Name: removal and replacement of endogenous ligands from lipid-bound proteins and allergens
Uploaded: 2021-02-24T13:00:00
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हम डॉ टॉम किर्बी, स्कॉट Gabel, और डॉ रॉबर्ट लंदन इस काम के दौरान उनकी मदद और सहायता के लिए शुक्रिया अदा करना चाहते हैं, डॉ बॉब पेट्रोविच और लोरी एडवर्ड्स के साथ उनके इंस्ट्रूमेंटेशन के उपयोग और इस अध्ययन में नियोजित बीएलए जी 1 निर्माण पैदा करने में उनकी सहायता के लिए । हम एंड्रिया एडम्स को बड़े पैमाने पर स्पेक्ट्रोमेट्री के साथ सहायता के लिए धन्यवाद देते हैं, और एनएमआर इंस्ट्रूमेंटेशन के साथ सहायता के लिए डॉ यूजीन डिरोज। इस शोध को एनआईएच, नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ एनवायरमेंटल हेल्थ साइंसेज, जेड01-ES102906 (गाम) के इंट्राम्यूरल रिसर्च प्रोग्राम ने सपोर्ट किया । सामग्री पूरी तरह से लेखकों की जिम्मेदारी है और जरूरी नहीं कि राष्ट्रीय पर्यावरण स्वास्थ्य विज्ञान संस्थान के आधिकारिक विचारों का प्रतिनिधित्व करता है ।

1. बला जी 1 क्लोनिंग
<ol><li>तिलचट्टा एलर्जेन बला जी 1.0101 (अवशेष 34-216) के लिए जीन प्राप्त करें, जो एमए डोमेन के एक दोहराने का प्रतिनिधित्व करता है। सादगी के लिए, बला जी 1 पूरे बला जी 1.0101 प्रतिलिपि के बजाय, इस एकल ?...

