Name: removal and replacement of endogenous ligands from lipid-bound proteins and allergens
Uploaded: 2021-02-24T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Removal and Replacement of Endogenous Ligands from Lipid-Bound Proteins and Allergens at JoVE.com

ونود أن نشكر الدكتور توم كيربي وسكوت غابل والدكتور روبرت لندن على مساعدتهم ومساعدتهم طوال هذا العمل، إلى جانب الدكتور بوب بتروفيتش ولوري إدواردز على استخدام أدواتهم ومساعدتهم في توليد بنى Bla g 1 المستخدمة في هذه الدراسة. نشكر أندريا آدامز على المساعدة في قياس الطيف الكتلي، والدكتور يوجين ديروس للمساعدة في أجهزة NMR. تم دعم هذا البحث من قبل برنامج البحوث داخل العين من المعاهد القومية للصحة، المعهد الوطني لعلوم الصحة البيئية، Z01-ES102906 (GAM). المحتوى هو فقط مسؤولية المؤلفين ولا يمثل بالضرورة وجهات النظر الرسمية للمعهد الوطني لعلوم الصحة البيئية.

1. Bla g 1 الاستنساخ
<ol><li>الحصول على جين لمسببات الحساسية الصرصور Bla g 1.0101 (المخلفات 34-216) ، مما يمثل تكرارا واحدا لنطاق MA. من أجل البساطة، سيتم استخدام Bla g 1 طوال العمل لتمثيل هذا التكرار الفردي، بدلا من النص الكامل Bla g 1.0101.</li>
	<li>subclone الجين Bla g 1 في المتجه المطلوب. في هذه الدراسة، تم إدراج ...

