Name: horizontal hippocampal slices of the mouse brain
Uploaded: 2020-09-22T14:45:00
Duration: 8 min 59 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Horizontal Hippocampal Slices of the Mouse Brain at JoVE.com

Мы благодарим электрофизиологическое отделение Центра исследований мозга и болезней VIB-KU Leuven под руководством д-ра Кеймпе Вирды и профессора д-ра Джориса Де Вит за использование их научно-исследовательских объектов. Кроме того, мы благодарим всех членов Лаборатории исследований ионных каналов и лаборатории эндометрия, эндометриоза и репродуктивной медицины в KU Leuven за их полезные обсуждения и комментарии.
Этот проект получил финансирование от Научно-исследовательского фонда-Фландрии (G.084515N и G.0B1819N до J.V.) и Научно-исследовательского совета КУ Левен (C1-финансирование C14/18/106 к J.V.). К.П. является стипендиатом ФВО«ПЕГАС» 2 Мари Склодовской-Кюри и получила финансирование от научно-исследовательской и инновационной программы Европейского Союза «Горизонт 2020» в рамках грантового соглашения Мари Склодовска-Кюри (665501) с Исследовательским фондом Фландрии (FWO) (12T0317N). К.Х. является докторантом Научно-исследовательского фонда Фландрии, Бельгия (12U7918N).

Авторов нечего раскрывать.

