Name: segmenting growth of endothelial cells in 6-well plates on an orbital shaker for mechanobiological studies
Uploaded: 2021-06-03T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Segmenting Growth of Endothelial Cells in 6-Well Plates on an Orbital Shaker for Mechanobiological Studies at JoVE.com

लेखकों कृतज्ञता से एक ब्रिटिश हार्ट फाउंडेशन परियोजना अनुदान स्वीकार (PDW के लिए), एक राष्ट्रीय चिकित्सा अनुसंधान परिषद सिंगापुर TAAP और डायनेमो अनुदान (XW, NMRC/OFLCG/004/2018, NMRC/OFLCG/001/2017), एक एक * स्टार स्नातक छात्रवृत्ति (KTP के लिए), और एक ब्रिटिश हार्ट फाउंडेशन सेंटर ऑफ रिसर्च एक्सीलेंस स्टूडेंटशिप (एमए के लिए) ।

1. उपकरणों का निर्माण और अभिकर् ती की तैयारी
<ol><li>स्टेनलेस स्टील मॉड्यूल का निर्माण<ol>
<li>प्रदान की गई इंजीनियरिंग ड्राइंग(चित्रा1) के अनुसार सीएनसी मिलिंग मशीन का उपयोग करके एक ग्रेड 316 स्टेनले?...