<ol>
	<li>Radauer, C., Bublin, M., Wagner, S., Mari, A., Breiteneder, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allergens+are+distributed+into+few+protein+families+and+possess+a+restricted+number+of+biochemical+functions.">Allergens are distributed into few protein families and possess a restricted number of biochemical functions.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 121 (4), 847-852 (2008).</li><li>Dearman, R. J., Alcocer, M. J. C., Kimber, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+plant+lipids+on+immune+responses+in+mice+to+the+major+Brazil+nut+allergen+Ber+e+1.">Influence of plant lipids on immune responses in mice to the major Brazil nut allergen Ber e 1.</a> Clinical and Experimental Allergy. 37 (4), 582-591 (2007).</li><li>Ichikawa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipopolysaccharide+binding+of+the+mite+allergen+Der+f+2.">Lipopolysaccharide binding of the mite allergen Der f 2.</a> Genes to Cells. 14 (9), 1055-1065 (2009).</li><li>Mueller, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+dust+mite+allergen+Der+p+7+reveals+similarities+to+innate+immune+proteins.">The structure of the dust mite allergen Der p 7 reveals similarities to innate immune proteins.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 125 (4), 909-917 (2010).</li><li>Reginald, K., Chew, F. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+major+allergen+Der+p+2+is+a+cholesterol+binding+protein.">The major allergen Der p 2 is a cholesterol binding protein.</a> Scientific Reports. 9 (1), 1556 (2019).</li><li>Trompette, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allergenicity+resulting+from+functional+mimicry+of+a+Toll-like+receptor+complex+protein.">Allergenicity resulting from functional mimicry of a Toll-like receptor complex protein.</a> Nature. 457 (7229), 585-589 (2009).</li><li>Angelina, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+lipid+interaction+capacity+of+Sin+a+2+and+Ara+h+1,+major+mustard+and+peanut+allergens+of+the+cupin+superfamily,+endorses+allergenicity.">The lipid interaction capacity of Sin a 2 and Ara h 1, major mustard and peanut allergens of the cupin superfamily, endorses allergenicity.</a> Allergy: European Journal of Allergy and Clinical Immunology. 71 (9), 1284-1294 (2016).</li><li>Soh, W. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+roles+of+Bet+v+1+ligands+in+allergen+stabilization+and+modulation+of+endosomal+protease+activity.">Multiple roles of Bet v 1 ligands in allergen stabilization and modulation of endosomal protease activity.</a> Allergy: European Journal of Allergy and Clinical Immunology. 74 (12), 2382-2393 (2019).</li><li>Foo, A. C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrophobic+ligands+influence+the+structure,+stability,+and+processing+of+the+major+cockroach+allergen+Bla+g+1.">Hydrophobic ligands influence the structure, stability, and processing of the major cockroach allergen Bla g 1.</a> Scientific Reports. 9 (1), 18294 (2019).</li><li>Machado, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fold+Stability+is+a+key+factor+for+immunogenicity+and+allergenicity+of+the+major+birch+pollen+allergen+Bet+v1.0101.">Fold Stability is a key factor for immunogenicity and allergenicity of the major birch pollen allergen Bet v1.0101.</a> Allergy: European Journal of Allergy and Clinical Immunology. 137 (5), 1525-1534 (2016).</li><li>Mueller, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+novel+structure+of+the+cockroach+allergen+Bla+g+1+has+implications+for+allergenicity+and+exposure+assessment.">The novel structure of the cockroach allergen Bla g 1 has implications for allergenicity and exposure assessment.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 132 (6), (2013).</li><li>Mogensen, J. E., Wimmer, R., Larsen, J. N., Spangfort, M. D., Otzen, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+major+birch+allergen+,+Bet+v+1+,+shows+affinity+for+a+broad+spectrum+of+physiological+ligands.">The major birch allergen , Bet v 1 , shows affinity for a broad spectrum of physiological ligands.</a> The Journal of Biological Chemistry. 277 (26), 23684-23692 (2002).</li><li>Seutter von Loetzen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secret+of+the+major+birch+pollen+allergen+Bet+v+1:+identification+of+the+physiological+ligand.">Secret of the major birch pollen allergen Bet v 1: identification of the physiological ligand.</a> Biochemical Journal. 457 (3), 379-390 (2014).</li><li>Ib&#225;&#241;ez-Shimabukuro, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+ligand+binding+of+As-p18,+an+extracellular+fatty+acid+binding+protein+from+the+eggs+of+a+parasitic+nematode.">Structure and ligand binding of As-p18, an extracellular fatty acid binding protein from the eggs of a parasitic nematode.</a> Bioscience Reports. 39 (7), 1-16 (2019).</li><li>Beyer, K., Klingenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ADP/ATP+carrier+protein+from+beef+heart+mitochondria+has+high+amounts+of+tightly+bound+cardiolipin,+as+revealed+by+31P+nuclear+magnetic+resonance.">ADP/ATP carrier protein from beef heart mitochondria has high amounts of tightly bound cardiolipin, as revealed by 31P nuclear magnetic resonance.</a> Biochemistry. 24 (15), 3821-3826 (1985).</li><li>Delaglio, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nmrpipe+-+a+multidimensional+spectral+processing+system+based+on+unix+pipes.">Nmrpipe - a multidimensional spectral processing system based on unix pipes.</a> Journal of Biomolecular NMR. 6 (3), 277-293 (1995).</li><li>Johnson, B. A., Blevins, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMR+View:+A+computer+program+for+the+visualization+and+analysis+of+NMR+data.">NMR View: A computer program for the visualization and analysis of NMR data.</a> Journal of Biomolecular NMR. 4 (5), 603-614 (1994).</li><li>Dillon, M. B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+Bla-g+T+cell+antigens+dominate+responses+in+asthma+versus+rhinitis+subjects.">Different Bla-g T cell antigens dominate responses in asthma versus rhinitis subjects.</a> Clinical and Experimental Allergy. 45, 1856-1867 (2015).</li><li>Pasquato, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crystal+structure+of+peach+Pru+p+3,+the+prototypic+member+of+the+family+of+plant+non-specific+lipid+transfer+protein+pan-allergens.">Crystal structure of peach Pru p 3, the prototypic member of the family of plant non-specific lipid transfer protein pan-allergens.