Хотя широко используется среди неврологии сообщества, мозга ломтик препаратов также сталкиваются с несколькими недостатками. Например, входные и выходные соединения с областями мозга, представляющими интерес, больше не связаны в срезе мозга. Кроме того, после изоляции, ткань начинает медленно деградировать с течением времени, и этот процесс может изменить физиологические условия мозга ломтик. Эта тема, в частности, очень относительно, потому что большинство записей ломтик мозга принимают от нескольких минут до часов, что приводит к долгим экспериментальным дней с записями, выполненными на ткани, которая была изолирована до 6-8 ч до начала эксперимента. Кроме того, спинномозговая жидкость и кровообращение прерываются во время срезных препаратов, что может привести к отсутствию важных эндогенных соединений в ломтике мозга. И, самое очевидное, сама процедура нарезки может привести к повреждению механической ткани, что может поставить под угрозу полученные результаты. Тем не менее, фактические преимущества препаратов ломтик мозга по-прежнему перевешивают свои недостатки, поэтому они представляют такие высоко ценится и используется техника в неврологии исследований.
Острые ломтики мозга гиппокампа представляют собой мощную и, следовательно, широко используемую технику для исследования нейронных процессов от молекулярного уровня до сложных исследований цепи мозга. Это основано на идеальной нейроанатомии гиппокампа, которые могут быть легко сохранены в срезподготовки 18. Следовательно, гиппокампа ломтики мозга используются в самых разнообразных научно-исследовательских проектов,в том числе скрининга наркотиков 17, исследования нейрональных и синаптических свойств, участвующих вкогнитивных функций 40,41, и исследования патологических состояний мозга14,42,43. Тем не менее, широкий спектр различных приложений также вызывает широкий спектр доступных протоколов подготовки фрагментов, которые могут отличаться по различным параметрам, таким как условия вскрытия и резки плоскости ориентации, среди других. Поэтому для выбора соответствующего протокола подготовки срезов необходимо определить точный исследовательский вопрос научного проекта.
Ткань измельчитель представляет собой один из старейших используемых методов для того, чтобы подготовить гиппокампаломтики мозга 44,45. Основные преимущества этого метода подготовки включают низкую стоимость вертолета и быстрое и легкое использование46. Тем не менее, тканевых измельчителя вызывают механический стресс, что приводит к морфологическим изменениям и гибеликлеток 47. Для сравнения, вибром является довольно дорогой машиной и время для подготовки ломтик значительно увеличивается, которые могут повлиять на качество ломтика. Тем не менее, вибром обычно предлагает более мягкий способ отделения ломтиков от ткани и позволяет сохранить мозг красиво охлаждается и насыщен кислородом в течение всей процедуры изоляции, тем самым улучшая свойстваломтика 46. Таким образом, несколько групп стандартно используют эту технику и выдвинули протоколы для подготовки острых ломтиков мозга гиппокампа с помощьювиброма 16,30,48. В то время как некоторые протоколы предоставляют лишь некоторые детали для нарезки себя, а сосредоточиться на конкретном применении такого срезаподготовки 48, другие предоставляют подробные протоколы ломтик, которые отличаются в резки плоскости или других деталей протокола (например, агароза встраивания или ломтик / восстановления решений), данныхв этой статье 27,30.
Протокол, описанный здесь представляет собой простой метод для того, чтобы подготовить высокое качество острой горизонтальной гиппокампа мыши ломтики мозга от молодых животных. Протокол особенно полезен для сохранения перфораторного пути (медиальный и боковой), который представляет путь ввода гиппокампа, который проецирует от энторинальной коры кгиппокампу 8,49,50. Стрельцы, корональные, а также изолированные препараты поперечного среза гиппокампа не сохраняют должным образом перфораторный путь, который происходит в основном из слоев II и V энторинной коры и проектов в нескольких областях в пределахгиппокампа 18. Из-за анатомического позиционирования энторинной коры по отношению к гиппокампу, горизонтальные ломтики мозга являются необходимостью для того, чтобы поддерживать полностью нетронутыми перфораторные волокна пути в рамках подготовкиломтика 31. Кроме того, горизонтальная нарезка идеально сохраняет мшистые волокна, которые проецируются от зубной извилины до нейронов CA3 вгиппокампе 9,30,50. Таким образом, этот метод подготовки имеет высокую ценность для исследований, которые исследуют пути ввода гиппокампа и процессы, связанные с ГД. Кроме того, этот протокол позволяет расследование Шаффер залоговый путь50. Тем не менее, sagittal и корональный мозг ломтик подготовки чаще используются при расследовании CA3 CA1 волокна прогнозы, по-видимому, из-за их немного быстрее время подготовки, которые могут увеличить вероятность получения высококачественных ломтиков. Тем не менее, горизонтальные препараты гиппокампа ломтик настоящее мощный инструмент исследования, поскольку она позволяет сохранение и исследование всех гиппокампа волокна пути в пределах одного ломтика полушария. Это может быть особенно полезно при изучении реакций цепи, например, в много электродных записях анализа.
