Name: rapid determination of antibody-antigen affinity by mass photometry
Uploaded: 2021-02-08T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Rapid Determination of Antibody-Antigen Affinity by Mass Photometry at JoVE.com

Мы благодарим Кейра Ноймана за его критическое прочтение рукописи. Эта работа была поддержана внутримунной программой NHLBI, NIH.

1. Подготовь камеры потока
<ol><li>Очистите стеклянные крышки<ol>
<li>Используя мыть бутылки с дистиллированной водой, этанолом и изопропанолом, промыть 24 мм х 50 мм крышки в следующем порядке: вода, этанол, вода, изопропанол, вода. Высушите крышки потоком чистого азота. Важно, чтобы промыть кры?...

<ol>
	<li>Francis, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+phase+I+trial+of+antibody+directed+enzyme+prodrug+therapy+(ADEPT)+in+patients+with+advanced+colorectal+carcinoma+or+other+CEA+producing+tumours.">A phase I trial of antibody directed enzyme prodrug therapy (ADEPT) in patients with advanced colorectal carcinoma or other CEA producing tumours.</a> British Journal of Cancer. 87 (6), 600-607 (2002).</li><li>van Dyck, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-Amyloid-beta+Monoclonal+Antibodies+for+Alzheimer's+Disease:+Pitfalls+and+Promise.">Anti-Amyloid-beta Monoclonal Antibodies for Alzheimer's Disease: Pitfalls and Promise.</a> Biological Psychiatry. 83 (4), 311-319 (2018).</li><li>Vennepureddy, A., Singh, P., Rastogi, R., Atallah, J. P., Terjanian, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+ramucirumab+in+the+treatment+of+cancer+-+A+review+of+literature.">Evolution of ramucirumab in the treatment of cancer - A review of literature.</a> Journal of Oncology Pharmacy Practice. 23 (7), 525-539 (2017).</li><li>Waldmann, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunotherapy:+past,+present+and+future.">Immunotherapy: past, present and future.</a> Nature Medicine. 9 (3), 269-277 (2003).</li><li>Huang, B., Bates, M., Zhuang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Super-resolution+fluorescence+microscopy.">Super-resolution fluorescence microscopy.</a> Annual Review of Biochemistry. 78, 993-1016 (2009).</li><li>Rosenberg, M. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Protein Analysis and Purification. , (2005).</li><li>Picot, J., Guerin, C. L., Le Van Kim, C., Boulanger, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometry:+Retrospective,+fundamentals+and+recent+instrumentation.">Flow cytometry: Retrospective, fundamentals and recent instrumentation.</a> Cytotechnology. 64 (2), 109-130 (2012).</li><li>Khan, S. H., Farkas, K., Kumar, R., Ling, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+versatile+method+to+measure+the+binding+to+basic+proteins+by+surface+plasmon+resonance.">A versatile method to measure the binding to basic proteins by surface plasmon resonance.</a> Analytical Biochemistry. 421 (2), 385-390 (2012).</li><li>Lofgren, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparing+ELISA+and+surface+plasmon+resonance+for+assessing+clinical+immunogenicity+of+panitumumab.">Comparing ELISA and surface plasmon resonance for assessing clinical immunogenicity of panitumumab.</a> The Journal of Immunology. 178 (11), 7467-7472 (2007).</li><li>Young, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+mass+imaging+of+single+biological+macromolecules.">Quantitative mass imaging of single biological macromolecules.</a> Science. 360 (6387), 423-427 (2018).</li><li>Wu, D., Piszczek, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+the+affinity+of+protein-protein+interactions+on+a+single-molecule+level+by+mass+photometry.">Measuring the affinity of protein-protein interactions on a single-molecule level by mass photometry.</a> Analytical Biochemistry. 592, 113575 (2020).</li><li>Cole, D., Young, G., Weigel, A., Sebesta, A., Kukura, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+single-molecule+imaging+with+numerical-aperture-shaped+interferometric+scattering+microscopy.">Label-free single-molecule imaging with numerical-aperture-shaped interferometric scattering microscopy.</a> ACS Photonics. 4 (2), 211-216 (2017).</li><li>Soltermann, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+protein-protein+interactions+by+molecular+counting+with+mass+photometry.">Quantifying protein-protein interactions by molecular counting with mass photometry.</a> Angewandte Chemie International Edition in English. 59 (27), 10774-10779 (2020).</li><li>Kemmer, G., Keller, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonlinear+least-squares+data+fitting+in+Excel+spreadsheets.">Nonlinear least-squares data fitting in Excel spreadsheets.</a> Nature Protocols. 5 (2), 267-281 (2010).</li></ol>

