Name: experimental autoimmune uveitis: an intraocular inflammatory mouse model
Uploaded: 2022-01-12T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Experimental Autoimmune Uveitis: An Intraocular Inflammatory Mouse Model at JoVE.com

JG a reçu une bourse d’études UCL Impact et un financement Rosetrees Trust pour soutenir CB. VC a reçu une subvention de collaboration de recherche d’Akari Therapeutics Inc. Nous tenons à remercier l’Institut d’ophtalmologie de l’UCL, l’unité de service biologique, en particulier Mme Alison O’Hara et son équipe pour leur soutien technique.

Toutes les expériences ont été réalisées conformément à la loi britannique sur les animaux (procédures scientifiques) de 1986 et aux directives institutionnelles de l’Animal Welfare and Ethical Review Body (AWERB).
1. Boîtier de souris C57BL/6J
<ol><li>Souris domestiques dans un environnement spécifique exempt d’agents pathogènes, sur un cycle lumière-obscurité de 12 heures et nourriture et eau disponibles ad libitum.</li>
	<li>Effectuer toutes les expériences sur ...

<ol>
	<li>Lyu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TMP778,+a+selective+inhibitor+of+RORgammat,+suppresses+experimental+autoimmune+uveitis+development,+but+affects+both+Th17+and+Th1+cell+populations.">TMP778, a selective inhibitor of RORgammat, suppresses experimental autoimmune uveitis development, but affects both Th17 and Th1 cell populations.</a> The European Journal of Immunology. 48, 1810-1816 (2018).</li><li>Klaska, I. P., Forrester, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+autoimmune+uveitis.">Mouse models of autoimmune uveitis.</a> Current Pharmaceutical Design. 21, 2453-2467 (2015).</li><li>Eskandarpour, M., Alexander, R., Adamson, P., Calder, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+Inhibition+of+Bromodomain+Proteins+Suppresses+Retinal+Inflammatory+Disease+and+Downregulates+Retinal+Th17+Cells.">Pharmacological Inhibition of Bromodomain Proteins Suppresses Retinal Inflammatory Disease and Downregulates Retinal Th17 Cells.</a> The Journal of Immunology. 198, 1093-1103 (2017).</li><li>Mochizuki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+and+clinical+study+of+FK506+in+uveitis.">Preclinical and clinical study of FK506 in uveitis.</a> Current Eye Research. 11, 87-95 (1992).</li><li>Nguyen, Q. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravitreal+Sirolimus+for+the+Treatment+of+Noninfectious+Uveitis:+Evolution+through+Preclinical+and+Clinical+Studies.">Intravitreal Sirolimus for the Treatment of Noninfectious Uveitis: Evolution through Preclinical and Clinical Studies.</a> Ophthalmology. 125, 1984-1993 (2018).</li><li>Leal, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-TNF+Drugs+for+Chronic+Uveitis+in+Adults-A+Systematic+Review+and+Meta-Analysis+of+Randomized+Controlled+Trials.">Anti-TNF Drugs for Chronic Uveitis in Adults-A Systematic Review and Meta-Analysis of Randomized Controlled Trials.</a> Frontiers in Medicine (Lausanne). 6, 104 (2019).</li><li>Chen, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functionally+distinct+IFN-?++IL-17A++Th+cells+in+experimental+autoimmune+uveitis:+T-cell+heterogeneity,+migration,+and+steroid+response.">Functionally distinct IFN-?+ IL-17A+ Th cells in experimental autoimmune uveitis: T-cell heterogeneity, migration, and steroid response.</a> European Journal of Immunology. 50 (12), 1941-1951 (2020).