Основной проблемой при подготовке ломтиков мозга является надлежащее сохранение ткани мозга. Это достигается несколькими важными шагами в нашем протоколе, включая быстрое вскрытие, непрерывную и достаточную оксигенацию и охлаждение ткани, а также защиту тканей мозга с помощью защитного метода резки с низким содержанием натрия, высокой сахарозой,нарезая раствор 39,51. Несмотря на то, что описанный здесь протокол дает успех около 90%, потенциально дополнительные защитные шаги могут потребоваться при работе с тканями, полученными от старых или генетически разнообразных животных или при попытке сохранить определенную популяцию клеток. Несколько методов уже сообщалось для защиты чувствительных препаратов ткани мозга. Эти методы включают в себя использование NMDG основе нарезки решений для снижения пронизываниянатрия 52, использование высоких уровней магния в нарезке раствора для того, чтобы блокировать активность nmDAрецепторов 53, и длительное использование защитных растворов также в периодвосстановления 23. Все эти меры приведут к снижению excitotoxicity. Кроме того, транскардиальная перфузия с ледяными защитными решениями ACSF часто используется и необходима при работе со старшими животными27.
Острые ломтики мозга гиппокампа идеально подходят и широко используются для электрофизиологических исследований по таким причинам, как высокая амплитуда сигналы, которые могут быть получены из относительно толстых (300-500 мкм) острый срез мозга, который гарантирует высокий сигналк шуму соотношение 11. Стандартно используемые электрофизиологические приложения включают внеклеточные полевые записи и внутриклеточные записи в режиме напряжения или тока. Для того, чтобы получить высококачественные электрофизиологические данные, срез здоровья имеет первое значение и может быть гарантировано строго следуя представленного протокола. Однако, поскольку срезовые препараты представляют емкий метод, перед началом каждого эксперимента необходимо регулярно включить проверку качества. Несколько параметров могут быть использованы в качестве проверки качества среза и стандартно оцениваются с помощью кривых ввода-выхода и базовых записей fEPSP или EPSC19. Тем не менее, следует отметить, что неоптимальные электрофизиологические свойства могут возникнуть в результате экспериментальных ошибок, таких как позиционирование электродов, ориентация или даже повреждение и не только представляют здоровье подготовленного ломтика. Поэтому рекомендуется выполнять дополнительные элементы контроля качества, такие как простая визуализация и оценка клеток под 40-й целью или окрашивание ядра DAPI. Такие проверки качества могут быть использованы для подтверждения постоянного здоровья ломтик в течение нескольких сеансов подготовки ломтик.
Микрофториметрия кальция представляет собой менее часто используемый метод для изучения ломтиков мозга гиппокампа. Тем не менее, этот метод имеет дополнительное значение для стандартных внеклеточных и внутриклеточных записей электродов, так как он позволяет визуализировать и количественно внутриклеточных потоков кальция, которые имеют большое значение в нейронной и синаптической сигнализации. Изменения в внутриклеточных концентрациях кальция участвуют в высвобождении нейромедиатора пузырьков, постсинаптической потенциальной генерации, регуляции синаптической пластичностии аксональной нервной проводимости 54,55,56. В качестве иллюстрации этого метода(рисунок 4),мы использовали коммерчески доступный краситель кальция. Бесспорно, лечение ломтиками тканей с красителями кальция может выдать такие трудности, как увеличение экспериментальных сроков, а также неэффективная загрузка нижних расположенных нейронных клеток. Однако для обхода этих технических проблем можно было бы использовать вариации в этом методе. Например, можно сочетать измерения кальция и записи зажима патча в ломтиках гиппокампа. Таким образом, флуоресцентный краситель кальция может быть загружен в конкретную клетку через патч пипетки, что позволяет измерения динамики кальция в одной конкретной клеткеинтереса 57. Кроме того, генетически модифицированных животных, выражаюющих кальций индикатор, GCaMP58, либо во всем мозге, или управляется клеточной конкретных промоутер, могут быть использованы. Интересно, что ткани мозга от GCaMP животных с прямым связующим звеном с интересом белка может предоставить возможность для определения модели выражения нейронов или исследовать участие в искр кальция и волн.
В общей сложности, мы предоставляем руководящие принципы для успешной подготовки здоровых и жизнеспособных горизонтальных ломтиков мозга гиппокампа от мышей для электрофизиологических и изображений записей. Эта методология очень полезна для доступа к неврологическим изменениям, которые происходят в патологиях мозга, которые описаны в зубной извилины.