<ol>
	<li>Hahn, C., Schwartz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanotransduction+in+vascular+physiology+and+atherogenesis.">Mechanotransduction in vascular physiology and atherogenesis.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 10 (1), 53-62 (2009).</li><li>Wang, C., Baker, B. M., Chen, C. S., Schwartz, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+Cell+Sensing+of+Flow+Direction.">Endothelial Cell Sensing of Flow Direction.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 33 (9), 2130-2136 (2013).</li><li>Tzima, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mechanosensory+complex+that+mediates+the+endothelial+cell+response+to+fluid+shear+stress.">A mechanosensory complex that mediates the endothelial cell response to fluid shear stress.</a> Nature. 437, 426-431 (2005).</li><li>Potter, C. M. F., Schobesberger, S., Lundberg, M. H., Weinberg, P. D., Mitchell, J. A., Gorelik, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shape+and+compliance+of+endothelial+cells+after+shear+stress+in+vitro+or+from+different+aortic+regions:+Scanning+ion+conductance+microscopy+study.">Shape and compliance of endothelial cells after shear stress in vitro or from different aortic regions: Scanning ion conductance microscopy study.</a> PLoS ONE. 7 (2), 1-5 (2012).</li><li>Asakura, T., Karino, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+Patterns+and+Spatial+Distribution+of+Atherosclerotic+Lesions+in+Human.">Flow Patterns and Spatial Distribution of Atherosclerotic Lesions in Human.</a> Circulation Research. 66 (4), 1045-1067 (1990).</li><li>Bond, A. R., Iftikhar, S., Bharath, A. A., Weinberg, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+evidence+for+a+change+in+the+pattern+of+aortic+wall+shear+stress+with+age.">Morphological evidence for a change in the pattern of aortic wall shear stress with age.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 31 (3), 543-550 (2011).</li><li>Giddens, D. P., Zarins, C. K., Glagov, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+fluid+mechanics+in+the+localization+and+detection+of+atherosclerosis.">The role of fluid mechanics in the localization and detection of atherosclerosis.</a> Journal of biomechanical engineering. 115, 588-594 (1993).</li><li>Schnittler, H. J., Franke, R. P., Akbay, U., Mrowietz, C., Drenckhahn, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+in+vitro+rheological+system+for+studying+the+effect+of+fluid+shear+stress+on+cultured+cells.">Improved in vitro rheological system for studying the effect of fluid shear stress on cultured cells.</a> The American journal of physiology. 265, 289-298 (1993).</li><li>Levesque, M. J., Nerem, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+elongation+and+orientation+of+cultured+endothelial+cells+in+response+to+shear+stress.">The elongation and orientation of cultured endothelial cells in response to shear stress.</a> Journal of biomechanical engineering. 107 (4), 341-347 (1985).</li><li>Chiu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+the+effect+of+disturbed+flow+on+monocytic+adhesion+to+endothelial+cells.">Analysis of the effect of disturbed flow on monocytic adhesion to endothelial cells.</a> Journal of Biomechanics. 36 (12), 1883-1895 (2003).</li><li>Venugopal Menon, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+tunable+microfluidic+3D+stenosis+model+to+study+leukocyte-endothelial+interactions+in+atherosclerosis.">A tunable microfluidic 3D stenosis model to study leukocyte-endothelial interactions in atherosclerosis.</a> APL Bioengineering. 2 (1), 016103 (2018).</li><li>Warboys, C. M., Ghim, M., Weinberg, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+mechanobiology+in+cultured+endothelium:+A+review+of+the+orbital+shaker+method.">Understanding mechanobiology in cultured endothelium: A review of the orbital shaker method.</a> Atherosclerosis. 285, 170-177 (2019).</li><li>Ghim, M., Pang, K. T., Arshad, M., Wang, X., Weinberg, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+for+segmenting+growth+of+cells+in+sheared+endothelial+culture+reveals+the+secretion+of+an+anti-inflammatory+mediator.">A novel method for segmenting growth of cells in sheared endothelial culture reveals the secretion of an anti-inflammatory mediator.</a> Journal of Biological Engineering. 12 (1), 15 (2018).</li><li>Sage, H., Pritzl, P., Bornstein, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secretory+phenotypes+of+endothelial+cells+in+culture:+comparison+of+aortic,+venous,+capillary,+and+corneal+endothelium.">Secretory phenotypes of endothelial cells in culture: comparison of aortic, venous, capillary, and corneal endothelium.</a> Arteriosclerosis. 1 (6), 427-442 (1981).</li><li>Tunica, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+analysis+of+the+secretome+of+human+umbilical+vein+endothelial+cells+using+a+combination+of+free-flow+electrophoresis+and+nanoflow+LC-MS/MS.">Proteomic analysis of the secretome of human umbilical vein endothelial cells using a combination of free-flow electrophoresis and nanoflow LC-MS/MS.</a> Proteomics. 9, 4991-4996 (2009).</li><li>Griffoni, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modification+of+proteins+secreted+by+endothelial+cells+during+modeled+low+gravity+exposure.">Modification of proteins secreted by endothelial cells during modeled low gravity exposure.</a> Journal of Cellular Biochemistry. 112, 265-272 (2011).</li><li>Ghim, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+of+three+pathways+for+macromolecule+transport+across+cultured+endothelium+and+their+modification+by+flow.">Visualization of three pathways for macromolecule transport across cultured endothelium and their modification by flow.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 313 (5), 959-973 (2017).</li><li>Levesque, M. J., Liepsch, D., Moravec, S., Nerem, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+of+endothelial+cell+shape+and+wall+shear+stress+in+a+stenosed+dog+aorta.">Correlation of endothelial cell shape and wall shear stress in a stenosed dog aorta.</a> Arteriosclerosis: An Official Journal of the American Heart Association, Inc. 6 (2), 220-229 (1986).</li></ol>

घूमता-अच्छी विधि केंद्र में एक अच्छी तरह से कम परिमाण बहुदिशात्मक प्रवाह (एलएमएमएफ) और अच्छी तरह से किनारे पर उच्च परिमाण यूनिएक्सियल फ्लो (एचएमयूएफ) में जटिल प्रवाह प्रोफाइल उत्पन्न करने में सक्षम है...

