Name: 3d culturing of organoids from the intestinal villi epithelium undergoing dedifferentiation
Uploaded: 2021-04-01T13:00:00
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Diese Publikation wurde durch die Award Number K22 CA218462-03 des NIH National Cancer Institute unterstützt. Die HEK293-T-Zellen, die R-Spondin1 exprimieren, waren ein großzügiges Geschenk von Dr. Michael P. Verzi.

Alle durchgeführten Mausexperimente, einschließlich der Verwendung von Tamoxifen und der Euthanasie durch Zervixluxation, hatten die Genehmigung des Institutional Animal Care and Use Committee am Stevens Institute of Echnology.
1. Mäuse
HINWEIS: Die Generation von Smad4f/f; Catnblox(ex3)/+; Villin-CreERT2 Mäuse wurden zuvor beschrieben3. Erwachsene weibliche Mäuse im Alter von ...

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A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intestinal+master+transcription+factor+CDX2+controls+chromatin+access+for+partner+transcription+factor+binding.">Intestinal master transcription factor CDX2 controls chromatin access for partner transcription factor binding.</a> Molecular and Cellular Biology. 33 (2), 281-292 (2013).</li><li>Grainger, S., Hryniuk, A., Lohnes, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cdx1+and+Cdx2+exhibit+transcriptional+specificity+in+the+intestine.">Cdx1 and Cdx2 exhibit transcriptional specificity in the intestine.</a> PLoS One. 8 (1), 54757 (2013).</li><li>Stringer, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cdx2+determines+the+fate+of+postnatal+intestinal+endoderm.">Cdx2 determines the fate of postnatal intestinal endoderm.</a> Development. 139 (3), 465-474 (2012).</li></ol>

Diese Methode kann die Selbsterneuerungsfähigkeit von dedifferenzierendem Zottenepithel bestätigen, das Stammzellmarker in vivo erwirbt. Das normale Darmepithel kann Organoide aus der Krypta, aber nicht aus dem Zottenkompartiment hervorbringen, wenn es in 3D kultiviert wird, da Stammzellen in den Krypten1vorliegen. So bestätigt die Organoidbildung aus dem in 3D-Kulturen kultivierten dedifferenzierten Zottenepithel die Stammzellbildung aus der Zellschicksalsumkehr. Berichte über die Um...

