Name: visualizing the calcitonin gene-related peptide immunoreactive innervation of the rat cranial dura mater with immunofluorescence and neural tracing
Uploaded: 2021-01-06T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Visualizing the Calcitonin Gene-Related Peptide Immunoreactive Innervation of the Rat Cranial Dura Mater with Immunofluorescence and Neural Tracing at JoVE.co

وقد تم دعم هذه الدراسة من خلال مشروع البرنامج الوطني للبحث والتطوير الرئيسي في الصين (رمز المشروع رقم 2019YFC1709103؛ رقم 2018YFC1707804) والمؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (رمز المشروع رقم 81774211؛ رقم 81774432؛ رقم 81801561).

تمت الموافقة على هذه الدراسة من قبل لجنة الأخلاقيات في معهد الوخز بالإبر و Moxibustion ، الأكاديمية الصينية للعلوم الطبية الصينية (الرقم المرجعي D2018-09-29-1). وقد أجريت جميع الإجراءات وفقا لدليل المعاهد الوطنية للصحة لرعاية واستخدام المختبرات (مطبعة الأكاديمية الوطنية، واشنطن، D.C، 1996). تم استخدام ?...

<ol>
	<li>Kekere, V., Alsayouri, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anatomy,+Head+and+Neck,+Dura+Mater.">Anatomy, Head and Neck, Dura Mater.</a> StatPearls. , (2020).</li><li>Shimizu, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+and+origin+of+TRPV1+receptor-containing+nerve+fibers+in+the+dura+mater+of+rat.">Distribution and origin of TRPV1 receptor-containing nerve fibers in the dura mater of rat.</a> Brain Research. 1173, 84-91 (2007).</li><li>Jacobs, B., Dussor, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurovascular+contributions+to+migraine:+moving+beyond+vasodilation.">Neurovascular contributions to migraine: moving beyond vasodilation.</a> Neuroscience. 338, 130-144 (2016).</li><li>Dodick, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+phase-by-phase+review+of+migraine+pathophysiology.">A phase-by-phase review of migraine pathophysiology.</a> Headache. 58, 4-16 (2018).</li><li>Amin, F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+the+pathophysiological+mechanisms+of+migraine+attacks+induced+by+pituitary+adenylate+cyclase-activating+polypeptide-38.">Investigation of the pathophysiological mechanisms of migraine attacks induced by pituitary adenylate cyclase-activating polypeptide-38.</a> Brain: A Journal of Neurology. 137, 779-794 (2014).</li><li>Keller, J. T., Marfurt, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peptidergic+and+serotoninergic+innervation+of+the+rat+dura+mater.">Peptidergic and serotoninergic innervation of the rat dura mater.</a> The Journal of Comparative Neurology. 309 (4), 515-534 (1991).</li><li>Messlinger, K., Hanesch, U., Baumg&#228;rtel, M., Trost, B., Schmidt, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innervation+of+the+dura+mater+encephali+of+cat+and+rat:+ultrastructure+and+calcitonin+gene-related+peptide-like+and+substance+P-like+immunoreactivity.">Innervation of the dura mater encephali of cat and rat: ultrastructure and calcitonin gene-related peptide-like and substance P-like immunoreactivity.</a> Anatomy and Embryology. 188 (3), 219-237 (1993).</li><li>Lennerz, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcitonin+receptor-like+receptor+(CLR),+receptor+activity-modifying+protein+1+(RAMP1),+and+calcitonin+gene-related+peptide+(CGRP)+immunoreactivity+in+the+rat+trigeminovascular+system:+differences+between+peripheral+and+central+CGRP+receptor+distribution.">Calcitonin receptor-like receptor (CLR), receptor activity-modifying protein 1 (RAMP1), and calcitonin gene-related peptide (CGRP) immunoreactivity in the rat trigeminovascular system: differences between peripheral and central CGRP receptor distribution.</a> The Journal of Comparative Neurology. 507 (3), 1277-1299 (2008).</li><li>Eftekhari, S., Warfvinge, K., Blixt, F. W., Edvinsson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+nerve+fibers+storing+CGRP+and+CGRP+receptors+in+the+peripheral+trigeminovascular+system.">Differentiation of nerve fibers storing CGRP and CGRP receptors in the peripheral trigeminovascular system.</a> The Journal of Pain: Official Journal of the American Pain Society. 14 (11), 1289-1303 (2013).</li><li>Xu, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+distribution+of+blood+vessels+and+nerve+fibers+in+the+skin+tissues+of+acupoint+"Taichong"+(LR3)+in+the+rat.">Characteristics of distribution of blood vessels and nerve fibers in the skin tissues of acupoint "Taichong" (LR3) in the rat.</a> Zhen Ci Yan Jiu. 41 (6), 486-491 (2016).</li><li>Cui, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+expression+of+calcitonin+gene-related+peptide+on+the+neurons+associated+Zusanli+(ST+36)+in+rats.">The expression of calcitonin gene-related peptide on the neurons associated Zusanli (ST 36) in rats.</a> Chinese Journal of Integrative Medicine. 21 (8), 630-634 (2015).