Name: experimental autoimmune uveitis: an intraocular inflammatory mouse model
Uploaded: 2022-01-12T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Experimental Autoimmune Uveitis: An Intraocular Inflammatory Mouse Model at JoVE.com

حصلت JG على منحة UCL Impact الدراسية وتمويل Rosetrees Trust لدعم CB. تلقت VC منحة تعاونية بحثية من شركة Akari Therapeutics Inc. نود أن نشكر معهد UCL لطب العيون ، وحدة الخدمات البيولوجية وخاصة السيدة أليسون أوهارا وفريقها على دعمهم الفني.

تم إجراء جميع التجارب وفقا لقانون الحيوانات في المملكة المتحدة (الإجراءات العلمية) لعام 1986 ، والمبادئ التوجيهية المؤسسية لهيئة رعاية الحيوان والمراجعة الأخلاقية (AWERB).
1. إسكان الفئران C57BL / 6J
<ol><li>الفئران المنزلية في بيئة محددة خالية من مسببات الأمراض ، في دورة الضوء والظلا?...

<ol>
	<li>Lyu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TMP778,+a+selective+inhibitor+of+RORgammat,+suppresses+experimental+autoimmune+uveitis+development,+but+affects+both+Th17+and+Th1+cell+populations.">TMP778, a selective inhibitor of RORgammat, suppresses experimental autoimmune uveitis development, but affects both Th17 and Th1 cell populations.</a> The European Journal of Immunology. 48, 1810-1816 (2018).</li><li>Klaska, I. P., Forrester, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+autoimmune+uveitis.">Mouse models of autoimmune uveitis.</a> Current Pharmaceutical Design. 21, 2453-2467 (2015).</li><li>Eskandarpour, M., Alexander, R., Adamson, P., Calder, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+Inhibition+of+Bromodomain+Proteins+Suppresses+Retinal+Inflammatory+Disease+and+Downregulates+Retinal+Th17+Cells.">Pharmacological Inhibition of Bromodomain Proteins Suppresses Retinal Inflammatory Disease and Downregulates Retinal Th17 Cells.</a> The Journal of Immunology. 198, 1093-1103 (2017).</li><li>Mochizuki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+and+clinical+study+of+FK506+in+uveitis.">Preclinical and clinical study of FK506 in uveitis.</a> Current Eye Research. 11, 87-95 (1992).</li><li>Nguyen, Q. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravitreal+Sirolimus+for+the+Treatment+of+Noninfectious+Uveitis:+Evolution+through+Preclinical+and+Clinical+Studies.">Intravitreal Sirolimus for the Treatment of Noninfectious Uveitis: Evolution through Preclinical and Clinical Studies.</a> Ophthalmology. 125, 1984-1993 (2018).</li><li>Leal, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-TNF+Drugs+for+Chronic+Uveitis+in+Adults-A+Systematic+Review+and+Meta-Analysis+of+Randomized+Controlled+Trials.">Anti-TNF Drugs for Chronic Uveitis in Adults-A Systematic Review and Meta-Analysis of Randomized Controlled Trials.</a> Frontiers in Medicine (Lausanne). 6, 104 (2019).</li><li>Chen, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functionally+distinct+IFN-?++IL-17A++Th+cells+in+experimental+autoimmune+uveitis:+T-cell+heterogeneity,+migration,+and+steroid+response.">Functionally distinct IFN-?+ IL-17A+ Th cells in experimental autoimmune uveitis: T-cell heterogeneity, migration, and steroid response.</a> European Journal of Immunology. 50 (12), 1941-1951 (2020).</li><li>Xu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+clinical+grading+system+for+retinal+inflammation+in+the+chronic+model+of+experimental+autoimmune+uveoretinitis+using+digital+fundus+images.">A clinical grading system for retinal inflammation in the chronic model of experimental autoimmune uveoretinitis using digital fundus images.</a> Experimental Eye Research. 