</a> Journal of Molecular Biology. 356 (3), 684-694 (2006).</li><li>Dubiela, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+lipid+binding+on+the+tertiary+structure+and+allergenic+potential+of+Jug+r+3,+the+non-specific+lipid+transfer+protein+from+walnut.">Impact of lipid binding on the tertiary structure and allergenic potential of Jug r 3, the non-specific lipid transfer protein from walnut.</a> Scientific Reports. 9 (2007), 1-11 (2019).</li><li>Abdullah, S. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ligand+binding+to+an+allergenic+lipid+transfer+protein+enhances+conformational+flexibility+resulting+in+an+increase+in+susceptibility+to+gastroduodenal+proteolysis.">Ligand binding to an allergenic lipid transfer protein enhances conformational flexibility resulting in an increase in susceptibility to gastroduodenal proteolysis.</a> Scientific Reports. 6, 30279 (2016).</li><li>Derewenda, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+crystal+structure+of+a+major+dust+mite+allergen+Der+p+2+,+and+its+biological+implications.">The crystal structure of a major dust mite allergen Der p 2 , and its biological implications.</a> Journal of Molecular Biology. 318 (1), 189-197 (2002).</li><li>Lipfert, J., Columbus, L., Chu, V. B., Lesley, S. A., Doniach, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size+and+shape+of+detergent+micelles+determined+by+small-angle+X-ray+scattering.">Size and shape of detergent micelles determined by small-angle X-ray scattering.</a> The Journal of Physical Chemistry. B. 111 (43), 12427-12438 (2007).</li><li>Pulsawat, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+house+dust+mite+allergen+Der+p+5+binds+lipid+ligands+and+stimulates+airway+epithelial+cells+through+a+TLR2-dependent+pathway.">The house dust mite allergen Der p 5 binds lipid ligands and stimulates airway epithelial cells through a TLR2-dependent pathway.</a> Clinical and Experimental Allergy. 49 (3), 378-390 (2019).</li><li>Douliez, J. P., Michon, T., Marion, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steady-state+tyrosine+fluorescence+to+study+the+lipid-binding+properties+of+a+wheat+non-specific+lipid-transfer+protein+(nsLTP1).">Steady-state tyrosine fluorescence to study the lipid-binding properties of a wheat non-specific lipid-transfer protein (nsLTP1).</a> Biochimica et Biophysica Acta - Biomembranes. 1467 (1), 65-72 (2000).</li><li>Ogburn, R. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Are+dust+mite+allergens+more+abundant+and/or+more+stable+than+other+Dermatophagoides+pteronyssinus+proteins.">Are dust mite allergens more abundant and/or more stable than other Dermatophagoides pteronyssinus proteins.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 139 (3), 1030-1032 (2017).</li><li>Cabrera, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Are+allergens+more+abundant+and/or+more+stable+than+other+proteins+in+pollens+and+dust.">Are allergens more abundant and/or more stable than other proteins in pollens and dust.</a> Allergy: European Journal of Allergy and Clinical Immunology. , 1267-1269 (2019).</li><li>Offermann, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+characterization+of+the+hazelnut+allergen+Cor+a+8.">Structural and functional characterization of the hazelnut allergen Cor a 8.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 63 (41), 9150-9158 (2015).</li><li>Koppelman, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+denaturation+of+Brazil+nut+2S+albumin+(Ber+e1)+and+implication+of+structural+destabilization+on+digestion+by+pepsin.">Reversible denaturation of Brazil nut 2S albumin (Ber e1) and implication of structural destabilization on digestion by pepsin.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 53 (1), 123-131 (2005).</li><li>Smole, U., Bublin, M., Radauer, C., Ebner, C., Breiteneder, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mal+d+2,+the+thaumatin-like+allergen+from+apple,+is+highly+resistant+to+gastrointestinal+digestion+and+thermal+processing.">Mal d 2, the thaumatin-like allergen from apple, is highly resistant to gastrointestinal digestion and thermal processing.</a> International Archives of Allergy and Immunology. 147 (4), 289-298 (2008).</li><li>Bublin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+gastrointestinal+digestion+and+heating+on+the+allergenicity+of+the+kiwi+allergens+Act+d+1,+actinidin,+and+Act+d+2,+a+thaumatin-like+protein.">Effects of gastrointestinal digestion and heating on the allergenicity of the kiwi allergens Act d 1, actinidin, and Act d 2, a thaumatin-like protein.</a> Molecular Nutrition and Food Research. 52 (10), 1130-1139 (2008).</li><li>Griesmeier, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physicochemical+properties+and+thermal+stability+of+Lep+w+1,+the+major+allergen+of+whiff.">Physicochemical properties and thermal stability of Lep w 1, the major allergen of whiff.</a> Molecular Nutrition and Food Research. 54 (6), 861-869 (2010).</li><li>de Jongh, H. H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+heat+treatment+on+the+conformational+stability+of+intact+and+cleaved+forms+of+the+peanut+allergen+Ara+h+6+in+relation+to+its+IgE-binding+potency.">Effect of heat treatment on the conformational stability of intact and cleaved forms of the peanut allergen Ara h 6 in relation to its IgE-binding potency.</a> Food Chemistry. 326, 127027 (2020).</li><li>Glasgow, B. J., Abduragimov, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ligand+binding+complexes+in+lipocalins:+Underestimation+of+the+stoichiometry+parameter+(n).">Ligand binding complexes in lipocalins: Underestimation of the stoichiometry parameter (n).</a> Biochimica et Biophysica Acta - Proteins and Proteomics. 1866 (10), 1001-1007 (2018).</li><li>Aalberse, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+amino-terminal+fragment+of+Ara+h+1+as+a+major+target+of+the+IgE-binding+activity+in+the+basic+peanut+protein+fraction.">Identification of the amino-terminal fragment of Ara h 1 as a major target of the IgE-binding activity in the basic peanut protein fraction.</a> Clinical and Experimental Allergy. 50 (3), 401-405 (2020).</li><li>Bublin, M., Eiwegger, T., Breiteneder, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Do+lipids+influence+the+allergic+sensitization+process.">Do lipids influence the allergic sensitization process.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 134 (3), 521-529 (2014).</li></ol>

