Name: organ ischemia-reperfusion injury by simulating hemodynamic changes in rat liver transplant model
Uploaded: 2021-03-06T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Organ Ischemia-Reperfusion Injury by Simulating Hemodynamic Changes in Rat Liver Transplant Model at JoVE.com

Vi vil gerne anerkende de nyttige forslag fra Dr. Wen-tao Li og Dr. Ji-hua Wu fra det andet tilknyttede hospital i Guangxi Medical University. Forfatterne vil gerne takke vores holdkammerater for nyttige kommentarer og diskussioner. Forfatterne vil også gerne takke de anonyme anmeldere og redaktører af JoVE for deres kommentarer. En særlig tak bør gå til Dr. Yuan forældre for deres fortsatte støtte og opmuntring. Arbejdet blev støttet af Ningbo Natural Science Foundation (2014A610248).

Animal Ethics Committee godkendte forsøget med Guangxi Medical University (nr. 20190920). Alle dyr blev leveret af Animal Experiment Center i Guangxi Medical University. Vi brugte SPF mandlige Sprague Dawley rotter (200-250 g, 10-12 uger), holdes under stuetemperatur på 25 ± 2 ° C og fugtighed på 50 ± 10%. Fodring blev stoppet 24 timer før drift; der blev dog leveret vand.
BEMÆRK: En operatør kan udføre alle operationer uden mikrokirurgi eller kirurgisk mikroskop.
<p class="jove_...

