Name: organ ischemia-reperfusion injury by simulating hemodynamic changes in rat liver transplant model
Uploaded: 2021-03-06T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Organ Ischemia-Reperfusion Injury by Simulating Hemodynamic Changes in Rat Liver Transplant Model at JoVE.com

Vi ønsker å anerkjenne de nyttige forslagene gitt av Dr. Wen-tao Li og Dr. Ji-hua Wu fra Second Affiliated Hospital of Guangxi Medical University. Forfatterne vil gjerne takke våre lagkamerater for nyttige kommentarer og diskusjoner. Forfatterne vil også takke de anonyme anmelderne og redaktørene av JoVE for deres kommentarer. Spesiell takk bør gå til Dr Yuan foreldre for deres kontinuerlige støtte og oppmuntring. Verket ble støttet av Ningbo Natural Science Foundation (2014A610248).

Dyreetikkkomiteen godkjente eksperimentet av Guangxi Medical University (No20190920). Alle dyr ble levert av Animal Experiment Center of Guangxi Medical University. Vi brukte SPF mannlige Sprague Dawley rotter (200-250 g, 10-12 uker), holdt under romtemperatur på 25 ± 2 ° C og fuktighet på 50 ± 10%. Fôringen ble stoppet 24 timer før drift; Vann ble imidlertid gitt.
MERK: En operatør kan utføre alle operasjoner uten mikrokirurgi eller kirurgisk mikroskop.
1. D...