تم تطبيق البروتوكول الموصوف في هذا العمل بنجاح لدراسة خصائص ربط الدهون بشكل منهجي من Bla g 1. وكشف هذا عن وجود علاقة بين ربط البضائع ، والترمسة ، والمعالجة الاندوسومالية ، وهذا الأخير كان مرتبطا بانخفاض في توليد epitope الخلايا التائية المعروفة مع الآثار المحتملة على المناعة9،</su...

كشف مسح لقاعدة بيانات مسببات الحساسية أن مسببات الحساسية موجودة في 2٪ فقط من جميع عائلات البروتين المعروفة ، مما يشير إلى أن الخصائص الوظيفية والفيزيائية الحيوية الشائعة تساهم في مسببات الحساسية1. ومن بين هذه الخصائص، يبدو أن القدرة على ربط شحنات الدهون ممثلة تمثيلا زائدا بقوة بين المواد المسببة للحساسية، مما يشير إلى أن هذه الشحنات قد تؤثر على عملية التوعية1. في الواقع، فقد ثبت أن البرازيل الجوز المسببة للحساسية بير ه 1 يتطلب الإدارة المشتركة مع الدهون الذاتية لتحقيق إمكاناتها توعية كاملة2. هذه الدهون يمكن أن تحفز الجهاز المناعي مباشرة كما يتضح من مسببات الحساسية العث دير p 2 و Der p 7، وكلاهما يشترك في الأوهام الهيكلية القوية مع البروتينات LPS ملزمة3،4،5. وبناء على هذه الملاحظة اقترح أن ديرب 2 ودير ص 7 يمكن ربط الدهون البكتيرية وتحفيز مباشرة الجهاز المناعي المضيف من خلال الإشارات بوساطة TLR4، وتسهيل عملية التوعية5،6. من الممكن أيضا أن الدهون المربوطة داخليا يمكن أن تغير الخصائص الفيزيائية الحيوية للبروتينات المسببة للحساسية نفسها. على سبيل المثال، فإن قدرة الخطيئة A 2 (الخردل) وأرا ح 1 (الفول السوداني) للتفاعل مع الحويصلات فوسفولبيد عززت بشكل كبير مقاومتها لتدهور المعدة والإندوسومالي7،في حين أن الربط ليغاند لمسببات الحساسية الرئيسية لحبوب اللقاح البتولا Bet v 1 غيرت كل من معدل المعالجة الإندوسولية وتنوع الببتيداتالناتجة 8. وهذا أمر وثيق الصلة بشكل خاص بحساسية الحساسية نظرا للارتباط الذي لوحظ بين الاستقرار وتوليد الخلايا التائية وحساسية البروتينات مثل Bet v 1 و Bla g 1؛ هذا الأخير الذي سيكون موضوع هذا العمل9،10.
Bla g 1 يمثل العضو النموذجي لعائلة بروتين الحشرات الرئيسية المسببة للحساسية (MA) ، ويمتلك بنية فريدة تتكون من 12 هليس ألفا البرمائي الذي يحيط تجويف مسعور كبير بشكل غير طبيعي9،11. يظهر الهيكل البلوري للأشعة السينية المتوفر في Bla g 1 كثافة الإلكترون داخل هذا التجويف بما يتفق مع الفوسفوليبيدات المنضمة أو الأحماض الدهنية. تخمين أكده 31P-NMR وقياس الطيف الكتلي. وكانت هذه الشحنات غير متجانسة في طبيعتها وكان تكوينها يعتمد بشكل كبير على مصدر مسببات الحساسية ، مع ملامح الدهون المختلفة لوحظت للمتلف Bla g 1 أعرب عنها في E. coli و P. pastoris. الغريب أن Bla g 1 المنقى من مصدر مسببات الحساسية الطبيعية (الصرصور frass) يحتوي على أحماض دهنية في الغالب داخل موقعه الملزم ، مع مزيج من البالميتات والأوليات والستيرات التي يتم تحديدها على أنها ليغندس "طبيعي"9،11. قدرة Bla g 1 على الاحتفاظ بالدهون والأحماض الدهنية بعد خطوات تنقية متعددة تعيق الجهود المبذولة لدراسة البروتين في عزلة. على العكس من ذلك ، فقد اقترح أن palmitate الطبيعية ، stearate ، وlyg ligands oleate من Bla g 1 (يشار إليها من الآن فصاعدا باسم nMix) تلعب دورا رئيسيا في كل من الحساسية والوظيفة البيولوجيةالأصلية 9. ومع ذلك، هذه الليجاند غير موجودة في Bla g 1 التي تم الحصول عليها من مصادر مؤتلفة، مما يجعل من الصعب تقييم هذه الفرضية. وقد لوحظت قضايا مماثلة لغيرها من المواد المسببة للحساسية ملزمة الدهون مثل بيت ضد 112،13. لتسهيل الدراسة المنهجية للتفاعلات الدهون المسببة للحساسية وضعنا بروتوكولا يمكن من خلاله تجريد المواد المسببة للحساسية كميا من الدهون المرتبطة بها وإعادة تشكيلها إما في شكل آبو أو تحميلها مع ليغاندس محددة.
يتم تنقية مسببات الحساسية الأكثر شيوعا من مصادرها الطبيعية أو المؤتلفة باستخدام الكروماتوغرافيا المتقاربة و / أو الكروماتوغرافيا استبعاد الحجم. هنا ، نقدم خطوة تنقية إضافية في شكل كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء (HPLC) تستخدم عمود C18 في المرحلة العكسية التي يتم من خلالها تحويل مسببات الحساسية إلى مذيب عضوي مشابه للبروتوكولات المطورة للبروتينات الملزمة للأحماض الدهنية14. ثم يتعرض البروتين الناتج لخطوة التلين الحراري في غياب أو وجود الأحماض الدهنية و / أو فوسفوليبيدات. بالإضافة إلى استعادة الأصلي Bla g 1 أضعاف, ارتفاع درجات الحرارة زيادة قابلية الذوبان وسهولة الوصول للشحنات الدهون, تسفر عن Bla g 1 إما في شكل أبو أو محملة بشكل موحد مع ليغاند الكاره للماء المطلوب. 31 أكدت أطياف P-NMR من Bla g 1 المنقى بهذه الطريقة الإزالة الكاملة للليجانات المربوطة داخليا والاستبدال الموحد بالمركبات المطلوبة ، في حين أكدت الديسكروزم الدائرية الانتعاش الناجح لأضعاف Bla g 1. يتم تسليط الضوء على فائدة هذه الطريقة في عمل حديث تم العثور فيه على ربط البضائع لتعزيز Bla g 1 thermostability والمقاومة البروتيوليكية ، وتغيير حركية توليد الصرع بالخلايا التائية مع الآثار المحتملة على التوعية وحساسية9.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bla g 1 Gene&#160;</td>
			<td>Genescript</td>
			<td>N/a</td>
			<td>Custom gene synthesis service. GenBank Accession no AF072219 Residues 34-216</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Affinity purified natural Bla g 1 (nBla g 1)</td>
			<td>Indoor biotechnologies</td>
			<td>N/a</td>
			<td>Custom order</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 1100 Series HPLC System</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>G1315B, G1311A, G1322A</td>
			<td>UV Detector, Pump, and Degasser</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent DD2 600 MHz spectrometer</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>N/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amicon Ultra-15 Centrifugal Filter Unit</td>
			<td>Amicon</td>
			<td>UFC-1008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1760-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benzonase</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E1014-5KU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Broad- band 5 mm Z-gradient probe</td>
			<td>Varian</td>
			<td>N/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ChemStation for LC (Software)</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>N/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cOmplete Mini Protease Inhibitor Cocktail</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11836153001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distearoylphosphatidylcholine (18:0 PC)</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>850365C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E. Coli BL21 DE3 Cells</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>C2530H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezone 4.5 Freeze Dry System</td>
			<td>Labconco</td>
			<td>7750000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutathione Resin</td>
			<td>Genescript</td>
			<td>L00206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutathione, Reduced</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP25211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl-&#946;-D-thiogalactopyranoside (IPTG)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>34060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Jasco&#160; CD spectropolarimeter</td>
			<td>Jasco</td>
			<td>J-815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millex Syringe Filter Unit</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>SLGS033SS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NMRPipe (Software)</td>
			<td>Delaglio et al.&#160;</td>
			<td>N/a</td>
			<td>Delaglio, F. et al. Nmrpipe - a Multidimensional Spectral Processing System Based On Unix Pipes. J. Biomol. NMR 6, 277&#8211;293 (1995).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NMRViewJ (Software)</td>
			<td>Johnson et al.&#160;</td>
			<td>N/a</td>
			<td>Johnson, B. A. &#38; Blevins, R. A. NMR View: A computer program for the visualization and analysis of NMR data. J. Biomol. NMR 4, 603&#8211;614 (1994).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oleic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>O1008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pierce BCA Protein Assay</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>BCA1-1KT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polaris 5 C18-A 250x10.0 mm HPLC Column</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>SKU: A2000250X100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SD-200 Vacuum Pump</td>
			<td>Varian</td>
			<td>VP-195</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Cholate Hydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C6445</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Palmitate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9767</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Stearate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S3381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VnmrJ (Software)</td>
			<td>Varian</td>
			<td>N/a</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

