Name: a protocol for immunohistochemistry and rna in-situ distribution within early drosophila embryo
Uploaded: 2022-05-06T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Protocol for Immunohistochemistry and RNA In-situ Distribution within Early Drosophila Embryo at JoVE.com

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (#31771377 / 31571273 / 31371256), Ulusal Eğitim Bakanlığı'ndan Yabancı Seçkin Bilim İnsanı Programı (#MS2014SXSF038), Ulusal Eğitim Bakanlığı Merkez Üniversiteleri Araştırma Fonu (#GK201301001 / 201701005 / GERP-17-45) tarafından desteklenmiştir ve XZ, Shaanxi İl Eğitim Departmanının Anahtar Programı (#2019TS082 / 2019TS079), Üstün Doktora Tezi Fonu (#20JS138 / 2019TS079) tarafından desteklenmektedir. Shaanxi İl Bilim ve Teknoloji Bölümü Doğa Bilimleri Temel Araştırma Programı Gençlik Projesi (#2020JQ-885).

1. Üzüm suyu agar tabaklarının hazırlanması
<ol><li>150 mL damıtılmış suya 5 g agar ve 5 g sakkaroz ekleyin. Agar ve sakkaroz tamamen çözünene kadar bir mikrodalga kullanarak kaynatın. 50 mL% 100 üzüm suyu ve çözeltiyi birlikte karıştırın.</li>
	<li>Son konsantrasyonu% 0.5 propiyonik aside yapmak için 1 mL% 100 propiyonik asit ekleyin. Hazırlanan çözeltinin 25 mL'sini her plakaya dökün. Agar katılaştıktan sonra, ortamı 4 ° C'de saklayın.</li>
</ol><p class="jove_title"...

<ol>
	<li>Weisleder, N., Ma, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+Ca2++sparks+in+aging+skeletal+and+cardiac+muscle.">Altered Ca2+ sparks in aging skeletal and cardiac muscle.</a> Ageing Research Reviews. 7 (3), 177-188 (2008).</li><li>Cheng, H., Lederer, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+Sparks.">Calcium Sparks.</a> Physiological Reviews. 88 (4), 1491-1545 (2008).</li><li>Fan, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ryanodine+Receptors:+Functional+Structure+and+Their+Regulatory+Factors.">Ryanodine Receptors: Functional Structure and Their Regulatory Factors.</a> Chinese Journal of Cell Biology. 37 (1), 6-15 (2015).</li><li>Xu, X., Balk, S. P., Isaacs, W., Ma, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+signaling:+an+underlying+link+between+cardiac+disease+and+carcinogenesis.">Calcium signaling: an underlying link between cardiac disease and carcinogenesis.</a> Cell &amp; Bioscience. 8 (39), 1-2 (2018).</li><li>Xu, X., Bhat, M. B., Nishi, M., Takeshima, H., Ma, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+cloning+of+cDNA+encoding+a+Drosophila+ryanodine+receptor+and+functional+studies+of+the+carboxyl-terminal+calcium+Release+Channel.">Molecular cloning of cDNA encoding a Drosophila ryanodine receptor and functional studies of the carboxyl-terminal calcium Release Channel.</a> Biophysical Journal. 78 (3), 1270-1281 (2000).</li><li>George, G. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+FKBP+family+protein:+evaluation,+structure,+and+function+in+mammals+and+Drosophila+melanogaster.">Comparative analysis of FKBP family protein: evaluation, structure, and function in mammals and Drosophila melanogaster.</a> BMC Developmental Biology. 18 (1), 1-12 (2018).</li><li>Zhou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Syncytium+calcium+signaling+and+macrophage+function+in+the+heart.">Syncytium calcium signaling and macrophage function in the heart.</a> Cell &amp; Bioscience. 8 (1), 1-9 (2018).</li><li>Wang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+and+CaSR/IP3R+in+prostate+cancer+development.">Calcium and CaSR/IP3R in prostate cancer development.</a> Cell &amp; Bioscience. 8 (1), 1-7 (2018).</li><li>Xu, M., Seas, A., Kiyani, M., Ji, K. S., Bell, H. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+temporal+examination+of+calcium+signaling+in+cancer-+from+tumorigenesis,+to+immune+evasion,+and+metastasis.">A temporal examination of calcium signaling in cancer- from tumorigenesis, to immune evasion, and metastasis.</a> Cell &amp; Bioscience. 8 (1), 1-9 (2018).</li><li>Shou, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+defects+and+altered+ryanodine+receptor+function+in+mice+lacking+FKBP12.">Cardiac defects and altered ryanodine receptor function in mice lacking FKBP12.</a> Nature. 391 (6666), 489-492 (1998).</li><li>Xin, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oestrogen+protects+FKBP12.6+null+mice+from+cardiac+hypertrophy.">Oestrogen protects FKBP12.6 null mice from cardiac hypertrophy.