Name: experimental autoimmune uveitis: an intraocular inflammatory mouse model
Uploaded: 2022-01-12T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Experimental Autoimmune Uveitis: An Intraocular Inflammatory Mouse Model at JoVE.com

JG זכתה במימון UCL Impact Studentship ו-Rosetrees Trust לתמיכה ב-CB. VC קיבלה מענק שיתוף פעולה מחקרי מחברת Akari Therapeutics Inc. ברצוננו להודות למכון UCL לרפואת עיניים, ליחידת השירות הביולוגי ובמיוחד לגב' אליסון או'הרה ולצוותה על תמיכתם הטכנית.

כל הניסויים בוצעו בהתאם לחוק הבריטי לבעלי חיים (הליכים מדעיים) משנת 1986, ולהנחיות מוסדיות של הגוף לרווחת בעלי חיים וביקורת אתית (AWERB).
1. דיור עכברי C57BL/6J
<ol><li>עכברי בית בסביבה ספציפית נטולת פתוגנים, במחזור אור-חושך של 12 שעות ומזון ומים זמינים עד לליביטום.</li>
	<li>בצע את כל הני...

<ol>
	<li>Lyu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TMP778,+a+selective+inhibitor+of+RORgammat,+suppresses+experimental+autoimmune+uveitis+development,+but+affects+both+Th17+and+Th1+cell+populations.">TMP778, a selective inhibitor of RORgammat, suppresses experimental autoimmune uveitis development, but affects both Th17 and Th1 cell populations.</a> The European Journal of Immunology. 48, 1810-1816 (2018).</li><li>Klaska, I. P., Forrester, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+autoimmune+uveitis.">Mouse models of autoimmune uveitis.</a> Current Pharmaceutical Design. 21, 2453-2467 (2015).</li><li>Eskandarpour, M., Alexander, R., Adamson, P., Calder, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+Inhibition+of+Bromodomain+Proteins+Suppresses+Retinal+Inflammatory+Disease+and+Downregulates+Retinal+Th17+Cells.">Pharmacological Inhibition of Bromodomain Proteins Suppresses Retinal Inflammatory Disease and Downregulates Retinal Th17 Cells.</a> The Journal of Immunology. 198, 1093-1103 (2017).</li><li>Mochizuki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+and+clinical+study+of+FK506+in+uveitis.">Preclinical and clinical study of FK506 in uveitis.</a> Current Eye Research. 11, 87-95 (1992).</li><li>Nguyen, Q. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravitreal+Sirolimus+for+the+Treatment+of+Noninfectious+Uveitis:+Evolution+through+Preclinical+and+Clinical+Studies.">Intravitreal Sirolimus for the Treatment of Noninfectious Uveitis: Evolution through Preclinical and Clinical Studies.</a> Ophthalmology. 125, 1984-1993 (2018).</li><li>Leal, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-TNF+Drugs+for+Chronic+Uveitis+in+Adults-A+Systematic+Review+and+Meta-Analysis+of+Randomized+Controlled+Trials.">Anti-TNF Drugs for Chronic Uveitis in Adults-A Systematic Review and Meta-Analysis of Randomized Controlled Trials.</a> Frontiers in Medicine (Lausanne). 6, 104 (2019).</li><li>Chen, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functionally+distinct+IFN-?++IL-17A++Th+cells+in+experimental+autoimmune+uveitis:+T-cell+heterogeneity,+migration,+and+steroid+response.">Functionally distinct IFN-?+ IL-17A+ Th cells in experimental autoimmune uveitis: T-cell heterogeneity, migration, and steroid response.</a> European Journal of Immunology. 50 (12), 1941-1951 (2020).</li><li>Xu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+clinical+grading+system+for+retinal+inflammation+in+the+chronic+model+of+experimental+autoimmune+uveoretinitis+using+digital+fundus+images.">A clinical grading system for retinal inflammation in the chronic model of experimental autoimmune uveoretinitis using digital fundus images.</a> Experimental Eye Research. 87, 319-326 (2008).</li><li>Copland, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+time-course+of+experimental+autoimmune+uveoretinitis+using+topical+endoscopic+fundal+imaging+with+histologic+and+cellular+infiltrate+correlation.">The clinical time-course of experimental autoimmune uveoretinitis using topical endoscopic fundal imaging with histologic and cellular infiltrate correlation.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 49, 5458-5465 (2008).</li><li>Dick, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Doyne+lecture+2016:+intraocular+health+and+the+many+faces+of+inflammation.">Doyne lecture 2016: intraocular health and the many faces of inflammation.</a> Eye (Lond). 31, 87-96 (2017).</li><li>Agarwal, R. K., Silver, P. B., Caspi, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+experimental+autoimmune+uveitis.">Rodent models of experimental autoimmune uveitis.</a> Methods in Molecular Biology. 900, 443-469 (2012).</li><li>Caspi, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+look+at+autoimmunity+and+inflammation+in+the+eye.">A look at autoimmunity and inflammation in the eye.</a> Journal of Clininical Investigation. 120, 3073-3083 (2010).</li><li>Caspi, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+experimental+autoimmune+uveitis.">Mouse models of experimental autoimmune uveitis.</a> Ophthalmic Research. 40, 169-174 (2008).</li><li>Shao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severe+chronic+experimental+autoimmune+uveitis+(EAU)+of+the+C57BL/6+mouse+induced+by+adoptive+transfer+of+IRBP1-20-specific+T+cells.">Severe chronic experimental autoimmune uveitis (EAU) of the C57BL/6 mouse induced by adoptive transfer of IRBP1-20-specific T cells.</a> Experimental Eye Research. 82, 323-331 (2006).</li><li>Horai, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiota-Dependent+Activation+of+an+Autoreactive+T+Cell+Receptor+Provokes+Autoimmunity+in+an+Immunologically+Privileged+Site.">Microbiota-Dependent Activation of an Autoreactive T Cell Receptor Provokes Autoimmunity in an Immunologically Privileged Site.</a> Immunity. 43, 343-353 (2015).</li><li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+induced+vs.+spontaneous+models+of+autoimmune+uveitis+targeting+the+interphotoreceptor+retinoid+binding+protein.">Comparative analysis of induced vs. spontaneous models of autoimmune uveitis targeting the interphotoreceptor retinoid binding protein.</a> PLoS One. 8, 72161 (2013).</li><li>Chen, J., Qian, H., Horai, R., Chan, C. C., Caspi, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+optical+coherence+tomography+and+electroretinography+to+evaluate+retinal+pathology+in+a+mouse+model+of+autoimmune+uveitis.">Use of optical coherence tomography and electroretinography to evaluate retinal pathology in a mouse model of autoimmune uveitis.</a> PLoS One. 8, 63904 (2013).</li><li>Harry, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+autoimmune+retinal+disease+by+lovastatin+does+not+require+Th2+cytokine+induction.">Suppression of autoimmune retinal disease by lovastatin does not require Th2 cytokine induction.</a> Journal of Immunology. 174, 2327-2335 (2005).</li></ol>