87, 319-326 (2008).</li><li>Copland, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+time-course+of+experimental+autoimmune+uveoretinitis+using+topical+endoscopic+fundal+imaging+with+histologic+and+cellular+infiltrate+correlation.">The clinical time-course of experimental autoimmune uveoretinitis using topical endoscopic fundal imaging with histologic and cellular infiltrate correlation.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 49, 5458-5465 (2008).</li><li>Dick, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Doyne+lecture+2016:+intraocular+health+and+the+many+faces+of+inflammation.">Doyne lecture 2016: intraocular health and the many faces of inflammation.</a> Eye (Lond). 31, 87-96 (2017).</li><li>Agarwal, R. K., Silver, P. B., Caspi, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+experimental+autoimmune+uveitis.">Rodent models of experimental autoimmune uveitis.</a> Methods in Molecular Biology. 900, 443-469 (2012).</li><li>Caspi, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+look+at+autoimmunity+and+inflammation+in+the+eye.">A look at autoimmunity and inflammation in the eye.</a> Journal of Clininical Investigation. 120, 3073-3083 (2010).</li><li>Caspi, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+experimental+autoimmune+uveitis.">Mouse models of experimental autoimmune uveitis.</a> Ophthalmic Research. 40, 169-174 (2008).</li><li>Shao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severe+chronic+experimental+autoimmune+uveitis+(EAU)+of+the+C57BL/6+mouse+induced+by+adoptive+transfer+of+IRBP1-20-specific+T+cells.">Severe chronic experimental autoimmune uveitis (EAU) of the C57BL/6 mouse induced by adoptive transfer of IRBP1-20-specific T cells.</a> Experimental Eye Research. 82, 323-331 (2006).</li><li>Horai, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiota-Dependent+Activation+of+an+Autoreactive+T+Cell+Receptor+Provokes+Autoimmunity+in+an+Immunologically+Privileged+Site.">Microbiota-Dependent Activation of an Autoreactive T Cell Receptor Provokes Autoimmunity in an Immunologically Privileged Site.</a> Immunity. 43, 343-353 (2015).</li><li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+induced+vs.+spontaneous+models+of+autoimmune+uveitis+targeting+the+interphotoreceptor+retinoid+binding+protein.">Comparative analysis of induced vs. spontaneous models of autoimmune uveitis targeting the interphotoreceptor retinoid binding protein.</a> PLoS One. 8, 72161 (2013).</li><li>Chen, J., Qian, H., Horai, R., Chan, C. C., Caspi, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+optical+coherence+tomography+and+electroretinography+to+evaluate+retinal+pathology+in+a+mouse+model+of+autoimmune+uveitis.">Use of optical coherence tomography and electroretinography to evaluate retinal pathology in a mouse model of autoimmune uveitis.</a> PLoS One. 8, 63904 (2013).</li><li>Harry, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+autoimmune+retinal+disease+by+lovastatin+does+not+require+Th2+cytokine+induction.">Suppression of autoimmune retinal disease by lovastatin does not require Th2 cytokine induction.</a> Journal of Immunology. 174, 2327-2335 (2005).</li></ol>

النماذج الحيوانية التجريبية هي أدوات ضرورية لدراسة التسبب في المرض والاختبارات قبل السريرية للنماذج العلاجية الجديدة. في البروتوكول الحالي ، ناقشنا منهجية لتحفيز ومراقبة وتسجيل EAU ، وهو نموذج تجريبي لالتهاب القزحية الالتهابي داخل العين. يحتوي نموذج EAU هذا على أكثر من 95٪ من حالات المرض عن...