</li><li>Xu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+clinical+grading+system+for+retinal+inflammation+in+the+chronic+model+of+experimental+autoimmune+uveoretinitis+using+digital+fundus+images.">A clinical grading system for retinal inflammation in the chronic model of experimental autoimmune uveoretinitis using digital fundus images.</a> Experimental Eye Research. 87, 319-326 (2008).</li><li>Copland, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+time-course+of+experimental+autoimmune+uveoretinitis+using+topical+endoscopic+fundal+imaging+with+histologic+and+cellular+infiltrate+correlation.">The clinical time-course of experimental autoimmune uveoretinitis using topical endoscopic fundal imaging with histologic and cellular infiltrate correlation.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 49, 5458-5465 (2008).</li><li>Dick, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Doyne+lecture+2016:+intraocular+health+and+the+many+faces+of+inflammation.">Doyne lecture 2016: intraocular health and the many faces of inflammation.</a> Eye (Lond). 31, 87-96 (2017).</li><li>Agarwal, R. K., Silver, P. B., Caspi, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+experimental+autoimmune+uveitis.">Rodent models of experimental autoimmune uveitis.</a> Methods in Molecular Biology. 900, 443-469 (2012).</li><li>Caspi, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+look+at+autoimmunity+and+inflammation+in+the+eye.">A look at autoimmunity and inflammation in the eye.</a> Journal of Clininical Investigation. 120, 3073-3083 (2010).</li><li>Caspi, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+experimental+autoimmune+uveitis.">Mouse models of experimental autoimmune uveitis.</a> Ophthalmic Research. 40, 169-174 (2008).</li><li>Shao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severe+chronic+experimental+autoimmune+uveitis+(EAU)+of+the+C57BL/6+mouse+induced+by+adoptive+transfer+of+IRBP1-20-specific+T+cells.">Severe chronic experimental autoimmune uveitis (EAU) of the C57BL/6 mouse induced by adoptive transfer of IRBP1-20-specific T cells.</a> Experimental Eye Research. 82, 323-331 (2006).</li><li>Horai, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiota-Dependent+Activation+of+an+Autoreactive+T+Cell+Receptor+Provokes+Autoimmunity+in+an+Immunologically+Privileged+Site.">Microbiota-Dependent Activation of an Autoreactive T Cell Receptor Provokes Autoimmunity in an Immunologically Privileged Site.</a> Immunity. 43, 343-353 (2015).</li><li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+induced+vs.+spontaneous+models+of+autoimmune+uveitis+targeting+the+interphotoreceptor+retinoid+binding+protein.">Comparative analysis of induced vs. spontaneous models of autoimmune uveitis targeting the interphotoreceptor retinoid binding protein.</a> PLoS One. 8, 72161 (2013).</li><li>Chen, J., Qian, H., Horai, R., Chan, C. C., Caspi, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+optical+coherence+tomography+and+electroretinography+to+evaluate+retinal+pathology+in+a+mouse+model+of+autoimmune+uveitis.">Use of optical coherence tomography and electroretinography to evaluate retinal pathology in a mouse model of autoimmune uveitis.</a> PLoS One. 8, 63904 (2013).</li><li>Harry, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+autoimmune+retinal+disease+by+lovastatin+does+not+require+Th2+cytokine+induction.">Suppression of autoimmune retinal disease by lovastatin does not require Th2 cytokine induction.</a> Journal of Immunology. 174, 2327-2335 (2005).</li></ol>