<ol>
	<li>Dar, W. A., Sullivan, E., Byon, J. S., Eltzschig, H., Ju, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischaemia+reperfusion+injury+in+liver+transplantation:+Cellular+and+molecular+mechanisms.">Ischaemia reperfusion injury in liver transplantation: Cellular and molecular mechanisms.</a> Liver International. 39 (5), 788-801 (2019).</li><li>Qiao, P. F., Yao, L., Zhang, X. C., Li, G. D., Wu, D. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heat+shock+pretreatment+improves+stem+cell+repair+following+ischemia-reperfusion+injury+via+autophagy.">Heat shock pretreatment improves stem cell repair following ischemia-reperfusion injury via autophagy.</a> World Journal of Gastroenterology. 21 (45), 12822-12834 (2015).</li><li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+YAP+attenuates+hepatic+damage+and+fibrosis+in+liver+ischemia-reperfusion+injury.">Activation of YAP attenuates hepatic damage and fibrosis in liver ischemia-reperfusion injury.</a> Journal of Hepatology. 71 (4), 719-730 (2019).</li><li>Hirao, H., Dery, K. J., Kageyama, S., Nakamura, K., Kupiec-Weglinski, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heme+Oxygenase-1+in+liver+transplant+ischemia-reperfusion+injury:+From+bench-to-bedside.">Heme Oxygenase-1 in liver transplant ischemia-reperfusion injury: From bench-to-bedside.</a> Free Radical Biology and Medicine. 157, 75-82 (2020).</li><li>Moti&#241;o, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+role+of+hepatocyte+cyclooxygenase-2+expression+against+liver+ischemia-reperfusion+injury+in+mice.">Protective role of hepatocyte cyclooxygenase-2 expression against liver ischemia-reperfusion injury in mice.</a> Hepatology. 70 (2), 650-665 (2019).</li><li>Guo, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+search+for+a+magic+bullet+to+fight+multiple+organ+failure+secondary+to+ischemia/reperfusion+injury+and+abdominal+compartment+syndrome.">The search for a magic bullet to fight multiple organ failure secondary to ischemia/reperfusion injury and abdominal compartment syndrome.</a> Journal of Surgical Research. 184 (2), 792-793 (2013).</li><li>Elham, M., Mahmoudi, M., Nassiri-Toosi, M., Baghfalaki, T., Zeraati, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post+liver+transplantation+survival+and+related+prognostic+factors+among+adult+recipients+in+tehran+liver+transplant+center;+2002-2019.">Post liver transplantation survival and related prognostic factors among adult recipients in tehran liver transplant center; 2002-2019.</a> Archives of Iranian Medicine. 1 (23), 326-334 (2020).</li><li>Kim, E. H., Ko, J. S., Gwak, M. S., Lee, S. K., Kim, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+and+clinical+significance+of+hyperfibrinolysis+during+living+donor+liver+transplantation.">Incidence and clinical significance of hyperfibrinolysis during living donor liver transplantation.</a> Blood Coagulation and Fibrinolysis. 29 (3), 322-326 (2018).</li><li>Czig&#225;ny, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+research+practice+in+rat+orthotopic+and+partial+orthotopic+liver+transplantation:+a+review,+recommendation,+and+publication+guide.">Improving research practice in rat orthotopic and partial orthotopic liver transplantation: a review, recommendation, and publication guide.</a> European Surgical Research. 55 (1-2), 119-138 (2015).</li><li>Kamada, N., Calne, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat.+Technique+using+cuff+for+portal+vein+anastomosis+and+biliary+drainage.">Orthotopic liver transplantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage.</a> Transplantation. 28 (1), 47-50 (1979).</li><li>Zimmermann, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+for+orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat+and+some+studies+of+the+immunologic+responses+to+fully+allogeneic+liver+grafts.">Techniques for orthotopic liver transplantation in the rat and some studies of the immunologic responses to fully allogeneic liver grafts.</a> Transplantation Proceedings. 11 (1), 571-577 (1979).</li><li>Miyata, M., Fischer, J. H., Fuhs, M., Isselhard, W., Kasai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+for+orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat.+Cuff+technique+for+three+vascular+anastomoses.">A simple method for orthotopic liver transplantation in the rat. Cuff technique for three vascular anastomoses.</a> Transplantation. 30 (5), 335-338 (1980).</li><li>Kamada, N. A., Calne, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+experience+with+five+hundred+thirty+liver+transplants+in+the+rat.">Surgical experience with five hundred thirty liver transplants in the rat.</a> Surgery. 93 (1), 64-69 (1983).</li><li>Yang, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rat+model+of+orthotopic+liver+transplantation+using+a+novel+magnetic+anastomosis+technique+for+suprahepatic+vena+cava+reconstruction.">A rat model of orthotopic liver transplantation using a novel magnetic anastomosis technique for suprahepatic vena cava reconstruction.</a> Journal of Visualized Experiments. 19 (133), e56933 (2018).</li><li>Liu, L. X., He, C., Huang, T., Gu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+new+technique+for+reconstruction+of+hepatic+artery+during+liver+transplantation+in+sprague-dawley+rat.">Development of a new technique for reconstruction of hepatic artery during liver transplantation in sprague-dawley rat.</a> PLoS One. 10 (12), 0145662 (2015).</li><li>Paller, M. S., Hoidal, J. R., Ferris, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxygen+free+radicals+in+ischemic+acute+renal+failure+In+the+rat.">Oxygen free radicals in ischemic acute renal failure In the rat.</a> Journal of Clinical Investigation. 74 (4), 1156-1164 (1984).</li><li>Schmidt, J., Lewandrowsi, K., Warshaw, A. L., Compton, C. C., Rattner, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphometric+characteristics+and+homogeneity+of+a+new+model+of+acute+pancreatitis+in+the+rat.">Morphometric characteristics and homogeneity of a new model of acute pancreatitis in the rat.</a> International Journal of Pancreatology. 12 (1), 41-51 (1992).</li><li>Chui, C. J., McArdle, A. H., Brown, R., Scott, H. J., Gurd, F. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+mucosal+lesion+in+low-flow+states.+I.+A+morphological,+hemodynamic,+and+metabolic+reappraisal.">Intestinal mucosal lesion in low-flow states. I. A morphological, hemodynamic, and metabolic reappraisal.</a> Archives of Surgery. 101 (4), 478-483 (1970).</li><li>Kozian, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One-lung+ventilation+induces+hyperfusion+and+alveolar+damage+in+the+ventilated+lung:an+experimental+study.">One-lung ventilation induces hyperfusion and alveolar damage in the ventilated lung:an experimental study.</a> British Journal of Anaesthesia. 100 (4), 549-559 (2008).</li><li>Shimada, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heavy+water+(D2O)+containing+preservation+solution+reduces+hepatic+cold+preservation+and+reperfusion+injury+in+an+isolated+perfused+rat+liver+(IPRL)+model.">Heavy water (D2O) containing preservation solution reduces hepatic cold preservation and reperfusion injury in an isolated perfused rat liver (IPRL) model.</a> Journal of Clinical Medicine. 8 (11), 1818 (2019).</li><li>Nakamura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sirtuin+1+attenuates+inflammation+and+hepatocellular+damage+in+liver+transplant+ischemia/reperfusion:+from+mouse+to+human.">Sirtuin 1 attenuates inflammation and hepatocellular damage in liver transplant ischemia/reperfusion: from mouse to human.</a> Liver Transplantation. 23 (10), 1282-1293 (2017).</li><li>Blaire, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+Considerations+of+Hilar+Cholangiocarcinoma.">Surgical Considerations of Hilar Cholangiocarcinoma.</a> Surgical Oncology Clinics of North America. 28 (4), 601-617 (2019).</li></ol>