</li><li>Andres, K. H., von D&#252;ring, M., Muszynski, K., Schmidt, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nerve+fibres+and+their+terminals+of+the+dura+mater+encephali+of+the+rat.">Nerve fibres and their terminals of the dura mater encephali of the rat.</a> Anatomy and Embryology. 175 (3), 289-301 (1987).</li><li>Leng, C., Chen, L., Li, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alteration+of+P2X1-6+receptor+expression+in+retrograde+Fluorogold-labeled+DRG+neurons+from+rat+chronic+neuropathic+pain+model.">Alteration of P2X1-6 receptor expression in retrograde Fluorogold-labeled DRG neurons from rat chronic neuropathic pain model.</a> Biomedical Reports. 10 (4), 225-230 (2019).</li><li>Huang, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Factors+influencing+the+retrograde+labeling+of+retinal+ganglion+cells+with+fluorogold+in+an+animal+optic+nerve+crush+model.">Factors influencing the retrograde labeling of retinal ganglion cells with fluorogold in an animal optic nerve crush model.</a> Ophthalmic Research. 51 (4), 173-178 (2014).</li><li>Huang, T. L., Chang, C. H., Lin, K. H., Sheu, M. M., Tsai, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lack+of+protective+effect+of+local+administration+of+triamcinolone+or+systemic+treatment+with+methylprednisolone+against+damages+caused+by+optic+nerve+crush+in+rats.">Lack of protective effect of local administration of triamcinolone or systemic treatment with methylprednisolone against damages caused by optic nerve crush in rats.</a> Experimental Eye Research. 92 (2), 112-119 (2011).</li><li>Tsai, R. K., Chang, C. H., Wang, H. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotective+effects+of+recombinant+human+granulocyte+colony-stimulating+factor+(G-CSF)+in+neurodegeneration+after+optic+nerve+crush+in+rats.">Neuroprotective effects of recombinant human granulocyte colony-stimulating factor (G-CSF) in neurodegeneration after optic nerve crush in rats.</a> Experimental Eye Research. 87 (3), 242-250 (2008).</li><li>Iyengar, S., Ossipov, M. H., Johnson, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+calcitonin+gene-related+peptide+in+peripheral+and+central+pain+mechanisms+including+migraine.">The role of calcitonin gene-related peptide in peripheral and central pain mechanisms including migraine.</a> Pain. 158 (4), 543-559 (2017).</li><li>Russell, F. A., King, R., Smillie, S. J., Kodji, X., Brain, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcitonin+gene-related+peptide:+physiology+and+pathophysiology.">Calcitonin gene-related peptide: physiology and pathophysiology.</a> Physiological Reviews. 94 (4), 1099-1142 (2014).</li><li>Kou, Z. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alterations+in+the+neural+circuits+from+peripheral+afferents+to+the+spinal+cord:+possible+implications+for+diabetic+polyneuropathy+in+streptozotocin-induced+type+1+diabetic+rats.">Alterations in the neural circuits from peripheral afferents to the spinal cord: possible implications for diabetic polyneuropathy in streptozotocin-induced type 1 diabetic rats.</a> Frontiers in neural circuits. 8, 6 (2014).</li><li>Alarcon-Martinez, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Capillary+pericytes+express+&#945;-smooth+muscle+actin,+which+requires+prevention+of+filamentous-actin+depolymerization+for+detection.">Capillary pericytes express &#945;-smooth muscle actin, which requires prevention of filamentous-actin depolymerization for detection.</a> eLife. 7, 34861 (2018).</li><li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+approach+for+examining+the+neurovascular+structure+with+phalloidin+and+calcitonin+gene-related+peptide+in+the+rat+cranial+dura+mater.">A new approach for examining the neurovascular structure with phalloidin and calcitonin gene-related peptide in the rat cranial dura mater.</a> Journal of Molecular Histology. 51 (5), 541-548 (2020).</li><li>Liu, Y., Broman, J., Edvinsson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+projections+of+sensory+innervation+of+the+rat+superior+sagittal+sinus.">Central projections of sensory innervation of the rat superior sagittal sinus.</a> Neuroscience. 129, 431-437 (2004).</li><li>Liu, Y., Broman, J., Edvinsson, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+projections+of+the+sensory+innervation+of+the+rat+middle+meningeal+artery.">Central projections of the sensory innervation of the rat middle meningeal artery.</a> Brain Research. 1208, 103-110 (2008).</li><li>Schmued, L. C., Fallon, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluoro-Gold:+a+new+fluorescent+retrograde+axonal+tracer+with+numerous+unique+properties.">Fluoro-Gold: a new fluorescent retrograde axonal tracer with numerous unique properties.</a> Brain Research. 377 (1), 147-154 (1986).</li></ol>