Les modèles animaux expérimentaux sont des outils nécessaires pour étudier la pathogenèse des maladies et les essais précliniques de nouveaux paradigmes thérapeutiques. Dans le protocole actuel, nous avons discuté d’une méthodologie pour induire, surveiller et noter EAU, un modèle expérimental d’uvéite inflammatoire intraoculaire. Ce modèle d’EAU a une incidence de plus de 95% de la maladie lorsque toutes les procédures sont effectuées conformément au protocole décrit dans le présent document, et ...

Ce protocole démontrera comment induire l’uvéite auto-immune expérimentale (EAU) chez la souris C57BL/6J par une injection sous-cutanée unique d’un antigène rétinien dans un adjuvant émulsionné. Les méthodes de surveillance et d’évaluation de la progression de la maladie seront détaillées au moyen de l’imagerie fundoscopique et de l’examen histologique, avec des paramètres de mesure décrits à l’intérieur. En outre, l’angiographie à la fluorescéine, une technique d’examen de la structure et de la perméabilité des vaisseaux sanguins de la rétine, sera discutée.
Ce modèle EAU récapitule les caractéristiques centrales de l’uvéite postérieure non infectieuse chez l’homme en ce qui concerne les caractéristiques clinicopathologiques et les mécanismes cellulaires et moléculaires de base qui conduisent la maladie. L’EAU est médiée par des sous-ensembles Th1 et/ou Th17 de lymphocytes CD4+T autoréactifs, comme le montrent les expériences de transfert adoptif et chez des souris appauvries en IFNγ1. Une grande partie de notre compréhension des rôles potentiels de ces cellules dans l’uvéite provient de l’étude de l’EAU2 où les cellules Th1 et Th17 sont détectées dans les tissus rétiniens3. Souvent, l’EAU est utilisée comme modèle préclinique pour évaluer l’utilité de nouvelles thérapies dans l’atténuation de la maladie. Les approches thérapeutiques qui ont réussi à moduler la maladie EAU ont montré une certaine efficacité en clinique et ont atteint le statut approuvé par la FDA. Des exemples de ceux-ci sont des groupes de médicaments immunorégulateurs tels que les thérapies ciblant les lymphocytes T: cyclosporine, FK-506 et rapamycine 4,5,6. Récemment, des interventions ciblant de nouvelles voies ont également été explorées dans ce modèle pour étudier à la fois le mécanisme et l’effet sur l’issue de la maladie. Il s’agit notamment de cibler la régulation transcriptionnelle par le lecteur de chromatine Bromodomain Extra-Terminal (BET) protéines et inhibiteurs de P-TEFb3. De plus, des approches plus conventionnelles telles qu’un inhibiteur de VLA-4 ont récemment démontré la suppression dans l’EAU via la modulation des lymphocytes T CD4+ effecteurs7. En outre, le ciblage des cellules Th17 avec TMP778, un agoniste inverse RORγt, s’est également avéré supprimer de manière significative l’EAU8. De plus, ce modèle offre la possibilité d’étudier l’inflammation auto-immune chronique dans la rétine et les mécanismes sous-jacents qui l’accompagnent tels que l’amorçage des lymphocytes.
Les résultats primaires des études précliniques sur l’eau sont l’évaluation clinique par imagerie par fundoscopie rétinienne et, moins fréquemment, par l’évaluation de l’intégrité rétinienne par tomographie par cohérence optique (OCT). L’évaluation histopathologique rétinienne et l’immunophénotypage des cellules rétiniennes par cytométrie de flux sont ensuite entrepris à la fin. Fundoscopy est un système d’imagerie en direct facile à utiliser qui permet une évaluation clinique rapide et reproductible de l’ensemble de la rétine. Pour les évaluations immunohistochimiques, les techniques sont basées sur la préparation de coupes rétiniennes qui nous permettent d’étudier l’architecture tissulaire pour le degré d’inflammation et de dommages structurels9. Les critères d’évaluation et les systèmes de notation conventionnels, pour toutes les techniques utilisées, seront décrits dans ce protocole. L’étendue des dommages enregistrés à l’aide de l’imagerie fundoscopique est souvent étroitement corrélée aux changements histologiques. Cette double approche de surveillance et d’évaluation de la gravité de la maladie offre une plus grande sensibilité et des résultats de mesure plus fiables.
L’EAU est un modèle bien établi et couramment utilisé pour les essais précliniques et l’investigation des maladies oculaires à médiation immunitaire. Ce modèle est fiable et reproductible avec >95% d’incidence de la maladie et génère des données complètes qui peuvent être utilisées pour valider ou répudier de nouvelles thérapies pour le traitement de la maladie inflammatoire intraoculaire qui représente une cause majeure de cécité en âge de travailler dans le monde10.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>antisedan</td>
			<td>ZOETIS, USA</td>
			<td></td>
			<td>for waking up</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete Freund&#8217;s Adjuvant; CFA</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>F5881</td>
			<td>for immunisation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Domitor</td>
			<td>Orion Pharma, Finland</td>
			<td></td>
			<td>for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flourescein</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>F2456</td>
			<td>for Angiography</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IRBP1-20</td>
			<td>Chamberidge peptide, UK</td>
			<td></td>
			<td>peptide;antigen&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Orion Pharma, Finland</td>
			<td></td>
			<td>for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micron III</td>
			<td>Phoenix Research, USA</td>
			<td></td>
			<td>for fundoscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Serum</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>M5905</td>
			<td>for immunisation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mycobacterium terberculosis</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>344289</td>
			<td>for immunisation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pertussis Toxin</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>P2980</td>
			<td>for immunisation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phenylephrine hydrochloride 2.5%&#160;</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb UK&#160;</td>
			<td>PHEN25</td>
			<td>for dilation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide 1%</td>
			<td>SANDOZ</td>
			<td></td>
			<td>for dilation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Viscotears</td>
			<td>WELDRICKS Pharmacy, UK</td>
			<td>2082642</td>
			<td>for eye lubrication</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

