Name: horizontal hippocampal slices of the mouse brain
Uploaded: 2020-09-22T14:45:00
Duration: 8 min 59 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Horizontal Hippocampal Slices of the Mouse Brain at JoVE.com

نشكر وحدة الفيزيولوجيا الكهربائية في مركز VIB-KU Leuven لأبحاث الدماغ والأمراض تحت إشراف الدكتور كيمبي ويردا والبروفسور الدكتور جوريس دي ويت لاستخدام مرافق أبحاثهم. وعلاوة على ذلك، نشكر جميع أعضاء مختبر أبحاث قناة أيون ومختبر بطانة الرحم، بطانة الرحم والطب التناسلي في جامعة كو لوفين على مناقشاتهم وتعليقاتهم المفيدة.
وقد تلقى هذا المشروع تمويلا من مؤسسة البحوث الفلاندرز (G.084515N وG.0B1819N إلى J.V.) ومجلس البحوث في جامعة لوفين (C1-funding C14/18/106 إلى J.V.). K.P. هو FWO [PEGASUS]2 ماري Skłodowska-كوري زميل وتلقى التمويل من الاتحاد الأوروبي أفق 2020 برنامج البحوث والابتكار بموجب اتفاق منحة ماري Skłodowska كوري (665501) مع مؤسسة البحوث فلاندرز (FWO) (12T0317N). ك. ه. هو زميل ما بعد الدكتوراه في مؤسسة البحوث فلاندرز، بلجيكا (12U7918N).

ليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.