Die Darmkrypten, aber keine Zotten, bilden Organoide, wenn sie in Matrigel oder BME-R1-Matrix kultiviert werden. Diese Organoide sind selbstorganisierende Strukturen, die oft als "Mini-Darm" bezeichnet werden, da die verschiedenen differenzierten Linien, Vorläufer- und Stammzellen im Darmepithel in vivovorhanden sind. Das Potenzial, Organoide aus Krypten zu bilden, wird auf das Vorhandensein von Stammzellenzurückgeführt 1. Die Darmzotten hingegen bestehen nur aus differenzierten Zellen und können daher keine Organoide bilden. Mutationen 2 oderZustände, die eine Dedifferenzierung des Zottenepithels ermöglichen, können jedoch zu Stammzellen in den Zotten2,3führen. Diese Schicksalsänderung, die zu einer Stängelbildung im Zottenepithel führt, kann durch Beschichtung des dedifferenzierenden Zottenepithels in 3D-Matrix bestätigt werden, um ihr organoidbildendes Potenzial als Indikator für die De-novo-Stemness im Zottenepithel zu bestimmen. Daher besteht der kritische Aspekt dieses Verfahrens darin, sicherzustellen, dass keine Kryptenkontamination vorliegt.
Die Smad4KO:β-CateninGOF-bedingte Mutation verursacht eine Dedifferenzierung im Darmepithel, die durch die Expression von Proliferations- und Stammzellmarkern in den Zotten und schließlich die Bildung kryptenartiger Strukturen in den als ektopische Krypten bezeichneten Zotten gekennzeichnet ist Das Vorhandensein von Stammzellen, diese dedifferenzierten Zotten wurde durch die Expression von Stammzellmarkern in den ektopischen Krypten (in vivo) und die Fähigkeit der mutierten Zotten, Organoide zu bilden, bestimmt. en plattiert Matrigel3. Das unten erwähnte Verfahren erläutert die Methodik, die verwendet wird, um die Stammhaftigkeit des dedifferenzierenden Darmepithels in den Smad4KO:β-CateninGOF-mutierten Mäusen zu bestätigen. Ein Schlüsselmerkmal dieser Methodik zur Isolierung von Zotten war die Verwendung des Abkratzens des Darmlumens im Gegensatz zur EDTA-Chelatbildungsmethode4. Anders als bei der EDTA-Chelat-Methode behält die Zottenisolierung durch Abkratzen den Großteil des darunter liegenden Mesenchyms bei und ermöglicht es, den Abkratzdruck so einzustellen, dass Zotten ohne angebundene Krypten ergeben. Der Abkratzdruck ist für den Bediener subjektiv, daher muss der optimale Druck, Zotten ohne angebundene Krypten zu liefern, vom Bediener empirisch bestimmt werden. Der kritische Aspekt dieses Verfahrens besteht darin, die Abwesenheit von Kryptenkontamination durch mikroskopische Untersuchung der Zotten sowohl vor als auch nach der Beschichtung in der BME-R1-Matrix sicherzustellen.
Darmzotten werden mit Glasobjektträgern vom Darmlumen abgekratzt und in einen 70 μm-Filter gegeben und mit PBS gewaschen, um lose Zellen oder Krypten, falls vorhanden, loszuwerden, bevor sie in die BME-R1-Matrix einplattiert werden. Die Methode betont die folgenden Kriterien, um eine Kryptenkontamination zu vermeiden: a) Eingrenzen der Zottenernte auf die proximale Hälfte des Zwölffingerdarms, wo die Zotten am längsten sind, b) Minimierung der Anzahl der Zotten-liefernden Kratzer, c) Waschen des Filters, der die Zotten enthält, durch eine Reihe von PBS in einer Sechs-Brunnen-Schüssel und d) Bestätigung des Fehlens einer Kryptakontamination durch mikroskopische Untersuchung vor und nach dem Plattieren in BME-R1-Matrix. Die Zottenisolierung durch Abkratzen und nicht durch EDTA-Chelatbildung verhindert den vollständigen Verlust des darunter liegenden Mesenchyms, das bei Bedarf die Nischensignale5,6,7,8für die Organoidinitiierung aus dem Zottenepithel liefern kann.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Advanced DMEM F-12 media</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12634010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3,3-diaminobenzidine</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>SK-4105</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 well U-bottom plate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>FB012932</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ABC kit</td>
			<td>Vector Labs</td>
			<td>&#160;PK4001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Angled scissor</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11-999</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Animal-Free Recombinant Human EGF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>AF-100-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B-27 Supplement (50X), minus vitamin A</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12587010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA) Protease-free Powder</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP9703100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD44 antibody</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>1030001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cdx2 antibody</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>12306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corn oil</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8267-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning 70-micron cell strainer</td>
			<td>Life Sciences</td>
			<td>431751</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cultrex Reduced Growth Factor Basement Membrane Extract, Type R1</td>
			<td>R&#38;D</td>
			<td>3433-005-R1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection scissors</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22-079-747</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>17-456-209</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutamax (100X)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>35050-061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEK 293-T cells expressing RSPO-1</td>
			<td>Gift from Dr. Michael Verzi</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES (1M)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15630-080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Histogel</td>
			<td>Thermoscientific</td>
			<td>HG-4000-012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mesh filter</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>07-201-431</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micrscope glass slide</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89218-844</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-2 Supplement (100X)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17502048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-acetyl cysteine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9165</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>p200 Blunt tips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>46620-642</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140-122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primocin (50mg/mL)</td>
			<td>Invivogen</td>
			<td>ant-pm-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quality Biological Inc PBS (10X)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-146-770</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Murine Noggin</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>250-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Signal diluent</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>8112L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tamoxifen</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T5648-1G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well tissue culture plate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50-146-770</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