OLT hos rotter er en ideel model til undersøgelse af organbevarelse i levertransplantation, IRI, transplantationsafstødning, immuntolerance, transplantationspatologi og farmakologi, homotransplantation og xenotransplantation. På nuværende tidspunkt er det meget udbredt i den eksperimentelle forskning i levertransplantation.
Under pilotundersøgelser administrerede vi først pentobarbital natrium intraperitoneal anæstesi og fandt ud af, at dette førte til høj postoperativ dødelighed og ...

Iskæmi-reperfusion skade (IRI) er en almindelig komplikation efter levertransplantation. Hepatisk IRI er en patologisk proces, der involverer iskæmi-medieret celleskade og unormal forringelse af leverafvisende. Hepatisk IRI og den lokale medfødte immunrespons kan opdeles i varm og kold IRI, alt efter forskelle i det kliniske miljø1. Hot IRI er induceret af stamcelleskade, normalt som følge af levertransplantation, chok, og traumer2. Kold IRI er en komplikation af levertransplantation forårsaget af endotelceller og perifercirkulation 3. Kliniske rapporter har vist, at lever-IRI er forbundet med 10% af tidlige organsvigt og kan øge forekomsten af akut og kronisk afvisning4,5. Derudover kan lever IRI også fremkalde flere organ dysfunktion syndromer eller systemisk inflammatorisk respons syndrom, med højdødelighed 6. Patienter med ekstrahepatisk organinddragelse har tendens til at blive længere på hospitalet, bruge flere penge og have en dårligere prognose7. Udviklingen af komplikationer er tæt forbundet med længden af den anheptiske fase af levertransplantation8.
Ortopisk levertransplantation (OLT) hos rotter blev først rapporteret af den amerikanske professor Lee i 1973. Den eksperimentelle operation simulerede trinene i klinisk levertransplantation og anastomose hos blodkar og den fælles galdegang (CBD) ved hjælp af suturmetoden. Proceduren er vanskelig og tidskrævende med en lav succesrate9. I 1979 foretog Kamada et al. en betydelig forbedring af OLT hos rotter ved kreativt at anvende »to-manchetmetoden« til anastomose i portalåren for at kontrollere den anhepatiske fase inden for 26 minutterog 10. Samme år foreslog Zimmermann "enkelt galdestentmetoden". På grundlag af Lees arbejde brugte Zimmermann polyethylenrør til direkte at anastomose CBD hos donoren og modtageren, forenklede genopbygningen af CBD og bevarede sphincters funktion, og denne metode blev standarden for galderekonstruktion af OLT-modeller11. I 1980 foreslog Miyata et al. den "tre-manchet metode", hvor portalen vene (PV), suprahepatic vena cava (SVC), og intrahepatic vena cava (IVC) blev anastomosed af manchetten metode. Der er dog risiko for forvrængning af kanylen med denne metode, hvilket kan føre til obstruktion af ringere vena cava refluks12. I 1983 blev metoden med »to manchetter« foreslået ved hjælp af manchetmetoden for anastomose i PV og IVC, men ved at anvende suturmetoden for SVC13. Denne metode blev vedtaget af forskere globalt for at etablere OLT-modeller. Siden da er manchet anastomosetrinnene blevet forbedret for at forkorte den anhepatisk fase og forbedre overlevelsesraten for rotterne14. Tilsvarende anvendes forbedrede metoder i klinisk praksis til at forkorte den anheptiske fase15. Grundforskning i IRI efter levertransplantation har imidlertid vist, at overlevelsesraten er omvendt relateret til graden af skade på ekstrahepatiske organer. Derfor er der behov for yderligere forskning, og der er behov for en enkel og reproducerbar dyremodel for at simulere IRI efter levertransplantation.
Baseret på definitionen af den anhepatisk fase simulerede vi de hæmodynamiske ændringer i levertransplantation, hvilket resulterede i IRI af ekstrahepatiske organer hos rotter. Heri giver vi en detaljeret beskrivelse af, hvordan man opbygger en dyremodel af den anheptiske fase (leveriskæmi) hos rotter for at lette grundforskning i IRI efter levertransplantation.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4% paraformaldehyde solution</td>
			<td>Shanghai Macklin Biochemical Co.,Ltd</td>
			<td>P804536</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>air drying oven</td>
			<td>Shanghai Binglin Electronic Technology Co., Ltd.</td>
			<td>BPG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alanine aminotransferase (ALT)Kit</td>
			<td>Elabscience Biotechnology Co.,Ltd</td>
			<td>E-BC-K235-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ammonia</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd</td>
