Name: experimental autoimmune uveitis: an intraocular inflammatory mouse model
Uploaded: 2022-01-12T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Experimental Autoimmune Uveitis: An Intraocular Inflammatory Mouse Model at JoVE.com

JG blev tildelt en UCL Impact Studentship og Rosetrees Trust finansiering til støtte for CB. VC modtog et forskningssamarbejdsstipendium fra Akari Therapeutics Inc. Vi vil gerne takke UCL Institute of Ophthalmology, Biological Service Unit, især fru Alison O'Hara og hendes team for deres tekniske support.

Alle forsøg blev udført i overensstemmelse med UK Animals (Scientific Procedures) Act of 1986 og Institutional Animal Welfare and Ethical Review Body (AWERB) retningslinjer.
1. Husing af C57BL/6J-mus
<ol><li>Husmus i et specifikt patogenfrit miljø på en 12 timers lys-mørk cyklus og mad og vand til rådighed ad libitum.</li>
	<li>Udfør alle forsøg på voksne kvindelige C57BL/6J (kvinder vælges fortrinsvis, da der er en forekomst af kvinder til mænd 1,4 til 1 hos uveitispatie...

<ol>
	<li>Lyu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TMP778,+a+selective+inhibitor+of+RORgammat,+suppresses+experimental+autoimmune+uveitis+development,+but+affects+both+Th17+and+Th1+cell+populations.">TMP778, a selective inhibitor of RORgammat, suppresses experimental autoimmune uveitis development, but affects both Th17 and Th1 cell populations.</a> The European Journal of Immunology. 48, 1810-1816 (2018).</li><li>Klaska, I. P., Forrester, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+autoimmune+uveitis.">Mouse models of autoimmune uveitis.</a> Current Pharmaceutical Design. 21, 2453-2467 (2015).</li><li>Eskandarpour, M., Alexander, R., Adamson, P., Calder, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+Inhibition+of+Bromodomain+Proteins+Suppresses+Retinal+Inflammatory+Disease+and+Downregulates+Retinal+Th17+Cells.">Pharmacological Inhibition of Bromodomain Proteins Suppresses Retinal Inflammatory Disease and Downregulates Retinal Th17 Cells.</a> The Journal of Immunology. 198, 1093-1103 (2017).</li><li>Mochizuki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+and+clinical+study+of+FK506+in+uveitis.">Preclinical and clinical study of FK506 in uveitis.</a> Current Eye Research. 11, 87-95 (1992).</li><li>Nguyen, Q. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravitreal+Sirolimus+for+the+Treatment+of+Noninfectious+Uveitis:+Evolution+through+Preclinical+and+Clinical+Studies.">Intravitreal Sirolimus for the Treatment of Noninfectious Uveitis: Evolution through Preclinical and Clinical Studies.</a> Ophthalmology. 125, 1984-1993 (2018).</li><li>Leal, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-TNF+Drugs+for+Chronic+Uveitis+in+Adults-A+Systematic+Review+and+Meta-Analysis+of+Randomized+Controlled+Trials.">Anti-TNF Drugs for Chronic Uveitis in Adults-A Systematic Review and Meta-Analysis of Randomized Controlled Trials.</a> Frontiers in Medicine (Lausanne). 6, 104 (2019).</li><li>Chen, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functionally+distinct+IFN-?++IL-17A++Th+cells+in+experimental+autoimmune+uveitis:+T-cell+heterogeneity,+migration,+and+steroid+response.">Functionally distinct IFN-?+ IL-17A+ Th cells in experimental autoimmune uveitis: T-cell heterogeneity, migration, and steroid response.</a> European Journal of Immunology. 50 (12), 1941-1951 (2020).</li><li>Xu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+clinical+grading+system+for+retinal+inflammation+in+the+chronic+model+of+experimental+autoimmune+uveoretinitis+using+digital+fundus+images.">A clinical grading system for retinal inflammation in the chronic model of experimental autoimmune uveoretinitis using digital fundus images.