في هذه الدراسة، أثبتنا بنجاح توزيع وأصل الألياف العصبية النشطة المناعية CGRP في طرية الجمجمة باستخدام الفلورة المناعية، وإعادة الإعمار ثلاثي الأبعاد ونهج التتبع العصبي مع الأجسام المضادة CGRP والمتتبع العصبي FG، وتوفير الأدلة النسيجية والكيميائية لفهم أفضل لشبكة الأوعية الدموية العصبية ال...

إن الطرية القحفية هي الطبقة الخارجية من السحايا لحماية الدماغ وتحتوي على أوعية دموية وفيرة وأنواع مختلفة من الألياف العصبية1،2. وقد أظهرت العديد من الدراسات أن حساسة دورا القحفية ماتر قد يكون العامل الرئيسي الذي يؤدي إلى حدوث الصداع, تنطوي على توسع الأوعية غير طبيعية و الداخلي3,4,5. وهكذا، فإن معرفة بنية الأوعية الدموية العصبية في الطرية القحفية أمر مهم لفهم مسببات الأمراض من الصداع، وخاصة بالنسبة للصداع النصفي.
على الرغم من أن ال الداخلي دورا قد درس سابقا مع الكيمياء المناعية التقليدية، والارتباط المكاني للألياف العصبية والأوعية الدموية في الطرية القحفية كانت أقل درس6،7،8،9. من أجل الكشف عن بنية الأوعية الدموية العصبية دورال بمزيد من التفصيل، تم اختيار الببتيد الكالسيتونين الجينات ذات الصلة (CGRP) وphalloidin كعلامات لتلطيخ على التوالي الألياف العصبية الجافية والأوعية الدموية في كامل جبل دورا القحفية ماتر مع immunofluorescence والكيمياء النسيجية الفلورية10. قد يكون الخيار الأمثل للحصول على عرض ثلاثي الأبعاد (3D) للبنية العصبية الوعائية. بالإضافة إلى ذلك ، تم تطبيق الفلوروغولد (FG) على المنطقة المحيطة بالشريان السحائي الأوسط (MMA) في طرية الجمجمة لتحديد أصل الألياف العصبية المناعية CGRP ، وتتبعت إلى العقدة الثلاثية البروم (TG) وعنق الرحم (C) العقدة الجذرية الظهرية (DRGs) ، في حين تم فحص الخلايا العصبية المسماة FG مع CGRP باستخدام immunofluorescence.
كان الهدف من هذه الدراسة هو توفير أداة فعالة للتحقيق في بنية الأوعية الدموية العصبية في طرية الجمجمة ل الداخلي CGRP-المناعي ومصدره. من خلال الاستفادة من شفافة كاملة جبل دورا ماتر والجمع بين immunofluorescence، تتبع الرجعية، وتقنيات confocal، وإعادة الإعمار 3D، كنا نتوقع لتقديم وجهة نظر 3D رواية من بنية الأوعية الدموية العصبية في ماتر دورا الجمجمة. ويمكن مواصلة تقديم هذه النهج المنهجية لاستكشاف مسببات الأمراض من الصداع المختلفة.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 488 donkey anti-mouse IgG (H+L)</td>
			<td>Invitrogen by Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A21202</td>
			<td>Protect from light; RRID: AB_141607</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain stereotaxis instrument</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>SR-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellSens Dimension</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>Version 1.1</td>
			<td>Software of fluorescent microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal imaging system</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>FV1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorogold (FG)</td>
			<td>Fluorochrome</td>
			<td>52-9400</td>
			<td>Protect from light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent imaging system</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>BX53</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezing microtome</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>Microm International&#160;GmbH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Olympus FV10-ASW 4.2a</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>Version 4.2</td>
			<td>Confocal image processing software system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Drill</td>
			<td>Saeyang Microtech</td>
			<td>Marathon-N7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-CGRP</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab81887</td>
			<td>RRID: AB_1658411</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal donkey serum</td>
			<td>Jackson ImmunoResearch</td>
			<td>017-000-121</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phalloidin 568</td>
			<td>Molecular&#160;Probes</td>
			<td>A12380</td>
			<td>Protect from light</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photoshop and&#160; Illustration</td>
			<td>Adobe</td>
			<td>CS6</td>
			<td>Photo editing software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti- Fluorogold</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>ab153</td>
			<td>RRID: AB_90738</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sprague Dawley</td>
			<td>National Institutes for Food and Drug Control</td>
			<td>SCXK (JING) 2014-0013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost plus microscope slides</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>#4951PLUS-001</td>
			<td>25x75x1mm</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