Обширное исследование гиппокампа началось, когда Сковилл и Милнер сообщили о неспособности пациента (H.M.) сформировать новую, декларативную память после хирургического удаления гиппокампа и близлежащих височных структур доли в качестве лечения тяжелой эпилепсии1. С этого момента, гиппокамп был изучен широко, начиная от общих свойств нейронов и функций до развития тяжелых расстройств мозга, таких как эпилепсия и болезнь Альцгеймера2,3,4,5. Гиппокамп является частью лимбической системы, состоящей из группы связанных структур мозга, участвующих в эмоциях иформировании памяти 6,7. Плотная сеть из нескольких волоконных путей достигает жесткой гиппокампа подключения к внутренним и внешним структурам мозга. Эти пути включают в себя медиальный и боковой перфораторный путь (энторинал коры для вмятины извилины, CA3 - CA1 и subiculum)8, мшистый путь волокна (дентат извилины CA3)9 и Шаффер залога / аспутной комиссариальной путь (CA3 к CA1)10 (Рисунок 1). Гиппокамп представляет собой один из наиболее широко изученных областей мозга до сих пор из-за его высоко сохраняется ламинарная организация формирования нейронального слоя, и возможность получить жизненно важные нейронные культуры и ломтики мозга с относительной легкостью5.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61753/61753fig01.jpg"> Рисунок 1: Мультфильм, иллюстрирующий различные области гиппокампа и основные пути волокна. Различные области гиппокампа обозначены сплошными цветными линиями: энториновая кора (EC; черный), зубная извилина (DG; оранжевый), Корну Аммонис (CA) 3 (циан), 2 (желтый) и 1 (пурпурный) и субикулум (зеленый). Волокно пути показаны с цветной пунктирной линии: медиальной (MPP, красный) и боковой перфорантный путь (LPP, синий) (от энторинной коры до зубной извилины, CA3, CA1 и субикулум), мшистый волоконный путь (MF, фиолетовый) (от зубной извилины до CA3) и обеспечение Шаффера (SC, коричневый) (ипсилатеральный от CA3 до CA1)/асбилитальные из-за эмиссионных путей (AC, светло-зеленый) (контратеральный от CA3 до CA1). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61753/61753fig01large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.</a>
Протоколы среза мозга часто приводят к потере связей из более отдаленных областей мозга в область интересов5. Кроме того, капилляры больше не функционируют5 и кровообращениелишено 11. Несмотря на эти ограничения, ломтики мозга по-прежнему в первую очередь используются для исследования нейрофизиологических функций гиппокампа из-за ряда преимуществ. Во-первых, экстракция гиппокампабыстро 12 и не требует много материалов. Единственными необходимыми инструментами являются комплект для вскрытия, лабораторная водяная ванна, доступ к карбогену и вибрирующий микротом (вибром)13. Другими активами техники среза мозга являются обход гемово-мозгового барьера (BBB) и вымывания эндогенно выпущенных молекул до началаэксперимента 5,что позволяет изучать эффект препаратов с относительно точным контролем дозировки14. Кроме того, ломтики мозга сохраняют цито-архитектуру и синаптические схемыв гиппокампе 15,16,где сохраняется нейроанатомия и местная среда с нейрональной связью и сложными нейронно-глийнымивзаимодействиями 4,11,17. Кроме того, соединения гиппокампа волокна преимущественно однонаправленные и гиппокампа нейроны имеют высокую синаптической пластичности, которая чрезвычайно упрощает сбор и интерпретацию высококачественных электрофизиологических записей для того, чтобы понятьневрологические процессы 18,19. Важно отметить, что срезы мозга представляют 100 ценных активов, применимых в широком спектре различных научных методов, охватывающих от молекулярно-биологическихметодовнад визуализациизаписей до электрофизиологических измерений 12,20,21,22,23,24,25,26.
Как описано выше, гиппокампа ломтики мозга представляют 4000 экспериментальный инструмент для изучения структурных и функциональных особенностей синаптической связи. Это дает возможность оценить влияние химических веществ или мутаций на возбудимость нейронов и пластичность16.
Острые препараты ломтик мозга представляют довольно чувствительный метод и оптимальное качество ломтика в значительной степени зависит от идеальных экспериментальных условий, в том числе возраст животного, метод эвтаназии, скорость вскрытия и нарезки, нарезки решений и параметров (например, нарезка скорость), а также условия длявосстановления ломтика 4. Таким образом, хорошо продуманный протокол имеет первостепенное значение и обеспечивает воспроизводимость различных исследовательских подразделений13.
Здесь мы предоставляем подробный протокол для острой горизонтальной подготовки ломтик гиппокампа, с целью сохранения целостности гиппокампа боковой и медиальной перфорантной путь и мшистый путь волокна, что позволяет исследование дента извилины связанныхпроцессов 9. Мы подробно опишем ключевые шаги по вскрытию, извлечению и горизонтальному срезанию муринового мозга, за которым последуют репрезентативные результаты кальциево-микрофлюорометрических записей и полевых возбудительных постсинаптических потенциальных записей (fEPSPs) в базовых условиях и во время протоколов индукции LTP в ломтиках мозга диких мышей типа C57BL/6J.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anesthesia chamber</td>
			<td>home made - Generic</td>
			<td>N/A</td>
			<td>plexiglas</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia vaporizer</td>
			<td>Dr&#228;ger &#38; MSS International Ltd</td>
			<td>Isoflurane Vapor 19.3 &#38; MSS Isoflurane</td>
			<td>to vaporize isoflurane for rodent anesthetization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Barrels for the perfusion system</td>
			<td>TERUMO</td>
			<td>Hypodermic syringes without needle</td>
			<td>https://www.terumotmp.com/products/hypodermics/terumo-hypodermic-syringes-without-needle.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bicuculline methiodide</td>