</a> Experimental Eye Research. 87, 319-326 (2008).</li><li>Copland, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+time-course+of+experimental+autoimmune+uveoretinitis+using+topical+endoscopic+fundal+imaging+with+histologic+and+cellular+infiltrate+correlation.">The clinical time-course of experimental autoimmune uveoretinitis using topical endoscopic fundal imaging with histologic and cellular infiltrate correlation.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 49, 5458-5465 (2008).</li><li>Dick, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Doyne+lecture+2016:+intraocular+health+and+the+many+faces+of+inflammation.">Doyne lecture 2016: intraocular health and the many faces of inflammation.</a> Eye (Lond). 31, 87-96 (2017).</li><li>Agarwal, R. K., Silver, P. B., Caspi, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+experimental+autoimmune+uveitis.">Rodent models of experimental autoimmune uveitis.</a> Methods in Molecular Biology. 900, 443-469 (2012).</li><li>Caspi, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+look+at+autoimmunity+and+inflammation+in+the+eye.">A look at autoimmunity and inflammation in the eye.</a> Journal of Clininical Investigation. 120, 3073-3083 (2010).</li><li>Caspi, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+experimental+autoimmune+uveitis.">Mouse models of experimental autoimmune uveitis.</a> Ophthalmic Research. 40, 169-174 (2008).</li><li>Shao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severe+chronic+experimental+autoimmune+uveitis+(EAU)+of+the+C57BL/6+mouse+induced+by+adoptive+transfer+of+IRBP1-20-specific+T+cells.">Severe chronic experimental autoimmune uveitis (EAU) of the C57BL/6 mouse induced by adoptive transfer of IRBP1-20-specific T cells.</a> Experimental Eye Research. 82, 323-331 (2006).</li><li>Horai, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiota-Dependent+Activation+of+an+Autoreactive+T+Cell+Receptor+Provokes+Autoimmunity+in+an+Immunologically+Privileged+Site.">Microbiota-Dependent Activation of an Autoreactive T Cell Receptor Provokes Autoimmunity in an Immunologically Privileged Site.</a> Immunity. 43, 343-353 (2015).</li><li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+induced+vs.+spontaneous+models+of+autoimmune+uveitis+targeting+the+interphotoreceptor+retinoid+binding+protein.">Comparative analysis of induced vs. spontaneous models of autoimmune uveitis targeting the interphotoreceptor retinoid binding protein.</a> PLoS One. 8, 72161 (2013).</li><li>Chen, J., Qian, H., Horai, R., Chan, C. C., Caspi, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+optical+coherence+tomography+and+electroretinography+to+evaluate+retinal+pathology+in+a+mouse+model+of+autoimmune+uveitis.">Use of optical coherence tomography and electroretinography to evaluate retinal pathology in a mouse model of autoimmune uveitis.</a> PLoS One. 8, 63904 (2013).</li><li>Harry, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+autoimmune+retinal+disease+by+lovastatin+does+not+require+Th2+cytokine+induction.">Suppression of autoimmune retinal disease by lovastatin does not require Th2 cytokine induction.</a> Journal of Immunology. 174, 2327-2335 (2005).</li></ol>

Eksperimentelle dyremodeller er nødvendige værktøjer til at studere sygdomspatogenese og præklinisk afprøvning af nye terapeutiske paradigmer. I den nuværende protokol har vi diskuteret en metode til inducering, overvågning og scoring af EAU, en eksperimentel model af intraokulær inflammatorisk uveitis. Denne EAU-model har mere end 95% sygdomsforekomst, når alle procedurer udføres i henhold til protokollen beskrevet heri, og resulterer i udvikling af kronisk, monofasisk EAU. For at opnå dette incidensniveau un...