			<td>10002118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>amylase Kit</td>
			<td>Elabscience Biotechnology Co.,Ltd</td>
			<td>E-BC-K005-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anhydrous ethanol</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd</td>
			<td>100092183</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal anesthesia machine</td>
			<td>Shenzhen Ruiwode Life Technology Co. Ltd</td>
			<td>R640</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>aspartate aminotransferase (AST)kit</td>
			<td>Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd.</td>
			<td>S03040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>automatic biochemical analyzer.</td>
			<td>SIEMENS AG FWB:SIE, NYSE:SI Co., Ltd.</td>
			<td>2400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biosystems (when nessary)</td>
			<td>Chengdu Taimeng Electronics Co., Ltd.</td>
			<td>BL-420F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Baiyang Medical Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>BY-600A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cover glass</td>
			<td>Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co. Ltd</td>
			<td>10212432C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>creatinine Kit</td>
			<td>Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd.</td>
			<td>S03076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dewatering machine</td>
			<td>Hungary 3DHISTECH Co.,Ltd</td>
			<td>Donatello Series 2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>embedding machine</td>
			<td>Hubei Xiaogan Kuohai Medical Technology Co., Ltd.</td>
			<td>KH-BL1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>frozen machine</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JB-L5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hematoxylin-eosin dye solution</td>
			<td>Wuhan Saiwell Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>G1005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>high-efficiency paraffin wax</td>
			<td>Shanghai huayong paraffin wax co., Ltd</td>
			<td>Q/YSQN40-91</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hydrochloric acid</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd</td>
			<td>10011018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>intraocular lens (IOL)forceps</td>
			<td>Guangzhou Guangmei Medical Equipment Co., Ltd.</td>
			<td>JTZRN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Shenzhen Ruiwode Life Technology Co. Ltd</td>
			<td>&#8212;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>micro Scissors(when nessary)</td>
			<td>Shanghai Surgical Instrument Factory</td>
			<td>WA1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>needle holders</td>
			<td>Shanghai Surgical Instrument Factory</td>
			<td>J32010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>neutral gum</td>
			<td>Shanghai Huashen Healing Equipment Co.,Ltd.</td>
			<td>&#8212;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>normal optical microscope</td>
			<td>Nikon Instrument Shanghai Co., Ltd</td>
			<td>Nikon Eclipse CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ophthalmic forceps</td>
			<td>Shanghai Surgical Instrument Factory</td>
			<td>J3CO30</td>
			<td>straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ophthalmic forceps</td>
			<td>Shanghai Surgical Instrument Factory</td>
			<td>JD1060</td>
			<td>bending</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ophthalmic Scissors</td>
			<td>Shanghai Surgical Instrument Factory</td>
			<td>J1E0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pathological slicer</td>
			<td>Shanghai Leica Instrument Co., Ltd</td>
			<td>RM2016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pipettes</td>
			<td>Dragon Laboratory Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>7010101008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>retractors</td>
			<td>Beijing Jinuotai Technology Development Co.,Ltd.</td>
			<td>JNT-KXQ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>scanner</td>
			<td>Hungary 3DHISTECH Co.,Ltd</td>
			<td>Pannoramic 250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>slide</td>
			<td>Wuhan Saiwell Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>G6004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>xylene</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd</td>
			<td>1330-20-7</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