</a> Nature. 416 (6878), 334-337 (2002).</li><li>Zalk, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+of+a+mammalian+ryanodine+receptor.">Structure of a mammalian ryanodine receptor.</a> Nature. 517 (7532), 44-49 (2015).</li><li>Ridgway, E. B., Gilkey, J. C., Jaffe, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Free+calcium+increases+explosively+in+activating+medaka+eggs.">Free calcium increases explosively in activating medaka eggs.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 74 (2), 623-627 (1977).</li><li>Gilkey, J. C., Jaffe, L. F., Ridgway, E. B., Reynolds, G. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+free+calcium+wave+traverses+the+activating+egg+of+the+medaka,+Oryzias+latipes.">A free calcium wave traverses the activating egg of the medaka, Oryzias latipes.</a> Journal of Cell Biology. 76 (2), 448-466 (1978).</li><li>Kreko-Pierce, T., Azpurua, J., Mahoney, R. E., Eaton, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extension+of+health+span+and+life+span+in+Drosophila+by+S107+requires+the+calstabin+homologue+FK506-BP2.">Extension of health span and life span in Drosophila by S107 requires the calstabin homologue FK506-BP2.</a> Journal of Biological Chemistry. 291 (50), 26045-26055 (2016).</li><li>Sullivan, K. M., Scott, K., Zuker, C. S., Rubin, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ryanodine+receptor+is+essential+for+larval+development+in+Drosophila+melanogaster.">The ryanodine receptor is essential for larval development in Drosophila melanogaster.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (11), 5942-5947 (2000).</li><li>Feng, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+expression+of+DmFKBP12/Calstabin+during+embryonic+early+development+of+Drosophila+melanogaster.">Dynamics expression of DmFKBP12/Calstabin during embryonic early development of Drosophila melanogaster.</a> Cell &amp; Bioscience. 9 (1), 1-16 (2019).</li><li>Campos-Ortega, J. A., Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The embryonic development of Drosophila melanogaster. , 633-645 (1958).</li><li>Xu, X., Dong, C., Vogel, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemicentins+Assemble+on+Diverse+Epithelia+in+the+Mouse.">Hemicentins Assemble on Diverse Epithelia in the Mouse.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 55 (2), 119-126 (2007).</li><li>Wehrens, X. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FKBP12.6+deficiency+and+defective+calcium+release+channel+(ryanodine+receptor)+function+linked+to+exercise-induced+sudden+cardiac+death.">FKBP12.6 deficiency and defective calcium release channel (ryanodine receptor) function linked to exercise-induced sudden cardiac death.</a> Cell. 113 (7), 829-840 (2003).</li><li>Wehrens, X. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protection+from+cardiac+arrhythmia+through+ryanodine+receptor-stabilizing+protein+calstabin2.">Protection from cardiac arrhythmia through ryanodine receptor-stabilizing protein calstabin2.</a> Science. 304 (5668), 292-296 (2004).</li><li>Bellinger, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remodeling+of+ryanodine+receptor+complex+causes+&amp;#34;leaky&amp;#34;+channels:+a+molecular+mechanism+for+decreased+exercise+capacity.">Remodeling of ryanodine receptor complex causes &amp;#34;leaky&amp;#34; channels: a molecular mechanism for decreased exercise capacity.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (6), 2198-2202 (2008).</li><li>Maruyama, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FKBP12+is+a+critical+regulator+of+the+heart+rhythm+and+the+cardiac+voltage-gated+sodium+current+in+mice.">FKBP12 is a critical regulator of the heart rhythm and the cardiac voltage-gated sodium current in mice.</a> Circulation Research. 108 (9), 1042-1052 (2011).</li><li>Xu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FKBP12+is+the+only+FK506+binding+protein+mediating+T-cell+inhibition+by+the+immunosuppressant+FK506.">FKBP12 is the only FK506 binding protein mediating T-cell inhibition by the immunosuppressant FK506.</a> Transplantation. 73 (11), 1835-1838 (2002).</li><li>Zalk, R., Marks, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca2++release+channels+join+the+'resolution+revolution'.">Ca2+ release channels join the 'resolution revolution'.</a> Trends in Biochemical Sciences. 42 (7), 543-555 (2017).</li></ol>