रक्त वाहिकाओं के सामान्य कार्य औररोगके विकास में उनके यांत्रिक वातावरण में संवहनी कोशिकाओं की प्रतिक्रियाएं महत्वपूर्ण हैं । एंडोथेलियल कोशिकाओं (ईसीएस) की मशीनोबायोलॉजी जो सभी रक्त वाहिकाओं की आंतरिक सतह को लाइन करती है, मशीनोबायोलॉजिकल अनुसंधान का एक विशेष ध्यान केंद्रित किया गया है क्योंकि ईसीएस सीधे उन पर रक्त प्रवाह से उत्पन्न कतरनी तनाव का अनुभव करते हैं। भड़काऊ प्रतिक्रियाओं, परिवर्तित कठोरता और आकृति विज्ञान, वासोएक्टिव पदार्थों की रिहाई, और जंक्शनल प्रोटीन के स्थानीयकरण और अभिव्यक्ति जैसे विभिन्न फेनोटाइपिकपरिवर्तन कतरनी तनाव2,3,4के लिए चुनाव आयोग के संपर्क पर निर्भर करते हैं। कतरनी पर निर्भर एंडोथेलियलगुणों में एथेरोस्क्लेरोसिस5,6,7जैसे रोगों के बद विकास का भी ध्यान हो सकता है।
यह संस्कृति में ECs पर कतरनी के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए उपयोगी है, जहां तनाव को नियंत्रित किया जा सकता है, और ECs अंय सेल प्रकार से अलग किया जा सकता है । आमतौर पर ECs के लिए कतरनी तनाव लागू करने के लिए विट्रो उपकरणों में इस्तेमाल समानांतर प्लेट प्रवाह कक्ष और शंकु और प्लेट विस्कॉमीटर शामिल हैं, लेकिन केवल एकीय स्थिर, दोलन, और स्पंदन प्रवाह8,9लागू किया जा सकता है । यद्यपि एक स्टेनोटिक ज्यामिति की नकल करने वाले पतला या ब्रांचिंग ज्यामिति और माइक्रोफ्लुइडिक चिप्स के साथ संशोधित प्रवाह कक्ष विकसित किए गए हैं, उनके कम थ्रूपुट और अपेक्षाकृत कम संस्कृति अवधि जो संभवहै, एक चुनौती10, 11उत्पन्न करती है।
एंडोथेलियल मेकेनोट्रांसडक्शन के अध्ययन के लिए कक्षीय शेखर (या अच्छी तरह से घूमता हुआ) विधि, जिसमें कोशिकाओं को एक कक्षीय शेखर के मंच पर रखे गए मानक सेल कल्चर प्लास्टिकवेयर में उगायाजाताहै, ध्यान बढ़ाने में सक्षम है क्योंकि यह लंबे समय से जटिल लगाने में सक्षम है, उच्च थ्रूपुट के साथ ECs पर स्थानिक रूप से अलग कतरनी तनाव पैटर्न (वारबॉयस एट अल द्वारा समीक्षा देखें)। कम्प्यूटेशनल फ्लूइड डायनेमिक्स (सीएफडी) सिमुलेशन को एक घूमता हुआ अच्छी तरह से कतरनी तनाव के स्थानिक और लौकिक भिन्नता की विशेषता के लिए नियोजित किया गया है। शेकर मंच की कक्षीय गति के कारण संस्कृति माध्यम की घूमता गति जिस पर प्लेट रखी जाती है, केंद्र में कम परिमाण बहुदिशात्मक प्रवाह (एलएमएमएफ, या ख्यात समर्थक एथेरोजेनिक प्रवाह) और 6-वेल प्लेट के कुओं के किनारे पर उच्च परिमाण यूनिएक्सियल फ्लो (एचएमयूएफ, या ख्यात रूप से एथेरोप्रोटेक्टिव प्रवाह) की ओर जाता है। उदाहरण के लिए, समय औसत दीवार कतरनी तनाव (TAWSS) केंद्र में लगभग 0.3 पीए और 0.7 पीए एक 6-अच्छी तरह से प्लेट के किनारे पर 5 मिमी कक्षीय त्रिज्या13के साथ 150 आरपीएम पर घूमता है। विधि केवल व्यावसायिक रूप से उपलब्ध प्लास्टिकवेयर और कक्षीय शेखर ही की आवश्यकता है ।
हालांकि, विधि के लिए एक दोष है (और विट्रो में प्रवाह लगाने के अन्य तरीकों के लिए): ईसीएस घुलनशील मध्यस्थों और सूक्ष्मकणों को कतरनी-निर्भर तरीके से14,15,16 जारी करता है और यह स्रावम घूमता माध्यम में मिश्रण के कारण अच्छी तरह से अन्य क्षेत्रों में ईसीएस को प्रभावित कर सकता है। यह चुनाव आयोग फेनोटाइप पर कतरनी तनाव के वास्तविक प्रभाव मुखौटा हो सकता है । उदाहरण के लिए, घाम एट अल ने अनुमान लगाया है कि यह बड़े कणों के पारकोशिकीय परिवहन पर विभिन्न कतरनी प्रोफाइल के समान प्रभाव के लिए खाता है17।
यहां हम एक 6-अच्छी तरह से प्लेट के विशिष्ट क्षेत्रों में मानव गर्भनाल नस एंडोथेलियल सेल (HUVEC) आसंजन को बढ़ावा देने के लिए एक विधि का वर्णन करते हैं, जबकि सतह को खराब करने और कहीं और विकास को रोकने के लिए प्लूरोनिक एफ-127 का उपयोग करते हुए फाइब्रोनेक्टिन कोटिंग का उपयोग करते हैं। विधि ऊपर वर्णित सीमा को हल करती है क्योंकि, सेल विकास को खंडित करके, ईसीएस केवल एक प्रकार की कतरनी प्रोफ़ाइल का अनुभव करते हैं, और अच्छी तरह से कहीं और अन्य प्रोफाइल के संपर्क में आने वाले ईसीएस से स्रावसेम से प्रभावित नहीं होते हैं।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Cell and Media</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endothelial Growth Medium (EGM-2)</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>cc-3162</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Umbilical Vein Endothelial Cells</td>