removal and replacement of endogenous ligands from lipid-bound proteins and allergens

ترتبط العديد من المواد المسببة للحساسية الرئيسية بالجزيئات الشبيهة بالدهون الكارهة للماء ، بما في ذلك Mus m 1 و Bet v 1 و Der p 2 و Fel d 1. يتم الاحتفاظ بهذه الليجاندات بقوة ولها القدرة على التأثير على عملية التوعية إما من خلال تحفيز الجهاز المناعي مباشرة أو تغيير الخصائص الفيزيائية الحيوية للبروتين المسبب للحساسية. من أجل السيطرة على هذه المتغيرات، وهناك حاجة إلى تقنيات لإزالة الليجانات ملزمة داخليا، وإذا لزم الأمر، واستبدال مع الدهون من تكوين معروف. يرفق مسبب الحساسية في الصرصور Bla g 1 تجويفا مائيا كبيرا يربط خليطا غير متجانس من الدهون الذاتية عند تنقيته باستخدام التقنيات التقليدية. هنا، ونحن نصف طريقة من خلالها تتم إزالة هذه الدهون باستخدام HPLC عكس المرحلة تليها التلأليد الحراري لتسفر Bla g 1 في شكلها أبو أو إعادة تحميلها مع خليط من الأحماض الدهنية أو الشحنات فوسفوليبيد المعرفة من قبل المستخدم. اقتران هذا البروتوكول مع المقايسات الكيميائية الحيوية تكشف عن أن شحنات الأحماض الدهنية تغير بشكل كبير من القدرة الحرارية والمقاومة البروتيوليك من Bla g 1 ، مع آثار المصب لمعدل توليد الظهارة T-الخلية وحساسية. تسلط هذه النتائج الضوء على أهمية بروتوكولات إزالة/إعادة تحميل الدهون مثل تلك الموصوفة هنا عند دراسة مسببات الحساسية من المصادر الطبيعية والمتلفة على حد سواء. البروتوكول قابل للتعميم على العائلات المسببة للحساسية الأخرى بما في ذلك lipocalins (Mus m 1) و PR-10 (Bet v 1) و MD-2 (Der p 2) و Uteroglobin (Fel d 1) ، مما يوفر أداة قيمة لدراسة دور الدهون في الاستجابة التحسسية.

