटी वंश के साथ की गई थी। एक प्रमुख परिणाम भ्रूण के विकास के दौरान कोशिका चक्र की एक प्रगतिशील देरी का पता लगाना था। नतीजतन, उत्परिवर्ती भ्रूण को मध्यवर्ती चरणों में गिरफ्तार किया गया जबकि डब्ल्यूटी भ्रूण ने प्रगति की और अंत में लार्वा के रूप में हैच किया।
माइक्रोस्कोप के तहत भ्रूण की तैयारी और प्रत्यक्ष अवलोकन या देर से भ्रूण मार्करों के खिलाफ एंटीबॉडी के साथ इम्यूनोस्टेनिंग डब्ल्यूटी की तुलना में उत्परिवर्ती में युवा भ्रूण के उच्च प्रतिशत की उपस्थिति को प्रकट कर सकता है। भ्रूण की गिरफ्तारी को तब सबसे प्रशंसनीय स्पष्टीकरण के रूप में अनुमान लगाया जा सकता है। हालांकि, सेल चक्र देरी का प्रत्यक्ष प्रमाण और सटीक परिमाणीकरण केवल सुरुचिपूर्ण और आसानी से दिखाया जा सकता है और 4 डी माइक्रोस्कोपी प्रयोग के माध्यम से परिमाणित किया जा सकता है। भ्रूण विकास की अन्य महत्वपूर्ण विशेषताएं जैसे सेल भेदभाव या एपोप्टोसिस (चित्रा 5) को 4 डी माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके गतिशील तरीके से भी देखा जा सकता है जो एक ही प्रयोग में विकास के कई पहलुओं का विस्तृत विश्लेषण प्रदान करता है।
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61736/61736fig01.jpg"> चित्रा 1: C. elegans नेमाटोड प्रयोगशाला की स्थिति में बढ़ रहा है। नेमाटोड ई कोलाई-सीडेड एनजीएम प्लेटों पर उगाए जाते हैं, कार्डबोर्ड बक्से में संग्रहीत होते हैं और 15 डिग्री सेल्सियस, 20 डिग्री सेल्सियस या 25 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट किए जाते हैं। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61736/61736fig01large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61736/61736fig02.jpg"> चित्रा 2: 4 डी माइक्रोस्कोपी रिकॉर्डिंग सॉफ्टवेयर का स्क्रीनशॉट. दो अलग-अलग माइक्रोस्कोप नियंत्रण सॉफ्टवेयर प्रोग्राम (ए और बी) का उदाहरण। ये प्रोग्राम 4 डी माइक्रोस्कोपी रिकॉर्डिंग के दौरान माइक्रोस्कोप और छवि कैप्चरिंग को नियंत्रित करने के लिए वर्कफ़्लो बनाते हैं। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61736/61736fig02large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61736/61736fig03.jpg"> चित्रा 3: आगर पैड की तैयारी और सी elegans भ्रूण दिखा के बढ़ते के सीरियल तस्वीरें. A. तैयार आगर ट्यूब. बी-सी। आगर पैड की तैयारी। डी। आंशिक रूप से पानी से भरा स्लाइड। ई। पेट्रोलियम जेली के साथ स्लाइड सील. एफ। अंतिम तैयारी। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61736/61736fig03large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61736/61736fig04.jpg"> चित्रा 4: सेल वंश अनुरेखक सॉफ्टवेयर के सीरियल स्क्रीन शॉट्स. कार्यक्रम एक सेल चक्र देरी उत्परिवर्ती (बाएं) और एक डब्ल्यूटी (दाएं) सी एलिगन्स भ्रूण के भ्रूण सेल वंश के पुनर्निर्माण की अनुमति देता है। एक। विकास का प्रारंभिक चरण। बी-सी। दोनों भ्रूणों का विकास समय के साथ आगे बढ़ता है। डी डब्ल्यूटी भ्रूण ठीक से विकसित होता है और बढ़ाव शुरू कर देता है जबकि उत्परिवर्ती गिरफ्तार करता है। सभी मामलों में प्रोग्राम वीडियो विंडो और वंश विंडो प्रदर्शित करता है। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61736/61736fig04large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61736/61736fig05v2.jpg"> चित्रा 5: एक C. elegans WT भ्रूण में एपोप्टोटिक कोशिकाओं की मसूर अपवर्तन आकार. रूपात्मक विशेषताओं द्वारा परिभाषित सेल भाग्य का मूल्यांकन 4 डी माइक्रोस्कोपी द्वारा किया जा सकता है। छवि सेम चरण में एक सी elegans भ्रूण से पता चलता है. जीवित कोशिकाएं एक दानेदार साइटोप्लाज्म से घिरे चिकनी आकार के नाभिक दिखाती हैं। इसके विपरीत, एपोप्टोटिक कोशिकाएं (पीले तीर) संघनित होती हैं और एक दाल जैसी, अपवर्तित आकार को अपनाती हैं। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61736/61736fig05large.jpg" target="_blank">कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>

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4D Microscopy: Unraveling Caenorhabditis elegans Embryonic Development Using Nomarski Microscopy

यहां, हम Caenorhabditis elegans भ्रूण को तैयार करने और बढ़ते करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं, 4 डी माइक्रोस्कोप के तहत विकास को रिकॉर्ड करते हैं और सेल वंश का पता लगाते हैं।

4 डी माइक्रोस्कोपी: नोमार्स्की माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके Caenorhabditis elegans भ्रूण विकास को उजागर करना

4D microscopy is an invaluable tool for unraveling the embryonic developmental process in different animals. Over the last decades, Caenorhabditis elegans ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

4D Microscopy: Unraveling Caenorhabditis elegans Embryonic Development Using Nomarski Microscopy

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