experimental autoimmune uveitis: an intraocular inflammatory mouse model

L’uvéite auto-immune expérimentale (EAU) est provoquée par des cellules immunitaires répondant à des auto-antigènes. De nombreuses caractéristiques de ce modèle de maladie inflammatoire intraoculaire non infectieuse récapitulent le phénotype clinique de l’uvéite postérieure chez l’homme. L’EAU a été utilisée de manière fiable pour étudier l’efficacité de nouveaux traitements inflammatoires, leur mode d’action et pour étudier plus avant les mécanismes qui sous-tendent la progression de la maladie des troubles intraoculaires. Ici, nous fournissons un protocole détaillé sur l’induction d’EAU chez la souris C57BL / 6J - l’organisme modèle le plus largement utilisé avec une sensibilité à cette maladie. L’évaluation clinique de la gravité et de la progression de la maladie sera démontrée à l’aide de la fundoscopie, de l’examen histologique et de l’angiographie à la fluorescéine. La procédure d’induction implique l’injection sous-cutanée d’une émulsion contenant un peptide (IRBP1-20) de la protéine de liaison au rétinoïde interphotorécepteur oculaire (également connue sous le nom de protéine de liaison au rétinol 3), adjuvant de Freund complet (CFA) et complétée par Mycobacterium tuberculosis. L’injection de cette émulsion visqueuse sur la nuque est suivie d’une seule injection intrapéritonéale de toxine Bordetella pertussis . Au début des symptômes (jours 12-14) et sous anesthésie générale, des images fundoscopiques sont prises pour évaluer la progression de la maladie par l’examen clinique. Ces données peuvent être directement comparées à celles des points temporels ultérieurs et du pic de la maladie (jours 20-22) avec des différences analysées. En même temps, ce protocole permet à l’investigateur d’évaluer les différences potentielles de perméabilité et de dommages des vaisseaux à l’aide de l’angiographie à la fluorescéine. L’EAU peut être induite dans d’autres souches de souris - à la fois de type sauvage ou génétiquement modifié - et combinée à de nouvelles thérapies offrant une flexibilité pour étudier l’efficacité des médicaments et / ou les mécanismes de la maladie.

Dans ce protocole, nous décrivons une méthode étape par étape pour induire un modèle d’uvéite auto-immune expérimentale (EAU) en immunisant des souris avec un peptide rétinien uveitogène dérivé de l’IRBP. L’évaluation de la maladie à l’aide d’approches largement utilisées et facilement accessibles est couverte, bien que celles-ci ne soient pas exclusives et puissent être ajoutées ou partiellement remplacées par d’autres techniques d’imagerie. Les premiers signes d’EAU chez les souris C57B...

Watch this Scientific Journal Video about Experimental Autoimmune Uveitis: An Intraocular Inflammatory Mouse Model at JoVE.com

Experimental Autoimmune Uveitis: An Intraocular Inflammatory Mouse Model

Dans ce rapport, nous présentons un protocole qui permet à l’investigateur de générer un modèle murin d’uvéite intraoculaire. Plus communément appelé uvéite auto-immune expérimentale (EAU), ce modèle établi englobe de nombreux aspects de la maladie humaine. Ici, nous décrirons comment induire et surveiller la progression de la maladie à l’aide de plusieurs lectures.

Uvéite auto-immune expérimentale : un modèle murin inflammatoire intraoculaire

Experimental Autoimmune Uveitis (EAU) is driven by immune cells responding to self-antigens. Many features of this non-infectious, intraocular ...