RyRs ve IP3Rs aracılı kalsiyum sinyalizasyonu, hem omurgalı hem de omurgasız hayvanların birçok fizyolojik ve patolojik sürecinde temel bir yoldur1,2,3,4. İnsanlarda, RyR2 genindeki CPVT ile ilişkili R4496C mutasyonu gibi nokta mutasyonları, kardiyomiyositin sarkoplazmik retikulumundan kalsiyum sızıntısına yol açarak kardiyak disfonksiyona neden olur. Bu mutasyonlar, fiziksel akt...

Kalsiyuma bağlı kalsiyum salınım sinyalizasyonu (CICR), iskelet/düz kas ve kardiyak vasküler fonksiyon, hücre proliferasyonu ve apoptoz, gelişim, yaşlanma, nöronal sinaptik plastisite ve rejenerasyon gibi birçok biyolojik süreçte kritik rol oynar1,2,3,4,5,6 . Ryanodin reseptörleri (RyR'ler) ve inositol 1,4,5-trisfosfat reseptörleri (IP3R), düzenleyicileri protein kinaz A (PKA), Ca2 + / kalmodüline bağımlı protein kinaz II (CaMKII), FK506 bağlayıcı proteinler (FKBP'ler), kalsequestrin (CSQ), triadin ve junktin1,2,3,4,5,6 tarafından kontrol edilen kalsiyum sinyal yolundaki önemli oyunculardır. . Anormal insan ekspresyonu ve bu proteinlerdeki mutasyonlar, aritmi7 ve onkojenik proliferasyon gibi patolojik fizyolojiye yol açabilir8,9.
FKBP'ler, RyR'ler tarafından endoplazmik retikülerden (ER) kalsiyum salınımını düzenler. Bu süreç, kasılma mekanizması için gereklidir ve bu nedenle, embriyonik RyRs1,2 ile birlikte kalsiyum kaynaklı kalsiyum salınımı yoluyla miyosin-aktin kontraksiyonu tarafından üretilen tüm mekanik hareketlerden sorumludur. Fare modellerinde, RyR2 ve regülatörü FKBP12 / Calstabin'in eksikliği, embriyonik gelişim sırasında veya erken doğum sonrası dönemde10,11,12 her zaman öldürücüdür. FKBP12 / Calstabin nakavt fareleri, embriyonik gelişim sırasında düzensiz uyarılma-kasılma kuplajları (EC) ve serebral ödem ile kritik kalp defektleri sergiler. Bu, FKBP12 / Calstabin'in hem kardiyak hem de serebral gelişim için önemli olan RyR2 kanal ekspresyonunun düzenlenmesinde önemli bir rol oynadığını göstermektedir10.
RyR tarafından yürütülen kalsiyum kıvılcımları başlangıçta döllenmiş Medaka yumurtalarının zigot oluşum aşamasında keşfedilmiştir13,14. Bununla birlikte, erken embriyonik gelişimde kalsiyum sinyalizasyonunun işlevi hakkında çok az araştırma yapılmıştır. Drosophila melanogaster'da, DmFKBP12 S107 mutantlarından elde edilen sonuçlar, bu genin larva gelişimi ve oksidatif strese karşı işlevine atfedilen sağlıklı bir yaşam süresi için önemini destekleyen güçlü kanıtlar sunmaktadır15,16. Son zamanlarda, erken Drosophila melanogaster gelişimi sırasında FKBP12 / Calstabin proteini ve mesajcı RNA'nın dinamik lokalizasyonunu tanımladık17. Bu metodolojide açıklanan yaklaşımları kullanarak, sinsityal blastoderm (0-2 saat), hücresel blastoderm (2-3 saat), erken gastrula (3-12 saat) ve geç gastrula (12-24 saat) sırasında D. melanogaster'de FKBP12 / Calstabin ekspresyonunu izleyebildik. Bu yazıda, klasik parafin kesitleme için embriyo öncesi gömme, embriyonik kesitler için ön kaplama slayt tedavisi, histo-kimya boyama ve immünoboyama ve gen ekspresyonunun tanımlanması için mRNA in-situ hibridizasyonu dahil olmak üzere önceki çalışmadaki her yaklaşımın ayrıntılı protokolleri sunulmuştur.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>-20&#176;C Refrigerator</td>
			<td>Meiling Biology &#38;Medical</td>
			<td>DW-YL270</td>
			<td>Used for regent storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>-80&#176;C Ultra low temperature refrigerator</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>Forma 90 Series</td>
			<td>Used for regent storage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>WXBB6360V</td>
			<td>Preparation of grape juice agar plates</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Digoxigenin-AP, Fab fragments</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11093274910</td>
			<td>For the detection of digoxigenin-labeled compound</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biochemical incubator</td>
			<td>Shanghai Bluepard Instruments</td>
			<td>LRH-250</td>
			<td>In-situ Hybridization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bouin&#39;s solution</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent at Beijing</td>
			<td>69945460</td>
			<td>Drosophila Embryo Embedding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>540BH07808</td>
			<td>In-situ Hybridization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tube</td>
			<td>Denville</td>
			<td>C-2170</td>
			<td>Drosophila Embryo Collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chrome Alum</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent at Beijing</td>
			<td>10001018</td>
			<td>Coating Slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Constant temperature water bath</td>
			<td>Jintan Henfeng Instruments</td>
			<td>KW-1000DC</td>
			<td>Hematoxylin-Eosin Staining, Immunohistochemistry, In-situ Hybridization and Periodic Acid-Silver Methenamine Staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dako REAL EnVision Detection System</td>
			<td>Dako</td>
			<td>K5007</td>
			<td>In immunohistochemical reaction or in situ hybridization reaction, it binds to the primary antigen antibody, and the target is labeled by staining.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DEPC</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5758</td>
			<td>In-situ Hybridization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DIG RNA Labeling Kit</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11093274910</td>
			<td>RNA labeling with diagoxigenin-UTP by in vitro transcription with SP6 and T7 RNA polymerase</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drosophila melanogaster</td>
			<td>Bloomington Stock Center</td>
			<td>BDSC_16799, BDSC_19894, BDSC_11664</td>
			<td>The stocks of Drosophila melanogaster mutant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric blast drying oven</td>
			<td>Tianjin Taiste Instruments</td>
			<td>101-0AB</td>
			<td>For coating slides and paraffin embedding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>230251</td>
			<td>Hematoxylin-Eosin Staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent at Beijing</td>
			<td>100092680</td>
			<td>Paraffin Embedding, Hematoxylin-Eosin Staining, Immunohistochemistry, In-situ Hybridization and Periodic Acid-Silver Methenamine Staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent at Beijing</td>
			<td>10010328</td>
			<td>Coating Slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gold chloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>379948</td>
			<td>Periodic Acid-Silver Methenamine Staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>H3136</td>
			<td>Hematoxylin-Eosin Staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High Pure PCR Product Purification Kit</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11732668001</td>
			<td>For purification of PCR products</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Intelligent constant temperature and humidity box</td>
			<td>Ningbo Jiangnan Instruments</td>
			<td>HWS</td>
			<td>For fly maintenance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LE Agarose</td>
			<td>HyAgarose</td>
			<td>14190108029</td>
			<td>Pre-embedding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent at Beijing</td>
			<td>10014108</td>
			<td>Drosophila Embryo Collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>Observer.A1</td>
			<td>Hematoxylin-Eosin Staining, Immunohistochemistry, In-situ Hybridization and Periodic Acid-Silver Methenamine Staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Slides</td>
			<td>MeVid Labware Manufacturing</td>
			<td>P105-2001</td>
			<td>Coating Slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral Gum</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent at Beijing</td>
			<td>10004160</td>
			<td>Hematoxylin-Eosin Staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-heptane</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent at Beijing</td>
			<td>40026768</td>
			<td>Drosophila Embryo Collection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin slicer</td>
			<td>Huahai science instrument</td>
			<td>HH-2508III</td>
			<td>In-situ Hybridization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent at Beijing</td>
			<td>69019461</td>
			<td>Paraffin Embedding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pH/mV Meter</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>PB-10</td>
			<td>For determing the pH value of a solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silver nitrate</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent at Beijing</td>
			<td>10018461</td>
			<td>Periodic Acid-Silver Methenamine Staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water meter</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>AFXI-0501-P</td>
			<td>In-situ Hybridization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent at Beijing</td>
			<td>10023418</td>
			<td>Paraffin Embedding</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a protocol for immunohistochemistry and rna in-situ distribution within early drosophila embryo