على الرغم من أن تستخدم عادة بين المجتمع علم الأعصاب, تواجه أيضا مستحضرات شريحة الدماغ مع العديد من العيوب. على سبيل المثال، لم تعد توصيلات المدخلات والمخرجات إلى مناطق الدماغ ذات الأهمية مرتبطة في شريحة الدماغ. وعلاوة على ذلك، بمجرد عزل، الأنسجة يبدأ تتحلل ببطء مع مرور الوقت وهذه العملية يمكن أن تغير الظروف الفسيولوجية لشريحة الدماغ. هذا الموضوع على وجه الخصوص هو مقلق جدا لأن معظم تسجيلات شريحة الدماغ تستغرق عدة دقائق إلى ساعات، مما يؤدي في أيام تجريبية طويلة مع التسجيلات التي أجريت على الأنسجة التي تم عزلها تصل إلى 6-8 ساعة قبل بدء التجربة. وعلاوة على ذلك، يحصل انقطاع السائل النخاعي والدورة الدموية أثناء الاستعدادات شريحة، مما قد يؤدي إلى عدم وجود المركبات الذاتية الهامة داخل شريحة الدماغ. والأكثر وضوحا، فإن إجراء تشريح نفسها قد يسبب تلف الأنسجة الميكانيكية التي قد تعرض للخطر النتائج التي تم الحصول عليها. ومع ذلك ، فإن الفوائد الفعلية من الاستعدادات شريحة الدماغ لا تزال تفوق عيوبها ، وهذا هو السبب في أنها تقدم تقنية عالية القيمة والموظفة في أبحاث علم الأعصاب.
شرائح الدماغ فرس النهر الحادة تقديم تقنية قوية، وبالتالي تستخدم على نطاق واسع للتحقيق في العمليات العصبية من المستوى الجزيئي حتى دراسات دائرة الدماغ المعقدة. ويستند هذا على استئصال الأعصاب المثالي من قرن آمون التي يمكن الحفاظ عليها بسهولة في إعداد شريحة18. وبالتالي، يتم استخدام شرائح الدماغ فرس النهر في مجموعة واسعة من مشاريع البحث العلمي، بما في ذلك فحص المخدرات17، دراسات الخصائص العصبية وs synaptic المشاركة في الوظائف المعرفية40,41, والتحقيقات من ظروف الدماغ المرضية14,42,43. ومع ذلك، هناك مجموعة واسعة من التطبيقات المختلفة أيضاً، مما يؤدي إلى مجموعة واسعة من بروتوكولات إعداد الشرائح المتاحة التي يمكن أن تختلف في مختلف البارامترات، مثل حالات التشريح وشريحة القطع، من بين أمور أخرى. ولذلك، فإن مسألة البحث الدقيق لمشروع علمي يجب أن تحدد من أجل اختيار بروتوكول إعداد شريحة مناسبة.
المروحية الأنسجة يعرض واحدة من أقدم التقنيات المستخدمة من أجل إعداد شرائح الدماغ فرس النهر44,45. وتشمل المزايا الرئيسية لهذا الأسلوب إعداد انخفاض تكلفة المروحية وسريعة وسهلة الاستخدام46. ومع ذلك، تسبب المروحيات الأنسجة الإجهاد الميكانيكية التي تؤدي إلى التعديلات المورفولوجية وموت الخلايا47. وبالمقارنة، فإن الاهتزاز هو آلة مكلفة نوعا ما، ويزداد وقت إعداد الشريحة بشكل كبير مما قد يؤثر على جودة الشريحة. ومع ذلك، فإن الاهتزاز عادة ما يقدم طريقة أكثر لطفا لفصل شرائح من الأنسجة ويسمح للحفاظ على الدماغ تبريد لطيف وأوكسيجين على إجراء العزلة كامل، وبالتالي تحسين خصائص شريحة46. ولذلك، العديد من المجموعات تستخدم معيار هذه التقنية وجلبت بروتوكولات إلى الأمام لإعداد شرائح الدماغ قرن آمون الحاد باستخدام هزاز16،30،48. في حين أن بعض البروتوكولات توفر بعض التفاصيل فقط لشرائح نفسها ولكن بدلا من التركيز على تطبيق محدد من هذه الشريحة إعداد48، والبعض الآخر توفير بروتوكولات شريحة مفصلة التي تختلف في قطع الطائرة أو غيرها من تفاصيل البروتوكول (على سبيل المثال، agarose تضمين أو حلول شريحة / الانتعاش) نظرا في هذه المادة27،30.
البروتوكول الموصوف هنا يقدم طريقة مباشرة من أجل إعداد عالية الجودة شرائح الدماغ الماوس فرس النهر الأفقي الحاد من الحيوانات الصغيرة. البروتوكول مفيد بشكل خاص للحفاظ على مسار perforant (الوسيطة والاتية) التي تقدم مسار المدخلات قرن آمون، الذي مشاريع من القشرة entorhinal إلى الحصين8،49،50. القوس، والإكليلية، فضلا عن معزولة قرن آمون الاستعدادات شريحة عرضية لا تحافظ بشكل صحيح على مسار perforant، والتي تنبع من الطبقات الثانية والخامسة أساسا من القشرة entorhinal والمشاريع إلى عدة مناطق داخل الحصين18. نظرا لتحديد المواقع التشريحية من القشرة entorhinal فيما يتعلق قرن آمون، شرائح الدماغ الأفقي هي ضرورة من أجل الحفاظ على سليمة تماما ألياف المسار perforant داخل إعداد شريحة31. بالإضافة إلى ذلك، تشريح الأفقي يحافظ بشكل مثالي على الألياف الطحلب التي المشروع من الجيروزاز إلى الخلايا العصبية CA3 داخل الحصين9،30،50. ولذلك، فإن طريقة الإعداد هذه ذات قيمة عالية للدراسات التي تحقق مسارات مدخلات فرس النهر والعمليات ذات الصلة DG. وبالإضافة إلى ذلك، يسمح هذا البروتوكول بالتحقيق في مسار الضمان شيفر50. ومع ذلك، الاستعدادات شريحة الدماغ القوس والإنليلية هي أكثر شيوعا عند التحقيق CA3 إلى توقعات الألياف CA1، ويفترض بسبب وقت إعدادها أسرع قليلا التي يمكن أن تزيد من فرصة الحصول على شرائح عالية الجودة. ومع ذلك، الاستعدادات شريحة قرن آمون الأفقي تقديم أداة بحثية قوية لأنه يسمح الحفاظ والتحقيق في جميع مسارات الألياف فرس النهر داخل شريحة واحدة نصف الكرة الأرضية. ويمكن أن يكون هذا مفيداً بشكل خاص عند دراسة استجابات الدوائر، على سبيل المثال، في تسجيلات فحص القطب المتعدد.