organ ischemia-reperfusion injury by simulating hemodynamic changes in rat liver transplant model

Ortopisk levertransplantation (OLT) hos rotter er en afprøvet og dokumenteret dyremodel, der anvendes til præoperative, intraoperative og postoperative undersøgelser, herunder iskæmi-reperfusionsskader (IRI) af ekstrahepatisk organer. Denne model kræver adskillige eksperimenter og enheder. Varigheden af anhepatisk fase er tæt forbundet med tiden til at udvikle IRI efter transplantation. I dette eksperiment brugte vi hæmodynamiske ændringer til at fremkalde ekstrahepatisk organskade hos rotter og bestemte den maksimale tolerancetid. Tiden indtil den mest alvorlige organskade varierede for forskellige organer. Denne metode kan let kopieres og kan også bruges til at studere IRI af de ekstrahepatiske organer efter levertransplantation.

Rotters tolerance over for leveriskæmi I denne dyremodel er de steder, hvor blodkarrene blev ligeret under drift, vist i figur 1. Rotterne blev tilfældigt opdelt i 5 grupper for iskæmi i 15 minutter (I15 gruppe), 30 minutter (I30 gruppe), 45 minutter (I45 gruppe), 60 minutter (I60), og fingeret gruppe, med 10 rotter i hver gruppe. Overlevelsesraten for hver gruppe blev observeret 14 dage efter operationen. Alle rotter overlevede i I15-gruppen, I30-gruppen og sham-grupp...

Watch this Scientific Journal Video about Organ Ischemia-Reperfusion Injury by Simulating Hemodynamic Changes in Rat Liver Transplant Model at JoVE.com

Organ Ischemia-Reperfusion Injury by Simulating Hemodynamic Changes in Rat Liver Transplant Model

Dette papir giver en detaljeret beskrivelse af, hvordan man opbygger en dyremodel af den anheptiske fase (leveriskæmi) hos rotter for at lette grundforskning i iskæmi-reperfusionsskade efter levertransplantation.

Organ Iskæmi-Reperfusion Skade ved at simulere hæmodynamiske ændringer i rottelevertransplantation Model

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats is a tried and proven animal model used for preoperative, intraoperative, and postoperative studies, ...