			<td>hellobio</td>
			<td>HB0893</td>
			<td>https://www.hellobio.com/bicuculline-methiodide.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosilcate glass capillaries</td>
			<td>Science Products</td>
			<td>GB150F-8P</td>
			<td>https://science-products.com/en/shop/micropipette-fabrication-1/capillary-glass-for-micropipette-pullers/borosilicate-glass-capillaries/borosilicate-filament-polished</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chlorid dihydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>102382</td>
			<td>https://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Calcium-chloride-dihydrate,MDA_CHEM-102382?ReferrerURL=https%3A%2F%2Fwww.google.com%2F</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Imaging software</td>
			<td>Till Photonics</td>
			<td>LiveAcquisition v2.3.0.18</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carbogen tank</td>
			<td>Air Liquide</td>
			<td>Alphagaz mix B50</td>
			<td>Gasmixture CO2/O2: 5/95, purity 5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cluster microelectrode</td>
			<td>FHC</td>
			<td>CE2C55</td>
			<td>https://www.fh-co.com/product/cluster-microelectrodes/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture dish (35 mm)</td>
			<td>Corning Life Sciences</td>
			<td>353001</td>
			<td>https://ecatalog.corning.com/life-sciences/b2c/US/en/Cell-Culture/Cell-Culture-Vessels/Dishes%2C-Culture/Falcon&#174;-Cell-Culture-Dishes/p/353001</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Culture dish (90 mm)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>101VR20</td>
			<td>https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/101R20#/101R20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved forceps</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>11270-20</td>
			<td>https://www.finescience.de/de-DE/Products/Forceps-Hemostats/Dumont-Forceps/Dumont-7b-Forceps/11270-20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-AP5</td>
			<td>hellobio</td>
			<td>HB0225</td>
			<td>https://www.hellobio.com/dap5.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose monohydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>16301</td>
			<td>https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/16301?lang=en&#38;region=BE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital CMOS camera</td>
			<td>HAMAMATSU</td>
			<td>ORCA-spark C11440-36U</td>
			<td>https://www.hamamatsu.com/eu/en/product/type/C11440-36U/index.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection scissors</td>
			<td>Fine Science tools</td>
			<td>14058-09</td>
			<td>https://www.finescience.de/de-DE/Products/Scissors/Standard-Scissors/Fine-Scissors-ToughCut&#174;/14058-09</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNQX</td>
			<td>hellobio</td>
			<td>HB0262</td>
			<td>https://www.hellobio.com/dnqx-disodium-salt.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EMCCD camera</td>
			<td>Andor</td>
			<td>iXon TM + DU-897E-CSO-#BV</td>
			<td>https://andor.oxinst.com/products/ixon-emccd-cameras?gclid=CjwKCAjw97P5BRBQEiwAGflV6ULsKjXfhN2YZxtvsWAmF4QghyXZKuqYHVMa6KU9JyS80ATQkSKeBBoCIM0QAvD_BwE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EPC10 USB Double Patch Clamp Amplifier</td>
			<td>HEKA Elektronik</td>
			<td>895278</td>
			<td>https://www.heka.com/sales/brochures_down/bro_epc10usb.pdf</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter paper</td>
			<td>VWR</td>
			<td>516-0818</td>
			<td>grade 413</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine brush</td>
			<td>Raphael Kaerell</td>
			<td>8204</td>
			<td>Size #1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18G needle</td>
			<td>Henke Sass Wolf Fine-Ject</td>
			<td>18G X 1 1/2&#34; 4710012040</td>
			<td>https://www.henkesasswolf.de/cms/de/veterinaer_produkte/produkte_vet/einmalkanuelen/hsw_henke_ject_einmalkanuelen/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Dechra Veterinary Products</td>
			<td>Iso-Vet 1000mg/g</td>
			<td>250 ml bottle</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Loctite 406</td>
			<td>Henkel Adhesive technologies</td>
			<td>Loctite 406</td>
			<td>Super glue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate heptahydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>105886</td>
			<td>https://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Magnesium-sulfate-heptahydrate,MDA_CHEM-105886?ReferrerURL=https%3A%2F%2Fwww.google.com%2F</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micromanipulator</td>
			<td>Luigs &#38; Neumann</td>
			<td>SM-10 with SM-7 remote control system</td>
			<td>https://www.luigs-neumann.org</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope (for calcium imaging)</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>BX51WI</td>
			<td>https://www.olympus-lifescience.com/de/microscopes/upright/bx61wi/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope (for ephys recordings)</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axio Examiner.A1</td>
			<td>https://www.micro-shop.zeiss.com/de/de/system/axio+examiner-axio+examiner.a1-aufrechte+mikroskope/10185/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope light source</td>
			<td>CAIRN Research</td>
			<td>dual OptoLed power supply</td>
			<td>https://www.cairn-research.co.uk/product/optoled/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Monochromator</td>
			<td>Till Photonics</td>
			<td>Polychrome V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-Methyl-D-aspartic acid (NMDA)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M3262</td>