مصدر قلق كبير عند إعداد شرائح الدماغ هو الحفاظ السليم على أنسجة الدماغ. ويتم ذلك من خلال عدة خطوات حاسمة في بروتوكول لدينا، بما في ذلك تشريح سريع، والأكسجين المستمر والكافي وتبريد الأنسجة، وحماية أنسجة المخ باستخدام طريقة قطع واقية مع محلول تقطيع منخفض الصوديوم، عالي السكروز39،51. على الرغم من حقيقة أن البروتوكول الموصوف هنا ينتج معدل نجاح حوالي 90٪، قد تكون هناك حاجة إلى خطوات وقائية إضافية محتملة عند العمل مع الأنسجة المشتقة من الحيوانات القديمة أو المتنوعة وراثيا أو عند محاولة الحفاظ على مجموعة خلايا محددة. وقد تم بالفعل الإبلاغ عن عدة طرق لحماية الاستعدادات الحساسة للأنسجة في الدماغ. وتشمل هذه الطرق استخدام NMDG القائم على حلول تشريح للحد من تغلغل الصوديوم52، واستخدام مستويات عالية من المغنيسيوم في حل تشريح من أجل منع نشاط مستقبلات NMDA53، والاستخدام المطول للحلول الوقائية أيضا خلال فترة النقاهة23. كل هذه التدابير سوف يؤدي إلى انخفاض السمية. بالإضافة إلى ذلك، يتم استخدام التسريب عبر كاردي مع الجليد الباردة حلول واقية ACSF وضرورية عند العمل مع الحيوانات القديمة27.
تناسب شرائح الدماغ الحصين الحادة بشكل مثالي وتستخدم على نطاق واسع للدراسات الفيزيولوجية الكهربائية لأسباب مثل إشارات السعة العالية التي يمكن الحصول عليها من شريحة الدماغ الحادة (300-500 ميكرومتر) السميكة نسبيًا ، والتي تضمن إشارة عالية إلى نسبة الضوضاء11. التطبيقات الكهربائية المستخدمة في القياسات تشمل تسجيلات الحقول خارج الخلية وتسجيلات الخلية الكاملة داخل الخلية في وضع الجهد أو المشبك الحالي. من أجل الحصول على بيانات عالية الجودة الكهربائية الفيزيولوجية، وصحة شريحة هو مصدر قلق رئيسي ويمكن ضمانها من خلال اتباع صارم البروتوكول المقدم. ومع ذلك، بما أن تحضيرات الشرائح تقدم تقنية حساسة للغاية، ينبغي أن يتم تضمين فحص الجودة بشكل روتيني قبل بدء كل تجربة. يمكن استخدام العديد من المعلمات كفحص جودة الشريحة ويتم تقييمها بشكل قياسي عبر منحنيات الإدخال والمخرجات وتسجيلات fEPSP أو EPSC19. ومع ذلك، تجدر الإشارة إلى أن الخصائص الكهروفيزيولوجية دون الأمثل يمكن أن تنشأ من أخطاء تجريبية مثل تحديد المواقع الكهربائي، والتوجه أو حتى الضرر ولا تمثل فقط صحة الشريحة المعدة. ولذلك، فمن المستحسن لتنفيذ ضوابط الجودة إضافية مثل التصور بسيطة وتقييم الخلايا تحت هدف 40x أو تلطيخ نواة DAPI. ويمكن استخدام هذه الشيكات الجودة لتأكيد صحة شريحة ثابتة على مدى عدة شرائح دورات التحضير.
يمثل قياس الفلوروريوم الكالسيوم تقنية أقل شيوعًا لدراسة شرائح الدماغ في فرس النهر. ومع ذلك، هذه التقنية هي ذات قيمة إضافية لتسجيلات القطب خارج الخلية والخلايا القياسية، كما أنها تسمح لتصور وقياس تدفقات الكالسيوم داخل الخلايا، والتي هي ذات أهمية كبيرة في إشارات الخلايا العصبية والتشابك. وتشارك التغيرات في تركيزات الكالسيوم داخل الخلايا في إطلاق الخلايا العصبية, الجيل المحتمل بعد تينابتيك, تنظيم اللدونة متشابك ومحور عصبي موصلالعصب 54,55,56. وكمثال على هذه التقنية (الشكل 4) ، استخدمنا صبغة الكالسيوم المتاحة تجاريًا. لا جدال، يمكن أن يؤدي علاج شرائح الأنسجة مع أصباغ الكالسيوم إلى صعوبات مثل زيادة الإطار الزمني التجريبي وكذلك التحميل غير الفعال للخلايا العصبية الأقل تحديدًا. ومع ذلك، يمكن استخدام الاختلافات على هذه التقنية للتحايل على هذه التحديات التقنية. على سبيل المثال، من الممكن الجمع بين قياسات الكالسيوم وتسجيلات المشبك في شرائح فرس النهر. وبهذه الطريقة، يمكن تحميل صبغة فلورية الكالسيوم في خلية محددة من خلال ماصة التصحيح، مما يسمح بقياسات ديناميات الكالسيوم في خلية واحدة محددة من الفائدة57. وبدلاً من ذلك، يمكن استخدام الحيوانات المهندسة وراثياً التي تعبر عن مؤشر الكالسيوم، GCaMP58،إما في الدماغ كله، أو التي يقودها مروج خاص بالخلايا. ومن المثير للاهتمام، أنسجة الدماغ من الحيوانات GCaMP مع رابط مباشر إلى البروتين من الفائدة يمكن أن توفر فرصا لتحديد نمط التعبير العصبي أو التحقيق في المشاركة في شرارات الكالسيوم وموجات.
وإجمالا، فإننا نقدم المبادئ التوجيهية لإعداد ناجح لشرائح الدماغ الدماغ فرس النهر الأفقية صحية وقابلة للتطبيق من الفئران للتسجيلات الكهربائية والفيزيائية والتصوير. هذه المنهجية مفيدة جدا للوصول إلى التغيرات العصبية التي تحدث في أمراض الدماغ التي يتم وصفها في الجيروز.