<ol>
	<li>Radauer, C., Bublin, M., Wagner, S., Mari, A., Breiteneder, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allergens+are+distributed+into+few+protein+families+and+possess+a+restricted+number+of+biochemical+functions.">Allergens are distributed into few protein families and possess a restricted number of biochemical functions.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 121 (4), 847-852 (2008).</li><li>Dearman, R. J., Alcocer, M. J. C., Kimber, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+plant+lipids+on+immune+responses+in+mice+to+the+major+Brazil+nut+allergen+Ber+e+1.">Influence of plant lipids on immune responses in mice to the major Brazil nut allergen Ber e 1.</a> Clinical and Experimental Allergy. 37 (4), 582-591 (2007).</li><li>Ichikawa, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipopolysaccharide+binding+of+the+mite+allergen+Der+f+2.">Lipopolysaccharide binding of the mite allergen Der f 2.</a> Genes to Cells. 14 (9), 1055-1065 (2009).</li><li>Mueller, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+structure+of+the+dust+mite+allergen+Der+p+7+reveals+similarities+to+innate+immune+proteins.">The structure of the dust mite allergen Der p 7 reveals similarities to innate immune proteins.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 125 (4), 909-917 (2010).</li><li>Reginald, K., Chew, F. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+major+allergen+Der+p+2+is+a+cholesterol+binding+protein.">The major allergen Der p 2 is a cholesterol binding protein.</a> Scientific Reports. 9 (1), 1556 (2019).</li><li>Trompette, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allergenicity+resulting+from+functional+mimicry+of+a+Toll-like+receptor+complex+protein.">Allergenicity resulting from functional mimicry of a Toll-like receptor complex protein.</a> Nature. 457 (7229), 585-589 (2009).</li><li>Angelina, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+lipid+interaction+capacity+of+Sin+a+2+and+Ara+h+1,+major+mustard+and+peanut+allergens+of+the+cupin+superfamily,+endorses+allergenicity.">The lipid interaction capacity of Sin a 2 and Ara h 1, major mustard and peanut allergens of the cupin superfamily, endorses allergenicity.</a> Allergy: European Journal of Allergy and Clinical Immunology. 71 (9), 1284-1294 (2016).</li><li>Soh, W. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+roles+of+Bet+v+1+ligands+in+allergen+stabilization+and+modulation+of+endosomal+protease+activity.">Multiple roles of Bet v 1 ligands in allergen stabilization and modulation of endosomal protease activity.</a> Allergy: European Journal of Allergy and Clinical Immunology. 74 (12), 2382-2393 (2019).</li><li>Foo, A. C. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrophobic+ligands+influence+the+structure,+stability,+and+processing+of+the+major+cockroach+allergen+Bla+g+1.">Hydrophobic ligands influence the structure, stability, and processing of the major cockroach allergen Bla g 1.</a> Scientific Reports. 9 (1), 18294 (2019).</li><li>Machado, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fold+Stability+is+a+key+factor+for+immunogenicity+and+allergenicity+of+the+major+birch+pollen+allergen+Bet+v1.0101.">Fold Stability is a key factor for immunogenicity and allergenicity of the major birch pollen allergen Bet v1.0101.</a> Allergy: European Journal of Allergy and Clinical Immunology. 137 (5), 1525-1534 (2016).</li><li>Mueller, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+novel+structure+of+the+cockroach+allergen+Bla+g+1+has+implications+for+allergenicity+and+exposure+assessment.">The novel structure of the cockroach allergen Bla g 1 has implications for allergenicity and exposure assessment.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 132 (6), (2013).</li><li>Mogensen, J. E., Wimmer, R., Larsen, J. N., Spangfort, M. D., Otzen, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+major+birch+allergen+,+Bet+v+1+,+shows+affinity+for+a+broad+spectrum+of+physiological+ligands.">The major birch allergen , Bet v 1 , shows affinity for a broad spectrum of physiological ligands.</a> The Journal of Biological Chemistry. 277 (26), 23684-23692 (2002).</li><li>Seutter von Loetzen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secret+of+the+major+birch+pollen+allergen+Bet+v+1:+identification+of+the+physiological+ligand.">Secret of the major birch pollen allergen Bet v 1: identification of the physiological ligand.</a> Biochemical Journal. 457 (3), 379-390 (2014).</li><li>Ib&#225;&#241;ez-Shimabukuro, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+ligand+binding+of+As-p18,+an+extracellular+fatty+acid+binding+protein+from+the+eggs+of+a+parasitic+nematode.">Structure and ligand binding of As-p18, an extracellular fatty acid binding protein from the eggs of a parasitic nematode.</a> Bioscience Reports. 39 (7), 1-16 (2019).</li><li>Beyer, K., Klingenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ADP/ATP+carrier+protein+from+beef+heart+mitochondria+has+high+amounts+of+tightly+bound+cardiolipin,+as+revealed+by+31P+nuclear+magnetic+resonance.">ADP/ATP carrier protein from beef heart mitochondria has high amounts of tightly bound cardiolipin, as revealed by 31P nuclear magnetic resonance.</a> Biochemistry. 24 (15), 3821-3826 (1985).</li><li>Delaglio, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nmrpipe+-+a+multidimensional+spectral+processing+system+based+on+unix+pipes.">Nmrpipe - a multidimensional spectral processing system based on unix pipes.</a> Journal of Biomolecular NMR. 6 (3), 277-293 (1995).</li><li>Johnson, B. A., Blevins, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NMR+View:+A+computer+program+for+the+visualization+and+analysis+of+NMR+data.">NMR View: A computer program for the visualization and analysis of NMR data.</a> Journal of Biomolecular NMR. 4 (5), 603-614 (1994).</li><li>Dillon, M. B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+Bla-g+T+cell+antigens+dominate+responses+in+asthma+versus+rhinitis+subjects.">Different Bla-g T cell antigens dominate responses in asthma versus rhinitis subjects.</a> Clinical and Experimental Allergy. 45, 1856-1867 (2015).</li><li>Pasquato, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crystal+structure+of+peach+Pru+p+3,+the+prototypic+member+of+the+family+of+plant+non-specific+lipid+transfer+protein+pan-allergens.">Crystal structure of peach Pru p 3, the prototypic member of the family of plant non-specific lipid transfer protein pan-allergens.