باستخدام الكروماتوغرافيا تقارب، تم عزل إعادة تركيب GST-Bla ز 1 بسهولة إلى مستوى عال من النقاء(الشكل 1A)،مما أدى إلى غلة ~ 2-4 ملغم / لتر من ثقافة الخلية. الحضانة بين عشية وضحاها مع بروتياز TEV في 4 درجة مئوية كافية لإزالة علامة GST، مما أسفر عن المنتج النهائي في ~ 24 كيلودا. لاحظ أنه في هذه الحال...

Watch this Scientific Journal Video about Removal and Replacement of Endogenous Ligands from Lipid-Bound Proteins and Allergens at JoVE.com

Removal and Replacement of Endogenous Ligands from Lipid-Bound Proteins and Allergens

يصف هذا البروتوكول إزالة الدهون الذاتية من مسببات الحساسية ، واستبدالها بالليجاندات المحددة من قبل المستخدم من خلال HPLC في المرحلة العكسية إلى جانب التلين الحراري. 31 P-NMR و dichroism دائرية تسمح لتأكيد سريع لإزالة ليجند / التحميل، واستعادة بنية مسببات الحساسية الأصلية.

إزالة واستبدال الليغندات الذاتية من البروتينات والمواد المسببة للحساسية المرتبطة بالدهون

Many major allergens bind to hydrophobic lipid-like molecules, including Mus m 1, Bet v 1, Der p 2, and Fel d 1. These ligands are strongly retained and ...