Denne protokol vil demonstrere, hvordan man inducerer eksperimentel autoimmun uveitis (EAU) i C57BL/6J-musen ved en enkelt subkutan injektion af et retinalt antigen i en emulgeret adjuvans. Metoder til overvågning og vurdering af sygdomsprogression vil blive detaljeret gennem fundoskopisk billeddannelse og histologisk undersøgelse med måleparametre skitseret indeni. Derudover vil fluorescein angiografi, en teknik til undersøgelse af retinal blodkarstruktur og permeabilitet blive diskuteret.
Denne EAU-model rekapitulerer centrale træk ved ikke-infektiøs posterior uveitis hos mennesker med hensyn til klinisk-atologiske egenskaber og de grundlæggende cellulære og molekylære mekanismer, der driver sygdom. EAU medieres af Th1- og/eller Th17-undergrupper af selvreaktive CD4+T-lymfocytter, som vist i adoptivoverførselsforsøg og med IFNγ-depleterede mus1. Meget af vores forståelse af disse cellers potentielle roller i uveitis kommer fra at studere EAU2, hvor både Th1- og Th17-celler detekteres i nethindevævet3. Ofte bruges EAU som en præklinisk model til at vurdere nytten af nye terapier til dæmpning af sygdom. Terapeutiske tilgange, der med succes har moduleret EAU-sygdom, har vist en vis effektivitet i klinikken og nået FDA-godkendt status. Eksempler på disse er grupper af immunregulerende lægemidler såsom T-cellemålretningsterapier: cyclosporin, FK-506 og rapamycin 4,5,6. For nylig er interventioner rettet mod nye veje også blevet undersøgt i denne model for at undersøge både mekanisme og effekt på sygdomsresultatet. Disse omfatter målretning transkriptionel regulering gennem kromatinlæser, Bromodomain Extra-Terminal (BET) proteiner og P-TEFb-hæmmere3. Desuden har mere konventionelle tilgange såsom en VLA-4-hæmmer for nylig vist undertrykkelse i EAU via modulering af effektor CD4 + T-celler7. Derudover har målretning af Th17-celler med TMP778, en RORγt invers agonist, også vist sig at undertrykke EAU8 betydeligt. Desuden giver denne model mulighed for at studere kronisk autoimmun inflammation i nethinden og de ledsagende underliggende mekanismer såsom lymfocytpriming.
De primære udlæsninger til EAU prækliniske undersøgelser er klinisk vurdering ved at udføre retinal fundoskopibilleddannelse og mindre hyppigt ved at vurdere retinal integritet ved optisk kohærenstomografi (OCT). Retinal histopatologisk evaluering og immunofænotypning af retinale celler ved flowcytometri udføres derefter ved afslutning. Fundoskopi er et brugervenligt levende billeddannelsessystem, der giver mulighed for hurtig og reproducerbar klinisk vurdering af hele nethinden. Til immunohistokemiske vurderinger er teknikkerne baseret på forberedelse af retinale sektioner, der giver os mulighed for at studere vævsarkitektur for graden af inflammation og strukturel skade9. Vurderingskriterierne og de konventionelle pointsystemer for alle anvendte teknikker vil blive beskrevet i denne protokol. Omfanget af skader registreret ved hjælp af fundoskopisk billeddannelse korrelerer ofte tæt med histologiske ændringer. Denne dobbelte tilgang til overvågning og vurdering af sygdommens sværhedsgrad giver større følsomhed og mere pålidelige måleresultater.
EAU er en veletableret, almindeligt anvendt model til præklinisk test og undersøgelse af immunmedieret øjensygdom. Denne model er pålidelig og reproducerbar med >95% sygdomsforekomst og genererer omfattende data, der kan bruges til at validere eller afvise nye terapier til behandling af intraokulær inflammatorisk sygdom, der repræsenterer en væsentlig årsag til blindhed i den erhvervsaktive alderpå verdensplan 10.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>antisedan</td>
			<td>ZOETIS, USA</td>
			<td></td>
			<td>for waking up</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete Freund&#8217;s Adjuvant; CFA</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>F5881</td>
			<td>for immunisation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Domitor</td>
			<td>Orion Pharma, Finland</td>
			<td></td>
			<td>for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flourescein</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>F2456</td>
			<td>for Angiography</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IRBP1-20</td>
			<td>Chamberidge peptide, UK</td>
			<td></td>
			<td>peptide;antigen&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Orion Pharma, Finland</td>
			<td></td>
			<td>for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micron III</td>
			<td>Phoenix Research, USA</td>
			<td></td>
			<td>for fundoscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Serum</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>M5905</td>
			<td>for immunisation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mycobacterium terberculosis</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>344289</td>
			<td>for immunisation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pertussis Toxin</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>P2980</td>
			<td>for immunisation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phenylephrine hydrochloride 2.5%&#160;</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb UK&#160;</td>
			<td>PHEN25</td>
			<td>for dilation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide 1%</td>
			<td>SANDOZ</td>
			<td></td>
			<td>for dilation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Viscotears</td>
			<td>WELDRICKS Pharmacy, UK</td>
			<td>2082642</td>
			<td>for eye lubrication</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