</a> Journal of Molecular Biology. 356 (3), 684-694 (2006).</li><li>Dubiela, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+lipid+binding+on+the+tertiary+structure+and+allergenic+potential+of+Jug+r+3,+the+non-specific+lipid+transfer+protein+from+walnut.">Impact of lipid binding on the tertiary structure and allergenic potential of Jug r 3, the non-specific lipid transfer protein from walnut.</a> Scientific Reports. 9 (2007), 1-11 (2019).</li><li>Abdullah, S. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ligand+binding+to+an+allergenic+lipid+transfer+protein+enhances+conformational+flexibility+resulting+in+an+increase+in+susceptibility+to+gastroduodenal+proteolysis.">Ligand binding to an allergenic lipid transfer protein enhances conformational flexibility resulting in an increase in susceptibility to gastroduodenal proteolysis.</a> Scientific Reports. 6, 30279 (2016).</li><li>Derewenda, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+crystal+structure+of+a+major+dust+mite+allergen+Der+p+2+,+and+its+biological+implications.">The crystal structure of a major dust mite allergen Der p 2 , and its biological implications.</a> Journal of Molecular Biology. 318 (1), 189-197 (2002).</li><li>Lipfert, J., Columbus, L., Chu, V. B., Lesley, S. A., Doniach, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size+and+shape+of+detergent+micelles+determined+by+small-angle+X-ray+scattering.">Size and shape of detergent micelles determined by small-angle X-ray scattering.</a> The Journal of Physical Chemistry. B. 111 (43), 12427-12438 (2007).</li><li>Pulsawat, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+house+dust+mite+allergen+Der+p+5+binds+lipid+ligands+and+stimulates+airway+epithelial+cells+through+a+TLR2-dependent+pathway.">The house dust mite allergen Der p 5 binds lipid ligands and stimulates airway epithelial cells through a TLR2-dependent pathway.</a> Clinical and Experimental Allergy. 49 (3), 378-390 (2019).</li><li>Douliez, J. P., Michon, T., Marion, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Steady-state+tyrosine+fluorescence+to+study+the+lipid-binding+properties+of+a+wheat+non-specific+lipid-transfer+protein+(nsLTP1).">Steady-state tyrosine fluorescence to study the lipid-binding properties of a wheat non-specific lipid-transfer protein (nsLTP1).</a> Biochimica et Biophysica Acta - Biomembranes. 1467 (1), 65-72 (2000).</li><li>Ogburn, R. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Are+dust+mite+allergens+more+abundant+and/or+more+stable+than+other+Dermatophagoides+pteronyssinus+proteins.">Are dust mite allergens more abundant and/or more stable than other Dermatophagoides pteronyssinus proteins.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 139 (3), 1030-1032 (2017).</li><li>Cabrera, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Are+allergens+more+abundant+and/or+more+stable+than+other+proteins+in+pollens+and+dust.">Are allergens more abundant and/or more stable than other proteins in pollens and dust.</a> Allergy: European Journal of Allergy and Clinical Immunology. , 1267-1269 (2019).</li><li>Offermann, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+characterization+of+the+hazelnut+allergen+Cor+a+8.">Structural and functional characterization of the hazelnut allergen Cor a 8.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 63 (41), 9150-9158 (2015).</li><li>Koppelman, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+denaturation+of+Brazil+nut+2S+albumin+(Ber+e1)+and+implication+of+structural+destabilization+on+digestion+by+pepsin.">Reversible denaturation of Brazil nut 2S albumin (Ber e1) and implication of structural destabilization on digestion by pepsin.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 53 (1), 123-131 (2005).</li><li>Smole, U., Bublin, M., Radauer, C., Ebner, C., Breiteneder, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mal+d+2,+the+thaumatin-like+allergen+from+apple,+is+highly+resistant+to+gastrointestinal+digestion+and+thermal+processing.">Mal d 2, the thaumatin-like allergen from apple, is highly resistant to gastrointestinal digestion and thermal processing.</a> International Archives of Allergy and Immunology. 147 (4), 289-298 (2008).</li><li>Bublin, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+gastrointestinal+digestion+and+heating+on+the+allergenicity+of+the+kiwi+allergens+Act+d+1,+actinidin,+and+Act+d+2,+a+thaumatin-like+protein.">Effects of gastrointestinal digestion and heating on the allergenicity of the kiwi allergens Act d 1, actinidin, and Act d 2, a thaumatin-like protein.</a> Molecular Nutrition and Food Research. 52 (10), 1130-1139 (2008).</li><li>Griesmeier, U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physicochemical+properties+and+thermal+stability+of+Lep+w+1,+the+major+allergen+of+whiff.">Physicochemical properties and thermal stability of Lep w 1, the major allergen of whiff.</a> Molecular Nutrition and Food Research. 54 (6), 861-869 (2010).</li><li>de Jongh, H. H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+heat+treatment+on+the+conformational+stability+of+intact+and+cleaved+forms+of+the+peanut+allergen+Ara+h+6+in+relation+to+its+IgE-binding+potency.">Effect of heat treatment on the conformational stability of intact and cleaved forms of the peanut allergen Ara h 6 in relation to its IgE-binding potency.</a> Food Chemistry. 326, 127027 (2020).</li><li>Glasgow, B. J., Abduragimov, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ligand+binding+complexes+in+lipocalins:+Underestimation+of+the+stoichiometry+parameter+(n).">Ligand binding complexes in lipocalins: Underestimation of the stoichiometry parameter (n).</a> Biochimica et Biophysica Acta - Proteins and Proteomics. 1866 (10), 1001-1007 (2018).</li><li>Aalberse, R. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+amino-terminal+fragment+of+Ara+h+1+as+a+major+target+of+the+IgE-binding+activity+in+the+basic+peanut+protein+fraction.">Identification of the amino-terminal fragment of Ara h 1 as a major target of the IgE-binding activity in the basic peanut protein fraction.</a> Clinical and Experimental Allergy. 50 (3), 401-405 (2020).</li><li>Bublin, M., Eiwegger, T., Breiteneder, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Do+lipids+influence+the+allergic+sensitization+process.">Do lipids influence the allergic sensitization process.</a> Journal of Allergy and Clinical Immunology. 134 (3), 521-529 (2014).</li></ol>