سيوضح هذا البروتوكول كيفية إحداث التهاب القزحية المناعي الذاتي التجريبي (EAU) في الماوس C57BL / 6J عن طريق حقن واحد تحت الجلد لمستضد شبكية في مادة مساعدة مستحلبة. سيتم تفصيل طرق مراقبة وتقييم تطور المرض من خلال التصوير بالمنظار والفحص النسيجي ، مع تحديد معلمات القياس في الداخل. بالإضافة إلى ذلك ، سيتم مناقشة تصوير الأوعية بالفلوريسئين ، وهي تقنية لفحص بنية الأوعية الدموية في شبكية العين ونفاذيتها.
يلخص نموذج EAU هذا السمات المركزية لالتهاب العنبية الخلفي غير المعدي لدى البشر فيما يتعلق بالخصائص السريرية المرضية والآليات الخلوية والجزيئية الأساسية التي تدفع المرض. يتم التوسط في EAU بواسطة مجموعات فرعية Th1 و / أو Th17 من الخلايا الليمفاوية CD4 + T ذاتية التفاعل ، كما هو موضح في تجارب النقل بالتبني ومع الفئران المستنفدةIFNγ 1. يأتي الكثير من فهمنا للأدوار المحتملة لهذه الخلايا في التهاب القزحية من دراسة EAU2 حيث يتم اكتشاف كل من خلايا Th1 و Th17 داخل أنسجة الشبكية3. في كثير من الأحيان ، يتم استخدام EAU كنموذج قبل السريري لتقييم فائدة العلاجات الجديدة في تخفيف المرض. أظهرت الأساليب العلاجية التي نجحت في تعديل مرض EAU بعض الفعالية في العيادة ووصلت إلى حالة معتمدة من إدارة الغذاء والدواء. ومن الأمثلة على ذلك مجموعات من الأدوية المنظمة للمناعة مثل علاجات استهداف الخلايا التائية: السيكلوسبورين ، FK-506 ، و rapamycin4،5،6. في الآونة الأخيرة ، تم أيضا استكشاف التدخلات التي تستهدف مسارات جديدة في هذا النموذج للتحقيق في كل من الآلية والتأثير على نتائج المرض. وتشمل هذه استهداف تنظيم النسخ من خلال بروتينات قارئ الكروماتين Bromodomain Extra-Terminal (BET) ومثبطات P-TEFb3. علاوة على ذلك ، أظهرت الأساليب الأكثر تقليدية مثل مثبط VLA-4 مؤخرا قمعا في EAU عن طريق تعديل الخلايا التائيةCD4 + T 7. بالإضافة إلى ذلك ، تم العثور على استهداف خلايا Th17 باستخدام TMP778 ، وهو ناهض عكسي RORγt ، لقمع EAU8 بشكل كبير. علاوة على ذلك ، يوفر هذا النموذج فرصة لدراسة التهاب المناعة الذاتية المزمن في شبكية العين والآليات الأساسية المصاحبة مثل تحضير الخلايا الليمفاوية.
القراءات الأساسية للدراسات قبل السريرية EAU هي التقييم السريري عن طريق إجراء تصوير تنظير قاع الشبكية وأقل تكرارا ، من خلال تقييم سلامة الشبكية عن طريق التصوير المقطعي للتماسك البصري (OCT). ثم يتم إجراء التقييم النسيجي المرضي للشبكية والتنميط المناعي لخلايا الشبكية عن طريق قياس التدفق الخلوي عند الإنهاء. تنظير قاع العين هو نظام تصوير حي سهل الاستخدام يسمح بإجراء تقييم سريري سريع وقابل للتكرار لشبكية العين بأكملها. بالنسبة للتقييمات المناعية الكيميائية ، تعتمد التقنيات على إعداد أقسام الشبكية التي تسمح لنا بدراسة بنية الأنسجة لدرجة الالتهاب والضرر الهيكلي9. سيتم تحديد معايير التقييم وأنظمة التسجيل التقليدية ، لجميع التقنيات المستخدمة ، ضمن هذا البروتوكول. غالبا ما يرتبط مدى الضرر المسجل باستخدام التصوير بالمنظار ارتباطا وثيقا بالتغيرات النسيجية. يوفر هذا النهج المزدوج لرصد وتقييم شدة المرض حساسية أكبر ونتائج قياس أكثر موثوقية.
EAU هو نموذج راسخ وشائع الاستخدام للاختبار قبل السريري والتحقيق في أمراض العين المناعية. هذا النموذج موثوق به وقابل للتكرار مع حدوث مرض بنسبة >95٪ ويولد بيانات شاملة يمكن استخدامها للتحقق من صحة أو رفض العلاجات الجديدة لعلاج مرض التهاب العين الذي يمثل سببا رئيسيا للعمى في سن العمل في جميع أنحاء العالم10.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>antisedan</td>
			<td>ZOETIS, USA</td>
			<td></td>
			<td>for waking up</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete Freund&#8217;s Adjuvant; CFA</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>F5881</td>
			<td>for immunisation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Domitor</td>
			<td>Orion Pharma, Finland</td>
			<td></td>
			<td>for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flourescein</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>F2456</td>
			<td>for Angiography</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IRBP1-20</td>
			<td>Chamberidge peptide, UK</td>
			<td></td>
			<td>peptide;antigen&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Orion Pharma, Finland</td>
			<td></td>
			<td>for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micron III</td>
			<td>Phoenix Research, USA</td>
			<td></td>
			<td>for fundoscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Serum</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>M5905</td>
			<td>for immunisation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mycobacterium terberculosis</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>344289</td>
			<td>for immunisation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pertussis Toxin</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>P2980</td>
			<td>for immunisation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phenylephrine hydrochloride 2.5%&#160;</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb UK&#160;</td>
			<td>PHEN25</td>
			<td>for dilation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide 1%</td>
			<td>SANDOZ</td>
			<td></td>
			<td>for dilation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Viscotears</td>
			<td>WELDRICKS Pharmacy, UK</td>
			<td>2082642</td>
			<td>for eye lubrication</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