بدأت الاستكشافات الواسعة لمقنا الحصين عندما أبلغ سكوفل وميلنر عن عدم قدرة المريض (H.M.) على تشكيل ذاكرة جديدة إعلانية بعد الإزالة الجراحية لمقنا الحصين وهياكل الفص الصدغي القريب كعلاج للصرع الشديد1. من تلك اللحظة، وقد درس الحصين على نطاق واسع بدءا من خصائص الخلايا العصبية العامة والوظائف حتى تطور اضطرابات الدماغ الحادة، مثل الصرع ومرض الزهايمر2،3،4،5. الحصين هو جزء من نظام الحوفي، ويتكون من مجموعة من هياكل الدماغ ذات الصلة المشاركة في تكوين العاطفة والذاكرة6،7. شبكة كثيفة من عدة مسارات الألياف يحقق اتصال فرس النهر ضيق إلى هياكل الدماغ الداخلية والخارجية. وتشمل هذه المسارات مسار متوسط وثقب جانبي (القشرة إينتورفينال لدنت gyrus, CA3 – CA1 و subiculum)8, مسار الألياف الطحلب (gyrus dentate إلى CA3)9 وChaffer الضمانات / مسار commiss associational (CA3 إلى CA1)10 (الشكل 1). الحصين يقدم واحدة من مناطق الدماغ الأكثر استكشافا على نطاق واسع حتى الآن بسبب تنظيمها المفارني المحافظة للغاية من تشكيل طبقة الخلايا العصبية, وإمكانية الحصول على الثقافات العصبية الحيوية وشرائح الدماغ مع سهولة نسبية5.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61753/61753fig01.jpg"> الشكل 1: الرسوم المتحركة التي توضح مناطق فرس النهر المختلفة ومسارات الألياف الرئيسية. يشار إلى مناطق فرس النهر المختلفة بخطوط ملونة صلبة: قشرة الأنف (EC؛ أسود)، الجيروسكوبات (DG؛ البرتقال)، كورنو أمونيس (كاليفورنيا) 3 (سماوي)، 2 (أصفر)، و 1 (أرجواني)، و subiculum (الأخضر). تظهر مسارات الألياف مع خط منقط الملونة: الوسيط (MPP، أحمر) والمسار الفرforant الجانبي (LPP، الأزرق) (من القشرة entorhinal إلى gyrus دنت، CA3، CA1، و subiculum)، ومسار الألياف الطحلب (MF، البنفسجي) (من جيروز دنت إلى CA3) وضمانات شيفر (SC، البني) (ipilateral من CA3 إلى CA1) / المسارات commissural الرابطة (AC، الضوء الأخضر الفاتح) (contraral من CA3 إلى CA1). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61753/61753fig01large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
غالبًا ما تؤدي بروتوكولات شريحة الدماغ إلى فقدان الاتصالات من مناطق الدماغ البعيدة إلى منطقة الاهتمام5. وعلاوة على ذلك، لم تعد الشعيرات الدموية وظيفية5 وحرمان الدورة الدموية11. على الرغم من هذه القيود، لا تزال تستخدم شرائح الدماغ في المقام الأول للتحقيق في الوظائف الفسيولوجية العصبية من قرن آمون بسبب عدد من المزايا. أولاً، استخراج الحصين هو سريع12 ولا يتطلب الكثير من المواد. وتشمل الأدوات الأساسية الوحيدة مجموعة تشريح، حمام المياه المختبرية، والوصول إلى كاربوجين وmicrotome تهتز (هزاز)13. الأصول الأخرى لتقنية شريحة الدماغ هي التحايل على حاجز الدم الدماغ (BBB) وغسل الجزيئات الصادرة من داخلها قبل بدء التجربة5، مما يجعل من الممكن دراسة تأثير المخدرات مع التحكم في الجرعة الدقيقة نسبيا14. وعلاوة على ذلك، شرائح الدماغ الحفاظ على cyto-العمارة والدوائر متشابك داخل الحصين15،16، حيث يتم الحفاظ على العصبية والبيئة المحلية مع اتصال الخلايا العصبية والتفاعلات المعقدة العصبية-غليا4,11,17. بالإضافة إلى ذلك، اتصالات ألياف فرس النهر هي في الغالب أحادي الاتجاه والخلايا العصبية فرس النهر لديها اللدونة متشابك عالية، مما يبسط بشكل كبير جمع وتفسير التسجيلات الكهربائية الفيزيولوجية عالية الجودة من أجل فهم العمليات العصبية18،19. الأهم من ذلك ، شرائح الدماغ تقديم الأصول القيمة المطبقة في مجموعة واسعة من التقنيات العلمية المختلفة ، وتمتد من التقنيات البيولوجية الجزيئية على تسجيلات التصوير تصل إلى القياسات الكهربائيةالفيزيولوجية 12،20،21،22،23،24،25،26.
كما هو موضح أعلاه، تقدم شرائح الدماغ فرس النهر أداة تجريبية قوية لدراسة السمات الهيكلية والوظيفية للاتصال المتشابك. وهذا يوفر الفرصة لتقييم آثار المواد الكيميائية أو الطفرات على الإثارة العصبية واللدونية16.
الاستعدادات شريحة الدماغ الحادة تقدم تقنية حساسة نسبيا ونوعية الشريحة المثلى تعتمد اعتمادا كبيرا على الظروف التجريبية المثالية، بما في ذلك عمر الحيوان، وطريقة القتل الرحيم، وسرعة تشريح وتشريح، والحلول والمعلمات تشريح (على سبيل المثال، تشريح السرعة) فضلا عن شروط الانتعاش شريحة4. ولذلك، فإن البروتوكول المصمم تصميماً جيداً له أهمية قصوى ويضمن إمكانية التكاثر عبر وحدات البحث المختلفة13.
هنا، ونحن نقدم بروتوكول مفصل للتحضيرات شريحة قرن آمون الأفقي الحاد، بهدف الحفاظ على سلامة مسار فرس النهر الجانبي ووسيمي مثقب ومسار الألياف الطحلب، مما يسمح للتحقيق في عمليات gyrus dentate ذات الصلة9. سوف نصف بالتفصيل الخطوات الرئيسية لتشريح واستخراج وشريحة أفقيا الدماغ مورين، تليها نتائج تمثيلية للتسجيلات الكالسيوم microfluorimetric والتسجيلات المحتملة ما بعد الإثارة الميدانية (fEPSPs) تحت شروط خط الأساس وخلال بروتوكولات التعريفي LTP في شرائح الدماغ من النوع البري C57BL/6J الفئران.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anesthesia chamber</td>
			<td>home made - Generic</td>
			<td>N/A</td>
			<td>plexiglas</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia vaporizer</td>
			<td>Dr&#228;ger &#38; MSS International Ltd</td>
			<td>Isoflurane Vapor 19.3 &#38; MSS Isoflurane</td>
			<td>to vaporize isoflurane for rodent anesthetization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barrels for the perfusion system</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>Hypodermic syringes without needle</td>
			<td>https://www.terumotmp.com/products/hypodermics/terumo-hypodermic-syringes-without-needle.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bicuculline methiodide</td>
			<td>hellobio</td>
			<td>HB0893</td>
			<td>https://www.hellobio.com/bicuculline-methiodide.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosilcate glass capillaries</td>
			<td>Science Products</td>
			<td>GB150F-8P</td>
			<td>https://science-products.com/en/shop/micropipette-fabrication-1/capillary-glass-for-micropipette-pullers/borosilicate-glass-capillaries/borosilicate-filament-polished</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chlorid dihydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>102382</td>