इस काम में वर्णित प्रोटोकॉल को सफलतापूर्वक बला जी 1 के लिपिड बाध्यकारी गुणों का व्यवस्थित अध्ययन करने के लिए लागू किया गया है। इससे कार्गो बाइंडिंग, थर्मोस्थेबिलिटी और एंडोसोमल प्रोसेसिंग के बीच एक स?...

एलर्जेन डेटाबेस के एक सर्वेक्षण से पता चलता है कि एलर्जी सभी ज्ञात प्रोटीन परिवारों के केवल 2% में पाई जाती है, आम कार्यात्मक और जैव भौतिक गुणों का सुझाव देता है जो एलर्जी1में योगदान देते हैं। इन गुणों में से, लिपिड कार्गो को बांधने की क्षमता एलर्जी के बीच दृढ़ता से अधिक प्रतिनिधित्व करती प्रतीत होती है, यह सुझाव देते हुए कि ये कार्गो संवेदीकरण प्रक्रिया को प्रभावित कर सकते हैं1। दरअसल, यह दिखाया गया है कि ब्राजील अखरोट एलर्जी Ber ई 1 अपने अंतर्जात लिपिड के साथ सह प्रशासन की आवश्यकता को अपनी पूरी संवेदनशील क्षमता2 काएहसास । ये लिपिड संभवतः प्रतिरक्षा प्रणाली को सीधे उत्तेजित कर सकते हैं जैसा कि पतंग एलर्जी डेर पी 2 और डेर पी 7 द्वारा दर्शाया गया है, जिनमें से दोनों एलपीएस-बाध्यकारीप्रोटीन3,4,5के साथ एक मजबूत संरचनात्मक होमोलॉजी साझा करते हैं। इस अवलोकन के आधार पर यह प्रस्ताव किया गया था कि डर्प 2 और डेर पी 7 बैक्टीरियल लिपिड को बांध सकते हैं और सीधे टीएलआर 4-मध्यस्थता सिग्नलिंग के माध्यम से मेजबान प्रतिरक्षा प्रणाली को प्रोत्साहित कर सकते हैं, जिससे संवेदीकरण प्रक्रिया5,6को सुविधाजनक बनाया जा सकता है। यह भी संभव है कि अंतर्जात रूप से बंधे लिपिड एलर्जी प्रोटीन के जैव भौतिक गुणों को बदल सकते हैं। उदाहरण के लिए, फॉस्फोलिपिड वेसिकल्स के साथ बातचीत करने के लिए पाप ए 2 (सरसों) और आरा एच 1 (मूंगफली) की क्षमता ने गैस्ट्रिक और एंडोसोमल क्षरण7के प्रति उनके प्रतिरोध को काफी बढ़ाया, जबकि प्रमुख बर्च पराग एलर्जेन बेट वी 1 के लिए बाध्यकारी लिगांड ने एंडोसोमल प्रसंस्करण की दर और परिणामस्वरूप पेप्टाइड्स8की विविधता दोनों को बदल दिया। यह विशेष रूप से स्थिरता, टी-सेल एपिटोप जनरेशन और बेट वी 1 और बीएलए जी 1 जैसे प्रोटीन के लिए एलर्जी के बीच मनाया गया सहसंबंध को देखते हुए एलर्जी के लिए प्रासंगिक है; जिनमें से बाद इस काम का विषय होगा9,10.
बला जी 1 कीट मेजर एलर्जेन (एमए) प्रोटीन परिवार के प्रोटोटाइप सदस्य का प्रतिनिधित्व करता है, और 12 एम्फीपैथिक अल्फा हेलीस से बना एक अद्वितीय संरचना है जो असामान्य रूप से बड़े हाइड्रोफोबिक गुहा9,11को संलग्न करता है। बीएलए जी 1 की उपलब्ध एक्स-रे क्रिस्टल संरचना इस गुहा के भीतर इलेक्ट्रॉन घनत्व दिखाती है जो बाउंड फॉस्फोलिपिड या फैटी एसिड लिगामेंट्स के अनुरूप है; 31पी-एनएमआर और मास स्पेक्ट्रोमेट्री द्वारा पुष्टि की गई अनुमान। ये कार्गो प्रकृति में विषम थे और उनकी संरचना एलर्जी स्रोत पर भारी निर्भर थी, जिसमें ई कोलाई और पी पादरीमें व्यक्त किए गए पुनर्संयोजन ब्ला जी 1 के लिए विभिन्न लिपिड प्रोफाइल मनाए गए थे। मजे की बात है, बला जी 1 अपने प्राकृतिक एलर्जी स्रोत (तिलचट्टा फ्रास) से शुद्ध होता है, जिसमें मुख्य रूप से फैटी एसिड होते हैं, जिसमें पामिट, ओलेट और स्टीरेट के मिश्रण को इसके "प्राकृतिक" लिगांड9,11के रूप में पहचाना जाता है। कई शुद्धिकरण चरणों के बाद लिपिड और फैटी एसिड को बनाए रखने के लिए बला जी 1 की क्षमता अलगाव में प्रोटीन का अध्ययन करने के प्रयासों में बाधा डालती है। इसके विपरीत, यह सुझाव दिया गया है कि बीएलए जी 1 (अब से एनएमआईएक्स के रूप में संदर्भित) के प्राकृतिक पल्मिटेट, स्टेरेट, और ओलेट लिगांड अपनी एलर्जी और देशी जैविक समारोह9दोनों में महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं। हालांकि, ये लिगामेंट्स रीकॉम्बिनेंट स्रोतों से प्राप्त बीएलए जी 1 में मौजूद नहीं हैं, जिससे इस परिकल्पना का आकलन करना मुश्किल हो जाता है। इसी तरह के मुद्दे अन्य लिपिड बाइंडिंग एलर्जी जैसे बेट वी1 12,13के लिए देखे गए हैं । लिपिड-एलर्जेन इंटरैक्शन के व्यवस्थित अध्ययन को सुगम बनाने के लिए हमने एक प्रोटोकॉल विकसित किया है जिसके माध्यम से एलर्जी को मात्रात्मक रूप से उनके अंतर्जात लिपिड से छीन लिया जा सकता है और या तो एपो-फॉर्म में पुनर्गठित किया जा सकता है या विशिष्ट लिगांड से भरा हुआ है।
एलर्जेंस को आमतौर पर आत्मीयता क्रोमेटोग्राफी और/या आकार-अपवर्जन क्रोमेटोग्राफी का उपयोग करके उनके प्राकृतिक या पुनर्संयोजन स्रोतों से शुद्ध किया जाता है । यहां, हम उच्च प्रदर्शन वाले तरल क्रोमेटोग्राफी (एचपीएलसी) के रूप में एक अतिरिक्त शुद्धिकरण कदम पेश करते हैं, जिसमें रिवर्स-फेज C18 कॉलम को नियोजित किया गया है, जिसमें से एलर्जी को फैटी एसिड बाइंडिंग प्रोटीन14के लिए विकसित प्रोटोकॉल के समान एक कार्बनिक विलायक में शामिल किया गया है। परिणामस्वरूप प्रोटीन तो फैटी एसिड और/या फॉस्फोलिपिड की अनुपस्थिति या उपस्थिति में एक थर्मल एनीलिंग कदम के अधीन है । देशी बला जी 1 गुना ठीक करने के अलावा, ऊंचा तापमान लिपिड कार्गो की घुलनशीलता और पहुंच में वृद्धि करता है, या तो एपो-फॉर्म में बला जी 1 उपज या वांछित हाइड्रोफोबिक लिगामेंट से समान रूप से भरा हुआ है। 31 इस तरह से शुद्ध बीएलए जी 1 के पी-एनएमआर स्पेक्ट्रा ने वांछित यौगिकों के साथ अंतर्जात रूप से बंधे लिगामेंट्स और समान प्रतिस्थापन को पूरी तरह से हटाने की पुष्टि की, जबकि परिपत्र डिक्रोवाद ने बला जी 1 गुना की सफल वसूली की पुष्टि की। इस विधि की उपयोगिता को हाल के एक काम में रेखांकित किया गया है जिसमें कार्गो बाइंडिंग को बला जी 1 थर्मोस्थेबिलिटी और प्रोटियोलिटिक प्रतिरोध को बढ़ाने के लिए पाया गया था, जो संवेदीकरण और एलर्जी9के संभावित प्रभावों के साथ टी-सेल एपिटोप उत्पादन की गतिज में फेरबदल करता था।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bla g 1 Gene&#160;</td>
			<td>Genescript</td>
			<td>N/a</td>
			<td>Custom gene synthesis service. GenBank Accession no AF072219 Residues 34-216</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Affinity purified natural Bla g 1 (nBla g 1)</td>
			<td>Indoor biotechnologies</td>
			<td>N/a</td>
			<td>Custom order</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 1100 Series HPLC System</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>G1315B, G1311A, G1322A</td>
			<td>UV Detector, Pump, and Degasser</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent DD2 600 MHz spectrometer</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>N/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amicon Ultra-15 Centrifugal Filter Unit</td>
			<td>Amicon</td>
			<td>UFC-1008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP1760-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benzonase</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>E1014-5KU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Broad- band 5 mm Z-gradient probe</td>
			<td>Varian</td>
			<td>N/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ChemStation for LC (Software)</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>N/a</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cOmplete Mini Protease Inhibitor Cocktail</td>
			<td>Roche</td>
			<td>11836153001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Distearoylphosphatidylcholine (18:0 PC)</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>850365C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E. Coli BL21 DE3 Cells</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>C2530H</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezone 4.5 Freeze Dry System</td>
			<td>Labconco</td>
			<td>7750000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutathione Resin</td>
			<td>Genescript</td>
			<td>L00206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutathione, Reduced</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP25211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropyl-&#946;-D-thiogalactopyranoside (IPTG)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>34060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Jasco&#160; CD spectropolarimeter</td>
			<td>Jasco</td>
			<td>J-815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millex Syringe Filter Unit</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>SLGS033SS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NMRPipe (Software)</td>
			<td>Delaglio et al.&#160;</td>
			<td>N/a</td>
			<td>Delaglio, F. et al. Nmrpipe - a Multidimensional Spectral Processing System Based On Unix Pipes. J. Biomol. NMR 6, 277&#8211;293 (1995).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NMRViewJ (Software)</td>
			<td>Johnson et al.&#160;</td>
			<td>N/a</td>
			<td>Johnson, B. A. &#38; Blevins, R. A. NMR View: A computer program for the visualization and analysis of NMR data. J. Biomol. NMR 4, 603&#8211;614 (1994).</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oleic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>O1008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pierce BCA Protein Assay</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>BCA1-1KT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polaris 5 C18-A 250x10.0 mm HPLC Column</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>SKU: A2000250X100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SD-200 Vacuum Pump</td>
			<td>Varian</td>
			<td>VP-195</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Cholate Hydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C6445</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Palmitate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9767</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Stearate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S3381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VnmrJ (Software)</td>
			<td>Varian</td>
			<td>N/a</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