experimental autoimmune uveitis: an intraocular inflammatory mouse model

التهاب العنبية المناعي الذاتي التجريبي (EAU) مدفوع بالخلايا المناعية التي تستجيب للمستضدات الذاتية. تلخص العديد من ميزات هذا النموذج غير المعدي للمرض الالتهابي داخل العين النمط الظاهري السريري لالتهاب العنبية الخلفي الذي يصيب البشر. تم استخدام EAU بشكل موثوق لدراسة فعالية العلاجات الالتهابية الجديدة وطريقة عملها ولمزيد من التحقيق في الآليات التي تدعم تطور المرض لاضطرابات العين. هنا ، نقدم بروتوكولا مفصلا حول تحريض EAU في الماوس C57BL / 6J - الكائن النموذجي الأكثر استخداما مع قابلية لهذا المرض. سيتم إثبات التقييم السريري لشدة المرض وتطوره باستخدام تنظير قاع القاع والفحص النسيجي وتصوير الأوعية بالفلوريسين. يتضمن إجراء الحث الحقن تحت الجلد لمستحلب يحتوي على ببتيد (IRBP1-20) من بروتين ربط الريتينويد بين مستقبلات العين (المعروف أيضا باسم بروتين ربط الريتينول 3) ، مساعد فرويند الكامل (CFA) ومكمل مع المتفطرة السلية المقتولة. يتبع حقن هذا المستحلب اللزج على الجزء الخلفي من الرقبة حقنة واحدة داخل الصفاق من توكسين السعال الديكي Bordetella . في بداية الأعراض (اليوم 12-14) وتحت التخدير العام ، يتم التقاط صور تنظير القاع لتقييم تطور المرض من خلال الفحص السريري. يمكن مقارنة هذه البيانات مباشرة مع تلك الموجودة في نقاط زمنية لاحقة وذروة المرض (اليوم 20-22) مع تحليل الاختلافات. في الوقت نفسه ، يسمح هذا البروتوكول للمحقق بتقييم الاختلافات المحتملة في نفاذية السفينة وتلفها باستخدام تصوير الأوعية بالفلوريسين. يمكن تحفيز EAU في سلالات الفئران الأخرى - سواء من النوع البري أو المعدل وراثيا - ودمجها مع علاجات جديدة توفر المرونة لدراسة فعالية الدواء و / أو آليات المرض.