Organisk iskæmi-reperfusion skade ved at simulere hæmodynamiske ændringer i rotte levertransplantation model. Iskæmi-reperfusion skade er en almindelig anvendelse efter levertransplantation. Patienter med ekstrahepatisk organinddragelse har en tendens til at blive længere på hospitalet, tilbringe mere og har en dårligere prognose.Udviklingen af komplikationen er tæt forbundet med længden af den anheptiske fase af levertransplantation. Grundforskning i iskæmi-reperfusionsskaden efter levertransplantation har imidlertid vist, at overlevelsesraten efter levertransplantation er omvendt relateret til graden af skade på ekstrahaptiske organer. Baseret på definitionen af den akklimatiske fase simulerede vi den hæmodynamiske ændring i levertransplantation, hvilket resulterede i iskæmi-reperfusionsskade af ekstrahaptiske organer.Af dette papir er at give en detaljeret beskrivelse af, hvordan man opbygger et dyr model af den akklimatiske fase i rotter, grundforskning i iskæmi-reperfusion skade efter levertransplantation. Dr.Yuan Yuan er ansvarlig for alle video dyr operationer. To oftalmiske pincet, lige og bøjning, og interokulær linse, IOL pincet, oftalmisk saks, en til to retractorer, vatpinde, 3-0 kirurgiske suturer, iodoform gaze, sutur nåle, Biosystems når det er nødvendigt, og interocular linse, IOL pincet bruges til at adskille blodkar på grund af roundheads.Dyrebedøvelsesmaskine, afvandingsmaskine, indlejringsmaskine, patologisk skiveskærer, frossen maskine, vævsskærer, lufttørringsovn, neuralt optisk mikroskop, scanneren, enflurane til generel anæstesi, 4%paraformaldehydopløsning, anyhydrous ethanol, xylen, højeffektiv paraffinvoks, hematoxylin-eosin farvestofopløsning, saltsyre, ammoniak, glide, dækglas, neutralt tyggegummi og døende reagenser og forbrugsmaterialer. Pipetter, centrifuge, automatisk biokemisk analysator, alanin amino transferase, ALT kit, aspartate, amino transferase, AST kit, kreatinin kit. Efter vejning bedøves rotterne med isoflurane af en dyrebedøvelsesmaskine.Efter abdominal desinfektion skal du lave et medianindsnit på tre centimeter under xiphoidprocessen ved hjælp af pincet og saks. Åbn bughulen, udsætte leveren ved hjælp af en retractor og mobilisere hepatogastriske ledbånd. Brug vatpinde til at vende den midterste lap af leveren forsigtigt og drej den opad for at eksponere porta habitis.Identificer galdegangen, portalåren og den leverarterie. Skub tyndtarmen mod venstre nedre bughulen ved hjælp af bomuld swaps og flytte ringere vena cava til højre nyre vene, isolere portalen vene, leverarterie og ringere vena cava over højre nyre vene med en intraokulær linse, IOL, pincet markeret med 3-0 silke tråd hver med en slip knude. Skær huden af venstre og højre nedre ende og udsætte lårbenet vene ved hjælp af oftalmiske pincet.Injicer langsomt lav molekylvægt heparin 625 IE/kg gennem lårbenets vene for at heparinere hele kroppen. Ligate portalen vene, leverarterie, og ringere vena cava over højre nyre vene med nummer 3-0 suturer, der varer i 45 minutter. Udskift tyndtarmen i bughulen og dække det med gaze.Indånding anæstesi er reduceret i disse perioder. Efter 45 minutter, slip portalen vene, leverarterie, og ringere vena cava over højre nyre vene. Sutur musklen og huden lag for lag og opsige inhalational anæstesi.Giv postoperativ analgesi ved hjælp af subkutan morfin på 5 mg/kg hver fjerde time Overhold rotten, indtil den er vågen, og hold den under en temperatur på 25 plus eller minus to grader Celsius og fugtighed på 50 plus eller minus 10% Dyreopvarmningslamper er nødvendig. I denne dyremodel blev rotterne tilfældigt opdelt i fem grupper i henhold til iskæmi i 15 minutter, jeg 15 gruppe, 30 minutter, jeg 30 gruppe, 45 minutter, jeg 45 gruppe, 60 minutter, jeg 60 og en sham gruppe med 10 rotter i hver gruppe. Deres overlevelsesrate for hver gruppe blev observeret 14 dage efter operationen.Alle rotter overlevede i I 15, I 30 og sham grupper. Otte overlevede i 14 dage i I 45-gruppen, og kun to overlevede i I 60-gruppen. Resultaterne tydede på, at rotterne højst kunne tåle den anhepatisk fase i 45 minutter.Under eksperimentet blev Biosystems brugt til at registrere ændringer i puls og blodtryk, højre indre halspulsåre intubation før og efter den anhepatiske fase. Vi fandt ud af, at pulsen og det gennemsnitlige arterielt tryk, MAP af rotter, ændrede sig dramatisk efter vaskulær ligation. Efter ligation var leverisk iskæmi, overbelastning og ødem i tarmene, mavevariationer og splenomegaly tydelige.80 rotter blev tilfældigt opdelt i otte grupper, herunder iskæmi i 45 minutter, T0, reperfusion i seks timer, T6, 12 timer, T12, 24 timer, T24, 48 timer, T48, 72 timer, T72, syv dage, T7, i 14 dage, T14, hhv. Nyrerne, bugspytkirtlen, tyndtarmen, hjerte-og lungevæv blev taget og farves med HE efter rotter blev ofret. Bortset fra hjertet blev patologiske scoringer givet i henhold til referencer.Resultaterne viste, at tidspunktet for den maksimale skade på de ekstrahepatiske organer varierede. Det var seks til 24 timer efter operation for bugspytkirtlen og 24 til 48 timer for lungerne. Tarmkanalen og nyrerne blev hårdest kvæstet efter 45 minutters iskæmi.Der var ingen åbenlys abnormitet af tarmslimhinden 24 timer efter operationen, og nyrerne kom sig efter 48 timer. Med hensyn til hjertet, med tiden efter reperfusion, blev lokal myokardiecelle narcosis, cellefragmentering og opløsning, inflammatorisk celleinfiltration og lokal vasodilation og overbelastning fundet i vævet med 24 til 48 timer efter operationen. Serum blev indsamlet, og niveauerne af ALT, AST, kreatinin og amylase blev opdaget af en automatisk biokemisk analysator.Alle indikatorer toppede ved 24 til 48 timer, i modsætning til de patologiske ændringer. Selv om niveauerne dybest set var normale 48 timer efter operationen, fortsatte de patologiske skader stadig. For opsummere er modellen i rotter enkel og lettere at bruge uden mikrokirurgi og danner grundlag for grundforskning af iskæmi-reperfusionsskaden af ekstrahepatisk organer efter leverisk iskæmi.