			<td>https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/m3262?lang=en&#38;region=BE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oregon Green&#174; 488 BAPTA-1</td>
			<td>Invitrogen Molecular Probes</td>
			<td>#06807</td>
			<td>10x50ug</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmometer</td>
			<td>Wescor</td>
			<td>5500 vapor pressure osmometer</td>
			<td>to verify osmolarity of salt solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic pump</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Masterflex C/L 77120-62</td>
			<td>https://www.fishersci.be/shop/products/masterflex-peristaltic-c-l-dual-channel-pump-2/p-8004229</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH meter</td>
			<td>WTW</td>
			<td>inoLab series pH 720</td>
			<td>https://www.geminibv.nl/wp-content/uploads/manuals/wtw-720-ph-meter/wtw-inolab-ph-720-manual-eng.pdf</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette puller</td>
			<td>Sutter Instrument</td>
			<td>P-1000</td>
			<td>https://www.sutter.com/MICROPIPETTE/p-1000.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chlorid</td>
			<td>Chem-lab</td>
			<td>CL00.1133</td>
			<td>https://www.chem-lab.be/#/en-gb/prod/1393528</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium dihydrogen phosphate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>104873</td>
			<td>https://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Potassium-dihydrogen-phosphate,MDA_CHEM-104873?ReferrerURL=https%3A%2F%2Fwww.google.com%2F</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blade to prepare hemispheres</td>
			<td>SPI supplies</td>
			<td>Safety Cartridge Dispenser - Pkg/10</td>
			<td>GEM Scientific Single Edge Razor Blades</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blade for vibratome</td>
			<td>Ted Pella Inc</td>
			<td>121-6</td>
			<td>double edge breakable style razor blades (PTFE-coated stainless steel)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recovery chamber</td>
			<td>home made - Generic</td>
			<td>N/A</td>
			<td>to collect and store brain slices in (see details in manuscript)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors</td>
			<td>Any company</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Blade should be well sharpened and at least 15 cm long for easy decapitation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver electrode wire</td>
			<td>Any company</td>
			<td></td>
			<td>for recording and reference electrodes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium dihydrogen phosphate dihydrate</td>
			<td>Merck</td>
			<td>106342</td>
			<td>https://www.merckmillipore.com/BE/en/product/Sodium-dihydrogen-phosphate-dihydrate,MDA_CHEM-106342?ReferrerURL=https%3A%2F%2Fwww.google.com%2F</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hydrogen carbonate</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>14707</td>
			<td>https://www.alfa.com/en/catalog/014707/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chlorid</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S/3160/60</td>
			<td>https://www.fishersci.co.uk/shop/products/sodium-chloride-certified-ar-analysis-meets-analytical-specification-ph-eur/10428420</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software for field recordings</td>
			<td>HEKA Elektronik</td>
			<td>PatchMaster</td>
			<td>https://www.heka.com/downloads/software/manual/m_patchmaster.pdf</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spatula</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S9147-12EA</td>
			<td>https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/s9147?lang=en&#38;region=BE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stimulator</td>
			<td>A.M.P.I</td>
			<td>ISO-FLEX</td>
			<td>http://www.ampi.co.il/isoflex.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td>VWR International Ltd.</td>
			<td>102745C</td>
			<td>https://es.vwr-cmd.com/ex/downloads/magazine/lupc_userguide_uk.pdf</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing for carbogen, perfusion and suction lines 1</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0167</td>
			<td>Tygon tubing (TY-50) for standard valve systems</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tubing for carbogen, perfusion and suction lines 2</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>800/100/200 &#38; 800/100/280</td>
			<td>Smiths Medical Portex Fine Bore LDPE Tubing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum pump</td>
			<td>home made - Generic</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8 valve multi-barrel perfusion system</td>
			<td>home made</td>
			<td>N/A</td>
			<td>consists of barrels, tubing and a self-made automated valve control (specifications of all purchased parts can be found in this Table)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnetic valves (to control the perfusion lines)</td>
			<td>NResearch Inc.</td>
			<td>p/n 161P011</td>
			<td>https://nresearch.com/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vibratome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>14912000001</td>
			<td>Semi-automatic vibrating blade microomei VT1200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath</td>
			<td>Memmert</td>
			<td>WNB 7</td>
			<td>https://www.memmert.be/wp-content/uploads/2019/09/Memmert-Waterbath-WNB-7.en_.pdf</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water purification system</td>
			<td>Merck</td>
			<td>Synergy millipore</td>
			<td>to obtain highly purified water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-well plates</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>CELLSTAR, 665180</td>
			<td>http://www.greinerbioone.com/UserFiles/File/Catalogue%202010_11/UK/3680_005-Kapitel1_UK.pdf</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