3d culturing of organoids from the intestinal villi epithelium undergoing dedifferentiation

Die Klonogenität von Organoiden aus dem Darmepithel wird auf das Vorhandensein von Stammzellen darin zurückgeführt. Das Dünndarmepithel der Maus ist in Krypten und Zotten unterteilt: Die Stamm- und Proliferationszellen sind auf die Krypten beschränkt, während das Zottenepithel nur differenzierte Zellen enthält. Daher können die normalen Darmkrypten, aber nicht die Zotten, in 3D-Kulturen organoide entstehen. Das hier beschriebene Verfahren ist nur auf Zottenepithel anwendbar, das einer Dedifferenzierung unterzogen wird, die zu Stielbildung führt. Die beschriebene Methode verwendet die Smad4-loss-of-function:β-catenin gain-of-function (Smad4 KO:β-cateninGOF)bedingte mutierte Maus. Die Mutation bewirkt, dass die Darmzotten dedifferenzieren und Stammzellen in den Zotten erzeugen. Darmzotten, die einer Dedifferenzierung unterzogen werden, werden mit Glasobjektträgern vom Darm abgekratzt, in ein 70 μm-Sieb gelegt und mehrmals gewaschen, um lose Zellen oder Krypten herauszufiltern, bevor sie in die BME-R1-Matrix einplattiert werden, um ihr organoidbildendes Potenzial zu bestimmen. Zwei Hauptkriterien wurden verwendet, um sicherzustellen, dass die resultierenden Organoide aus dem entdifferenzierenden Zottenkompartiment und nicht aus den Krypten entwickelt wurden: 1) mikroskopische Bewertung der isolierten Zotten, um sicherzustellen, dass keine angebundenen Krypten sowohl vor als auch nach der Beschichtung in der 3D-Matrix vorhanden sind, und 2) Überwachung des zeitliche Verlaufs der Organoidentwicklung aus den Zotten. Die organoide Initiation aus den Zotten erfolgt nur zwei bis fünf Tage nach dem Plattieren und erscheint unregelmäßig geformt, während die aus der Krypta abgeleiteten Organoide aus demselben Darmepithel innerhalb von sechzehn Stunden nach der Beschichtung sichtbar sind und kugelförmig erscheinen. Die Einschränkung der Methode besteht jedoch darin, dass die Anzahl der gebildeten Organoide und die Zeit, die für die Organoidinitiierung aus den Zotten benötigt wird, je nach Grad der Dedifferenzierung variieren. Abhängig von der Spezifität der Mutation oder der Beleidigung, die die Dedifferenzierung verursacht, muss daher das optimale Stadium, in dem Zotten entnommen werden können, um ihr organoidales Bildungspotenzial zu bestimmen, empirisch bestimmt werden.

Ausschlaggebend für den Erfolg des Verfahrens ist die Vermeidung von Kryptenkontaminationen. Die Organoidentwicklung aus den Zotten (und nicht aus kontaminierenden Krypten) wird durch die Bestätigung von vier Hauptkriterien sichergestellt: 1) Sicherstellung der Reinheit der geernteten Zotten durch mikroskopische Untersuchung vor und nach dem Plattieren der Zotten in BME-R1, 2) Beschichtung einer begrenzten Anzahl von Zotten pro Vertiefung, um die Visualisierung aller plattierten Zotten einzeln zu ermöglichen, 3) tägl...

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3D Culturing of Organoids from the Intestinal Villi Epithelium Undergoing Dedifferentiation

Das Verfahren beschreibt die Isolierung der Zotten aus dem Darmepithel der Maus, die einer Dedifferenzierung unterzogen werden, um ihr organoidbildendes Potenzial zu bestimmen.