			<td>https://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Calcium-chloride-dihydrate,MDA_CHEM-102382?ReferrerURL=https%3A%2F%2Fwww.google.com%2F</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Imaging software</td>
			<td>Till Photonics</td>
			<td>LiveAcquisition v2.3.0.18</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbogen tank</td>
			<td>Air Liquide</td>
			<td>Alphagaz mix B50</td>
			<td>Gasmixture CO2/O2: 5/95, purity 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cluster microelectrode</td>
			<td>FHC</td>
			<td>CE2C55</td>
			<td>https://www.fh-co.com/product/cluster-microelectrodes/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture dish (35 mm)</td>
			<td>Corning Life Sciences</td>
			<td>353001</td>
			<td>https://ecatalog.corning.com/life-sciences/b2c/US/en/Cell-Culture/Cell-Culture-Vessels/Dishes%2C-Culture/Falcon&#174;-Cell-Culture-Dishes/p/353001</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture dish (90 mm)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>101VR20</td>
			<td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/101R20#/101R20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>11270-20</td>
			<td>https://www.finescience.de/de-DE/Products/Forceps-Hemostats/Dumont-Forceps/Dumont-7b-Forceps/11270-20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-AP5</td>
			<td>hellobio</td>
			<td>HB0225</td>
			<td>https://www.hellobio.com/dap5.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose monohydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>16301</td>
			<td>https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/16301?lang=en&#38;region=BE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital CMOS camera</td>
			<td>HAMAMATSU</td>
			<td>ORCA-spark C11440-36U</td>
			<td>https://www.hamamatsu.com/eu/en/product/type/C11440-36U/index.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection scissors</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>14058-09</td>
			<td>https://www.finescience.de/de-DE/Products/Scissors/Standard-Scissors/Fine-Scissors-ToughCut&#174;/14058-09</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNQX</td>
			<td>hellobio</td>
			<td>HB0262</td>
			<td>https://www.hellobio.com/dnqx-disodium-salt.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EMCCD camera</td>
			<td>Andor</td>
			<td>iXon TM + DU-897E-CSO-#BV</td>
			<td>https://andor.oxinst.com/products/ixon-emccd-cameras?gclid=CjwKCAjw97P5BRBQEiwAGflV6ULsKjXfhN2YZxtvsWAmF4QghyXZKuqYHVMa6KU9JyS80ATQkSKeBBoCIM0QAvD_BwE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EPC10 USB Double Patch Clamp Amplifier</td>
			<td>HEKA Elektronik</td>
			<td>895278</td>
			<td>https://www.heka.com/sales/brochures_down/bro_epc10usb.pdf</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper</td>
			<td>VWR</td>
			<td>516-0818</td>
			<td>grade 413</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine brush</td>
			<td>Raphael Kaerell</td>
			<td>8204</td>
			<td>Size #1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18G needle</td>
			<td>Henke Sass Wolf Fine-Ject</td>
			<td>18G X 1 1/2&#34; 4710012040</td>
			<td>https://www.henkesasswolf.de/cms/de/veterinaer_produkte/produkte_vet/einmalkanuelen/hsw_henke_ject_einmalkanuelen/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Dechra Veterinary Products</td>
			<td>Iso-Vet 1000mg/g</td>
			<td>250 ml bottle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Loctite 406</td>
			<td>Henkel Adhesive technologies</td>
			<td>Loctite 406</td>
			<td>Super glue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate heptahydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>105886</td>
			<td>https://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Magnesium-sulfate-heptahydrate,MDA_CHEM-105886?ReferrerURL=https%3A%2F%2Fwww.google.com%2F</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>Luigs &#38; Neumann</td>
			<td>SM-10 with SM-7 remote control system</td>
			<td>https://www.luigs-neumann.org</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope (for calcium imaging)</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>BX51WI</td>
			<td>https://www.olympus-lifescience.com/de/microscopes/upright/bx61wi/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope (for ephys recordings)</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axio Examiner.A1</td>
			<td>https://www.micro-shop.zeiss.com/de/de/system/axio+examiner-axio+examiner.a1-aufrechte+mikroskope/10185/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope light source</td>
			<td>CAIRN Research</td>
			<td>dual OptoLed power supply</td>
			<td>https://www.cairn-research.co.uk/product/optoled/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monochromator</td>
			<td>Till Photonics</td>
			<td>Polychrome V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-Methyl-D-aspartic acid (NMDA)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M3262</td>
			<td>https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/m3262?lang=en&#38;region=BE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oregon Green&#174; 488 BAPTA-1</td>
			<td>Invitrogen Molecular Probes</td>
			<td>#06807</td>
			<td>10x50ug</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmometer</td>
			<td>Wescor</td>
			<td>5500 vapor pressure osmometer</td>