visualizing the calcitonin gene-related peptide immunoreactive innervation of the rat cranial dura mater with immunofluorescence and neural tracing

كان الهدف من هذه الدراسة هو دراسة توزيع وأصل الببتيد المرتبط بالكالسيتونين المرتبط بالجينات (CGRP) - الألياف العصبية الحسية المناعية من طرية الجمجمة باستخدام الفلورة المناعية وإعادة البناء ثلاثي الأبعاد (3D) وتقنية التتبع الرجعي. هنا، كانت الألياف العصبية والأوعية الدموية ملطخة باستخدام تقنيات الفلورسينس المناعي والكيمياء النسيجية مع CGRP والفلورسنت phalloidin، على التوالي. وقد تجلى الارتباط المكاني للألياف العصبية والأوعية الدموية DURAL CGRP-immuoreactive من خلال إعادة البناء ثلاثي الأبعاد. وفي الوقت نفسه، تم الكشف عن أصل الألياف العصبية النشطة المناعية CGRP عن طريق تقنية التتبع العصبي مع فلوروغولد (FG) من المنطقة المحيطة بالشريان السحائي الأوسط (MMA) في طرية الجمجمة إلى العقدة الثلاثية البروم (TG) وعنق الرحم (C) العقدة الجذرية الظهرية (DRGs). وبالإضافة إلى ذلك، تم أيضا فحص الخصائص الكيميائية للخلايا العصبية المسماة FG في TG وDRGs جنبا إلى جنب مع CGRP باستخدام الفلورفلورسينس المناعي المزدوج. الاستفادة من عينة شفافة كاملة جبل وإعادة الإعمار 3D، تبين أن الألياف العصبية CGRP-المناعية والشرايين phalloidin المسمى تشغيل معا أو تشكيل شبكة الأوعية الدموية العصبية دورال بشكل منفصل في عرض 3D، في حين تم العثور على الخلايا العصبية FG المسمى في فروع العيون، الفك العلوي، والمانديبولار من TG، فضلا عن C2-3 DRGs ipsilateral إلى جانب تطبيق التتبع الذي بعض الخلايا العصبية FG المسمى قدم مع التعبير CGRP-المناعي. مع هذه النهج، أظهرنا الخصائص التوزيعية للألياف العصبية النشطة المناعية CGRP حول الأوعية الدموية في طرية الجمجمة، فضلا عن أصل هذه الألياف العصبية من TG وDRGs. من منظور المنهجية ، قد يوفر مرجعا قيما لفهم البنية العصبية الوعائية المعقدة لمدرس الغور القحفي تحت الحالة الفسيولوجية أو المرضية.