3D-Kultivierung von Organoiden aus dem intestinalen Zottenepithel, das einer Dedifferenzierung unterzogen wird

Clonogenicity of organoids from the intestinal epithelium is attributed to the presence of stem cells therein. The mouse small intestinal epithelium is ...

Diese Methode kann die organoidbildende Fähigkeit des de-differenzierenden Zottenepithels bestätigen, das Stammzellmarker in vivo erwirbt. Die Entnahme von Zotten erfolgt durch Scraping und nicht durch die EDTA-Chelatbildungsmethode, die den vollständigen Verlust des darunter liegenden Mesenchyms verhindert, das die Nischensignale liefern kann, wenn dies für die Organoidinitiierung erforderlich ist. Diese Methode ist in Epithelgeweben anwendbar, in denen proliferative und differenzierte Kompartimente physikalisch abgegrenzt sind und die entdifferenzierenden Zellen Stammzellmarker in vivo exprimieren.Einige Faktoren in diesem Protokoll müssen empirisch bestimmt werden, einschließlich des optimalen Stadiums für die Ernte der Zotten und des optimalen Drucks für das Abkratzen der Zotten, was Zeit und Übung in Anspruch nimmt. Induktion des Smad4-Knockouts und des Beta-Catenin-Gewinns der Funktionsmutation bei mutierten Mäusen mit intraperitonealer Injektion von Tamoxifen und Maisöl an vier aufeinanderfolgenden Tagen. Nach dem Einschläfern der Maus den Bauch mit 70% Ethanol besprühen, um zu verhindern, dass Mausfell in die Peritonealhöhle gelangt.Öffnen Sie die Bauchhöhle mit einer Dissektionsschere, um den Darm freizulegen und den Darm mit Schere und Zette zu isolieren. Sezieren Sie die proximale Hälfte des Zwölffingerdarms und spülen Sie dann den Zwölffingerdarm mit fünf Millilitern eiskaltem PBS in einer 10-Milliliter-Spritze, um den Luminalgehalt zu klären. Öffnen Sie den Zwölffingerdarm längs mit einer abgewinkelten Schere und legen Sie den Zwölffingerdarm flach auf eine 15 Zentimeter große Petrischale auf Eis mit dem Lumen des Zwölffingerdarms dem Bediener zugewandt.Bevor Sie mit dem Schaben beginnen, legen Sie ein 70 Mikrometer großes Maschensieb in einen der Vertiefungen einer Sechs-Well-Gewebekulturplatte. Füllen Sie alle Brunnen mit vier Millilitern 1X PBS und legen Sie die Platte auf Eis. Kratzen Sie die Zotten mit zwei mikroskopisch kleinen Glasobjektträgern, von einem, um den Zwölffingerdarm festzuhalten und zum Abkratzen.Kratzen Sie die luminale Seite des Zwölffingerdarms oberflächlich zweimal, um den Schleim zu entfernen, ohne die Zotten zu entfernen, und kratzen Sie dann den Zwölffingerdarm zwei weitere Male, um die Zotten auf den Dias zu sammeln, ohne die Krypten zu binden. Verwenden Sie eine Ein-Milliliter-Transferpipette, die PBS enthält, um die Zotten in ein 70-Mikrometer-Maschensieb in der Sechs-Well-Schüssel zu übertragen. Sammle die Zotten nach jedem Kratzen.Um lose Krypten zu entfernen, waschen Sie die mit dem 70-Mikrometer-Sieb gesammelten Zotten, indem Sie das Sieb durch eine Reihe von Vertiefungen in der Sechs-Brunnen-Schüssel mit vier Millilitern eiskaltem PBS pro Brunnen übertragen. Übertragen Sie mit einer P1000-Pipette die Zottensuspension in etwa drei Millilitern PBS vom 70-Mikrometer-Sieb in ein neues 15-Milliliter-Rohr