removal and replacement of endogenous ligands from lipid-bound proteins and allergens

कई प्रमुख एलर्जी हाइड्रोफोबिक लिपिड जैसे अणुओं से बांधते हैं, जिनमें मस एम 1, बेट वी 1, डेर पी 2 और फेल डी 1 शामिल हैं। इन लिगामेंट्स को दृढ़ता से बनाए रखा जाता है और संवेदीकरण प्रक्रिया को सीधे प्रतिरक्षा प्रणाली को उत्तेजित करने या एलर्जिक प्रोटीन के जैव भौतिक गुणों में फेरबदल करने की क्षमता होती है। इन चरों को नियंत्रित करने के लिए, अंतर्जात रूप से बंधे लिगामेंट्स को हटाने के लिए तकनीकों की आवश्यकता होती है और यदि आवश्यक हो, तो ज्ञात संरचना के लिपिड के साथ प्रतिस्थापन। तिलचट्टा एलर्जेन बला जी 1 एक बड़ी हाइड्रोफोबिक गुहा को संलग्न करता है जो पारंपरिक तकनीकों का उपयोग करते हुए शुद्ध होने पर अंतर्जात लिपिड के विषम मिश्रण को बांधता है। यहां, हम एक ऐसी विधि का वर्णन करते हैं जिसके माध्यम से इन लिपिड को रिवर्स-फेज एचपीएलसी का उपयोग करके हटा दिया जाता है जिसके बाद थर्मल एनीलिंग द्वारा अपने एपो-फॉर्म में बला जी 1 उपज या फैटी एसिड या फॉस्फोलिपिड कार्गो के उपयोगकर्ता-परिभाषित मिश्रण के साथ फिर से लोड किया जाता है। जैव रासायनिक परख के साथ इस प्रोटोकॉल युग्मन से पता चलता है कि फैटी एसिड कार्गो काफी टी सेल epitope पीढ़ी और एलर्जी की दर के लिए डाउनस्ट्रीम निहितार्थ के साथ, बीएलए जी 1 के थर्मोसिटी और प्रोटियोलिटिक प्रतिरोध को बदल देते हैं। ये परिणाम लिपिड हटाने/रीलोडिंग प्रोटोकॉल के महत्व को उजागर करते हैं जैसे कि यहां वर्णित जब दोनों पुनः संयोजन और प्राकृतिक स्रोतों से एलर्जी का अध्ययन करते हैं । प्रोटोकॉल लिपोकलिन (मस एम 1), पीआर-10 (बेट वी 1), एमडी-2 (डेर पी 2) और यूट्रोग्लोबिन (फेल डी 1) सहित अन्य एलर्जी परिवारों के लिए सामान्य रूप से महत्वपूर्ण है, जो एलर्जी प्रतिक्रिया में लिपिड की भूमिका का अध्ययन करने के लिए एक मूल्यवान उपकरण प्रदान करता है।

एफ़िनिटी क्रोमेटोग्राफी का उपयोग करके, पुनः संयोजन जीएसटी-बला जी 1 को आसानी से उच्च स्तर की शुद्धता(चित्रा 1 ए)में अलग कर दिया गया था, जो सेल संस्कृति के ~ 2-4 मिलीग्राम/एल की उपज का उत्पादन करता था। रा?...