Протокол на основе массовой фотометрии, изложенный здесь, обеспечивает быстрый и точный метод измерения антиген-антител, связывающих сходства. Анализ MP использует очень небольшое количество материала, и дополнительная информация, включая стоихиометрию, олигомеризацию и чистоту, може...

Антитела стали повсеместными инструментами молекулярной биологии и широко используются как в медицинских, так и в научно-исследовательских приложениях. В медицине, они имеют решающее значение в диагностике, но их терапевтическое применение также расширяется и новые антитела на основетерапии постоянно разрабатываются 1,2,3,4. Научное применение антител включает в себя множество незаменимых лабораторных методов, таких как иммунофлуоресценция5,иммунопреципиентация 6,цитометрия потока 7,ELISA и западное blotting. Для каждого из этих применений, получение точных измерений связывающих свойств антитела, включая связывающее сродство и специфичность, имеет решающее значение.
С тех пор как в 1990 году был введен первый коммерческий прибор для производства поверхностных плазмоновых резонансов (SPR), оптические биосенсоры стали «золотым стандартом» характеристики антител, но другие методы, включая ELISA, также регулярно используются дляизмерения сродства антител 8,9. Эти методы обычно требуют иммобилизации или маркировки анализируемых молекул, что потенциально может повлиять на взаимодействие интересов. Они также относительно медленные, включающие несколько этапов анализа, прежде чем результаты могут быть собраны для анализа данных. Недавно разработанный одномекулярный метод, массовая фотометрия (MP), обнаруживает молекулы непосредственно в растворе, когда они приземляются на поверхность микроскопа coverslip10,11. Световое рассеяние на основе оптического обнаружения, которое использует MP, не требует маркировки или модификации белка. Индивидуальные молекулы белка регистрируются интерферометрическим рассеянным микроскопом как темные пятна, появляющиесяна изображении (рисунок 1D),и несколько тысяч молекул могут быть обнаружены в течение одной минуты полученияданных 12. Сигнал, генерируемый каждой отдельной частицей, измеряется количественно, и рассчитывается его контрастное значение (относительная темнота). Значения интерферометрического контраста пропорциональны молекулярным массам белков, что позволяет идентифицировать связанные и свободные виды в смеси антиген-антител. В то же время, подсчитывая молекулярные посадочные явления, депутат напрямую измеряет популяции видов. Это дает методам, основанным на MP, уникальную возможность независимой количественной оценки сродства нескольких связывающих сайтов.
Связывание молекул антигена(Ag) с двумя связывающими участками нетронутого антитела(Ab) может быть описано как: <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/61784/61784equ01v2.jpg"> с константами равновесной ассоциации Ka1 и Ka2, определяемыми как: <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/61784/61784equ02v5.jpg"> где ci и fя представляю концентрацию и фракцию компонента i,соответственно. Общая концентрация антигена (cAg)tot может быть выражена как: <img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/61784/61784equ03v3.jpg">
Так как общие концентрации антитела (cAb )totи антигена (cAg)tot известны, это уравнение может быть использовано непосредственно для непосредственного времени подходят экспериментальные компонентные фракции, полученные из измерений MP и вычислить константы равновесной ассоциации Ka1 и Ka2 (см. Дополнительную информацию).
Данные MP также могут быть использованы для оценки кооператорности между двумя сайтами связывания антител11. Для двух паратопов антител с идентичными микроскопическими связывающими константами, статистические факторы, описывающие процесс популяции Аб Аг и Аб Ag2 комплексы диктуют, что очевидное макроскопическое равновесие константы Ka1 и Ka2 не будет численно равным, и K a1 и 4Ka2. Таким образом, экспериментальные значения Ka1 lt; 4Ka2 указывают на положительную кооператорность между двумя сайтами связывания антител. Аналогичным образом, Ka1 и 4Ka2 указывает на отрицательную кооператорность.
Измерения MP антиген-антитела связывая сродства быстры и требуют малого количества материала. Массовые распределения MP, используемые для равновесных постоянных расчетов, предоставляют дополнительную информацию о свойствах выборки и позволяют оценить чистоту выборки, олигомеризацию и агрегацию в одном эксперименте. Тот же метод может быть использован для измерения высокой сродства белково-белковой привязки, и MP особенно полезен для исследований многовалентных белковых взаимодействий. Мульти-белковые комплексы обычно имеют большие молекулярные массы, оптимальные для обнаружения MP, и одномекулярные данные могут быть использованы для измерения стоихиометрии и расчета сродства нескольких связывающих участков одновременно. Эта информация, как правило, трудно получить с помощью навалочных методов.
Без изменений текущий протокол подходит для измерений относительно высокого сродства, субмимолярных взаимодействий с антигенами молекулярной массы 20 кДа и больше. Для достижения оптимальных результатов запасы белка должны быть высокой чистоты, но особых требований к буферу не существует. С помощью MP, связывание антиген-антител может быть оценено менее чем за пять минут. Сбор и анализ данных, необходимых для точных расчетов Kd, может быть выполнен в течение 30 минут.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>AcquireMP</td>
			<td>Refeyn</td>
			<td></td>
			<td>MP data collection software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human thrombin</td>
			<td>Haematologic Technologies</td>
			<td>AHT-5020</td>
			<td>RRID: AB_2864302</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton-tipped applicators</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>CTA10</td>
			<td>cotton optical swabs for lens cleaning</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips 24x24 mm</td>
			<td>Globe Scientific</td>
			<td>1405-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips 24x50 mm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-544-EP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DiscoverMP</td>
			<td>Refeyn</td>
			<td></td>
			<td>MP data processing software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>78080-CF</td>
			<td>soft-tipped forceps for coverslips handling</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human &#945;-thrombin</td>
			<td>Haematologic Technologies</td>
			<td>HCT-0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immersion oil</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>MOIL-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>36644</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsoft Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td>spreadsheet</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OneMP</td>
			<td>Refeyn</td>
			<td></td>
			<td>Mass Photometry instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Origin</td>
			<td>OriginLab</td>
			<td></td>
			<td>scientific graphing software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Corning</td>
			<td>46-013-CM</td>
			<td>10x stock</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe filter</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>SLGSR33SS</td>
			<td>buffer and sample filtering</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