auf Eis. Verwenden Sie eine 0,1% BSA-beschichtete stumpfe P200-Pipettenspitze, um ein Volumen von 50 Mikrolitern der Zottenaufhängung auf einen Glasträger zu übertragen.Zählen Sie die Anzahl der Zotten im 50-Mikroliter-Tröpfchen unter 4-facher Vergrößerung, um die Konzentration von Zotten in der PBS-Suspension zu bestimmen und das Fehlen von angebundenen Krypten zu bestätigen. Um die Zotten zu plattieren, verwenden Sie eine 0,1% BSA-beschichtete P200-Pipettenspitze mit stumpfem Ende, um die Zotten in ein Mikrozentrifugenrohr zu übertragen, um eine Beschichtungsdichte von sechs Zotten pro Vertiefung in 12,5 Mikrolitern BME-R1-Matrix zu erreichen. Drehen Sie die Zotten zwei Minuten lang bei 200 mal G bei vier Grad Celsius herunter.Entfernen Sie den Überstand und wiederholen Sie die Zentrifugation, um alle PBS-Reste zu entfernen. In einer Laminar-Flow-Haube das Zottenpellet vorsichtig in der erforderlichen Menge an kaltem BME-R1 auf Eis auftauen. Mit einer P20-Pipette werden 12,5 Mikroliter der Zotten in BME-R1-Matrix pro Vertiefung einer 96-Well-U-Bodenplatte auf 37 Grad Celsius vorgewärmt.Inkubieren Sie die Platte in einem Gewebekultur-Inkubator bei 37 Grad Celsius für 15 Minuten, um die BME-R1-Matrix zu erstarren. Zu jeder Vertiefung fügen Sie 125 Mikroliter vorgewärmte ENR-Medien hinzu, die wie im Textmanuskript beschrieben ergänzt werden. Inkubieren Sie die plattierten Zotten in einem Gewebekultur-Inkubator bei 37 Grad Celsius mit 5% Kohlendioxid und wechseln Sie die Medien jeden zweiten Tag.Verwerfen Sie jeden Brunnen, in dem Organoide vor zwei Tagen erscheinen. Es gibt einen Unterschied im Aussehen der Organoide, die aus den Krypten hervorgehen, im Vergleich zum entdifferenzierten Zottenepithel aus demselben Mausdarm. Die kryptisch abgeleiteten Organoide erscheinen über Nacht als kugelförmige Strukturen mit klar definierten Grenzen.Untersucht wurde die Kinetik und das morphologische Erscheinungsbild der aus Zotten initiierten Organoide, die zunächst unregelmäßig geformt erscheinen und zwei bis fünf Tage dauern, bis sie unter dem Mikroskop zu sehen sind. Organoid-Initiation von zwei verschiedenen Zotten wird gezeigt. Die Zotten mit organoidbildenden Potentialen erscheinen dicht, möglicherweise aufgrund der Retention des darunter liegenden Mesenchyms.Organoide Initiation aus den Villen ist am zweiten Tag von einem der Zotten sichtbar. In den anderen Villen erscheint das Organoid am vierten Tag. Es ist wichtig, die richtigen Schritte zu unternehmen, um eine Kryptenkontamination zu vermeiden, wenn die Zotten geerntet und die resultierenden Organoide wachsen.Phänotypische Unterschiede zwischen den organoiden, die aus den Krypten und Zotten derselben Mutante hervorgingen, wurden nach diesem Verfahren beobachtet, so dass weitere Experimente durchgeführt werden konnten, um nach molekularen Unterschieden zwischen den beiden zu suchen. Dieses Protokoll könnte verwendet werden, um die Unterschiede zwischen Organoiden, die aus endogenen Krypten entstehen, und ektopischen Krypten, die sich aus der Dedifferenzierung ergeben, zu untersuchen, so dass die Auswirkungen der Dedifferenzierung angegangen werden könnten.