<ol>
	<li>Dar, W. A., Sullivan, E., Byon, J. S., Eltzschig, H., Ju, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischaemia+reperfusion+injury+in+liver+transplantation:+Cellular+and+molecular+mechanisms.">Ischaemia reperfusion injury in liver transplantation: Cellular and molecular mechanisms.</a> Liver International. 39 (5), 788-801 (2019).</li><li>Qiao, P. F., Yao, L., Zhang, X. C., Li, G. D., Wu, D. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heat+shock+pretreatment+improves+stem+cell+repair+following+ischemia-reperfusion+injury+via+autophagy.">Heat shock pretreatment improves stem cell repair following ischemia-reperfusion injury via autophagy.</a> World Journal of Gastroenterology. 21 (45), 12822-12834 (2015).</li><li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+YAP+attenuates+hepatic+damage+and+fibrosis+in+liver+ischemia-reperfusion+injury.">Activation of YAP attenuates hepatic damage and fibrosis in liver ischemia-reperfusion injury.</a> Journal of Hepatology. 71 (4), 719-730 (2019).</li><li>Hirao, H., Dery, K. J., Kageyama, S., Nakamura, K., Kupiec-Weglinski, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heme+Oxygenase-1+in+liver+transplant+ischemia-reperfusion+injury:+From+bench-to-bedside.">Heme Oxygenase-1 in liver transplant ischemia-reperfusion injury: From bench-to-bedside.</a> Free Radical Biology and Medicine. 157, 75-82 (2020).</li><li>Moti&#241;o, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+role+of+hepatocyte+cyclooxygenase-2+expression+against+liver+ischemia-reperfusion+injury+in+mice.">Protective role of hepatocyte cyclooxygenase-2 expression against liver ischemia-reperfusion injury in mice.</a> Hepatology. 70 (2), 650-665 (2019).</li><li>Guo, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+search+for+a+magic+bullet+to+fight+multiple+organ+failure+secondary+to+ischemia/reperfusion+injury+and+abdominal+compartment+syndrome.">The search for a magic bullet to fight multiple organ failure secondary to ischemia/reperfusion injury and abdominal compartment syndrome.</a> Journal of Surgical Research. 184 (2), 792-793 (2013).</li><li>Elham, M., Mahmoudi, M., Nassiri-Toosi, M., Baghfalaki, T., Zeraati, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post+liver+transplantation+survival+and+related+prognostic+factors+among+adult+recipients+in+tehran+liver+transplant+center;+2002-2019.">Post liver transplantation survival and related prognostic factors among adult recipients in tehran liver transplant center; 2002-2019.</a> Archives of Iranian Medicine. 1 (23), 326-334 (2020).</li><li>Kim, E. H., Ko, J. S., Gwak, M. S., Lee, S. K., Kim, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+and+clinical+significance+of+hyperfibrinolysis+during+living+donor+liver+transplantation.">Incidence and clinical significance of hyperfibrinolysis during living donor liver transplantation.</a> Blood Coagulation and Fibrinolysis. 29 (3), 322-326 (2018).</li><li>Czig&#225;ny, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+research+practice+in+rat+orthotopic+and+partial+orthotopic+liver+transplantation:+a+review,+recommendation,+and+publication+guide.">Improving research practice in rat orthotopic and partial orthotopic liver transplantation: a review, recommendation, and publication guide.</a> European Surgical Research. 55 (1-2), 119-138 (2015).</li><li>Kamada, N., Calne, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat.+Technique+using+cuff+for+portal+vein+anastomosis+and+biliary+drainage.">Orthotopic liver transplantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage.</a> Transplantation. 28 (1), 47-50 (1979).</li><li>Zimmermann, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+for+orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat+and+some+studies+of+the+immunologic+responses+to+fully+allogeneic+liver+grafts.">Techniques for orthotopic liver transplantation in the rat and some studies of the immunologic responses to fully allogeneic liver grafts.</a> Transplantation Proceedings. 11 (1), 571-577 (1979).</li><li>Miyata, M., Fischer, J. H., Fuhs, M., Isselhard, W., Kasai, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+method+for+orthotopic+liver+transplantation+in+the+rat.+Cuff+technique+for+three+vascular+anastomoses.">A simple method for orthotopic liver transplantation in the rat. Cuff technique for three vascular anastomoses.</a> Transplantation. 30 (5), 335-338 (1980).</li><li>Kamada, N. A., Calne, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+experience+with+five+hundred+thirty+liver+transplants+in+the+rat.">Surgical experience with five hundred thirty liver transplants in the rat.</a> Surgery. 93 (1), 64-69 (1983).</li><li>Yang, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rat+model+of+orthotopic+liver+transplantation+using+a+novel+magnetic+anastomosis+technique+for+suprahepatic+vena+cava+reconstruction.">A rat model of orthotopic liver transplantation using a novel magnetic anastomosis technique for suprahepatic vena cava reconstruction.</a> Journal of Visualized Experiments. 19 (133), e56933 (2018).</li><li>Liu, L. X., He, C., Huang, T., Gu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+new+technique+for+reconstruction+of+hepatic+artery+during+liver+transplantation+in+sprague-dawley+rat.">Development of a new technique for reconstruction of hepatic artery during liver transplantation in sprague-dawley rat.</a> PLoS One. 10 (12), 0145662 (2015).</li><li>Paller, M. S., Hoidal, J. R., Ferris, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxygen+free+radicals+in+ischemic+acute+renal+failure+In+the+rat.">Oxygen free radicals in ischemic acute renal failure In the rat.</a> Journal of Clinical Investigation. 74 (4), 1156-1164 (1984).</li><li>Schmidt, J., Lewandrowsi, K., Warshaw, A. L., Compton, C. C., Rattner, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphometric+characteristics+and+homogeneity+of+a+new+model+of+acute+pancreatitis+in+the+rat.">Morphometric characteristics and homogeneity of a new model of acute pancreatitis in the rat.</a> International Journal of Pancreatology. 12 (1), 41-51 (1992).</li><li>Chui, C. J., McArdle, A. H., Brown, R., Scott, H. J., Gurd, F. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+mucosal+lesion+in+low-flow+states.+I.+A+morphological,+hemodynamic,+and+metabolic+reappraisal.">Intestinal mucosal lesion in low-flow states. I. A morphological, hemodynamic, and metabolic reappraisal.</a> Archives of Surgery. 101 (4), 478-483 (1970).</li><li>Kozian, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One-lung+ventilation+induces+hyperfusion+and+alveolar+damage+in+the+ventilated+lung:an+experimental+study.">One-lung ventilation induces hyperfusion and alveolar damage in the ventilated lung:an experimental study.</a> British Journal of Anaesthesia. 100 (4), 549-559 (2008).</li><li>Shimada, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heavy+water+(D2O)+containing+preservation+solution+reduces+hepatic+cold+preservation+and+reperfusion+injury+in+an+isolated+perfused+rat+liver+(IPRL)+model.">Heavy water (D2O) containing preservation solution reduces hepatic cold preservation and reperfusion injury in an isolated perfused rat liver (IPRL) model.</a> Journal of Clinical Medicine. 8 (11), 1818 (2019).</li><li>Nakamura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sirtuin+1+attenuates+inflammation+and+hepatocellular+damage+in+liver+transplant+ischemia/reperfusion:+from+mouse+to+human.">Sirtuin 1 attenuates inflammation and hepatocellular damage in liver transplant ischemia/reperfusion: from mouse to human.</a> Liver Transplantation. 23 (10), 1282-1293 (2017).</li><li>Blaire, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+Considerations+of+Hilar+Cholangiocarcinoma.">Surgical Considerations of Hilar Cholangiocarcinoma.</a> Surgical Oncology Clinics of North America. 28 (4), 601-617 (2019).</li></ol>