Kalsiyuma bağlı kalsiyum salınım sinyalizasyonu (CICR) birçok biyolojik süreçte kritik bir rol oynar. Hücre proliferasyonu ve apoptoz, gelişim ve yaşlanmadan nöronal sinaptik plastisite ve rejenerasyona kadar her hücresel aktivite Ryanodin reseptörleri (RyR) ile ilişkilendirilmiştir. Kalsiyum sinyalizasyonunun önemine rağmen, erken gelişimdeki işlevinin kesin mekanizması belirsizdir. Kısa gebelik periyoduna sahip bir organizma olarak, Drosophila melanogaster'in embriyoları, CICR ile ilişkili proteinlerin ve bunların gelişim sırasındaki düzenleyicilerinin dağılımını ve lokalizasyonunu araştırmak için birincil çalışma konularıdır. Bununla birlikte, lipit bakımından zengin embriyoları ve kitin bakımından zengin koryonları nedeniyle, faydaları embriyoları cam yüzeylere monte etmenin zorluğu ile sınırlıdır. Bu çalışmada, Drosophila embriyosunun slaytlara bağlanmasını önemli ölçüde artıran pratik bir protokol ve başarılı histokimya, immünohistokimya ve yerinde hibridizasyon için ayrıntılı yöntemler sunuyoruz. Krom şap jelatin slayt kaplama yöntemi ve embriyo ön gömme yöntemi, Drosophila embriyo proteini ve RNA ekspresyonunun incelenmesinde verimi önemli ölçüde artırır. Bu yaklaşımı göstermek için, Drosophila melanogaster'ın erken embriyonik gelişimi sırasında RyR'nin iyi bilinen bir düzenleyicisi olan DmFKBP12 / Calstabin'i inceledik. DmFKBP12'yi sinsityal blastoderm aşaması kadar erken bir zamanda tanımladık ve gelişim sırasında DmFKBP12'nin dinamik ekspresyon paternini bildirdik: başlangıçta sinsityal blastodermde eşit olarak dağılmış bir protein olarak, daha sonra hücresel blastoderm sırasında korteksin bodrum tabakasına önceden lokalize olarak, erken gastrülasyonda üç mücevherli tabaka fazı sırasında ilkel nöronal ve sindirim mimarisinde dağılmadan önce. Bu dağılım, RyR'nin bu katmanlardan kaynaklanan hayati organ sistemlerinde oynadığı kritik rolü açıklayabilir: subözofageal ve supraözofageal ganglion, ventral sinir sistemi ve kas-iskelet sistemi.

Şekiller, yüksek lipid ve kitin içeren koryon Drosophila embriyolarının (Tablo 1) inceleme ve deney için cam slayt yüzeyine bağlanma zorluğunun üstesinden gelmek için kullanılan protokolleri açıklamaktadır. Şekil 1'de gösterilen krom şap jelatin slayt kaplama yöntemini kullanarak, Drosophila embriyolarının slaytların yüzeyine bağlanmasını arttırırken, Şekil 2'de gösterilen embriyo ön gömme yönte...

Watch this Scientific Journal Video about A Protocol for Immunohistochemistry and RNA In-situ Distribution within Early Drosophila Embryo at JoVE.com

A Protocol for Immunohistochemistry and RNA In-situ Distribution within Early Drosophila Embryo

Burada, Drosophila embriyo proteini ve RNA'nın toplanmasından ön gömülmesine ve gömülmesine, immünoboyamaya ve mRNA in situ hibridizasyonuna kadar tespiti ve lokalizasyonu için bir protokol tarif ediyoruz.

Erken Drosophila Embriyosunda İmmünohistokimya ve RNA In-situ Dağılımı için Bir Protokol

Calcium induced calcium release signaling (CICR) plays a critical role in many biological processes. Every cellular activity from cell proliferation and ...