بنية الأوعية الدموية العصبية من الأم دورا الجمجمة بعد immunofluorescent والفلورسنت تلطيخ الهستوفيميائي مع CGRP وphalloidin، CGRP-المناعية الألياف العصبية والشرايين الجافية phalloidin المسمى والأنسجة الضامة أظهرت بوضوح في جميع أنحاء كامل جبل الجمجمة دورا ماتر في نمط 3D (<strong class="xfig"...

Watch this Scientific Journal Video about Visualizing the Calcitonin Gene-Related Peptide Immunoreactive Innervation of the Rat Cranial Dura Mater with Immunofluorescence and Neural Tracing at JoVE.co

Visualizing the Calcitonin Gene-Related Peptide Immunoreactive Innervation of the Rat Cranial Dura Mater with Immunofluorescence and Neural Tracing

هنا نقدم بروتوكولا لتصور الارتباط المكاني للببتيد الكالسيتونين ذات الصلة بالجينات (CGRP) - الألياف العصبية المناعية والأوعية الدموية في طرية الجمجمة باستخدام الفلورسينس المناعي والكيمياء الهستوكسية الفلورية مع CGRP و phalloidin ، على التوالي. بالإضافة إلى ذلك ، كان أصل هذه الألياف العصبية رجعيا مع تتبع عصبي فلوري.

تصور الكالسيتونين الجينات ذات الصلة الببتيد المناعي الداخلي من الجرذ الجمجمة دورا ماتر مع Immunofluorescence والتتبع العصبي

The aim of this study was to examine the distribution and origin of the calcitonin gene-related peptide (CGRP)-immunoreactive sensory nerve fibers of the ...