OLT hos rotter er en ideell modell for å studere organbevaring i levertransplantasjon, IRI, transplantasjonsavvisning, immuntoleranse, transplantasjonspatologi og farmakologi, homotransplantasjon og xenotransplantasjon. I dag er det mye brukt i eksperimentell forskning av levertransplantasjon.
Under pilotstudier administrerte vi først pentobarbital natrium intraperitoneal anestesi og fant at dette førte til høy postoperativ dødelighet og kort toleranse for hemoodynamiske endringer. Dermed...

Iskemi-reperfusjonsskade (IRI) er en vanlig komplikasjon etter levertransplantasjon. Hepatisk IRI er en patologisk prosess som involverer iskemimediert celleskade og unormal forverring av leverreperfusjon. Lever-IRI og lokal medfødt immunrespons kan deles inn i varm og kald IRI, i henhold til forskjeller i det kliniske miljøet1. Hot IRI induseres av stamcelleskade, vanligvis som følge av levertransplantasjon, sjokk og traumer2. Cold IRI er en komplikasjon av levertransplantasjon forårsaket av endotelceller og perifer sirkulasjon3. Kliniske rapporter har vist at lever-IRI er forbundet med 10% av tidlige organsvikt og kan øke forekomsten av akutt og kronisk avvisning4,5. I tillegg kan lever-IRI også indusere flere organdysfunksjonssyndromer eller systemisk inflammatorisk responssyndrom, med høydødelighet 6. Pasienter med ekstrahepatisk organinvolvering har en tendens til å bli lenger på sykehuset, bruke mer penger og ha en verre prognose7. Utviklingen av komplikasjoner er nært knyttet til lengden på den anhepatiske fasen av levertransplantasjon8.
Ortotopisk levertransplantasjon (OLT) hos rotter ble først rapportert av den amerikanske professoren Lee i 1973. Den eksperimentelle operasjonen simulerte trinnene for klinisk levertransplantasjon og anastomose av blodkar og den vanlige gallekanalen (CBD) ved hjelp av suturmetoden. Prosedyren er vanskelig og tidkrevende med lav suksesshastighet9. I 1979 gjorde Kamada et al. en betydelig forbedring av OLT hos rotter ved kreativt å bruke "to-mansjettmetoden" for anastomose i portalvenen for å kontrollere den anhepatiske fasen innen 26 minutter10. Samme år foreslo Zimmermann den «enkle biliære stentmetoden». På grunnlag av Lees arbeid brukte Zimmermann polyetylenrør for å direkte anastomose cbd av donor og mottaker, forenklet rekonstruksjon av CBD, og bevarte funksjonen til sphincteren, og denne metoden ble standarden for gallerekonstruksjon av OLT-modeller11. I 1980 foreslo Miyata et al. "tre-mansjettmetoden" hvor portalvenen (PV), suprahepatic vena cava (SVC) og intrahepatisk vena cava (IVC) ble anastomosed av mansjetten metoden. Det er imidlertid fare for forvrengning av kanylen med denne metoden, noe som kan føre til obstruksjon av dårligere vena cava refluks12. I 1983 ble "to-mansjettmetoden" foreslått ved hjelp av mansjettmetoden for anastomose av PV og IVC, men vedtok suturmetoden for SVC13. Denne metoden ble vedtatt av forskere globalt for å etablere OLT-modeller. Siden da har mansjetten anastomose trinnene blitt forbedret for å forkorte anhepatisk fase og forbedre overlevelsesraten til rotter14. På samme måte brukes forbedrede metoder i klinisk praksis for å forkorte anhepatisk fase15. Imidlertid har grunnleggende forskning på IRI etter levertransplantasjon vist at overlevelsesraten er omvendt relatert til graden av skade på ekstrahepatiske organer. Derfor er det nødvendig med videre forskning, og en enkel og reproduserbar dyremodell er nødvendig for å simulere IRI etter levertransplantasjon.
Basert på definisjonen av den anhepatiske fasen simulerte vi de heodynamiske endringene i levertransplantasjon, noe som resulterte i IRI av ekstrahepatiske organer hos rotter. Heri gir vi en detaljert beskrivelse av hvordan du bygger en dyremodell av anhepatisk fase (leveriskemi) hos rotter for å lette grunnleggende forskning på IRI etter levertransplantasjon.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>4% paraformaldehyde solution</td>
			<td>Shanghai Macklin Biochemical Co.,Ltd</td>
			<td>P804536</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>air drying oven</td>
			<td>Shanghai Binglin Electronic Technology Co., Ltd.</td>
			<td>BPG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alanine aminotransferase (ALT)Kit</td>
			<td>Elabscience Biotechnology Co.,Ltd</td>
			<td>E-BC-K235-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ammonia</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd</td>