			<td>NA</td>
			<td>NA</td>
			<td>Isolated from cords obtained from donors with uncomplicated labour at the Hammersmith Hospital</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents and Materials</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fuor 488-labelled goat anti-rabbit IgG</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>A11008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A9418-50G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 6 Well Clear Flat Bottom Not Treated&#160;</td>
			<td>Scientific Laboratory Supplies Ltd&#160;</td>
			<td>351146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibronectin from Bovine Plasma</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F1141-5MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>158127-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffered Saline</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8537-6X500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pluronic F-127</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P2443</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human TNF-a</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>300-01A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RS PRO 2.85 mm Black PLA 3D Printer Filament, 1 kg</td>
			<td>RS</td>
			<td>832-0264</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel 316</td>
			<td>Metal Supermarket</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgard184 Silicone Elastomer kit</td>
			<td>Farnell</td>
			<td>101697</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>X100-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T4049-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zonula Occludens-1 (ZO-1) antibody</td>
			<td>Cell Signaling Technology</td>
			<td>13663</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DRAQ5 (5mM)</td>
			<td>Bio Status</td>
			<td>DR50200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipments</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grant Orbital Shaker PSU-10i</td>
			<td>Scientific Laboratory Supplies Ltd&#160;</td>
			<td>SHA7930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica TCS SP5 Confocal Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retaining Ring Pliers</td>
			<td>Misumi</td>
			<td>RTWP32-58</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Retaining Rings/Internal/C-Type</td>
			<td>Misumi</td>
			<td>RTWS35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultimaker 2+3-D printer</td>
			<td>Ultimaker</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Softwares</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cura 2.6.2</td>
			<td>Ultimaker</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MATLAB</td>
			<td>The MathWorks</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solidworks 2016</td>
			<td>Dassault Systemes</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