Ce modèle peut être utilisé pour étudier les mécanismes cellulaires impliquant la pathogenèse de l’uvéite postérieure humaine à médiation immunitaire. L’implication de cette technique s’étend à l’étude translationnelle de l’uvéite humaine dans le suivi de l’efficacité des nouveaux médicaments et pour fournir un aperçu mécaniste de la progression de la maladie chimique. Le principal avantage de l’utilisation de ce modèle est la fiabilité de l’induction de la maladie et l’utilisation de techniques endoscopiques non invasives qui nous permettent de surveiller la progression de la maladie.Ici, nous décrivons comment induire la maladie et évaluer la pathologie à l’aide de plusieurs lectures Pour préparer l’IRBP 1-20 complet Freund Adjuvant ou CFA, remettez en suspension une quantité calculée du peptide dans un volume minimum de 100% DMSO. Lorsque la poudre est complètement dissoute, ajouter de petits volumes de PBS dans le tube jusqu’à atteindre le volume final calculé de PBS en fonction du nombre de souris à injecter en agitant doucement pour mélanger la solution. Après avoir préparé l’adjuvant de Freund complet, pipeter doucement et fréquemment la solution pour former un visque et une émulsion uniformément répartie tout en ajoutant la solution de peptide PBS DMSO goutte à goutte à un rapport de un pour un à la suspension.Pour aérer les solutions, utilisez une pipette de 1000 microlitres réglée à 700 microlitres pour pipeter la solution à plusieurs reprises jusqu’à l’obtention d’une émulsion épaisse et crémeuse. Avant d’injecter la suspension peptidique, placez chaque souris à injecter dans une cage séparée et utilisez une seringue d’un millilitre équipée d’une aiguille de calibre 23 pour administrer par voie intrapéritonéale 1,5 microgramme de toxine Bordetella pertussis dans 100 microlitres de milieu RPMI 1640 supplémenté avec 1% de sérum de souris à chaque animal. Lorsque la solution de toxine de la coqueluche a été injectée, la souris doit être maintenue dans une position semblable à une peau et la peau pincée pour former une structure semblable à une tente à l’arrière du cou.Enfilez l’aiguille dans l’espace entre le doigt et le pouce et injectez 200 microlitres de l’émulsion IRBP sur la peau de la tente, en maintenant la pression après l’injection et en tournant la tête de l’aiguille pour fermer la peau avant la rétraction. Pour marquer la maladie clinique, le jour 21 après l’injection, confirmer un manque de réponse au réflexe pétal chez la souris injectée de peptide anesthésié et retenir l’animal dans une peau. Appliquer localement 1% de tropicamide et 2% de phényléphrine sur la cornée de chaque œil immédiatement après l’injection.Lorsque les pupilles sont complètement dilatées, placez la souris sur une platine de microscope spécialement conçue. Positionnez le microscope pour un accès complet à la rétine. Ajustez l’oculaire tout au long du processus d’imagerie si nécessaire pour voir le disque optique et la rétine et acquérir des images de toute la zone rétinienne, en ajustant et en couvrant tous les coins de la périphérie.Pour mesurer les fuites des vaisseaux, administrez 100 microlitres de fluorescéine à 2% par voie sous-cutanée à l’arrière du cou et repositionnez la souris de manière à ce que la rétine soit centrée au milieu de l’image en direct. Réglez le fundoscope sur un filtre d’excitation de la lumière bleue à 465 à 490 nanomètres avant d’acquérir une image de chacun à 1,5 et sept minutes après l’injection fluorescente. Lorsque toutes les images ont été acquises, administrer par voie intrapéritonéale un injectable anti-sédation pour la récupération et placer la souris dans une cage sur un tapis préchauffé avec accès à un régime humide trempé avec surveillance jusqu’à ce que la souris reprenne conscience.Pour la notation clinique de la maladie des images, basez l’évaluation clinique sur la gravité de l’inflammation du disque optique, de la coiffe des vaisseaux rétiniens, de l’infiltrat de tissu rétinien et des dommages structurels. Évaluez chacun de ces paramètres sur une échelle de un à cinq. Le total collectif est représentatif de la maladie clinique pour l’ensemble de l’œil avec un score maximum de 20 pouvant être obtenu par œil.Après l’imagerie du fond d’œil pour le critère clinique final de l’étude, euthanasier la souris. Pour l’analyse histologique, écartez les paupières pour accéder à l’œil entier, puis placez des pinces incurvées derrière le globe pour saisir le tissu conjonctif orbitaire et le nerf optique et énucléer l’œil. Placez l’œil énucléé dans un à cinq millilitres de 4% de glutaraldéhyde pendant au moins 15 minutes avant de transférer l’organe dans un à cinq millilitres de formaldéhyde à 10% pendant au moins 24 heures.Après coloration histologique des tissus, selon les protocoles standard, attribuer des scores sur une échelle de zéro à trois en fonction du niveau d’infiltration des cellules immunitaires et du degré de lésion rétinienne. Les changements fundoscopiques sont classés au cours de la progression de la maladie comme des changements inflammatoires qui comprennent l’inflammation du tissu rétinien et du disque vasculaire et optique et des dommages structurels rétiniens, en plus des changements histologiques basés sur l’infiltration des cellules immunitaires et les déficiences structurelles. Ces changements cliniques et histopathologiques peuvent être classés et notés pour évaluer la progression de la maladie et l’efficacité de l’intervention thérapeutique.Les fuites vasculaires sont également une caractéristique pathologique du modèle et de l’uvéite humaine. Comme illustré dans cette analyse, la fluorescéine peut être utilisée pour visualiser les fuites vasculaires comme une autre lecture de ce modèle. Il est essentiel pour les chercheurs de s’assurer que l’émulsion est préparée correctement sans signes de séparation entre les solutions.Ils doivent être soigneusement mélangés et le produit final doit être lisse dans la texture. Cette procédure peut être combinée avec d’autres méthodes d’administration de médicaments et avec pour la cytométrie pour le phénotypage infiltrant les populations de cellules immunitaires rétiniennes.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Experimental Metastasis and CTL Adoptive Transfer Immunotherapy Mouse Model