			<td>10002118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>amylase Kit</td>
			<td>Elabscience Biotechnology Co.,Ltd</td>
			<td>E-BC-K005-M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anhydrous ethanol</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd</td>
			<td>100092183</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal anesthesia machine</td>
			<td>Shenzhen Ruiwode Life Technology Co. Ltd</td>
			<td>R640</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>aspartate aminotransferase (AST)kit</td>
			<td>Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd.</td>
			<td>S03040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>automatic biochemical analyzer.</td>
			<td>SIEMENS AG FWB:SIE, NYSE:SI Co., Ltd.</td>
			<td>2400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biosystems (when nessary)</td>
			<td>Chengdu Taimeng Electronics Co., Ltd.</td>
			<td>BL-420F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge</td>
			<td>Baiyang Medical Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>BY-600A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cover glass</td>
			<td>Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co. Ltd</td>
			<td>10212432C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>creatinine Kit</td>
			<td>Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd.</td>
			<td>S03076</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dewatering machine</td>
			<td>Hungary 3DHISTECH Co.,Ltd</td>
			<td>Donatello Series 2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>embedding machine</td>
			<td>Hubei Xiaogan Kuohai Medical Technology Co., Ltd.</td>
			<td>KH-BL1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>frozen machine</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JB-L5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hematoxylin-eosin dye solution</td>
			<td>Wuhan Saiwell Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>G1005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>high-efficiency paraffin wax</td>
			<td>Shanghai huayong paraffin wax co., Ltd</td>
			<td>Q/YSQN40-91</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hydrochloric acid</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd</td>
			<td>10011018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>intraocular lens (IOL)forceps</td>
			<td>Guangzhou Guangmei Medical Equipment Co., Ltd.</td>
			<td>JTZRN</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Shenzhen Ruiwode Life Technology Co. Ltd</td>
			<td>&#8212;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>micro Scissors(when nessary)</td>
			<td>Shanghai Surgical Instrument Factory</td>
			<td>WA1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>needle holders</td>
			<td>Shanghai Surgical Instrument Factory</td>
			<td>J32010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>neutral gum</td>
			<td>Shanghai Huashen Healing Equipment Co.,Ltd.</td>
			<td>&#8212;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>normal optical microscope</td>
			<td>Nikon Instrument Shanghai Co., Ltd</td>
			<td>Nikon Eclipse CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ophthalmic forceps</td>
			<td>Shanghai Surgical Instrument Factory</td>
			<td>J3CO30</td>
			<td>straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ophthalmic forceps</td>
			<td>Shanghai Surgical Instrument Factory</td>
			<td>JD1060</td>
			<td>bending</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ophthalmic Scissors</td>
			<td>Shanghai Surgical Instrument Factory</td>
			<td>J1E0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pathological slicer</td>
			<td>Shanghai Leica Instrument Co., Ltd</td>
			<td>RM2016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pipettes</td>
			<td>Dragon Laboratory Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>7010101008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>retractors</td>
			<td>Beijing Jinuotai Technology Development Co.,Ltd.</td>
			<td>JNT-KXQ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>scanner</td>
			<td>Hungary 3DHISTECH Co.,Ltd</td>
			<td>Pannoramic 250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>slide</td>
			<td>Wuhan Saiwell Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>G6004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>xylene</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd</td>
			<td>1330-20-7</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