			<td>to verify osmolarity of salt solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic pump</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Masterflex C/L 77120-62</td>
			<td>https://www.fishersci.be/shop/products/masterflex-peristaltic-c-l-dual-channel-pump-2/p-8004229</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH meter</td>
			<td>WTW</td>
			<td>inoLab series pH 720</td>
			<td>https://www.geminibv.nl/wp-content/uploads/manuals/wtw-720-ph-meter/wtw-inolab-ph-720-manual-eng.pdf</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette puller</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>P-1000</td>
			<td>https://www.sutter.com/MICROPIPETTE/p-1000.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chlorid</td>
			<td>Chem-lab</td>
			<td>CL00.1133</td>
			<td>https://www.chem-lab.be/#/en-gb/prod/1393528</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium dihydrogen phosphate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>104873</td>
			<td>https://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Potassium-dihydrogen-phosphate,MDA_CHEM-104873?ReferrerURL=https%3A%2F%2Fwww.google.com%2F</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blade to prepare hemispheres</td>
			<td>SPI supplies</td>
			<td>Safety Cartridge Dispenser - Pkg/10</td>
			<td>GEM Scientific Single Edge Razor Blades</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blade for vibratome</td>
			<td>Ted Pella Inc</td>
			<td>121-6</td>
			<td>double edge breakable style razor blades (PTFE-coated stainless steel)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recovery chamber</td>
			<td>home made - Generic</td>
			<td>N/A</td>
			<td>to collect and store brain slices in (see details in manuscript)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Any company</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Blade should be well sharpened and at least 15 cm long for easy decapitation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver electrode wire</td>
			<td>Any company</td>
			<td></td>
			<td>for recording and reference electrodes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dihydrogen phosphate dihydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>106342</td>
			<td>https://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Sodium-dihydrogen-phosphate-dihydrate,MDA_CHEM-106342?ReferrerURL=https%3A%2F%2Fwww.google.com%2F</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydrogen carbonate</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>14707</td>
			<td>https://www.alfa.com/en/catalog/014707/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chlorid</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S/3160/60</td>
			<td>https://www.fishersci.co.uk/shop/products/sodium-chloride-certified-ar-analysis-meets-analytical-specification-ph-eur/10428420</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software for field recordings</td>
			<td>HEKA Elektronik</td>
			<td>PatchMaster</td>
			<td>https://www.heka.com/downloads/software/manual/m_patchmaster.pdf</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spatula</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S9147-12EA</td>
			<td>https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/s9147?lang=en&#38;region=BE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stimulator</td>
			<td>A.M.P.I</td>
			<td>ISO-FLEX</td>
			<td>http://www.ampi.co.il/isoflex.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>VWR International Ltd.</td>
			<td>102745C</td>
			<td>https://es.vwr-cmd.com/ex/downloads/magazine/lupc_userguide_uk.pdf</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing for carbogen, perfusion and suction lines 1</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0167</td>
			<td>Tygon tubing (TY-50) for standard valve systems</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing for carbogen, perfusion and suction lines 2</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>800/100/200 &#38; 800/100/280</td>
			<td>Smiths Medical Portex Fine Bore LDPE Tubing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum pump</td>
			<td>home made - Generic</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8 valve multi-barrel perfusion system</td>
			<td>home made</td>
			<td>N/A</td>
			<td>consists of barrels, tubing and a self-made automated valve control (specifications of all purchased parts can be found in this Table)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic valves (to control the perfusion lines)</td>
			<td>NResearch Inc.</td>
			<td>p/n 161P011</td>
			<td>https://nresearch.com/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibratome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>14912000001</td>
			<td>Semi-automatic vibrating blade microomei VT1200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td>Memmert</td>
			<td>WNB 7</td>
			<td>https://www.memmert.be/wp-content/uploads/2019/09/Memmert-Waterbath-WNB-7.en_.pdf</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water purification system</td>
			<td>Merck</td>
			<td>Synergy millipore</td>
			<td>to obtain highly purified water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-well plates</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>CELLSTAR, 665180</td>
			<td>http://www.greinerbioone.com/UserFiles/File/Catalogue%202010_11/UK/3680_005-Kapitel1_UK.pdf</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