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Removal and Replacement of Endogenous Ligands from Lipid-Bound Proteins and Allergens

यह प्रोटोकॉल एलर्जी से अंतर्जात लिपिड को हटाने और रिवर्स-फेज एचपीएलसी के माध्यम से उपयोगकर्ता-निर्दिष्ट लिगामेंट्स के साथ उनके प्रतिस्थापन का वर्णन करता है। 31 पी-एनएमआर और परिपत्र डिक्रोमिज़्म लिगांड हटाने/लोडिंग की तेजी से पुष्टि और देशी एलर्जी संरचना की वसूली के लिए अनुमति देते हैं।

लिपिड-बाउंड प्रोटीन और एलर्जेंस से एंडोजेनस लिगांड को हटाना और प्रतिस्थापन

Many major allergens bind to hydrophobic lipid-like molecules, including Mus m 1, Bet v 1, Der p 2, and Fel d 1. These ligands are strongly retained and ...

कई एलर्जी हाइड्रोफोबिक अणुओं को बांधते हैं। यह प्रोटोकॉल इन लिगामेंट्स को पूरी तरह से हटाने और बदलने में सक्षम बनाता है, जिससे हमें संरचना और इम्यूनोजेनिसिटी पर उनके प्रभाव का व्यवस्थित तरीके से अध्ययन करने की अनुमति देता है। थर्मल एनीलिंग के साथ मिलकर रिवर्स-फेज एचपीएलसी के उपयोग के दो फायदे हैं।यह अंतर्जात लिगामेंट्स को हटा देता है, और यह अन्यथा-दुर्गम बाध्यकारी साइटों को खोलने के लिए लिगांड को घुलनशील करने में मदद करता है। यदि हम उन कारकों को निर्धारित कर सकते हैं जो एलर्जी में योगदान देते हैं, तो हम उन उपचारों को डिजाइन करने में सक्षम हो सकते हैं जो इन कारकों से बचते हैं। कई प्रोटीन लिपिड लिगांड बांधते हैं, जो दृढ़ता से बनाए रखते हैं और संरचना और कार्य दोनों को प्रभावित कर सकते हैं।हमारी विधि इन बातचीत के व्यवस्थित अध्ययन की अनुमति देता है। सीमित घुलनशीलता और कई लिपिड कार्गो की पहुंच लोडिंग प्रक्रिया को रोक सकती है। इन लिगामेंट्स को तैयार करते समय ध्यान रखना सुनिश्चित करें, और सिस्टम-विशिष्ट अनुकूलन की आवश्यकता पर विचार करें।हाइड्रोफोबिक और अघुलनशील लिगामेंट्स के साथ काम करना कुछ एलर्जीविदों और बायोकेमिस्टों के लिए एक समायोजन है, यह देखना उपयोगी हो सकता है कि नमूने विभिन्न चरणों में क्या दिखते हैं। अभिव्यक्ति और शुद्धिकरण क्लोनिंग के बाद, एक स्विंग बाल्टी रोटर में कई अपकेंद्री के लिए 10 किलोडडलटन आणविक वजन कटऑफ के साथ एक अपकेंद्रित्र फिल्टर इकाई के लिए क्लीवेड बला जी 1 के 12 मिलीलीटर लागू करें जब तक कुल मात्रा दो मिलीलीटर से कम हो गई है । परिणामस्वरूप ध्यान केंद्रित 10 मिलीमीटर एचपीएलसी प्रणाली द्वारा 250 पर लोड करें जो सी 18 रिवर्स-फेज क्रोमेटोग्राफी कॉलम से लैस है, जो 97% बफर ए और 3% बफर बी.एल्यूट बला जी 1 के साथ 1.5 से 4 मिलीलीटर प्रति मिनट प्रवाह दर पर है, जैसा कि तालिका में दर्शाया गया है, ताल की निगरानी के लिए 280 नैनोमीटर अवशोषित पर फ्लोरेसेंस अवशोषण का उपयोग करके।लगभग 34 से 40 मिनट से शुरू और 74% से ऊपर एक बफर बी एकाग्रता प्रत्येक बला जी 1 अंश के चार मिलीलीटर से अधिक नहीं इकट्ठा होती है। अलीकोट ग्लास टेस्ट ट्यूब में पूल्ड बला जी 1 अंश। ट्यूबों को पैराफिन फिल्म से कवर करें और फिल्म को दो छेदों से छिद्रित करें।फिर, नमूनों को एक घंटे के लिए शून्य से 80 डिग्री सेल्सियस पर फ्रीज करें और परिणामस्वरूप डी-लिपिल्ड प्रोटीन नमूनों को सुखाने के लिए एक लिओफिलाइजर का उपयोग करें। प्रत्याशित बला जी 1 उपज निर्धारित करने के लिए, फिर से एक lyophilized de-lipidated परीक्षण aliquot पुनर्फलाक बफर के पांच मिलीलीटर में निलंबित । इस मिश्रण को 500 मिलीलीटर बीकर में गर्म प्लेट पर 95 डिग्री सेल्सियस तक 95 डिग्री सेल्सियस तक गर्म और आंतरायिक भंवर के साथ गर्म करें।पानी के स्नान को धीरे-धीरे कमरे के तापमान तक बराबरी करने की अनुमति देने से पहले 30 से 60 मिनट के लिए 95 डिग्री पर समाधान पकड़ो। जब समाधान ठंडा हो जाता है, तो पार्टिकुलेट मैटर को हटाने के लिए 0.22 माइक्रोन सिरिंज फिल्टर के माध्यम से एनील्ड बल्ड जी 1 लिपिड मिश्रण पास करें, और किसी भी अवशिष्ट मुक्त फैटी एसिड और कार्बनिक सॉल्वेंट को हटाने के लिए फ़िल्टर किए गए प्रोटीन को पीएफबीएस में तीन बार बफर करने के लिए 10 किलोडडलटन कटऑफ के साथ एक नए सेंट्रलिफ्यूगल फिल्टर का उपयोग करें। फिर, शेष बला जी 1 aliquots के लिए प्रत्याशित उपज निर्धारित करने के लिए एक मानक प्रोटीन विश्लेषण परख का उपयोग कर प्रोटीन एकाग्रता का आकलन करें।