experimental autoimmune uveitis: an intraocular inflammatory mouse model

Eksperimentel autoimmun uveitis (EAU) drives af immunceller, der reagerer på selvantigener. Mange træk ved denne ikke-infektiøse, intraokulære inflammatoriske sygdomsmodel rekapitulerer den kliniske fænotype af posterior uveitis, der påvirker mennesker. EAU er blevet brugt pålideligt til at studere effekten af nye inflammatoriske behandlinger, deres virkningsmekanisme og til yderligere at undersøge de mekanismer, der understøtter sygdomsprogression af intraokulære lidelser. Her giver vi en detaljeret protokol om EAU-induktion i C57BL/6J-musen - den mest anvendte modelorganisme med modtagelighed for denne sygdom. Klinisk vurdering af sygdommens sværhedsgrad og progression vil blive demonstreret ved hjælp af fundoskopi, histologisk undersøgelse og fluorescein angiografi. Induktionsproceduren involverer subkutan injektion af en emulsion indeholdende et peptid (IRBP1-20) fra det okulære protein interfotoreceptor retinoidbindende protein (også kendt som retinolbindende protein 3), Complete Freunds Adjuvans (CFA) og suppleret med dræbt Mycobacterium tuberculosis. Injektion af denne viskøse emulsion på bagsiden af nakken efterfølges af en enkelt intraperitoneal injektion af Bordetella pertussis-toksin . Ved symptomdebut (dag 12-14) og under generel anæstesi tages fundoskopiske billeder for at vurdere sygdomsprogression gennem klinisk undersøgelse. Disse data kan sammenlignes direkte med dem på senere tidspunkter og peak disease (dag 20-22) med forskelle analyseret. Samtidig giver denne protokol efterforskeren mulighed for at vurdere potentielle forskelle i karpermeabilitet og skade ved hjælp af fluorescein angiografi. EAU kan induceres i andre musestammer - både vildtype eller genetisk modificeret - og kombineres med nye terapier, der giver fleksibilitet til at studere lægemiddeleffektivitet og / eller sygdomsmekanismer.

I denne protokol beskriver vi en trinvis metode til at inducere en model af eksperimentel autoimmun uveitis (EAU) ved at immunisere mus med et uveitogent retinalt peptid afledt af IRBP. Vurdering af sygdomme, hvor der anvendes almindeligt anvendte og let tilgængelige metoder, er omfattet, selv om disse ikke udelukker og kan suppleres med eller delvis erstattes af andre billeddiagnostiske teknikker. De første tegn på EAU hos C57BL/6J-mus kan påvises to uger efter immunisering, og maksimal sygdom nås inden for tre uge...

Watch this Scientific Journal Video about Experimental Autoimmune Uveitis: An Intraocular Inflammatory Mouse Model at JoVE.com

Experimental Autoimmune Uveitis: An Intraocular Inflammatory Mouse Model

I denne rapport præsenterer vi en protokol, der gør det muligt for efterforskeren at generere en musemodel af intraokulær uveitis. Mere almindeligt omtalt som eksperimentel autoimmun uveitis (EAU), fanger denne etablerede model mange aspekter af menneskelig sygdom. Heri vil vi beskrive, hvordan man inducerer og overvåger sygdomsprogression ved hjælp af flere aflæsninger.

Eksperimentel autoimmun uveitis: En intraokulær inflammatorisk musemodel

Experimental Autoimmune Uveitis (EAU) is driven by immune cells responding to self-antigens. Many features of this non-infectious, intraocular ...