organ ischemia-reperfusion injury by simulating hemodynamic changes in rat liver transplant model

Ortotopisk levertransplantasjon (OLT) hos rotter er en velprøvd dyremodell som brukes til preoperative, intraoperative og postoperative studier, inkludert iskemi-reperfusjonsskade (IRI) av ekstrahepatiske organer. Denne modellen krever mange eksperimenter og enheter. Varigheten av anhepatisk fase er nært knyttet til tiden for å utvikle IRI etter transplantasjon. I dette eksperimentet brukte vi heodynamiske endringer for å indusere ekstrahepatisk organskade hos rotter og bestemme maksimal toleransetid. Tiden til den mest alvorlige organskaden varierte for forskjellige organer. Denne metoden kan lett replikeres og kan også brukes til å studere IRI av de ekstrahepatiske organene etter levertransplantasjon.

Rotters toleranse for leveriskemi I denne dyremodellen er stedene der blodårene ble ligated under drift vist i figur 1. Rottene ble tilfeldig delt inn i 5 grupper for iskemi i 15 minutter (I15-gruppe), 30 minutter (I30-gruppe), 45 minutter (I45-gruppe), 60 minutter (I60) og sham-gruppe, med 10 rotter i hver gruppe. Overlevelsesraten for hver gruppe ble observert 14 dager etter operasjonen. Alle rotter overlevde i I15-gruppen, I30-gruppen og sham-gruppen. Åtte overlevde ...

Watch this Scientific Journal Video about Organ Ischemia-Reperfusion Injury by Simulating Hemodynamic Changes in Rat Liver Transplant Model at JoVE.com

Organ Ischemia-Reperfusion Injury by Simulating Hemodynamic Changes in Rat Liver Transplant Model

Dette papiret gir en detaljert beskrivelse av hvordan man bygger en dyremodell av anhepatisk fase (leveriskemi) hos rotter for å lette grunnleggende forskning på iskemi-reperfusjonsskade etter levertransplantasjon.

Organ iskemi-reperfusjon skade ved å simulere hemoodynamiske endringer i rotte levertransplantasjon modell

Orthotopic liver transplantation (OLT) in rats is a tried and proven animal model used for preoperative, intraoperative, and postoperative studies, ...