قد يوفر هذا البروتوكول مرجعا منهجيا متغيرا لفهم البنية العصبية الوعائية المعقدة لمدرس الغور القحفي على الحالة الفسيولوجية أو المرضية. الاستفادة من شفافة جبل كامل دورا ماتر، يمكن أن تظهر الارتباط التشنجي من الألياف العصبية المناعية DURAL CGRP والأوعية الدموية في عرض 3D. بعد القتل الرحيم للفئران، تغلغلت عبر القلب مع 100 ملليلتر من 0.9٪ المالحة العادية تليها 250 إلى 300 ملليلتر من 4٪ paraformaldehyde في 0.1 العازلة فوسفات الضرس.عند الانتهاء، قم بإزالة جلد الرأس وفتح الجمجمة لفضح دورة ماتر والجانب الظهري من الدماغ. تشريح الأم دورا الجمجمة على طول جذع الدماغ إلى لمبة الشم في نمط جبل كامل. شطف الطرية القحفية في 0.1 ضرس الفوسفات العازلة لمدة دقيقة واحدة تقريبا واحتضانه في حل حجب.نقل ماتر دورا في الأجسام المضادة للماوس CGRP بين عشية وضحاها. في اليوم التالي، غسل الطرية ثلاث مرات في 0.1 ضرس الفوسفات العازلة. احتضان ماتر دورا في حل مختلط من الحمار المضادة للفأرة اليكسا فلور 488 الأجسام المضادة الثانوية وphalloidin 568 في 0.1.عازل فوسفات المولار يحتوي على مصل حمار طبيعي بنسبة 1٪ و 0.5٪ تريتون X-100 لمدة 1.5 ساعة في درجة حرارة الغرفة. ثم، غسل ماتر دورا ثلاث مرات في 0.1 ضرس الفوسفات العازلة، تقليم حواف، وجبل على الشرائح المجهر. وضع على غطاء زلات مع 50٪ الجلسرين قبل الملاحظة.صورة جبل كله دورا ماتر مع المجهر الفلوري، ثم التقاط صور للألياف العصبية CGRP المناعي والأوعية الدموية phalloidin المسمى في ماتر دورا باستخدام المجهر confocal. حلق رأس الجرذ بشفرة حلاقة كهربائية، ثم ضع قضبان أذن حادة على الجرذ وضعه على الجهاز المجسم. وضع حامل الفم وتطبيق مرهم العيون على العينين.تنظيف الجانب الجراحي من الجلد الرأس باستخدام الإيثانول 75٪، وجعل شق على طول خط الوسط من فروة الرأس. إزالة بلانتا periosteum والأنسجة العضلية بعيدا عن الجمجمة باستخدام القطن العقيم يميل التطبيقات. حفر حفرة صغيرة باستخدام حفرة بور مع بت تلميح جولة على العظام الجدارية والصدغية اليسرى فوق الشريان السحاري الأوسط.بناء بنك حول الحفرة مع أسمنت سيليكات الأسنان وإضافة اثنين من microliters من الفلوروغولد في حفرة حول الشريان السحائي الأوسط مع microsyringe 10 ميكرولتر. غطي الثقب بقطعة صغيرة من إسفنجة الهيموستاتيكي. وضع قطعة من فيلم البارافين على الحفرة وختم حواف مع الشمع العظام.خياطة الجرح مع الخيط العقيم. إبقاء الفئران في منطقة دافئة حتى أنها قد تعافى تماما. ثم أعد الجرذان إلى أقفاصهابعد سبعة أيام البقاء على قيد الحياة، perfuse هذه الفئران مع 0.9٪ المالحة العادية تليها 4٪ paraformaldehyde في 0.1 العازلة فوسفات الضرس. تشريح TG وعنق الرحم 1-4 DRGs، ثم قطع لهم في سمك 30 ميكرومتر على نظام microtome cryostat في الاتجاه القوس. وجبل المقاطع على الشرائح الزجاجية المغلفة السيلان.دائرة المقاطع مع قلم الهسوتشيماكيميكل واحتضانها لمدة 30 دقيقة في حل حجب. نقل العينات إلى حل أرنب المضادة للفلوروغولد والفأر المضادة CGRP الأجسام المضادة واحتضان في أربع درجات مئوية بين عشية وضحاها. في اليوم التالي، اغسل الأقسام ثلاث مرات في 0.1 عازل فوسفات الضرس.احتضان المقاطع المغسولة في حل مختلط من الحمار المضادة للأرانب اليكسا فلور 594 والحمار المضادة للفأرة اليكسا فلور 488 الأجسام المضادة الثانوية. ثم غسلها ثلاث مرات في 0.1 ضرس الفوسفات العازلة وتطبيق زلات الغطاء مع 50٪ الجلسرين للمراقبة. التقاط صور للخلايا العصبية الفلوروغولد المسمى في TG وDRGs تحت إضاءة الأشعة فوق البنفسجية باستخدام المجهر الفلوري.ثم، التقاط صور للفلوروغولد وCGRP وصفت الخلايا العصبية في TG وDRGs. بعد immunofluorescent والفلورسنت تلطيخ الهستهوتشيما مع CGRP وphalloidin، CGRP الألياف العصبية المناعية وphalloidin المسمى الشرايين الجافية والأنسجة الضامة تم تصورها بوضوح في جميع أنحاء جبل كامل الجمجمة دورا ماتر في نمط 3D. تعمل الألياف العصبية المناعية السميكة والرقيقة CGRP بالتوازي مع الشرايين الجافية حول جدار الأوعية الدموية أو بين الأوعية الدموية.بعد سبعة أيام من تطبيق الفلوروغولد على منطقة الشريان السحائي الأوسط ودرا ماتر الجمجمة الجرذ ، تم الكشف عن الخلايا العصبية المسماة بالفلوروغولد في TG وDRGs عنق الرحم على الجانب ipsilateral من تطبيق التتبع ، والذي لوحظ مباشرة تحت إضاءة الأشعة فوق البنفسجية للتنظير الدقيق الفلوري. تم العثور على الخلايا العصبية المسمى فلوروغولد في جميع الفروع الثلاثة من TG، مع تركيزات أعلى على أقسام العيون والفك العلوي ومع تركيزات أقل على الانقسام الفك السفلي. كما لوحظت بعض الخلايا العصبية المسماة بالفلوروغولد في عنق الرحم من اثنين إلى ثلاثة من مجموعات DRGs.هذه الصور ممثل immunofluorescences مزدوجة تظهر الخلايا العصبية الحسية في TG وDRG. الخلايا العصبية المسماة مع FG، CGRP، وكل من FG و CGRP تم تصورها عن طريق الفلورة المناعية المزدوجة. عند محاولة هذا البروتوكول، تذكر تشريح خارج الجافية الجمجمة تماما ولصقه على شريحة في نمط جبل كامل.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Organotypic Cerebellar Cultures: Apoptotic Challenges and Detection