Kısa bir gebelik süresine sahip bir organizma olarak, Drosophila melanogaster'in embriyoları, gelişim sırasında proteinlerin ve düzenleyicilerinin dağılımını ve lokalizasyonunu araştırmak için ana çalışma konularıdır. Bununla birlikte, lipit bakımından zengin embriyoları ve kitin bakımından zengin koryonları nedeniyle, faydaları embriyoları cam yüzeylere monte etmenin zorluğu ile sınırlıdır. Bu çalışmada, Drosophila embriyosunun slaytlara bağlanmasını önemli ölçüde artıran pratik bir yöntem tanıtıyoruz ve başarılı histokimya, immünohistokimya ve yerinde hibridizasyon için yöntemlerimizi detaylandırıyoruz.Burada gösterilen adımlardan önce, slaytlar deterjanla yıkanmalı, daha sonra musluk suyunda durulanmalı ve kuruması için fırına yerleştirilmeden önce damıtılmış su ile durulanmalıdır. Kuru slaytlar, durulanmadan ve tekrar kurutulmadan önce 24 saat boyunca potasyum dikromata hafifçe batırılmalı, daha sonra en az iki saat boyunca% 95 etanol içine yerleştirilmelidir. Bu adım sırasında, yöntemlerimize göre daha fazla slayt veya krom alum-jelatin hazırlayabilirsiniz.Jelatin daha sonra kullanımdan önce 60 derece banyo suyunda saklanabilir. Slaytları kaplamak için, slaytın bir kenarına az miktarda jelatin bırakın. Ardından, jelatini kaplanacak slaytın yüzeyi boyunca yavaşça ve eşit bir şekilde sürüklemek için başka bir cam slayt kullanın.Bu ince, eşit bir katman oluşturur. Bir rafa konmadan önce veya bir gece veya 48 saat daha tam kurumaya izin vermek için bir fırında saklanacak kurutma aparatları. Embriyo bir üzüm suyu agar plakası kullanılarak toplanır, hazır olduktan sonra üzüm suyu agar plakası çıkarılabilir.Plakayı PBS ile doldurun ve ekli embriyoları çıkarmak için yumuşak bir fırçayla hafifçe fırçalayın. PBS içeren embriyoyu 1,5 mililitrelik bir santrifüj tüpüne çıkarın ve buz üzerinde dinlenmeye bırakın. Embriyo buz üzerine yerleştikten sonra, süpernatant PBS'yi yavaşça çıkarın.Tüpün altındaki embriyoyu rahatsız etmemeye dikkat edin. Numuneye 1 mL% 50 ağartıcı ekleyin ve iki dakika boyunca hafifçe çalkalayın. Ağartıcıyı filtrasyonla çıkarın ve embriyoları PBS'de üç kez yıkayın.N-heptan hazırlayın. Hazır olduktan sonra, embriyoları filtre kağıdından n-heptana filtre kağıdını çözelti içinde hafifçe çalkalayarak yıkayın. Embriyoların n-heptan plakasının dibine yerleşmesine izin verin ve bu n-heptanı yeni bir 1.5 mililitrelik santrifüj tüpünde toplayın.Tüpe bir mililitre metanol ekleyin, çözeltinin çökelmesine izin verin ve ardından n-heptan metanolü aspire edin. Artık metanolü çıkarmak için embriyoyu PBS'de üç ila beş kez yıkayın. Bu ekstra PBS'yi çıkarın ve Bouin'in fiksatif maddesini ekleyin ve embriyoları sabitlemek için 30 ila 60 dakika yerleşmesine izin verin.Bouin'in fiksatifini çıkarın ve embriyoları PBS'de üç kez tekrar yıkayın. PBS'de% 1.2 agaroz hazırlayın ve 60 derecelik bir su banyosunda sıcak tutun, ardından embriyoları, depolandığı ekstra PBS'yi hafifçe aspire ederek gömmek için hazırlayın. Alttaki embriyoları rahatsız etmemeye dikkat edin ve daha sonra çözeltinin altındaki embriyo tapasını aspire edin ve yavaşça bir şişe kapağı kalıbına yerleştirin.% 1.2 agaroz jeli eklemeden önce bu kalıptan herhangi bir ek PBS'yi aspire edin. Bu agaroz fişlerini saklamak için bir PBS çözeltisi hazırlayın. Agaroz katılaştıktan sonra, bireysel fişler depolama için bu PBS'ye taşınabilir.Burada sıralı dehidrasyon sürecini gösteriyoruz. Her seferinde inkübasyon için 15 dakika izin verilir. Daha sonra% 100 etanolden çıkarın ve bire bir etanol ve ksilen çözeltisinde 15 dakika daha sabitleyin.Bu bire bir çözeltiden çıkarıldıktan sonra, bir dakika boyunca saf ksilen içinde çıkarın. Şimdi doku örneği, ısıtılmış bire bir ksilen parafin çözeltisine taşınmaya hazırdır. Son gömmeden önce% 100 parafin içine yerleştirmeden önce 30 dakika oturmasına izin verin.