एपीओ-बला जी 1 का पुनर्गठन करने के लिए, प्रति एलिकोट बफर को फिर से बनाने के पांच मिलीलीटर में बला जी 1 एलिकोट को फिर से निलंबित करें, और नमूनों को प्रदर्शित के रूप में एनील करें। फास्फोलिपिड्स के साथ बला जी 1 लोड करने के लिए, एक ग्लास टेस्ट ट्यूब में वांछित कार्गो के 10 मिलीग्राम जोड़ें और क्लोरोफॉर्म में भंग करें, और लिपिड फिल्म का निर्माण करने के लिए क्लोरोफॉर्म को वाष्पित करें। फिर, 20 मिलीमोलर की अंतिम फॉस्फोलिपिड एकाग्रता का उत्पादन करने के लिए ट्यूब में पीबीएस जोड़ें।लिपिड फिल्म को फिर से हाइड्रेट करने के लिए लिपिड कार्गो के चरण संक्रमण तापमान के ऊपर फॉस्फोलिपिड को गर्म करें, और भंवर तब तक गर्म करें जब तक कि समाधान बादल न हो जाए। फिर, फास्फोर लिपिड कार्गो को जोड़ने के लिए प्रत्याशित उपज के आधार पर बला जी 1 के सापेक्ष लिगांड की एक 20X मोलर अतिरिक्त उत्पादन करने के लिए । एक तेज़ी बन सकती है।भंवर के रूप में प्रदर्शन प्रोटीन annealing से पहले मिश्रण करने के लिए । फास्फोरस-31 एनएमआर द्वारा कार्गो हटाने या लोडिंग की पुष्टि करने के लिए, प्रदर्शन के अनुसार 100 माइक्रोमोलर के लिए नमूने को केंद्रित करने के लिए एक अपकेंद्रित्र फिल्टर का उपयोग करें। संकेत के अनुसार पीबीएस बफर में ज्ञात सांद्रता के संदर्भ फॉस्फोलिपिड नमूने तैयार करें, और बीएलए जी 1 अंत संदर्भ को 1:1 अनुपात के साथ कोलेट बफर के साथ लगभग 600 माइक्रोलीटर की कुल मात्रा में पतला करें।एक आयामी, 31-फास्फोरस एनएमआर स्पेक्ट्रा कोलेट सोल्यूबिलाइज्ड बीएलए जी 1 नमूनों और संदर्भ फास्फोलिपिड मानकों के प्राप्त करने के लिए ब्रॉडबैंड जांच का उपयोग करें, और फास्फोलिपिड संदर्भ नमूनों के लिए प्राप्त उन लोगों के लिए बला जी 1 31 फॉस्फोरस एनएमआर स्पेक्ट्रा की तुलना करें ताकि दृश्यमान चोटियों के रासायनिक बदलावों के आधार पर एंडोजेनस रूप से बंधे लिगांड और/या वांछित लिगांड को हटाने की पुष्टि की जा सके, फिर पूर्ण बाध्यकारी स्टोचिओमेट्री की पुष्टि की अनुमति देने के लिए ब्लैकोस्फीपिड संदर्भ मानकों की पीक तीव्रता की तुलना करें । आत्मीयता क्रोमेटोग्राफी का उपयोग करके, पुनः संयोजन जीएसटी बला जी 1 को आसानी से शुद्धता के उच्च स्तर पर अलग किया जा सकता है, जिससे सेल संस्कृति के प्रति लीटर दो से चार मिलीग्राम की उपज का उत्पादन होता है। चार डिग्री सेल्सियस पर TEV प्रोटीज के साथ रातोंरात इनक्यूबेशन जीएसटी टैग को हटाने के लिए पर्याप्त है, लगभग 24 किलोडडलटन पर अंतिम उत्पाद उपज ।एक रिवर्स चरण C18 कॉलम के लिए बीएलए जी 1 लागू करने से एक विशिष्ट एल्यूशन प्रोफाइल पैदा होता है, जिसमें 50% बफर बी पर दो बड़ी चोटियां होती हैं, और 75% बफर बी फास्फोरस-31 एनएमआर स्पेक्ट्रा ऑफ एपीओ-ब्ला जी 1 में एक दूसरी बड़ी चोटी कोई पता लगाने योग्य फॉस्फोलिपिड नहीं दिखाती है। ज्ञात डीएसपीसी सांद्रता के संदर्भ नमूनों का उपयोग करके एनएमआर से एक मानक वक्र का उत्पादन किया जा सकता है। इस मानक वक्र के खिलाफ डीएसपीसी बला जी 1 से प्राप्त फॉस्फोरस 31 सिग्नल तीव्रता की तुलना लिपिड-प्रति-प्रोटीन के बाध्यकारी स्टोइचियोमेट्री को उपज देने के लिए किया जा सकता है।एपीओ-और लिपिड-लोडेड बला जी 1 के लिए परिपत्र डिक्रोमिज़्म स्पेक्ट्रा 220 और 210 नैनोमीटर का मिनीमा दिखाता है, जो मुख्य रूप से अल्फा-पेचिक संरचना का संकेत है। परिपत्र डिक्रोमिज़्म-आधारित थर्मल डेनैचेशन परख अल्फा-हेलिकल माध्यमिक संरचना का सहकारी नुकसान भी दिखाता है, जो एक मुड़ा हुआ गोलाकार डोमेन का संकेत है। इसके अलावा, परिणामी पिघलने वाले तापमान का विश्लेषण एनएमिक्स लिगांड बाइंडिंग पर एक महत्वपूर्ण वृद्धि का पता चलता है, जो इसके प्राकृतिक एलर्जी स्रोत से प्राप्त बला जी 1 के अनुरूप है।इस प्रोटोकॉल की सफलता हाइड्रोफोबिक लिगामेंट्स की सीमित घुलनशीलता और बला जी 1 बाध्यकारी गुहा की दुर्गम प्रकृति दोनों को दूर करने की क्षमता पर निर्भर करती है। यह प्रक्रिया संवेदीकरण और आणविक तंत्र पर लिपिड लिगामेंट्स के प्रभाव का आकलन करने के लिए प्रतिरक्षा अध्ययनों, जैसे टी-सेल प्रसार परख के लिए आधार देती है जिसके माध्यम से यह होता है। आगे जैव भौतिक परख के साथ इस प्रक्रिया युग्मन, हमने दिखाया है कि हाइड्रोफोबिक ligands के बाध्यकारी बीएलए जी 1 स्थिरता को बढ़ाता है, epitope पीढ़ी और एलर्जी के लिए संभावित बहाव निहितार्थ के साथ ।