مخيخي الثقافات عضوي النمط : التحديات والكشف عن أفكارك

Organotypic cultures of neuronal tissue were first introduced by Hogue in 1947 1,2 and have constituted a major breakthrough in the field of neuroscience. ...

Investigating the Neural Mechanisms of Aware and Unaware Fear Memory with fMRI

التحقيق في الآليات العصبية للذاكرة الخوف وغير مدركين إدراكا مع الرنين المغناطيسي الوظيفي

Pavlovian fear conditioning is often used in combination with functional magnetic resonance imaging (fMRI) in humans to investigate the neural substrates ...

Optical Recording of Suprathreshold Neural Activity with Single-cell and Single-spike Resolution

بصري تسجيل النشاط العصبي للقرار suprathreshold وحيدة الخلية واحد مسمار-

Signaling of information in the vertebrate central nervous system is often carried by populations of neurons rather than individual neurons. Also ...

Viral Tracing of Genetically Defined Neural Circuitry

تتبع الفيروسية من الدوائر العصبية تعريف وراثيا

Classical methods for studying neuronal circuits are fairly low throughput. Transsynaptic viruses, particularly the pseudorabies (PRV) and rabies virus ...

Optogenetic Perturbation of Neural Activity with Laser Illumination in Semi-intact Drosophila Larvae in Motion

Optogenetic Perturbation of Neural Activity with Laser Illumination in Semi-intact Drosophila Larvae in Motion

Optogenetic اضطراب النشاط العصبي مع إضاءة الليزر في شبه سليمة<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; اليرقات في الحركة

Drosophila larval locomotion is a splendid model system in developmental and physiological neuroscience, by virtue of the genetic accessibility of the ...

Conditional Genetic Transsynaptic Tracing in the Embryonic Mouse Brain

شرطي عبر التشابك الوراثية للبحث عن المفقودين في المخ الجنينية الماوس

Anatomical path tracing is of pivotal importance to decipher the relationship between brain and behavior. Unraveling the formation of neural circuits ...

Time-dependent Increase in the Network Response to the Stimulation of Neuronal Cell Cultures on Micro-electrode Arrays

زيادة تعتمد على الوقت في استجابة الشبكة لتحفيز الثقافات خلية الخلايا العصبية على صفائف الدقيقة الكهربائي

Micro-electrode arrays (MEAs) can be used to investigate drug toxicity, design paradigms for next-generation personalized medicine, and study network ...

Improving the Application of High Molecular Weight Biotinylated Dextran Amine for Thalamocortical Projection Tracing in the Rat

تحسين تطبيق أمين ديكستران بيوتينيلاتيد عالية الوزن الجزيئي للإسقاط ثالاموكورتيكال تتبع في الفئران

High molecular weight biotinylated dextran amine (BDA) has been used as a highly sensitive neuroanatomical tracer for many decades. Since the quality of ...

Simultaneous Recordings of Cortical Local Field Potentials, Electrocardiogram, Electromyogram, and Breathing Rhythm from a Freely Moving Rat

التسجيلات المتزامنة الإمكانات الميدانية المحلية القشرية، ورسم القلب، اليكتروميوجرام وإيقاع من الفئران تتحرك بحرية في التنفس

Monitoring the physiological dynamics of the brain and peripheral tissues is necessary for addressing a number of questions about how the brain controls ...

The Detection of 5-Hydroxymethylcytosine in Neural Stem Cells and Brains of Mice

الكشف عن 5-هيدروكسي ميثيل سيتوسين في الخلايا الجذعية العصبية وعقول الفئران

Multiple&#160;DNA modifications have been identified in the mammalian genome. Of that, 5-methylcytosine and 5-hydroxymethylcytosine-mediated epigenetic ...