ترتبط العديد من المواد المسببة للحساسية بالجزيئات الكارهة للماء. هذا البروتوكول يتيح إزالة واستبدال هذه ligands كاملة، مما يسمح لنا لدراسة تأثيرها على الهيكل والمناعة بطريقة منهجية. استخدام HPLC عكس المرحلة، إلى جانب التلين الحراري، له ميزتين.يزيل ليغاندس الذاتية، ويساعد على تليين ليغاندس لفتح مواقع ملزمة خلاف ذلك لا يمكن الوصول إليها. إذا تمكنا من تحديد العوامل التي تساهم في مسببات الحساسية، فقد نتمكن من تصميم علاجات تتجنب هذه العوامل. العديد من البروتينات ربط ليغاندس الدهون، والتي يتم الاحتفاظ بها بقوة، ويمكن أن تؤثر على كل من الهيكل والوظيفة.تسمح طريقتنا بالدراسة المنهجية لهذه التفاعلات. وقد تحول قلة قابلية الذوبان وإمكانية الوصول للعديد من شحنات الدهون دون عملية التحميل. تأكد من الاهتمام عند إعداد هذه ligands ، والنظر في الحاجة إلى تعديلات النظام محددة.كما العمل مع ليغاندس مسعور وغير قابل للذوبان هو تعديل لبعض الحساسية والكيمياء الحيوية، يمكن أن يكون من المفيد أن نرى ما تبدو عليه العينات في مراحل مختلفة. بعد استنساخ التعبير والتنقية، قم بتطبيق 12 ملليلتر من Bla g 1 المشقوق على وحدة فلترة الطرد المركزي مع قطع الوزن الجزيئي أقل من 10 كيلودالتون لأجهزة الطرد المركزي المتعددة في دوار دلو أرجوحة حتى يتم تقليل الحجم الإجمالي إلى أقل من ملليلترين. قم بتحميل التركيز الناتج على نظام HPLC 250 في 10 ملليمتر مجهز بعمود كروماتوغرافي من المرحلة العكسية C18 متساوي التوازن بمعدل تدفق 97٪ عازل A و3٪ عازل B.Elute Bla g 1 بمعدل تدفق 1.5 إلى 4 ملليلتر في الدقيقة ، كما هو مبين في الجدول ، باستخدام امتصاص الفلورية عند 280 نانومتر لمراقبة عملية الإلتواء.بدءا من حوالي 34 إلى 40 دقيقة وتركيز B العازلة فوق 74٪ جمع ما لا يزيد عن أربعة ملليلتر من كل جزء Bla g 1. Aliquot تجمع Bla g 1 كسر في أنابيب اختبار الزجاج. تغطية الأنابيب مع فيلم البارافين وثقب الفيلم مع اثنين من الثقوب.ثم، تجميد العينات في ناقص 80 درجة مئوية لمدة ساعة واحدة واستخدام الليسوفليس لتجفيف عينات البروتين إزالة الدهون الناتجة. لتحديد العائد المتوقع Bla g 1، إعادة تعليق اختبار مزيل الدهون lyophilized aliquot في خمسة ملليلتر من العازلة إعادة طيها. سخني الخليط في كوب 500 ملليلتر يحتوي على 250 ملليلتر من الماء إلى 95 درجة مئوية على طبق ساخن مع التحريك ودوامة متقطعة.عقد الحل في 95 درجة لمدة 30 إلى 60 دقيقة قبل السماح للحمام المياه لتوازن ببطء لدرجة حرارة الغرفة. عندما يبرد الحل، مرر خليط الدهون Bla g 1 الم معلق من خلال فلتر حقنة 0.22 ميكرون لإزالة الجسيمات، واستخدم فلتر طرد مركزي جديد مع قطع 10 كيلودالتون لتبادل البروتين المصفى ثلاث مرات في PBS لإزالة أي أحماض دهنية حرة متبقية ومذيب عضوي. ثم، تقييم تركيز البروتين باستخدام معيار تحليل البروتين المقايسة لتحديد العائد المتوقع لaliquots Bla g 1 المتبقية.لإعادة تشكيل Apo-Bla g 1، إعادة تعليق الاقتباسات Bla g 1 في خمسة ملليلترات من العازلة إعادة طيها لكل aliquot، و anneal العينات كما هو موضح. لتحميل Bla g 1 مع فوسفوليبيدات، أضف 10 ملليغرام من الشحنة المطلوبة إلى أنبوب اختبار زجاجي وتذوب في الكلوروفورم، وتتبخر الكلوروفورم لإنتاج فيلم الدهون. ثم، إضافة برنامج تلفزيوني إلى الأنبوب لإنتاج تركيز الفوسفوليبيد النهائي من 20 ملليمولار.سخني الفوسفولبيد فوق درجة حرارة المرحلة الانتقالية للبضائع الدهنية لإعادة ترطيب فيلم الدهون، ودوامة حتى يتحول المحلول إلى غائم. ثم، إضافة البضائع الدهون فوسفو لإنتاج فائض الضرس 20X من الليجانات بالنسبة إلى Bla g 1 على أساس العائد المتوقع. قد تتشكل متسرعة.دوامة لخلط قبل تميين البروتين كما هو موضح. لتأكيد إزالة البضائع أو تحميلها بواسطة الفوسفور-31 NMR، استخدم فلتر الطرد المركزي لتركيز العينة على أكثر من 100 ميكرومولار كما هو موضح. إعداد عينات الفوسفولبيد المرجعية من التركيزات المعروفة في المخزن المؤقت PBS كما هو مبين، وتمييع إشارة نهاية Bla g 1 إلى نسبة 1:1 مع حاجز المرارة إلى حجم إجمالي يبلغ حوالي 600 ميكرولتر.استخدام مسبار النطاق العريض للحصول على أطياف NMR أحادية البعد، 31-الفوسفور من عينات Bla g 1 الممتلأة والمعايير المرجعية للفوسفولبيد، ومقارنة أطياف BLA g 1 31 الفوسفوري NMR لتلك التي تم الحصول عليها لعينات مرجعية فوسفولبيد لتأكيد إزالة ليغاندس ملزمة داخليا و / أو ربط ليغاندس المطلوب على أساس التحولات الكيميائية للقمم مرئية، ثم قارن كثافة الذروة من الطيف Bla g 1 إلى أن من المعايير المرجعية فوسفولبيد للسماح بتأكيد stoichiometry ملزمة كاملة. باستخدام الكروماتوغرافيا تقارب، يمكن عزل إعادة تركيب GST Bla g 1 بسهولة إلى مستوى عال من النقاء، وإنتاج عائد من 2-4 ملليغرام لكل لتر من ثقافة الخلية. الحضانة بين عشية وضحاها مع بروتياز TEV في أربع درجات مئوية كافية لإزالة علامة GST، مما أسفر عن المنتج النهائي في حوالي 24 كيلودالتون.تطبيق Bla g 1 على عمود C18 في المرحلة العكسية ينتج عنه ملف تعريف elution مميز ، مع قمتين كبيرتين عند 50٪ من العازلة B ، وذروة كبيرة ثانية عند 75٪ عازلة B.Phosphorus-31 NMR spectra من Apo-Bla g 1 لا تظهر أي فوسفوليبيدات يمكن اكتشافها. ويمكن إنتاج منحنى قياسي من NMR باستخدام عينات مرجعية من تركيزات DSPC المعروفة. مقارنة كثافة إشارة 31 الفوسفور التي تم الحصول عليها من DSPC Bla g 1 ضد هذا المنحنى القياسي يمكن استخدامها لتسفر عن قياس الاستواء ملزمة من الدهون لكل بروتين.أطياف dichroism دائرية لApo والدهون محملة Bla ز 1 تظهر مينيما من 220 و 210 نانومتر، مما يدل على هيكل ألفا-هيليكال في الغالب. كما تظهر مقايسات التشبع الحراري الدائرية المستندة إلى الديكروزم فقدانا تعاونيا للبنية الثانوية ألفا-هلية، مما يدل على مجال كروي مطوي. بالإضافة إلى ذلك ، يكشف تحليل درجات حرارة الذوبان الناتجة عن زيادة كبيرة على ربط nMix ligand ، بما يتفق مع Bla g 1 الذي تم الحصول عليه من مصدر مسببات الحساسية الطبيعية.يعتمد نجاح هذا البروتوكول على القدرة على التغلب على كل من قابلية الذوبان المحدودة للليغند الكاره للماء ، والطبيعة التي يتعذر الوصول إليها لتجويف Bla g 1 الملزم. يضع هذا الإجراء الأساس للدراسات المناعية، مثل فحوصات انتشار الخلايا التائية، لتقييم تأثير الليغندات الدهنية على التوعية والآليات الجزيئية التي يحدث من خلالها ذلك. اقتران هذا الإجراء مع مزيد من المقايسات الفيزيائية الحيوية، أظهرنا أن ربط ليغاندس الكاره للماء يعزز الاستقرار Bla g 1، مع الآثار المحتملة المصب لتوليد epitope وحساسية.