في هذا البروتوكول ، نصف طريقة خطوة بخطوة لإحداث نموذج لالتهاب القزحية المناعي الذاتي التجريبي (EAU) عن طريق تحصين الفئران بببتيد شبكية عنبي مشتق من IRBP. يتم تغطية تقييم المرض باستخدام مناهج مستخدمة على نطاق واسع ويمكن الوصول إليها بسهولة على الرغم من أنها ليست حصرية ويمكن إضافتها أو استبدال?...

Watch this Scientific Journal Video about Experimental Autoimmune Uveitis: An Intraocular Inflammatory Mouse Model at JoVE.com

Experimental Autoimmune Uveitis: An Intraocular Inflammatory Mouse Model

في هذا التقرير نقدم بروتوكولا يسمح للمحقق بإنشاء نموذج فأر لالتهاب القزحية داخل العين. يشار إليه بشكل أكثر شيوعا باسم التهاب العنبية المناعي الذاتي التجريبي (EAU) ، يلتقط هذا النموذج الثابت العديد من جوانب الأمراض البشرية. هنا ، سنصف كيفية تحفيز ومراقبة تطور المرض باستخدام العديد من القراءات.

التهاب القزحية المناعي الذاتي التجريبي: نموذج فأر التهابي داخل العين

Experimental Autoimmune Uveitis (EAU) is driven by immune cells responding to self-antigens. Many features of this non-infectious, intraocular ...