horizontal hippocampal slices of the mouse brain

الحصين هو بنية منظمة للغاية في الدماغ الذي هو جزء من الجهاز الحوفي وتشارك في تكوين الذاكرة والدمج وكذلك مظهر من اضطرابات الدماغ الحادة، بما في ذلك مرض الزهايمر والصرع. يتلقى قرن آمون درجة عالية من الاتصال الداخلي و البيني، مما يضمن التواصل الصحيح مع هياكل الدماغ الداخلية والخارجية. ويتم إنجاز هذا الاتصال من خلال تدفقات إعلامية مختلفة في شكل مسارات الألياف. شرائح الدماغ هي منهجية تستخدم بشكل متكرر عند استكشاف الوظائف العصبية الفسيولوجية من قرن آمون. يمكن استخدام شرائح الدماغ فرس النهر لعدة تطبيقات مختلفة، بما في ذلك التسجيلات الكهربائية الفيزيولوجية، والقياسات المجهرية الخفيفة، فضلا عن العديد من التقنيات البيولوجية الجزيئية والهستوكيميائية. لذلك ، تمثل شرائح الدماغ نظامًا نموذجيًا مثاليًا لتقييم وظائف البروتين ، والتحقيق في العمليات الفسيولوجية المرضية التي تنطوي عليها الاضطرابات العصبية وكذلك لأغراض اكتشاف الأدوية.
هناك عدة طرق مختلفة من التحضيرات شريحة. الاستعدادات شريحة الدماغ مع هزاز تسمح للحفاظ على نحو أفضل من بنية الأنسجة وضمان إمدادات كافية من الأوكسجين أثناء تشريح, التي تقدم مزايا على الاستخدام التقليدي للمروحيات الأنسجة. وعلاوة على ذلك، يمكن تطبيق طائرات قطع مختلفة للاستعدادات شريحة الدماغ هزاز. هنا، يتم توفير بروتوكول مفصل لإعداد ناجح لشرائح قرن آمون أفقية قطع اهتزازي من أدمغة الماوس. على النقيض من مستحضرات شريحة أخرى، تشريح الأفقي يسمح للحفاظ على ألياف مسار مدخل قرن آمون (مسار مثقب) في حالة سليمة تماما داخل شريحة، مما يسهل التحقيق في التفاعلات entorhinal-فرس النهر. هنا، ونحن نقدم بروتوكول شامل لتشريح، استخراج، وشرائح أفقية حادة من الدماغ مورين، ومناقشة التحديات والمزالق المحتملة لهذه التقنية. وأخيراً، سوف نعرض بعض الأمثلة لاستخدام شرائح الدماغ في تطبيقات أخرى.