Research

JoVE Journal

Biology

A 3D System for Culturing Human Articular Chondrocytes in Synovial Fluid

Ein 3D-System für Züchtung menschlichen Chondrozyten in der Synovialflüssigkeit

Cartilage destruction is a central pathological feature of osteoarthritis, a leading cause of disability in the US. Cartilage in the adult does not ...

Forschung

Biologie

A Protocol for Lentiviral Transduction and Downstream Analysis of Intestinal Organoids

Ein Protokoll für Lentivirale Transduktion und Downstream-Analyse der Darm Organoide

Intestinal crypt-villus structures termed organoids, can be kept in sustained culture three dimensionally when supplemented with the appropriate growth ...

Primary Cell Cultures from the Mouse Retinal Pigment Epithelium

Primären Zellkulturen aus das retinale Pigmentepithel Maus

The retinal pigment epithelium (RPE) is a highly polarized multi-functional epithelium that is located between the neural retina and the choroid of the ...

Analyzing Oxidative Stress in Murine Intestinal Organoids using Reactive Oxygen Species-Sensitive Fluorogenic Probe

Analyse von oxidativem Stress in murinen Darmorganoiden mit reaktiver Sauerstoffspezies-sensitiver fluorogener Sonde

Reactive oxygen species (ROS) play essential roles in intestinal homeostasis. ROS are natural by-products of cell metabolism. They are produced in ...

A High-Throughput Platform for Culture and 3D Imaging of Organoids

Eine Hochdurchsatzplattform für Kultur und 3D-Bildgebung von Organoiden

The characterization of a large number of three-dimensional (3D) organotypic cultures (organoids) at different resolution scales is currently limited by ...

Establishing 3D Endometrial Organoids from the Mouse Uterus

Etablierung von 3D-Endometrium-Organoiden aus der Gebärmutter der Maus

Endometrial tissue lines the inner cavity of the uterus and is under the cyclical control of estrogen and progesterone. It is a tissue that is composed of ...

Culture of Piglet Intestinal 3D Organoids from Cryopreserved Epithelial Crypts and Establishment of Cell Monolayers

Kultivierung von Ferkel-Darm-3D-Organoiden aus kryokonservierten Epithelkrypten und Etablierung von Zellmonoschichten

Intestinal organoids are increasingly being used to study the gut epithelium for digestive disease modeling, or to investigate interactions with drugs, ...

3D Culture of Organoids from Murine Intestinal Crypts and Single Stem Cell

The 3D Culturing of Organoids from Murine Intestinal Crypts and a Single Stem Cell for Organoid Research

The 3D Culturing of Organoids from Murine Intestinal Crypts and a Single Stem Cell for Organoid Research (Video) | JoVE 

Die 3D-Kultivierung von Organoiden aus murinen Darmkrypten und einer einzelnen Stammzelle für die Organoidforschung

At present, organoid culture represents an important tool for in vitro studies of different biological aspects and diseases in different organs. Murine ...

Rat Intestinal Crypts Isolation and Intestinal Organoids Generation

Generation and Manipulation of Rat Intestinal Organoids

Generation and Manipulation of Rat Intestinal Organoids (Video) | JoVE 

Generierung und Manipulation von Ratten-Darm-Organoiden

When using organoids to assess physiology and cell fate decisions, it is important to use a model that closely recapitulates in vivo contexts. ...

Construction of a 3D Intestinal Mucosa Model with Paraffin Embedding

Basic Three-Dimensional (3D) Intestinal Model System with an Immune Component

Investigating the Effects of Compounds on Intestinal Tissue Using 3D Human Cell Line Models (Video) | JoVE

Grundlegendes dreidimensionales (3D) Darmmodellsystem mit einer Immunkomponente

There has been an increase in the use of in vivo and in vitro intestinal models to study the pathophysiology of inflammatory intestinal diseases, for the ...