Organ iskemi-reperfusjon skade ved å simulere hemoodynamiske endringer i rotte levertransplantasjon modell. Iskemi-reperfusjonsskade er et vanlig program etter levertransplantasjon. Pasienter med ekstrahepatisk organinvolvering har en tendens til å bli lenger på sykehuset, tilbringe mer og har en verre prognose.Utviklingen av komplikasjonen er nært knyttet til lengden på den anhepatiske fasen av levertransplantasjon. Imidlertid har grunnleggende forskning på iskemi-reperfusjonsskade etter levertransplantasjon vist at overlevelsesraten etter levertransplantasjon er omvendt relatert til graden av skade på ekstrahaptiske organer. Basert på definisjonen av den anhaptiske fasen simulerte vi den heodynamiske endringen i levertransplantasjon som resulterte i iskemi-reperfusjonsskade av ekstrahaptiske organer.Av dette papiret er å gi en detaljert beskrivelse av hvordan å bygge en dyremodell av den anhaptiske fasen hos rotter, grunnleggende forskning på iskemi-reperfusjonsskade etter levertransplantasjon. Dr.Yuan Yuan er ansvarlig for alle video dyr operasjoner. To oftalmiske pinsett, rett og bøying, og interokulær linse, IOL pinsett, oftalmisk saks, en til to retractors, bomullspinner, 3-0 kirurgiske suturer, iodoform gasbind, sutur nåler, Biosystemer når det er nødvendig, og interokulær linse, IOL pinsett brukes til å skille blodkar på grunn av rundhoder.Dyrebedøvelsesmaskin, avvanningsmaskin, innebyggingsmaskin, patologisk slicer, frossen maskin, vevsskiver, lufttørkingsovn, nevrale optisk mikroskop, skanneren, enflurane for generell anestesi, 4% paraformaldehydløsning, vannfri etanol, xylen, høyeffektiv parafinvoks, hematoksylin-eosinfargeløsning, saltsyre, ammoniakk, lysbilde, dekkglass, nøytralt tyggegummi og døende reagenser og forbruksmaterialer. Pipetter, sentrifuge, automatisk biokjemisk analysator, alanin amino transferase, ALAT kit, aspartat, amino transferase, ASAT kit, kreatinin kit. Etter veiing blir rottene bedøvet med isofluran av en dyrebedøvelsesmaskin.Etter abdominal desinfeksjon, gjør et median snitt på tre centimeter under xiphoid prosessen ved hjelp av tang og saks. Åpne bukhulen, utsett leveren ved hjelp av en retractor og mobiliser det hepatogastriske ligamentet. Bruk bomullspinner til å vende leverens midtapp forsiktig og snu den oppover for å eksponere porta habitis.Identifiser gallekanalen, portalvenen og leverarterien. Skyv tynntarmen mot venstre nedre bukhule ved hjelp av bomullsbytter og flytt den dårligere vena cava til høyre nyrevene, isolere portalvenen, leverarterien og den dårligere vena cava over høyre nyrevene med en intraokulær linse, IOL, tang merket med 3-0 silketråd hver med en slip knute. Klipp opp huden på venstre og høyre nedre ekstremitet og utsett lårvenen ved hjelp av oftalmiske tang.Injiser sakte lavmolekylær heparin 625 IE/kg gjennom lårvenen for å heparinisere hele kroppen. Ligate portalvenen, leverarterien og dårligere vena cava over høyre nyrevene med nummer 3-0 suturer, som varer i 45 minutter. Erstatt tynntarmen i bukhulen og dekk den med gasbind.Innånding anestesi er redusert i disse periodene. Etter 45 minutter, slipp portalvenen, leverarterien og den dårligere vena cava over høyre nyrevene. Sutur muskel og hud lag for lag og avslutte inhalasjonelle anestesi.Gi postoperativ analgesi ved hjelp av subkutan morfin på 5 mg/kg hver fjerde time Vær oppmerksom på at rotten er våken og holdes matet under en temperatur på 25 pluss eller minus to grader Celsius og fuktighet på 50 pluss eller minus 10% Animal oppvarming lamper er nødvendig. I denne dyremodellen ble rottene tilfeldig delt inn i fem grupper i henhold til iskemi i 15 minutter, jeg 15 gruppe, 30 minutter, jeg 30 gruppe, 45 minutter, jeg 45 gruppe, 60 minutter, jeg 60, og en sham gruppe med 10 rotter i hver gruppe. Deres overlevelsesrate for hver gruppe ble observert 14 dager etter operasjonen.Alle rotter overlevde i I 15, jeg 30 og sham grupper. Åtte overlevde i 14 dager i I 45-gruppen og bare to overlevde i I 60-gruppen. Resultatene antydet at rottene kunne tolerere den anhepatiske fasen i 45 minutter på det meste.Under forsøket ble Biosystems brukt til å registrere endringer i hjertefrekvens og blodtrykk, høyre indre halspulsåren intubasjon før og etter anhepatisk fase. Vi fant at hjertefrekvensen og gjennomsnittlig arterielt trykk, KART over rotter, endret seg dramatisk etter vaskulær ligation. Etter ligation var leveriskemi, overbelastning og ødem i tarmene, magevariices og splenomegali tydelige.80 rotter ble tilfeldig delt inn i åtte grupper, inkludert iskemi i 45 minutter, T0, reperfusjon i seks timer, T6, 12 timer, T12, 24 timer, T24, 48 timer, T48, 72 timer, T72, syv dager, T7, i 14 dager, T14, henholdsvis. Nyre,bukspyttkjertel, tynntarm, hjerte og lungevev ble tatt og farget med HE etter at rotter ble ofret. Med unntak av hjertet ble patologiske score gitt i henhold til referanser, henholdsvis.Resultatene viste at tiden for maksimal skade på de ekstrahepatiske organene varierte. Det var seks til 24 timer etter drift for bukspyttkjertelen og 24 til 48 timer for lungene. Tarmkanalen og nyrene ble alvorlig skadet etter 45 minutter med iskemi.Det var ingen åpenbar abnormitet i tarmslimhinnen 24 timer etter operasjonen og nyrene gjenopprettet etter 48 timer. Som for hjertet, med passering av tid etter reperfusjon, ble lokal myokardcellenarkosis, cellefragmentering og oppløsning, inflammatorisk celleinfiltrasjon og lokal vasodilatasjon og overbelastning funnet i vevet av 24 til 48 timer etter operasjonen. Serum ble samlet inn og nivåene av ALAT, ASAT, kreatinin og amylase ble oppdaget av en automatisk biokjemisk analysator.Alle indikatorer toppet seg på 24 til 48 timer, i motsetning til de patologiske endringene. Selv om nivåene i utgangspunktet var normale 48 timer etter operasjonen, fortsatte den patologiske skaden fortsatt. For å oppsummere er modellen hos rotter enkel og enklere å bruke uten mikrokirurgi og gir grunnlag for grunnleggende forskning av iskemi-reperfusjonsskade av ekstrahepatiske organer etter leveriskemi.