horizontal hippocampal slices of the mouse brain

Гиппокамп является высокоорганизованной структурой в головном мозге, которая является частью лимбической системы и участвует в формировании памяти и консолидации, а также проявление тяжелых расстройств мозга, в том числе болезни Альцгеймера и эпилепсии. Гиппокамп получает высокую степень внутри- и межсвязной связи, обеспечивая надлежащую связь с внутренними и внешними структурами мозга. Это подключение осуществляется с помощью различных информационных потоков в виде волоконных путей. Ломтики мозга являются часто используемой методологией при изучении нейрофизиологических функций гиппокампа. Гиппокамп мозга ломтики могут быть использованы для нескольких различных приложений, в том числе электрофизиологических записей, свет микроскопических измерений, а также несколько молекулярно-биологических и гистохимических методов. Таким образом, ломтики мозга представляют собой идеальную модельную систему для оценки белковых функций, для исследования патофизиологических процессов, связанных с неврологическими расстройствами, а также для целей обнаружения наркотиков.
Существует несколько различных способов подготовки ломтика. Препараты среза мозга с вибромом позволяют лучше сохранить структуру тканей и гарантировать достаточный запас кислорода во время нарезки, которые представляют преимущества по сравнению с традиционным использованием вертолета ткани. Кроме того, различные плоскости резки могут быть применены для вибромы мозга ломтик подготовки. Здесь представлен подробный протокол для успешной подготовки вибрато-отрезанных горизонтальных ломтиков гиппокампа мозга мыши. В отличие от других препаратов ломтик, горизонтальная нарезка позволяет сохранить волокна гиппокампа входной путь (перфорантный путь) в полностью нетронутом состоянии в ломтик, что облегчает исследование энторинал-гиппокампа взаимодействий. Здесь мы предоставляем тщательный протокол для вскрытия, экстракции и острой горизонтальной нарезки мозга мурина, и обсуждаем проблемы и потенциальные подводные камни этой техники. Наконец, мы покажем несколько примеров использования срезов мозга в дальнейших приложениях.