Denne model kan bruges til at studere cellulære mekanismer, der involverer patogenesen af immunmedieret human posterior uveitis. Implikationen af denne teknik strækker sig mod translationel undersøgelse af human uveitis i overvågningen af ny lægemiddeleffektivitet og for at give mekanistisk indsigt i kemisk sygdomsprogression. Den største fordel ved at bruge denne model er pålideligheden af sygdomsinduktion og anvendelse af ikke-invasive endoskopiske teknikker, der giver os mulighed for at overvåge sygdomsprogression.Her beskriver vi, hvordan man inducerer sygdommen og vurderer patologien ved hjælp af flere aflæsninger For at forberede IRBP 1-20 komplet Freunds adjuvans eller CFA, resuspenderes en beregnet mængde peptid i et minimumsvolumen på 100% DMSO. Når pulveret er helt opløst, tilsættes små mængder PBS til glasset, indtil det når det endelige beregnede volumen PBS i henhold til antallet af mus, der skal injiceres, under forsigtig omrøring for at blande opløsningen. Efter fremstilling af den komplette Freunds adjuvans pipetteres opløsningen forsigtigt og hyppigt til dannelse af en viscus og jævnt fordelt emulsion, mens DMSO PBS-peptidopløsningen tilsættes dråbevis i et en-til-en-forhold til suspensionen.For at lufte opløsningerne skal du bruge en 1000 mikroliter pipette indstillet til 700 mikroliter til gentagne gange at pipette opløsningen, indtil der er opnået en tyk, cremet emulsion. Før du injicerer peptidsuspensionen, skal du placere hver mus, der skal injiceres, i et separat bur og bruge en milliliter sprøjte udstyret med en 23 gauge nål til intraperitoneal levere 1,5 mikrogram Bordetella pertussis-toksin i 100 mikroliter RPMI 1640 medium suppleret med 1% museserum til hvert dyr. Når kighostetoksinopløsning er blevet injiceret, skal musen holdes i en skrubbelignende position, og huden klemmes for at danne en teltlignende struktur på bagsiden af nakken.Træk nålen til mellemrummet mellem finger og tommelfinger, og injicer 200 mikroliter IRBP-emulsion på telthuden, idet trykket opretholdes efter injektionen, og nålehovedet roteres for at lukke huden, før den trækkes tilbage. For at score den kliniske sygdom bekræfter du på dag 21 efter injektion manglende respons på kronbladrefleks i den bedøvede peptidinjicerede mus og fastholder dyret i en scruff. Topisk påføres 1% tropamid og 2% phenylephrin på hornhinden i hvert øje umiddelbart efter injektion.Når pupillerne er fuldt udvidede, skal du placere musen på et specialbygget mikroskopstadium. Placer mikroskopet for fuld adgang til nethinden. Juster øjestykket under hele billeddannelsesprocessen efter behov for at se synsskiven og nethinden og få billeder af hele nethindeområdet, justere og dække alle hjørner af periferien.For at måle beholderlækage skal du administrere 100 mikroliter 2% fluorescein subkutant bag på nakken og flytte musen, så nethinden er centreret midt på det levende billede. Indstil fundoskopet til et blåt lys excitationsfilter ved 465 til 490 nanometer, før du får et billede af hver på 1,5 og syv minutter efter fluorescerende injektion. Når alle billederne er erhvervet, skal du intraperitonealt levere en anti-sedation injicerbar til genopretning og placere musen i et bur på en forvarmet måtte med adgang til våd gennemblødt kost med overvågning, indtil musen genvinder bevidstheden.For klinisk sygdomsscoring af billederne skal du basere den kliniske vurdering på sværhedsgraden af optisk diskbetændelse, retinal karmanchet, retinal vævsinfiltrat og strukturel skade. Scor hver af disse parametre på en skala fra en til fem. Den samlede total er repræsentativ for den kliniske sygdom for hele øjet med en maksimal score på 20 opnåelige pr. øje.Efter fundusbilleddannelse for det endelige kliniske endepunkt for undersøgelsen aflives musen. Til histologisk analyse skal du skille øjenlågene fra hinanden for adgang til hele øjet og derefter placere buede tang bag kloden for at forstå det orbitale bindevæv og synsnerven og enukleere øjet. Placer det enukleerede øje i en til fem ml 4% glutaraldehyd i mindst 15 minutter, før organet overføres til en til fem milliliter 10% formaldehyd i mindst 24 timer.Efter histologisk vævsfarvning tildeles ifølge standardprotokoller score på en skala fra nul til tre baseret på niveauet af immuncelleinfiltration og graden af retinal skade. Fundoskopiske ændringer klassificeres under sygdomsprogression som inflammatoriske ændringer, der omfatter retinal væv og vaskulær og optisk diskbetændelse og retinal strukturel skade ud over histologiske ændringer baseret på infiltrerende immunceller og strukturelle svækkelser. Disse kliniske og histopatologiske ændringer kan klassificeres og scores for at vurdere sygdomsprogression og evaluere terapeutisk interventionseffekt.Vaskulær lækage er også et patologisk træk ved modellen og human uveitis. Som illustreret i denne analyse kan fluorescein bruges til at visualisere vaskulær lækage som en anden aflæsning af denne model. Det er vigtigt for forskere at sikre, at emulsionen fremstilles korrekt uden tegn på adskillelse mellem opløsningerne.De skal blandes grundigt, og slutproduktet skal være glat i tekstur. Denne procedure kan kombineres med andre metoder til lægemiddeladministration og med for cytometri til fænotypebestemmelse infiltrerende retinale immuncellepopulationer.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Experimental Metastasis and CTL Adoptive Transfer Immunotherapy Mouse Model