segmenting growth of endothelial cells in 6-well plates on an orbital shaker for mechanobiological studies

रक्त के प्रवाह से धमनी की दीवार पर लगाया गया कतरनी तनाव एंडोथेलियल सेल आकृति विज्ञान और कार्य को प्रभावित करता है। एंडोथेलियल कोशिकाओं में एक समर्थक एथेरोस्क्लेरोटिक फेनोटाइप को प्रोत्साहित करने के लिए कम परिमाण, दोलनात्मक और बहुदिशात्मक कतरनी तनाव सभी को पोस्टकिया गया है, जबकि उच्च परिमाण और एकदिशात्मक या एकीय कतरनी को एंडोथेलियल होमोस्टेसिस को बढ़ावा देने के लिए सोचा जाता है। इन परिकल्पनाओं को आगे की जांच की आवश्यकता होती है, लेकिन पारंपरिक इन विट्रो तकनीकों की सीमाएं होती हैं, और कोशिकाओं पर बहुदिशात्मक कतरनी तनाव लगाने में विशेष रूप से गरीब होते हैं। 
एक विधि जो बढ़ते उपयोग को प्राप्त कर रही है, वह एक कक्षीय शेखर के मंच पर मानक बहु-अच्छी प्लेटों में एंडोथेलियल कोशिकाओं को संस्कृति देना है; इस सरल, कम लागत वाले, उच्च थ्रूपुट और पुरानी विधि में, घूमता माध्यम कुएं के विभिन्न हिस्सों में बहुदिश कतरनी सहित कतरनी के विभिन्न पैटर्न और परिमाण पैदा करता है। हालांकि, इसकी एक महत्वपूर्ण सीमा है: एक क्षेत्र में कोशिकाएं, एक प्रकार के प्रवाह के संपर्क में, मध्यस्थों को उस माध्यम में जारी कर सकती हैं जो अच्छी तरह से अन्य हिस्सों में कोशिकाओं को प्रभावित करती है, विभिन्न प्रवाहों के संपर्क में आती है, इसलिए प्रवाह और फेनोटाइप के बीच स्पष्ट संबंध को विकृत करती है। 
यहां हम विधि का एक आसान और किफायती संशोधन प्रस्तुत करते हैं जो कोशिकाओं को केवल विशिष्ट कतरनी तनाव विशेषताओं के संपर्क में लाने की अनुमति देता है। सेल सीडिंग फाइब्रोनेक्टिन के साथ ब्याज के क्षेत्र को कोटिंग करके कुएं के एक परिभाषित क्षेत्र तक सीमित है, जिसके बाद पासिवाटिंग समाधान का उपयोग करके पासिवेशन किया जाता है। इसके बाद, प्लेटों को शेकर पर घूमता जा सकता है, जिसके परिणामस्वरूप कोशिकाओं के संपर्क में आने से कम परिमाण वाले बहुदिशात्मक कतरनी या उच्च परिमाण वाले एकक्षी कतरनी जैसे अच्छी तरह से परिभाषित कतरनी प्रोफाइल होते हैं, जो उनके स्थान के आधार पर होते हैं। पहले की तरह, मानक सेल-कल्चर प्लास्टिकवेयर का उपयोग कोशिकाओं के सीधे आगे के विश्लेषण की अनुमति देता है। संशोधन पहले से ही घुलनशील मध्यस्थों के प्रदर्शन की अनुमति दी है, परिभाषित कतरनी तनाव विशेषताओं के तहत एंडोथेलियम से जारी है, कि अच्छी तरह से कहीं और स्थित कोशिकाओं को प्रभावित करते हैं ।

फाइब्रोनेक्टिन से लेपित नहीं अच्छी प्लेट के क्षेत्रों में एचएचवीसी का आसंजन प्लूरोनिक एफ-127 पासिवेशन द्वारा निरस्त किया गया था; विकास संस्कृति के ७२ घंटे के बाद भी फाइब्रोनेक्टिन के साथ ल?...

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Segmenting Growth of Endothelial Cells in 6-Well Plates on an Orbital Shaker for Mechanobiological Studies

यह प्रोटोकॉल कक्षीय शेखर मॉडल का उपयोग करके कतरनी तनाव आवेदन के लिए 6-अच्छी प्लेट के एक विशिष्ट क्षेत्र में एंडोथेलियल सेल विकास को प्रतिबंधित करने के लिए एक कोटिंग विधि का वर्णन करता है।

मेकानोबायोलॉजिकल स्टडीज के लिए ऑर्बिटल शेकर पर 6-वेल प्लेट्स में एंडोथेलियल सेल की ग्रोथ को सेगमेंट करना

Shear stress imposed on the arterial wall by the flow of blood affects endothelial cell morphology and function. Low magnitude, oscillatory and ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

On-Chip Endothelial Inflammatory Phenotyping

पर चिप Endothelial भड़काऊ phenotyping

Atherogenesis is potentiated by metabolic abnormalities that contribute to a heightened state of systemic inflammation resulting in endothelial ...