Watch this Scientific Journal Video about Horizontal Hippocampal Slices of the Mouse Brain at JoVE.com

Horizontal Hippocampal Slices of the Mouse Brain

Эта статья направлена на описывать систематический протокол для получения горизонтальных ломтиков мозга гиппокампа у мышей. Цель этой методологии заключается в сохранении целостности гиппокампа волокна пути, такие как перфорантный путь и мшистый волокна тракта для оценки зубной извилины связанных неврологических процессов.

Горизонтальные гиппокампа ломтики мыши мозга

The hippocampus is a highly organized structure in the brain that is a part of the limbic system and is involved in memory formation and consolidation as ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Oligomeric &beta;-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Preparation of Oligomeric ÃƒÅ½Ã‚Â²-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Подготовка Олигомерные β-амилоида 1-42 И индукция Synaptic Обесценение Пластичность на срезах гиппокампа

Impairment of synaptic connections is likely to underlie the subtle amnesic changes occurring at the early stages of Alzheimer s Disease (AD). ...

Imaging Calcium Responses in GFP-tagged Neurons of Hypothalamic Mouse Brain Slices

Изображениями кальция Ответы на GFP с метками нейроны гипоталамуса фрагменты мозга мыши

Despite an enormous increase in our knowledge about the mechanisms underlying the encoding of information in the brain, a central question concerning the ...

Investigations on Alterations of Hippocampal Circuit Function Following Mild Traumatic Brain Injury

Исследования О внесении изменений гиппокампа Функция Circuit после легкой черепно-мозговой травмой

Traumatic Brain Injury (TBI) afflicts more than 1.7 million people in the United States each year and even mild TBI can lead to persistent neurological ...

Paired Whole Cell Recordings in Organotypic Hippocampal Slices

Парные Целые Записи Сотовые в Органотипической срезов гиппокампа

Pair recordings involve simultaneous whole cell patch clamp recordings from two synaptically connected neurons, enabling not only direct ...

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Подготовка фрагментов острого мозга, с помощью оптимизированного N-метил-D-glucamine защитные восстановления метод

This protocol is a practical guide to the N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. Numerous recent studies have ...

Preparation of Horizontal Slices of Adult Mouse Retina for Electrophysiological Studies

Подготовка горизонтальных слоев взрослых мышей Retina для электрофизиологических исследований

Vertical slice preparations are well established to study circuitry and signal transmission in the adult mammalian retina. The plane of sectioning in ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

Запись синаптической пластичности в острой гиппокампа ломтики в малообъемной рециркуляции-, перфузии и погружения типа камерная система

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Evaluation of Synapse Density in Hippocampal Rodent Brain Slices

Оценка плотности синапсов в срезах гиппокампа грызунов мозга

In the brain, synapses are specialized junctions between neurons, determining the strength and spread of neuronal signaling. The number of synapses is ...

Assessment of Long-term Depression Induction in Adult Cerebellar Slices

Оценка долгосрочной депрессии индукции в взрослых церебеллярной ломтики

Synaptic plasticity provides a mechanism for learning and memory. For cerebellar motor learning, long-term depression (LTD) of synaptic transmissions from ...

Imaging of Intracellular ATP in Organotypic Tissue Slices of the Mouse Brain using the FRET-based Sensor ATeam1.03YEMK

Imaging of Intracellular ATP in Organotypic Tissue Slices of the Mouse Brain using the FRET-based Sensor ATeam1.03YEMK

Изображение внутриклеточного АТФ в органотипических фрагментах мышечного мозга с помощью датчика ATeam1.03YEMK на основе FRET

Neuronal activity in the central nervous system (CNS) evokes a high demand on cellular energy provided by the breakdown of adenosine triphosphate (ATP). A ...