rapid determination of antibody-antigen affinity by mass photometry

Измерения специфичности и сродства взаимодействий антиген-антител критически важны для медицинского и исследовательского применения. В этом протоколе мы описываем внедрение новой одномекулярной техники, массовой фотометрии (MP), для этой цели. MP — это метод без этикеток и иммобилизации, который обнаруживает и количественно определяет молекулярные массы и популяции антител и антиген-антител на одном молекулярном уровне. Депутат анализирует образец антиген-антитела в течение нескольких минут, что позволяет точно определить связывающее сродство и одновременно предоставлять информацию о стоихиометрии и олигомерном состоянии белков. Это простой и простой метод, который требует только пикомол количества белка и не дорогие расходные расходные материалов. Та же процедура может быть использована для изучения белково-белкового связывания белков с молекулярной массой более 50 кДа. Для многовалентных белковых взаимодействий, сродства нескольких связывающих участков могут быть получены в одном измерении. Однако одномекулярный режим измерения и отсутствие маркировки накладывает некоторые экспериментальные ограничения. Этот метод дает наилучшие результаты при применении к измерениям субмимолярного взаимодействия сродства, антигенов с молекулярной массой 20 кДа или больше, и относительно чистых образцов белка. Мы также описываем процедуру выполнения необходимых этапов установки и расчета с использованием базового программного обеспечения для анализа данных.