Research

JoVE Journal

Medicine

Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

In situ Transverse Rectus Abdominis Myocutaneous Flap: A Rat Model of Myocutaneous Ischemia Reperfusion Injury

In situ Transverse Rectus Abdominis Myocutaneous Flap: A Rat Model of Myocutaneous Ischemia Reperfusion Injury

In situ Tværgående Rectus abdominis Myocutaneous Flap: En Rat Model of Myocutaneous iskæmisk reperfusionsbeskadigelse

Free tissue transfer is the gold standard of reconstructive surgery to repair complex defects not amenable to local options or those requiring composite ...

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Iskæmireperfusion Model akut nyreskade og Post Injury Fibrose i mus

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

Technique of Porcine Liver Procurement and Orthotopic Transplantation using an Active Porto-Caval Shunt

Teknik af porcin Liver Indkøb og ortotopisk Transplantation ved hjælp af en Active Porto-Caval Shunt

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. Each year, a considerable number of patients on the liver transplantation ...

Induction and Assessment of Ischemia-reperfusion Injury in Langendorff-perfused Rat Hearts

Induktion og vurdering af iskæmi-reperfusion skade i Langendorff-perfusionerede rottehjerter

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Murin model af intestinal iskæmi-reperfusionsskade

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

En mus Model of retinaiskæmi-reperfusionsskade Gennem Elevation af intraokulært tryk

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

Method of Direct Segmental Intra-hepatic Delivery Using a Rat Liver Hilar Clamp Model

Metode til direkte Segmentoplysninger Intra-hepatisk Levering Ved hjælp af en rotte Lever hilar Clamp Model

Major hepatic surgery with inflow occlusion, and liver transplantation, necessitate a period of warm ischemia, and a period of reperfusion leading to ...

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

En lille dyremodel af Ex Vivo Normothermic lever Perfusion

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Evaluering af koronar flow reserve efter myokardieiskæmi reperfusion hos rotter

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...