Research

JoVE Journal

Medicine

Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

In situ Transverse Rectus Abdominis Myocutaneous Flap: A Rat Model of Myocutaneous Ischemia Reperfusion Injury

In situ Transverse Rectus Abdominis Myocutaneous Flap: A Rat Model of Myocutaneous Ischemia Reperfusion Injury

In situ Tverrgående rectus abdominis myocutaneous Flap: A Rat Modell av myocutaneous Ischemia reperfusjonsskade

Free tissue transfer is the gold standard of reconstructive surgery to repair complex defects not amenable to local options or those requiring composite ...

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Iskemi-reperfusjon Modell av akutt nyreskade og Post Injury fibrose i Mus

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

Technique of Porcine Liver Procurement and Orthotopic Transplantation using an Active Porto-Caval Shunt

Teknikken med svinekjøtt Liver anskaffelser og ortotopiske Transplantasjon ved hjelp av en Active Porto-Caval Shunt

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. Each year, a considerable number of patients on the liver transplantation ...

Induction and Assessment of Ischemia-reperfusion Injury in Langendorff-perfused Rat Hearts

Induksjon og vurdering av iskemi-reperfusjon Injury in Langendorff-perfuserte rottehjerter

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Murine modell av intestinal iskemi-reperfusjon Injury

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

En musemodell av retinal iskemi-reperfusjonsskade Gjennom Heving av intraokulært trykk

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

Method of Direct Segmental Intra-hepatic Delivery Using a Rat Liver Hilar Clamp Model

Metode for direkte Segmental Intra-lever Levering Ved hjelp av en rottelever hilar Clamp Model

Major hepatic surgery with inflow occlusion, and liver transplantation, necessitate a period of warm ischemia, and a period of reperfusion leading to ...

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

En liten dyr modell av Ex Vivo Normothermic lever perfusjon

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Evaluering av koronar Flow Reserve etter hjerteinfarkt ischemia reperfusion i rotter

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...