% 100 parafinin ilkine geçin ve iki saat dinlenin. Bu işlemi iki ve üç parafininde tekrarlayın. Numune artık bir kalıba taşınmaya hazırdır ve gömme işlemini tamamlamak için kalıp balmumu ile doldurulmuştur.Drosophila embriyolarının gömülmesi. Drosophila embriyolarının hazırlanan parafin kesitlerini 60 derece fırında 15 dakika bekletin. Bunları% 100 ksilen çözeltisine yerleştirin.Daha sonra rehidrasyona başlarız. Slaytları bu çözümlerin her birine her biri üç dakika boyunca yerleştirin. Slayt damıtılmış suya girdikten sonra, hematoksilin çözeltisine iki dakika boyunca yerleştirin.Tamamlandığında, çözeltinin mümkün olduğunca çoğunu slayttan boşalttığınızdan emin olun. Slayt damıtılmış suda yıkandıktan sonra, slaytı bir dakika boyunca eozin içinde lekeleyin. Son olarak, sürgünü eozinden çıkarın ve damıtılmış suda yıkayın.Bu slayt temizlendikten sonra, şimdi son dehidrasyon sürecimize başlıyoruz. Sonunda beş dakika boyunca% 100 ksilen içine yerleştirilir. Bu işlem,% 100 ksilenden oluşan iki yeni çözeltide tekrarlanır ve kızağın bir kenarı boyunca az miktarda nötr sakız damlatılır.Bu kapak kaymasını alın ve kızağın bir kenarına yavaşça yerleştirin. İlk önce slaytları% 100 ksilen içine yerleştirerek deparafinize edin. Slaytlar damıtılmış sudan çıkarıldıktan sonra,% 1 periyodik asit çözeltisi ile kaplanmalıdır.Daha sonra fazla çözeltiyi atar ve damıtılmış suda durularız. Slaytı doğrudan önceden ısıtılmış bir çözeltiye yerleştirerek. Bu tamamlandıktan sonra, slaytı damıtılmış suda durulayın ve daha sonra çözeltiyi% 0.2 altın klorür ile bir ila iki dakika renklendirin.Daha sonra, damıtılmış su kullanarak dokuyu% 3 sodyum tiyo sülfat ile üç dakika sabitliyoruz. Ve sonra hematoksilin ile karşı boyama. Karşı boyamadan sonra, leke burada gösterildiği gibi damıtılmış su tüpü ile yıkanabilir.Sonra dehidrasyon işlemine geçiyoruz. Slaytları doğrudan% 100 ksilene koyarak bunu izleyin ve ardından slaytın köşesine az miktarda nötr sakız uygulayın. Bir kapak kayması ile yavaşça örtün.Slaytları daha önce olduğu gibi deparafininize ederek ve ksilene ile hazırlamaya başlayın. Ve sonra bire bir ksilen etanolde. Slaytlar deparafinize edildikten sonra, dokularını yeniden sulandırmaya başlarız ve son olarak PBS'de.Slaytları 10 dakika boyunca metanol içinde yapılmış% 0.3 hidrojen peroksit içine yerleştirin. Daha sonra slaytlar 20 mLs hedef alma çözümü ile kaplanır. Slaytlar daha sonra boyama kutusuna yerleştirilebilir.Boyama kutusunu bir vapura yerleştirin, hiçbir çözümün kaçmadığından ve slaytların hala tamamen kaplandığından emin olun. Buharlama işlemi sırasında su buharının kaçabilmesi için leke kutusu kapağının tamamen kapatılmaması gerektiğini unutmayın. Ve sonra PBS-T'de üç kez hafifçe durulayın.Fazla çözeltiyi atın ve işlemi bu kez PBS ile tekrarlayın. Daha sonra, slaytları beş ila 10 dakika boyunca bir peroksit bloğunda inkübe ediyoruz ve daha sonra PBS-T'de ve daha sonra PBS'de birkaç kez duruluyoruz. Antikoru hazırlayın ve doğrudan dokunun üzerine bırakın.Bu dokular daha sonra inkübe edilebilir veya dört saat boyunca oda sıcaklığında olabilir. İkincil antikor, iki ila 10 dakika boyunca% 5 DAB ile boyanan 90 dakika boyunca oda sıcaklığında inkübe edilmelidir. Uygun renk elde edildikten sonra, damıtılmış suda durulayın ve ardından hematoksilinde karşı leke yapın.Bu hematoksilin boyamasından sonra, slaytlar sırayla dehidre edilebilir. Slaytları% 100 ksilen içine yerleştirin ve üç dakika bekletin. Ardından, kızağın bir kenarına az miktarda nötr sakız bırakın.Bir sakız yerleştirildikten sonra, slayt kapağını alın ve slaytın bir kenarından yavaşça yerleştirin. Steril bir RNaz içermeyen reaksiyon şişesine bir mikrogram saflaştırılmış doğrusallaştırılmış şablon DNA ekleyin. Ardından, toplam 13 mikrolitrelik bir numune hacmi oluşturmak için yeterli steril RNase içermeyen DEPC ile işlenmiş çift damıtılmış su ekleyin.Daha sonra kısa bir süre santrifüj yapın ve 37 santigrat derecede iki saat kuluçkaya yatırın. RNase koruma deneyleri için, şablon DNA'yı çıkarmak için iki mikrolitre Dnaz-1, RNaz içermeyen 15 dakika boyunca inkübe etmenizi öneririz. İnkübasyon adımı tamamlandıktan sonra, sekiz pH'ta iki mikrolitre 0.2 molar EDTA ekleyerek reaksiyonu durdurun.Burada gösterilen adımlardan önce, daha önce gösterilen protokolümüze göre, slaytlar deparafinize edildi ve rehidre edildi. Rehidrasyondan sonra, fiksatif çözeltiyi dokudan çıkarmak için slaytları litre başına 0.01 mol PBS'de 7.4 pH'ta beş dakika boyunca inkübe edin. PBS'de duruladıktan sonra, serbest aldehit gruplarını dokudan çıkarmak için litre başına 100 milimolar glisin çözeltisi ile beş dakika boyunca iki kez durularız.Bu adımdan sonra, slaytları PBS ile beş dakika durulayın. Daha sonra, durulamadan önce 15 dakika boyunca% 0.3triton X-100 içeren PBS'de inkübe edin ve daha sonra mikrolitre proteinaz K.Next başına bir mikrogram ile tekrar inkübe edin, slaytları% 4 paraformaldehit ve PBS ile üç dakika boyunca 7.2 pH'ta sabitleyin. Daha sonra,% 0.25 asetik anhidrit içeren 0.1 molar trietanolamin tamponu pH 8 ile inkübe etmeden önce slaytları yıkayın.