Ранее мы исследовали взаимодействие человека α-тромбина (HT) и мыши моноклональных антител к тромбину человека (AHT) с использованием MP на основеанализа 11. Поскольку молекулярная масса HT (37 kDa) ниже предела обнаружения 40 кДа, максимальная концентрация образца может превышать о...

Watch this Scientific Journal Video about Rapid Determination of Antibody-Antigen Affinity by Mass Photometry at JoVE.com

Rapid Determination of Antibody-Antigen Affinity by Mass Photometry

Мы описываем одномекулярный подход к измерениям сродства антиген-антител с использованием массовой фотометрии (MP). Протокол на основе MP быстр, точен, использует очень небольшое количество материала и не требует модификации белка.

Быстрое определение антител-антигена Аффинити по массовой фотометрии

Measurements of the specificity and affinity of antigen-antibody interactions are critically important for medical and research applications. In this ...

Антитела регулярно используются в лабораторных методах, и их терапевтическое и диагностическое применение быстро расширяется. Быстрая и точная характеристика связывания антиген-антител критически важна для этих применений. Массовая фотометрия быстро измеряет связывающие сходства, используя крайне небольшое количество материала.Маркировка или иммобилизация не требуются, и информация о олигомеризации и чистоте белка может быть получена из того же эксперимента. Этот протокол может быть использован не только для изучения антител, но и для измерения сильных белково-белковых связей для белков с молекулярной массой более 50 килодальтонов. Начните с использования мягкого наконечника типсов и мыть бутылки последовательно промыть 24 на 50 миллиметров coverslips сверху вниз с дистиллированной водой, этанолом, дистиллированной водой, изопропанол, и дистиллированной воды.После последней стирки высушите крышки потоком чистого азота в том же направлении, чтобы избежать переноса загрязнения из типсов. Промыть 24 на 24 миллиметра крышки с дистиллированной водой и этанолом, как попродемонстрировано, а затем сушки с потоком чистого азота. После высыхания поместите 24 на 24 миллиметра крышку на кусок алюминиевой фольги и поместите полоски односторонней ленты на крышку.Затем вырежьте 24 на 24 миллиметра крышки из фольги и осторожно нажмите фольгу на рабочую сторону 24 на 50 миллиметров крышки. Чтобы подготовить образцы антител-антигенов для измерений сродства, фильтруем по крайней мере два миллилитров PBS через фильтр шприца 0,22 микрона для удаления частиц и агрегатов пыли, а также центрифугируют запасы антител и антигенов, представляющие интерес. Измерьте 280 нанометровую уф-абсорбцию запасов антител и антигенов, чтобы определить их фактическую концентрацию, и подготовьте серию антител-антигенных смесей в соответствующем диапазоне концентраций антигена в окончательном объеме 50 микролитров на образец.Затем инкубировать антиген-антитела смеси в течение примерно 10 минут при комнатной температуре, чтобы обязательная реакция достичь химического равновесия. Для оценки сродства антител-антигенов по массовой фотометрии нанесите каплю масла погружения микроскопа на цель прибора и поместите камеру потока на стадию микроскопа. Добавьте 10 микролитров фильтрованного PBS к одному концу канала камеры потока.Буфер войдет в канал с помощью капиллярного действия. Во вкладке управления фокусом программного обеспечения для сбора данных используйте грубые кнопки вверх и вниз, чтобы внести первоначальные коррективы и щелкнуть резкостью, чтобы просмотреть считывание сигнала резкости. Используйте штраф вверх и вниз кнопки регулировки, чтобы максимизировать значение резкости и нажмите кнопку фокусировки и блокировки фокус, чтобы активировать функцию отслеживания фокусировки.Изображение чистого слайда должно иметь сигнальное значение, равное или ниже 0,05%Load 20 микролитров первого образца антитела-антигена, как попродемонстрировано, смая жидкость с другого конца небольшим куском бумаги. Сразу после загрузки нажмите запись, чтобы получить соответствующее количество кадров, эквивалентное 100 секунд данных. В конце периода сбора данных введите имя файла для данных и нажмите OK, а затем образец, чтобы сохранить файл.