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Isolation of Intermediate Filament Proteins from Multiple Mouse Tissues to Study Aging-associated Post-translational Modifications

عزل بروتينات الشعيرة المتوسطة من أنسجة الفئران المتعددة لدراسة التعديلات المرتبطة بالشيخوخة بعد الترجمة

Intermediate filaments (IFs), together with actin filaments and microtubules, form the cytoskeleton &#8211; a critical structural element of every cell. ...

Optimized Protocol for the Extraction of Proteins from the Human Mitral Valve

بروتوكول محسن لاستخراج البروتينات من صمام ميترال الإنسان

Analysis of the cellular proteome can help to elucidate the molecular mechanisms underlying diseases due to the development of technologies that permit ...

A Simple Fractionated Extraction Method for the Comprehensive Analysis of Metabolites, Lipids, and Proteins from a Single Sample

وهناك طريقة استخراج مجزأة بسيطة للتحليل الشامل من الأيض، والليبيدات، والبروتينات من عينة واحدة

Understanding of complex biological systems requires the measurement, analysis and integration of multiple compound classes of the living cell, usually ...

Measuring Biomolecular DSC Profiles with Thermolabile Ligands to Rapidly Characterize Folding and Binding Interactions

قياس الملامح الجزيئية البيولوجية DSC مع يغاندس ثيرمولابيلي لوصف سرعة قابلة للطي والربط التفاعلات

Differential scanning calorimetry (DSC) is a powerful technique for quantifying thermodynamic parameters governing biomolecular folding and binding ...

Utilizing a Comprehensive Immunoprecipitation Enrichment System to Identify an Endogenous Post-translational Modification Profile for Target Proteins

استخدام نظام إثراء إيمونوبريسيبيتيشن شاملة لتحديد ملف تعريف تعديل بوستترانسلاشونال ذاتية للبروتينات المستهدفة

It is now well-appreciated that post-translational modifications (PTMs) play an integral role in regulating a protein&#39;s structure and function, which ...

Isolation of Glomeruli and In Vivo Labeling of Glomerular Cell Surface Proteins

Isolation of Glomeruli and In Vivo Labeling of Glomerular Cell Surface Proteins

عزل جلوميرولي و في فيفو وسم البروتينات السطحية خلية الكبيبي

Proteinuria results from the disruption of the glomerular filter that is composed of the fenestrated endothelium, glomerular basement membrane, and ...

Looking Outwards: Isolation of Cyanobacterial Released Carbohydrate Polymers and Proteins

يبحث إلى الخارج: عزل البوليمرات الكربوهيدرات السيانوبكتيرية المفرج عنها والبروتينات

Cyanobacteria can actively secrete a wide range of biomolecules into the extracellular environment, such as heteropolysaccharides and proteins. The ...

Transverse Sectioning of Mature Rice (Oryza sativa L.) Kernels for Scanning Electron Microscopy Imaging Using Pipette Tips as Immobilization Support

Transverse Sectioning of Mature Rice Oryza sativa L. Kernels for Scanning Electron Microscopy Imaging Using Pipette Tips as Immobilization Support

المقطع المستعرض من الأرز الناضج(Oryza sativa L.) حبات لمسح المجهر الإلكتروني التصوير باستخدام نصائح ماصة كدعم تعطيل

Starch granules (SGs) exhibit different morphologies depending on the plant species, especially in the endosperm of the Poaceae family. Endosperm ...

Imaging of Podocytic Proteins Nephrin, Actin, and Podocin with Expansion Microscopy

تصوير البروتينات بودوسيتيك نيفرين، أكتين، وبودوسين مع المجهر التوسع

Disruption of the glomerular filter composed of the glomerular endothelium, glomerular basement membrane and podocytes, results in albuminuria. Podocyte ...

Identifying the Binding Proteins of Small Ligands with the Differential Radial Capillary Action of Ligand Assay (DRaCALA)

Identifying the Binding Proteins of Small Ligands with the Differential Radial Capillary Action of Ligand Assay DRaCALA

تحديد البروتينات الملزمة للليجاندات الصغيرة مع العمل الشعيرات الدموية الشعاعية التفاضلية من المقايسة ليغاند (DRaCALA)

The past decade has seen tremendous progress in the understanding of small signaling molecules in bacterial physiology. In particular, the target proteins ...