Watch this Scientific Journal Video about Horizontal Hippocampal Slices of the Mouse Brain at JoVE.com

Horizontal Hippocampal Slices of the Mouse Brain

تهدف هذه المقالة إلى وصف بروتوكول منهجي للحصول على شرائح الدماغ قرن آمون الأفقي في الفئران. والهدف من هذه المنهجية هو الحفاظ على سلامة مسارات ألياف فرس النهر، مثل المسار المثقب والمسالك الألياف الطحبية لتقييم العمليات العصبية ذات الصلة بالجيروز.

شرائح فرس النهر الأفقية من دماغ الفأر

The hippocampus is a highly organized structure in the brain that is a part of the limbic system and is involved in memory formation and consolidation as ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Oligomeric &beta;-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Preparation of Oligomeric ÃƒÅ½Ã‚Â²-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

إعداد Oligomeric β اميلويد 1-42 والتعريفي للعاهة اللدونة متشابك على شرائح الحصين

Impairment of synaptic connections is likely to underlie the subtle amnesic changes occurring at the early stages of Alzheimer s Disease (AD). ...

Imaging Calcium Responses in GFP-tagged Neurons of Hypothalamic Mouse Brain Slices

الردود الكالسيوم في الخلايا العصبية التصوير GFP الموسومة تحت المهاد البصري من شرائح مخ الفأر

Despite an enormous increase in our knowledge about the mechanisms underlying the encoding of information in the brain, a central question concerning the ...

Investigations on Alterations of Hippocampal Circuit Function Following Mild Traumatic Brain Injury

تحقيقات بشأن التعديلات من وظيفة الدائرة الحصين عقب معتدل إصابات في الدماغ

Traumatic Brain Injury (TBI) afflicts more than 1.7 million people in the United States each year and even mild TBI can lead to persistent neurological ...

Paired Whole Cell Recordings in Organotypic Hippocampal Slices

تقرن تسجيلات خلية كاملة في عضوي شرائح الحصين

Pair recordings involve simultaneous whole cell patch clamp recordings from two synaptically connected neurons, enabling not only direct ...

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

إعداد شرائح الدماغ الحادة باستخدام محسن N-الميثيل-د-أسلوب استرداد واقية جلوكاميني

This protocol is a practical guide to the N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. Numerous recent studies have ...

Preparation of Horizontal Slices of Adult Mouse Retina for Electrophysiological Studies

إعداد شرائح أفقية من الكبار شبكية العين الفأر للدراسات الكهربية

Vertical slice preparations are well established to study circuitry and signal transmission in the adult mammalian retina. The plane of sectioning in ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

تسجيل اللدونة متشابك في شرائح هيبوكامبال الحاد تحتفظ في صغيرة الحجم-إعادة التدوير، ونضح-، وغمر من نوع نظام الدائرة

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Evaluation of Synapse Density in Hippocampal Rodent Brain Slices

تقييم كثافة المشبك في الدماغ القوارض هيبوكامبال شرائح

In the brain, synapses are specialized junctions between neurons, determining the strength and spread of neuronal signaling. The number of synapses is ...

Assessment of Long-term Depression Induction in Adult Cerebellar Slices

تقييم الحث علي الاكتئاب علي المدى الطويل في شرائح البالغين المخيخار

Synaptic plasticity provides a mechanism for learning and memory. For cerebellar motor learning, long-term depression (LTD) of synaptic transmissions from ...

Imaging of Intracellular ATP in Organotypic Tissue Slices of the Mouse Brain using the FRET-based Sensor ATeam1.03YEMK

Imaging of Intracellular ATP in Organotypic Tissue Slices of the Mouse Brain using the FRET-based Sensor ATeam1.03YEMK

التصوير من ATP داخل الخلايا في شرائح الانسجه العضوية من الدماغ الماوس باستخدام الاستشعار القائم علي التاكل ATeam 1.03يمك

Neuronal activity in the central nervous system (CNS) evokes a high demand on cellular energy provided by the breakdown of adenosine triphosphate (ATP). A ...