Чтобы проанализировать данные массовой фотометрии, откройте файл, представляющий интерес, и нажмите анализ. Нажмите нагрузку, чтобы загрузить функцию калибровки и нажмите файл и сохранить результаты, чтобы сохранить проанализированные данные. Чтобы получить относительную концентрацию каждого вида в образце, откройте событияfitted.csv файл, скопировать данные в колонке M в соответствующее программное обеспечение построения и анализа, и использовать функцию гистограммы статистики сюжета для построения молекулярной массы распределения. Дважды нажмите на гистограмму, чтобы открыть окно свойств участка, отключить автоматическое биннинг и выбрать размер ячеек 2,5 килодалтонов. Чтобы создать бен-центры и рассчитывает данные, нажмите применить и идти.Чтобы соответствовать гистограмме с функциями Gaussian, выберите бен-центры и считает столбцы и нажмите на пики анализа и базовые несколько пиковых функций меню. Дважды щелкните, чтобы указать приблизительные пиковые позиции на участке распределения и нажмите кнопку открытой NL fit. Проверьте фиксированные флажки для пиковых центров XC и установите их значения на ожидаемые молекулярные массы свободных антител и одиночные и двойные антиген-антитела комплексов.Проверьте опцию share для параметров ширины и нажмите fit. Установленные пиковые значения высоты гауссийских компонентов отражают относительную концентрацию каждого вида в образце. Затем используйте уравнение для расчета доли концентрации каждого вида из пиковых значений высоты.Чтобы вычислить равновесные константы с помощью программы электронной таблицы, откройте диссоциациюконстанткаляцию. xlsx лист. В этом листе желтые выделенные значения ячеев в строках от 1 до 10 могут быть изменены для выполнения равновесных постоянных вычислений.Введите предполагаемые диссоциации постоянных значений в наномолярных единиц в клетки B1 и B2. Если предполагаемые константы диссоциации неизвестны, оставьте значения по умолчанию в ячейках B1 и B2 без изменений. Введите общие антитела и общие концентрации антигена в наномолярных единицах в клетки D2 и E2 и введите рассчитанные значения фракций для каждого вида в клетки F2, G2 и H2. При проведении глобального анализа титровали добавьте соответствующие значения фракций данных в строки от 2 до 10. В окне параметров решатера выберите ячейку B15 для установленного объективного ящика и ячейки B1 к B2 для изменя переменную ячейку коробки.Выберите кнопку мин для опции и проверить сделать неограниченные переменные не-отрицательный флажок, а затем выбрать GRG нелинейный в качестве метода решения и нажмите решить. Наилучшие значения диссоциации будут показаны в клетках B1 и B2. А окончательная сумма ошибок в квадрате будет показана в ячейке B15. В этом репрезентативном эксперименте, серия титрование с антителами анти-человеческого тромбина при фиксированной концентрации 25 наномолярных и 0, 7.5, 15, 30, 60 и 120 наномолярных человеческих концентраций альфа-тромбина человека были выполнены для получения молекулярной массы распределения антиген-антитела смесей и антител только образец.Наилучшие пиковые параметры высоты гауссийских компонентов были нормализованы для получения фракций концентрации видов. Значения фракции концентрации после этого были приспособлены глобально для того чтобы получить антиген-антитела связывая сходства. Экспериментальные фракции концентрации и глобальные результаты подходят для свободного антитела, одного антиген-антитела комплекса, и двойной антигенный комплекс может быть построен.Чтобы получить точные значения KD, концентрации белка должны быть тщательно отобраны, чтобы заполнить все виды реакции. Мы рекомендуем подготовить серию титрова с использованием ряда концентраций антигенов. После установки данных метод проекции ошибки может быть использован для получения подходящей ошибки, но лучше повторить эксперимент и вычислить стандартные отклонения средних связывающих значений сродства.