Time-lapse Fluorescence Imaging of Arabidopsis Root Growth with Rapid Manipulation of The Root Environment Using The RootChip

समय चूक रूट पर्यावरण रैपिड हेरफेर साथ Arabidopsis रूट विकास के प्रतिदीप्ति इमेजिंग RootChip के के का उपयोग करना

The root functions as the physical anchor of the plant and is the organ responsible for uptake of water and mineral nutrients such as nitrogen, ...

A Novel Three-dimensional Flow Chamber Device to Study Chemokine-directed Extravasation of Cells Circulating under Physiological Flow Conditions

शारीरिक प्रवाह शर्तों के तहत घूम प्रकोष्ठों की प्रतिलिपि का निर्देश परिस्त्राव अध्ययन करने के लिए एक उपन्यास तीन आयामी फ्लो चैंबर डिवाइस

Extravasation of circulating cells from the bloodstream plays a central role in many physiological and pathophysiological processes, including stem cell ...

3D Orbital Tracking in a Modified Two-photon Microscope: An Application to the Tracking of Intracellular Vesicles

एक संशोधित दो photon माइक्रोस्कोप में 3 डी कक्षीय ट्रैकिंग: Intracellular vesicles की ट्रैकिंग के लिए एक आवेदन

The objective of this video protocol is to discuss how to perform and analyze a three-dimensional fluorescent orbital particle tracking experiment using a ...

Gene Transfection toward Spheroid Cells on Micropatterned Culture Plates for Genetically-modified Cell Transplantation

आनुवंशिक रूप से संशोधित कोशिका प्रत्यारोपण के लिए micropatterned संस्कृति प्लेटों पर उपगोल प्रकोष्ठों की ओर जीन अभिकर्मक

To improve the therapeutic effectiveness of cell transplantation, a transplantation system of genetically modified, injectable spheroids was developed. ...

Studying the Stoichiometry of Epidermal Growth Factor Receptor in Intact Cells using Correlative Microscopy

Correlative माइक्रोस्कोपी का उपयोग बरकरार कोशिकाओं में epidermal वृद्धि कारक रिसेप्टर की स्तुईचिओमेटरी का अध्ययन

This protocol describes the labeling of epidermal growth factor receptor (EGFR) on COS7 fibroblast cells, and subsequent correlative fluorescence ...

Electrotaxis Studies of Lung Cancer Cells using a Multichannel Dual-electric-field Microfluidic Chip

एक multichannel दोहरे बिजली क्षेत्र microfluidic चिप का उपयोग कर लंग कैंसर कोशिकाओं के Electrotaxis अध्ययन

The behavior of directional cell migration under a direct current electric-field (dcEF) is referred to as electrotaxis. The significant role of ...

Patterning Bioactive Proteins or Peptides on Hydrogel Using Photochemistry for Biological Applications

Hydrogel पर जैव सक्रिय प्रोटीन या पेप्टाइड्स पैटर्न जैविक अनुप्रयोगों के लिए Photochemistry का उपयोग

There are many biological stimuli that can influence cell behavior and stem cell differentiation. General cell culture approaches rely on soluble factors ...

An Orbital Shaking Culture of Mammalian Cells in O-shaped Vessels to Produce Uniform Aggregates

वर्दी समुच्चय का उत्पादन करने के लिए ओ के आकार का जहाजों में स्तनधारी कोशिकाओं की एक परिक्रमा मिलाते संस्कृति

Suspension cultures of mammalian cell aggregates are required for various applications in medical and biotechnological fields. The disposable bag-based ...