Çözümle tam kapsama alanı sağlamak için kutuyu bu aşamada eğmeyi seçebilirsiniz. Kutu, kuru bir hibridizasyon kutusunun dibine % 20 gliserol veya DEPC suyu eklenerek hazırlanır. Ardından, slaytları 20 mikrolitre ön hibridizasyon çözeltisinde örtün.Somon'un sperm DNA'sı, her slaytta mililitre başına 100 mikrogram konsantrasyonda. Ve sonra dört saat boyunca 42 santigrat derecede kuluçkaya yatırın. Bu, bu işlem sırasında çözeltinin kurumamasını sağlamak için önceden hazırlanmış nemlendirilmiş bir kutuda yapılır.Hibridizasyon sonrası aşamada, hibridizasyon çözeltisinin numunelerinizden tamamen durulanması çok önemlidir. Bu, dört kez konsantrasyon SSC, iki kez konsantrasyon bir kez konsantrasyon, 0.5 kez konsantrasyon ve 0.1 kez konsantrasyon SSC çözeltisi kullanılarak 37 derecede 15 dakikalık ardışık durulamalarda yapılabilir. Her biri 37 santigrat derecede 15 dakika kuluçkaya yatar.Bu yapıldıktan sonra, yıkama tamponunu eklemeden önce PBS ile her biri beş dakika boyunca üç kez yıkayın. Yıkama tamponu, sonraki adımlardan önce bir dakika durulanmalıdır Bir sonraki çözeltiyi eklemeden önce yıkama tamponunun slaytlardan tamamen kuruduğundan emin olun. Her slayta 100 mililitre blokaj çözeltisi ekleyin ve slaytı 30 dakika boyunca inkübe edin.Bu, iyi lekelenmeyi sağlamak için en iyi şekilde ışıksız bir ortamda yapılır. Daha sonra slaytları 20 mLs antikor çözeltisinde 30 dakika boyunca tekrar inkübe edin. Dokunuzun tam olarak kaplanması için antikor çözeltisini doğrudan slaytlara uygulayın.Kuluçka tamamlandıktan sonra, 100 mililitre yıkama tamponu uygulayın. Bağlanmamış antikor konjugatlarını çıkarmak için ışıksız koşullarda 15 dakika boyunca inkübe edin. Yıkama tamponunu çıkarın.Daha sonra, 20 mililitre algılama tamponu uygulayın ve yaklaşık dört dakika boyunca inkübe edilmesine izin verin. Dört dakika sonra algılama arabelleğini çıkarın. Ek bir çözelti olmadığından emin olmak için slaytları kurutun ve 10 mililitre taze hazırlanmış renkli substrat çözeltisi ekleyin.Bu reaksiyon birkaç dakika içinde başlar, ancak 16 saat sonra tamamlanır. Bu nedenle, bu süre boyunca ışıksız bir durumda kuluçkaya yatmanıza izin verin. Bantların tespit edildiği istenen noktalar reaksiyonu durdurmak için slaytı 50 mililitre TE tamponu ile yıkayın.Daha sonra nötr sakız için daha önce gösterilen dehidrasyon işlemimizi ve montaj işlemimizi tamamlayın. Şekil bir ve iki, parafin kesitleri için krom alüminyum jelatin kaplama yöntemini ve Drosophila embriyolarının geliştirilmesinde FKBP12 ve DmFKBP12'nin ekspresyon profili için gömme yöntemini göstermektedir. Şekil üç, sinsityal hücresel blastoderm aşamalarında FKBP12 tespit edilen antikorun protein dağılımını göstermektedir.Bu histokimyasal sonuçlardan, FKBP12 ekspresyonunun sinsityal blastodermde daha az polarize olduğu, daha sonra trofektoderm epitelinin altındaki bazal membran içinde lokalize olmaya başladığı ve ön ve arka kutuplarda bulunan daha fazla ekspresyon ile gradyanı bilgilendirdiği görülebilir. Drosophila embriyosunun erken ve geç gaz ilişkisi aşamalarını takip eden dördüncü Şekil, FKBP12 proteininin ilkel embriyonik dokunun belirli mimari bileşenleriyle sınırlı hale geldiğini göstermektedir. Erken ve geç gastro embriyonik evrelerde gözlenenden daha az hücre dışı dağılım ile.İlginçtir ki, yukarıda tarif edilen dinamik protein dağılımına, şekil beşte görüldüğü gibi FKBP12'nin MRG düzeylerindeki karşılık gelen değişiklikler eşlik etmemektedir. Protein ekspresyonunun, transkripsiyon sonrası moleküler mekanizmanın hala bilinmeyen bir sonucu olduğunu göstermek. Ryanodin reseptörü aracılı kalsiyum sinyalizasyonu, hem omurgalı hem de omurgasız hayvanların birçok fizyolojik ve patolojik sürecinde temel bir yoldur.Bu gendeki mutasyonların, hastalığa veya erken kardiyak ölüme yol açan birçok fizyolojik rahatsızlığa neden olduğu bilinmektedir. Bununla birlikte, bu genin erken Drosophila gelişiminde oynadığı rolü incelemek zor olmuştur. Embriyonun bir transit bileşeni olarak, lipit bakımından zengin embriyo ve kitin bakımından zengin koryon, erken Drosophila gelişiminde protein ve embriyonik ekspresyon çalışmalarını zorlaştırır.Bu yazıda açıklanan slayt kaplama, embriyo gömme ve immünohistokimyasal teknikler, ryanodin reseptör proteini ve mRNA'nın dinamik dağılımını ayrıntılı olarak incelememizi sağlamıştır. Bu teknikleri ve Drosophila'nın erken gelişim aşamalarında başkalarının diğer proteinleri incelemesine izin verecekleri umudunu paylaşıyoruz.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