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Isolation of Intermediate Filament Proteins from Multiple Mouse Tissues to Study Aging-associated Post-translational Modifications

इंटरमीडिएट फिलामेंट प्रोटीन का मल्टीपल माऊस ट्यूस्यूज से अलगाव, एजिंग से जुड़े पोस्ट-ट्रांसजेशनल संशोधनों का अध्ययन

Intermediate filaments (IFs), together with actin filaments and microtubules, form the cytoskeleton &#8211; a critical structural element of every cell. ...

Optimized Protocol for the Extraction of Proteins from the Human Mitral Valve

मानव मैट्रल वाल्व से प्रोटीन के निष्कर्षण के लिए अनुकूलित प्रोटोकॉल

Analysis of the cellular proteome can help to elucidate the molecular mechanisms underlying diseases due to the development of technologies that permit ...

A Simple Fractionated Extraction Method for the Comprehensive Analysis of Metabolites, Lipids, and Proteins from a Single Sample

एक नमूना से मेटाबोलाइट्स, लिपिड्स और प्रोटीन्स के व्यापक विश्लेषण के लिए एक सरल भिन्नात्मक निष्कर्षण विधि

Understanding of complex biological systems requires the measurement, analysis and integration of multiple compound classes of the living cell, usually ...

Measuring Biomolecular DSC Profiles with Thermolabile Ligands to Rapidly Characterize Folding and Binding Interactions

मापने Thermolabile लाइगैंडों के साथ आणविक डीएससी प्रोफाइल तेजी से तह और बाध्यकारी बातचीत की विशेषता के लिए

Differential scanning calorimetry (DSC) is a powerful technique for quantifying thermodynamic parameters governing biomolecular folding and binding ...

Utilizing a Comprehensive Immunoprecipitation Enrichment System to Identify an Endogenous Post-translational Modification Profile for Target Proteins

एक व्यापक Immunoprecipitation संवर्धन प्रणाली का उपयोग करने के लिए एक अंतर्जात पद-अनुवाद लक्ष्य प्रोटीन के लिए संशोधन प्रोफ़ाइल की पहचान

It is now well-appreciated that post-translational modifications (PTMs) play an integral role in regulating a protein&#39;s structure and function, which ...

Isolation of Glomeruli and In Vivo Labeling of Glomerular Cell Surface Proteins

Isolation of Glomeruli and In Vivo Labeling of Glomerular Cell Surface Proteins

अलगाव की Glomeruli और Vivo में Glomerular सेल सतह प्रोटीन की लेबलिंग

Proteinuria results from the disruption of the glomerular filter that is composed of the fenestrated endothelium, glomerular basement membrane, and ...

Looking Outwards: Isolation of Cyanobacterial Released Carbohydrate Polymers and Proteins

बाहर की ओर देख रहे हैं: Cyanobactrial जारी कार्बोहाइड्रेट पॉलिमर और प्रोटीन के अलगाव

Cyanobacteria can actively secrete a wide range of biomolecules into the extracellular environment, such as heteropolysaccharides and proteins. The ...

Transverse Sectioning of Mature Rice (Oryza sativa L.) Kernels for Scanning Electron Microscopy Imaging Using Pipette Tips as Immobilization Support

Transverse Sectioning of Mature Rice Oryza sativa L. Kernels for Scanning Electron Microscopy Imaging Using Pipette Tips as Immobilization Support

परिपक्व चावल के अनुप्रस्थ विभाजन(Oryza sativa एल.) स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी इमेजिंग के लिए कर्नेल्स स्थिरीकरण समर्थन के रूप में पिपेट युक्तियाँ का उपयोग कर

Starch granules (SGs) exhibit different morphologies depending on the plant species, especially in the endosperm of the Poaceae family. Endosperm ...

Imaging of Podocytic Proteins Nephrin, Actin, and Podocin with Expansion Microscopy

विस्तार माइक्रोस्कोपी के साथ पोडोसाइटिक प्रोटीन नेफ्रिन, ऐक्टिन और पोडोसिन की इमेजिंग

Disruption of the glomerular filter composed of the glomerular endothelium, glomerular basement membrane and podocytes, results in albuminuria. Podocyte ...

Identifying the Binding Proteins of Small Ligands with the Differential Radial Capillary Action of Ligand Assay (DRaCALA)

Identifying the Binding Proteins of Small Ligands with the Differential Radial Capillary Action of Ligand Assay DRaCALA

लिगांड परख (DRaCALA) के अंतर रेडियल केशिलरी एक्शन के साथ छोटे लिगांड के बाध्यकारी प्रोटीन की पहचान करना

The past decade has seen tremendous progress in the understanding of small signaling molecules in bacterial physiology. In particular, the target proteins ...