Métastases expérimentales et CTL Modèle adoptifs souris Transfert immunothérapie

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into ...

Recherche

Immunologie et infection

Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis

Préparation de la souris Immunogène hypophysaires pour l&#39;induction de hypophysite auto-immune expérimentale

Autoimmune hypophysitis is a chronic inflammation of the pituitary gland caused or accompanied by autoimmunity1.  It has traditionally been considered a ...

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

L&#39;induction de hypophysite auto-immune expérimentale chez la souris SJL

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Surmonter Absence de réaction dans encéphalomyélite allergique expérimentale (EAE) souches de souris résistantes par transfert adoptif et une stimulation antigénique

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an inflammatory disease of the central nervous system (CNS) and has been used as an animal model for ...

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein (MOG35-55) Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) in C57BL/6 Mice

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein MOG35-55 Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE in C57BL/6 Mice

Myéline Oligodendrocyte glycoprotéine (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) Induit encéphalomyélite allergique expérimentale (EAE) dans C57BL / 6

Multiple sclerosis is a chronic neuroinflammatory demyelinating disorder of the central nervous system with a strong neurodegenerative component. While ...

Isolation of Infiltrating Leukocytes from Mouse Skin Using Enzymatic Digest and Gradient Separation

Isolement de leucocytes infiltrant de la peau de souris Utilisation de digestion enzymatique et séparation par gradient

Dissociating murine skin into a single cell suspension is essential for downstream cellular analysis such as the characterization of infiltrating immune ...

Simple and Efficient Production and Purification of Mouse Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein for Experimental Autoimmune Encephalomyelitis Studies

Production et purification de souris myéline oligodendrocyte glycoprotéine simple et efficace pour auto-immune expérimentale encéphalomyélite études

Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS), thought to occur as a result of autoimmune responses ...

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

Un modèle de souris transmissible transitoirement IL-8 pour le<em&gt; In vivo</em&gt; Suivi à long terme des réponses inflammatoires

Airway inflammation is often associated with bacterial infections and represents a major determinant of lung disease. The in vivo determination of the ...

Effects of Taste Signaling Protein Abolishment on Gut Inflammation in an Inflammatory Bowel Disease Mouse Model

Effets du goût signalisation suppression de protéine sur l’Inflammation intestinale dans un modèle de souris de la maladie inflammatoire de l’intestin

Inflammatory bowel disease (IBD) is one of the immune-related gastrointestinal disorders, including ulcerative colitis and Crohn's disease, that affects ...

High-Efficiency Generation of Antigen-Specific Primary Mouse Cytotoxic T Cells for Functional Testing in an Autoimmune Diabetes Model

Génération à haut rendement de cellules T cytotoxiques cytotoxiques de souris primaires spécifiques à l'antigène pour les tests fonctionnels dans un modèle de diabète auto-immun

Type 1 Diabetes (T1D) is characterized by islet-specific autoimmunity leading to beta cell destruction and absolute loss of insulin production. In the ...