يمكن استخدام هذا النموذج لدراسة الآليات الخلوية التي تنطوي على التسبب في التهاب العنبية الخلفي البشري بوساطة المناعة. تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية نحو الدراسة الانتقالية لالتهاب القزحية البشري في مراقبة فعالية الأدوية الجديدة وتوفير نظرة ميكانيكية على تطور المرض الكيميائي. الميزة الرئيسية لاستخدام هذا النموذج هي موثوقية تحريض المرض واستخدام تقنيات التنظير الداخلي غير الغازية التي تسمح لنا بمراقبة تطور المرض.هنا نصف كيفية تحفيز المرض وتقييم علم الأمراض باستخدام العديد من القراءات لإعداد IRBP 1-20 أكمل مساعد Freund أو CFA ، أعد تعليق كمية محسوبة من الببتيد في حجم لا يقل عن 100٪ DMSO. عندما يذوب المسحوق تماما ، أضف كميات صغيرة من PBS إلى الأنبوب حتى تصل إلى الحجم النهائي المحسوب من PBS وفقا لعدد الفئران المراد حقنها باستخدام التقليب اللطيف لخلط المحلول. بعد تحضير مساعد Freund الكامل ، قم بماصة المحلول برفق وبشكل متكرر لتشكيل مستحلب لزج وموزع بالتساوي مع إضافة محلول الببتيد DMSO PBS بالتنقيط بنسبة واحد إلى واحد إلى التعليق.لتهوية المحاليل ، استخدم ماصة 1000 ميكرولتر مضبوطة على 700 ميكرولتر لماصة المحلول بشكل متكرر حتى يتم الحصول على مستحلب سميك كريمي. قبل حقن معلق الببتيد ، ضع كل فأر ليتم حقنه في قفص منفصل واستخدم حقنة ملليلتر واحد مجهزة بإبرة قياس 23 لتوصيل 1.5 ميكروغرام من توكسين بورديتيلا السعال الديكي في 100 ميكرولتر من وسط RPMI 1640 مكمل بمصل فأر 1٪ لكل. عندما يتم حقن محلول توكسين السعال الديكي ، يجب وضع الماوس في وضع يشبه القفا وقرص الجلد لتشكيل هيكل يشبه الخيمة على الجزء الخلفي من الرقبة.قم بربط الإبرة بالفراغ بين الإصبع والإبهام ، وحقن 200 ميكرولتر من مستحلب IRBP على جلد الخيام ، مع الحفاظ على الضغط بعد الحقن وتدوير رأس الإبرة لإغلاق الجلد قبل التراجع. لتسجيل المرض السريري ، في اليوم 21 بعد الحقن ، تأكد من عدم الاستجابة لمنعكس البتلة في الفأر حقن الببتيد المخدر وكبح جماح الحيوان في. ضع موضعيا 1٪ تروبيكاميد و 2٪ فينيليفرين على قرنية كل عين مباشرة بعد الحقن.عندما يتوسع التلاميذ بالكامل ، ضع الماوس على مرحلة مجهر مصممة لهذا الغرض. ضع المجهر للوصول الكامل إلى شبكية العين. اضبط قطعة العين طوال عملية التصوير حسب الضرورة لرؤية القرص البصري والشبكية والحصول على صور لمنطقة الشبكية بأكملها ، وضبط وتغطية جميع زوايا المحيط.لقياس تسرب الأوعية الدموية ، قم بإدارة 100 ميكرولتر من 2٪ فلوريسئين تحت الجلد في الجزء الخلفي من الرقبة وأعد وضع الماوس بحيث تكون شبكية العين في منتصف الصورة الحية. اضبط منظار القاع على مرشح إثارة الضوء الأزرق عند 465 إلى 490 نانومتر قبل الحصول على صورة لكل منهما عند 1.5 وبعد سبع دقائق من حقن الفلورسنت. عندما يتم الحصول على جميع الصور ، قم بتوصيل حقن مضاد للتخدير داخل الصفاق للتعافي ووضع الفأر في قفص على حصيرة مسخنة مسبقا مع إمكانية الوصول إلى نظام غذائي مبلل مع مراقبة حتى يستعيد الفأر وعيه.لتسجيل الأمراض السريرية للصور ، قم بتأسيس التقييم السريري على شدة التهاب القرص البصري ، وتكبيل الأوعية الدموية في شبكية العين ، وتسلل أنسجة الشبكية ، والأضرار الهيكلية. سجل كل من هذه المعلمات على مقياس من واحد إلى خمسة. يمثل المجموع الجماعي المرض السريري للعين بأكملها بحد أقصى 20 درجة يمكن الحصول عليها لكل عين.بعد تصوير قاع العين لنقطة النهاية السريرية النهائية للدراسة ، القتل الرحيم للفأر. للتحليل النسيجي ، قم بفصل الجفون للوصول إلى العين بأكملها ، ثم ضع ملقط منحني خلف الكرة الأرضية للإمساك بالنسيج الضام المداري والعصب البصري واستئصال العين. ضع العين منزوعة النواة في واحد إلى خمسة ملليلتر من 4٪ جلوتارالدهيد لمدة لا تقل عن 15 دقيقة قبل نقل العضو إلى واحد إلى خمسة ملليلتر من 10٪ فورمالديهايد لمدة 24 ساعة على الأقل.بعد تلطيخ الأنسجة النسيجية ، وفقا للبروتوكولات القياسية ، تم تعيين درجات على مقياس من صفر إلى ثلاثة بناء على مستوى تسلل الخلايا المناعية ودرجة تلف الشبكية. تصنف التغيرات القاعية أثناء تطور المرض على أنها تغيرات التهابية تشمل أنسجة الشبكية والتهاب الأوعية الدموية والقرص البصري والأضرار الهيكلية للشبكية بالإضافة إلى التغيرات النسيجية القائمة على تسلل الخلايا المناعية والإعاقات الهيكلية. يمكن تصنيف هذه التغيرات السريرية والنسيجية المرضية وتسجيلها لتقييم تطور المرض وتقييم فعالية التدخل العلاجي.تسرب الأوعية الدموية هو أيضا سمة مرضية للنموذج والتهاب القزحية البشري. كما هو موضح في هذا التحليل ، يمكن استخدام الفلوريسئين لتصور تسرب الأوعية الدموية كقراءة أخرى لهذا النموذج. من الضروري للباحثين التأكد من تحضير المستحلب بشكل صحيح دون علامات الفصل بين المحاليل.يجب خلطها جيدا ويجب أن يكون المنتج النهائي ناعم الملمس. يمكن دمج هذا الإجراء مع طرق أخرى لإدارة الدواء والقياس الخلوي للتنميط الظاهري الذي يتسلل إلى مجموعات الخلايا المناعية في شبكية العين.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Experimental Metastasis and CTL Adoptive Transfer Immunotherapy Mouse Model