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Biochemistry

Unit 1

Energy and Catalysis

SCIENTISTS IN ACTION

Species Determination and Quantitation in Mixtures Using MRM Mass Spectrometry of Peptides Applied to Meat Authentication

Определение и виды Количественное в смесях с помощью масс-спектрометрии MRM пептидов прикладной к мясу аутентификации

We describe a simple protocol for identifying and quantifying the two components in binary mixtures of species possessing one or more similar proteins. ...

A Rapid Laser Probing Method Facilitates the Non-invasive and Contact-free Determination of Leaf Thermal Properties

Быстрой лазерный Зондирование Метод Облегчает неинвазивным и бесконтактный Определение Листа теплофизических свойств

Plants can produce valuable substances such as secondary metabolites and recombinant proteins. The purification of the latter from plant biomass can be ...

Resolving Affinity Purified Protein Complexes by Blue Native PAGE and Protein Correlation Profiling

Разрешающая Affinity Очищенная Белковые комплексы от Синей Native ПААГ и белка корреляции профилирование

Most proteins act in association with others; hence, it is crucial to characterize these functional units in order to fully understand biological ...

Determination of High-affinity Antibody-antigen Binding Kinetics Using Four Biosensor Platforms

Определение высокого сродства антитело-антиген-связывающий Kinetics с использованием четырех биосенсор платформы

Label-free optical biosensors are powerful tools in drug discovery for the characterization of biomolecular interactions. In this study, we describe the ...

The Determination of Protease Specificity in Mouse Tissue Extracts by MALDI-TOF Mass Spectrometry: Manipulating PH to Cause Specificity Changes

Определение специфики протеазы в ткани мыши извлекает, масс-спектрометрия MALDI-TOF: манипулирования PH вызвать специфики изменения

Proteases have several biological functions, including protein activation/inactivation and food digestion. Identifying protease specificity is important ...

Leaf Spray Mass Spectrometry: A Rapid Ambient Ionization Technique to Directly Assess Metabolites from Plant Tissues

Масс-спектрометрия спрей лист: Быстрое окружающего ионизации техника непосредственно оценить метаболитов из растительных тканей

Plants produce thousands of small molecules that are diverse in their chemical properties. Mass spectrometry (MS) is a powerful technique for analyzing ...

Detection of Protein Ubiquitination Sites by Peptide Enrichment and Mass Spectrometry

Обнаружение мест убиквитирования белка путем обогащения пептида и масс-спектрометрии

The posttranslational modification of proteins by the small protein ubiquitin is involved in many cellular events. After tryptic digestion of ...

Nitropeptide Profiling and Identification Illustrated by Angiotensin II

НитропептидНое профилирование и идентификация Иллюстрировано Ангиотензином II

Protein nitration is one of the most important post-translational modifications (PTM) on tyrosine residues and it can be induced by chemical actions of ...

Identification of Inositol Phosphate or Phosphoinositide Interacting Proteins by Affinity Chromatography Coupled to Western Blot or Mass Spectrometry

Идентификация фосфата инозитола или фосфонинозидных взаимодействующих белков по хроматографии Affinity в сочетании с Западной погреловой или масс-спектрометрией

Inositol phosphates and phosphoinositides regulate several cellular processes in eukaryotes, including gene expression, vesicle trafficking, signal ...

Activated Cross-linked Agarose for the Rapid Development of Affinity Chromatography Resins - Antibody Capture as a Case Study

Активированный перекрестный связаны Агароуз для быстрого развития аффинити Хроматография resins - Захват антител как пример

The purification of monoclonal antibodies (mAbs) is commonly achieved by Protein A affinity chromatography, which can account for up to 25% of the overall ...