A Protocol for Immunohistochemistry and RNA In-situ Distribution within Early Drosophila Embryo

Understanding Early Organogenesis Using a Simplified In Situ Hybridization Protocol in Xenopus

Understanding Early Organogenesis Using a Simplified In Situ Hybridization Protocol in Xenopus

Anlamak Basitleştirilmiş kullanma Erken Organogenez<em&gt; In Situ</emIçinde&gt; Hibridizasyon Protokolü<em&gt; Ksenopus</em

Organogenesis is the study of how organs are specified and then acquire their specific shape and functions during development.  The Xenopuslaevis embryo ...

Protocols for Obtaining Zygotic and Somatic Embryos for Studying the Regulation of Early Embryo Development in the Model Legume Medicago truncatula

Protocols for Obtaining Zygotic and Somatic Embryos for Studying the Regulation of Early Embryo Development in the Model Legume Medicago truncatula

Model Baklagil Erken Embriyo Geliştirme Yönetmeliği incelenmesi için zigotik ve somatik embriyolar Elde protokolleri<em&gt; Medicago truncatula</em

Early embryogenesis starting from a single cell zygote goes through rapid cell division and morphogenesis, and is morphologically characterized by ...

Medium-scale Preparation of Drosophila Embryo Extracts for Proteomic Experiments

Medium-scale Preparation of Drosophila Embryo Extracts for Proteomic Experiments

Orta Ölçekli Hazırlanışı<em&gt; Drosophila</em&gt; Proteomik Denemeler için Embriyo Özleri

Analysis of protein-protein interactions (PPIs) has become an indispensable approach to study biological processes and mechanisms, such as cell signaling, ...

Visualizing Multiciliated Cells in the Zebrafish Through a Combined Protocol of Whole Mount Fluorescent In Situ Hybridization and Immunofluorescence

Visualizing Multiciliated Cells in the Zebrafish Through a Combined Protocol of Whole Mount Fluorescent In Situ Hybridization and Immunofluorescence

Zebra balığı bütün Dağı Floresan Situ hibridizasyon ve ayirt kombine bir protokol aracılığıyla Multiciliated hücrelerde görüntülenmesi

In recent years, the zebrafish embryo has emerged as a popular model to study developmental biology due to traits such as ex utero embryo development and ...

Minimally Invasive Embryo Transfer and Embryo Vitrification at the Optimal Embryo Stage in Rabbit Model

En düşük Invaziv embriyo transferi ve tavşan modelinde optimum embriyo aşamasında embriyo vitrifikasyon

Assisted reproductive techniques (ARTs), such as in vitro embryo culture or embryo cryopreservation, affect natural development patterns with perinatal ...

Dissection of the Drosophila Pupal Retina for Immunohistochemistry, Western Analysis, and RNA Isolation

Dissection of the Drosophila Pupal Retina for Immunohistochemistry, Western Analysis, and RNA Isolation

Drosophila pupa Retina diseksiyon immünhistokimya, Batı analiz ve RNA izolasyon için

The Drosophila pupal retina provides an excellent model system for the study of morphogenetic processes during development. In this paper, we present a ...

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Canlı görüntüleme ve Drosophila embryo kas kasılmaları Analizi

Coordinated muscle contractions are a form of rhythmic behavior seen early during development in Drosophila embryos. Neuronal sensory feedback circuits ...

Thawing, Culturing, and Cryopreserving Drosophila Cell Lines

Thawing, Culturing, and Cryopreserving Drosophila Cell Lines

Çözdürme, kültür ve Drosophila hücre hatları Cryopreserving

There are currently over 160 distinct Drosophila cell lines distributed by the Drosophila Genomics Resource Center (DGRC). With genome engineering, the ...

A Direct and Simple Method to Assess Drosophila melanogaster's Viability from Embryo to Adult

A Direct and Simple Method to Assess Drosophila melanogaster's Viability from Embryo to Adult

Drosophila Melanogaster'In Embriyodan Yetişkine Canlılığını Değerlendirmek Için Doğrudan ve Basit Bir Yöntem

In Drosophila melanogaster, viability assays are used to determine the fitness of certain genetic backgrounds. Allelic variations can result in partial or ...

Preparation of Small RNA Libraries for Sequencing from Early Mouse Embryos

Erken Fare Embriyolarından Sıralama için Küçük RNA Kütüphanelerinin Hazırlanması

MicroRNAs (miRNAs) are important for the complex regulation of cell fate decisions and developmental timing. In vivo studies of the contribution of miRNAs ...