الإنبثاث التجريبية وCTL المناعي نقل بالتبني النموذجي ماوس

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into ...

Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis

إعداد مستمنع ماوس النخامية للتحريض التهاب النخامية الذاتية التجريبي

Autoimmune hypophysitis is a chronic inflammation of the pituitary gland caused or accompanied by autoimmunity1.  It has traditionally been considered a ...

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

تحريض التهاب النخامية الذاتية التجريبية في الفئران SJL

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

التغلب على عدم التجاوب في التجارب الذاتية التهاب الدماغ (EAE) سلالات الفئران المقاومة للنقل بواسطة بالتبني والتحدي الأنتيجين

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an inflammatory disease of the central nervous system (CNS) and has been used as an animal model for ...

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein (MOG35-55) Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) in C57BL/6 Mice

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein MOG35-55 Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE in C57BL/6 Mice

المايلين دبقية قليلة التغصن جلايكوبروتين (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) المستحثة التجريبية المناعة الذاتية التهاب الدماغ (EAE) في C57BL / 6 الفئران

Multiple sclerosis is a chronic neuroinflammatory demyelinating disorder of the central nervous system with a strong neurodegenerative component. While ...

Isolation of Infiltrating Leukocytes from Mouse Skin Using Enzymatic Digest and Gradient Separation

عزل التسلل الكريات البيض من ماوس الجلد عن طريق الأنزيمية دايجست والفصل التدرج

Dissociating murine skin into a single cell suspension is essential for downstream cellular analysis such as the characterization of infiltrating immune ...

Simple and Efficient Production and Purification of Mouse Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein for Experimental Autoimmune Encephalomyelitis Studies

إنتاج بسيطة وفعالة وتنقية ماوس المايلين دبقية قليلة التغصن البروتين السكري لالتجريبية المناعة الذاتية الدراسات التهاب الدماغ

Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS), thought to occur as a result of autoimmune responses ...

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

و إيل-8 عابر نموذج الماوس المعدلة وراثيا ل<em&gt; في فيفو</em&gt; رصد طويل الأمد للردود الالتهابية

Airway inflammation is often associated with bacterial infections and represents a major determinant of lung disease. The in vivo determination of the ...

Effects of Taste Signaling Protein Abolishment on Gut Inflammation in an Inflammatory Bowel Disease Mouse Model

آثار الذوق مما يشير إلى إلغاء البروتين على التهاب الأمعاء في طراز ماوس مرض التهاب الأمعاء

Inflammatory bowel disease (IBD) is one of the immune-related gastrointestinal disorders, including ulcerative colitis and Crohn's disease, that affects ...

High-Efficiency Generation of Antigen-Specific Primary Mouse Cytotoxic T Cells for Functional Testing in an Autoimmune Diabetes Model

توليد عالي الكفاءة من الخلايا T السامة للماوس الأولية الخاصة بالمستضد للاختبار الوظيفي في نموذج مرض السكري المناعي الذاتي

Type 1 Diabetes (T1D) is characterized by islet-specific autoimmunity leading to beta cell destruction and absolute loss of insulin production. In the ...