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into ...

Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis

Autoimmune hypophysitis is a chronic inflammation of the pituitary gland caused or accompanied by autoimmunity1.  It has traditionally been considered a ...

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Overvinde unresponsiveness i eksperimentel autoimmun encephalomyelitis (EAE) Resistente musestammer ved adoptiv overførsel og antigenudfordring

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an inflammatory disease of the central nervous system (CNS) and has been used as an animal model for ...

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein (MOG35-55) Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) in C57BL/6 Mice

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein MOG35-55 Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE in C57BL/6 Mice

Myelin oligodendrocyt Glycoprotein (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) Induceret eksperimentel autoimmun encephalomyelitis (EAE) i C57BL / 6 mus

Multiple sclerosis is a chronic neuroinflammatory demyelinating disorder of the central nervous system with a strong neurodegenerative component. While ...

Isolation of Infiltrating Leukocytes from Mouse Skin Using Enzymatic Digest and Gradient Separation

Isolering af leukocytter fra musehud anvendelse af enzymatiske Digest og Gradient Separation

Dissociating murine skin into a single cell suspension is essential for downstream cellular analysis such as the characterization of infiltrating immune ...

Simple and Efficient Production and Purification of Mouse Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein for Experimental Autoimmune Encephalomyelitis Studies

Enkel og effektiv produktion og oprensning af Mouse Myelin oligodendrocyt Glycoprotein for Eksperimentel Autoimmune Encephalomyelitis Studies

Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS), thought to occur as a result of autoimmune responses ...

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

En IL-8 Transient Transgenized Mouse Model for<em&gt; In vivo</em&gt; Langsigtet overvågning af inflammatoriske reaktioner

Airway inflammation is often associated with bacterial infections and represents a major determinant of lung disease. The in vivo determination of the ...

Effects of Taste Signaling Protein Abolishment on Gut Inflammation in an Inflammatory Bowel Disease Mouse Model

Virkningerne af smag signalerer Protein afskaffelse på Gut betændelse i en inflammatorisk tarm sygdom musen Model

Inflammatory bowel disease (IBD) is one of the immune-related gastrointestinal disorders, including ulcerative colitis and Crohn's disease, that affects ...

High-Efficiency Generation of Antigen-Specific Primary Mouse Cytotoxic T Cells for Functional Testing in an Autoimmune Diabetes Model

Højeffektiv generation af antigen-specifikke primære mus cytotoksiske T-celler til funktionel testning i en autoimmun diabetes model

Type 1 Diabetes (T1D) is characterized by islet-specific autoimmunity leading to beta cell destruction and absolute loss of insulin production. In the ...