מודלים ניסיוניים של בעלי חיים הם כלים הכרחיים לחקר פתוגנזה של מחלות ולבדיקה פרה-קלינית של פרדיגמות טיפוליות חדשות. בפרוטוקול הנוכחי, דנו במתודולוגיה להשראת, ניטור וניקוד EAU, מודל ניסיוני של אובאיטיס דלקתית תוך עינית. מודל EAU זה כולל שכיחות מחלה של יותר מ -95% כאשר כל ההליכים מבוצעים על פי הפר?...

פרוטוקול זה ידגים כיצד לגרום לאובאיטיס אוטואימונית ניסיונית (EAU) בעכבר C57BL/6J על ידי הזרקה תת-עורית יחידה של אנטיגן רשתית באדג'ובנט מתחלב. שיטות לניטור והערכה של התקדמות המחלה יפורטו באמצעות הדמיה פונדוסקופית ובדיקה היסטולוגית, עם פרמטרים למדידה המתוארים בהן. בנוסף, תידון אנגיוגרפיה פלואורסצאין, טכניקה לבחינת מבנה כלי הדם ברשתית וחדירות.
מודל EAU זה משחזר תכונות מרכזיות של אובאיטיס אחורית לא זיהומית בבני אדם ביחס למאפיינים קליניים-אופתולוגיים והמנגנונים התאיים והמולקולריים הבסיסיים המניעים מחלות. EAU מתווך על ידי תת-קבוצות Th1 ו / או Th17 של לימפוציטים CD4+T תגובתיים עצמיים, כפי שמוצג בניסויי העברה מאומצת ובעכברים מרוקנים IFNγ1. חלק גדול מההבנה שלנו של התפקידים הפוטנציאליים של תאים אלה באובאיטיס מגיע ממחקר EAU2, שבו תאי Th1 ו-Th17 מזוהים בתוך רקמות הרשתית3. לעתים קרובות, EAU משמש כמודל פרה-קליני להערכת התועלת של טיפולים חדשניים בהחלשת המחלה. גישות טיפוליות אשר הצליחו לווסת את מחלת EAU הראו יעילות מסוימת במרפאה והגיעו למעמד מאושר FDA. דוגמאות לכך הן קבוצות של תרופות אימונו-רגולטוריות כגון טיפולים ממוקדי תאי T: ציקלוספורין, FK-506 ורפמיצין 4,5,6. לאחרונה, התערבויות המכוונות למסלולים חדשים נחקרו גם במודל זה כדי לחקור הן את המנגנון והן את ההשפעה על תוצאות המחלה. אלה כוללים מיקוד ויסות שעתוק באמצעות קורא הכרומטין Bromodomain Extra-Terminal חלבונים (BET) ומעכבי P-TEFb3. יתר על כן, גישות קונבנציונליות יותר כגון מעכב VLA-4 הוכיחו לאחרונה דיכוי ב- EAU באמצעות אפנוןשל תאי T CD4+ 7. בנוסף, מיקוד תאי Th17 עם TMP778, אגוניסט הופכי RORγt, נמצא גם כמדכא באופן משמעותי את EAU8. יתר על כן, מודל זה מציע הזדמנות לחקור דלקת אוטואימונית כרונית ברשתית ואת המנגנונים הבסיסיים הנלווים כגון פריימינג לימפוציטים.
הקריאות העיקריות למחקרים פרה-קליניים של EAU הן הערכה קלינית על ידי ביצוע הדמיה פונדוסקופית רשתית ובתדירות נמוכה יותר, על ידי הערכת שלמות הרשתית על ידי טומוגרפיה קוהרנטית אופטית (OCT). הערכה היסטופתולוגית של הרשתית ואימונופנוטיפ של תאי הרשתית על ידי ציטומטריית זרימה מתבצעות לאחר מכן בסיום. פונדוסקופיה היא מערכת הדמיה חיה קלה לשימוש המאפשרת הערכה קלינית מהירה וניתנת לשחזור של הרשתית כולה. להערכות אימונוהיסטוכימיות, הטכניקות מבוססות על הכנת קטעי רשתית המאפשרים לנו ללמוד ארכיטקטורת רקמות למידת הדלקת והנזק המבני9. קריטריוני ההערכה ומערכות הניקוד הקונבנציונליות, עבור כל הטכניקות בהן נעשה שימוש, יפורטו במסגרת פרוטוקול זה. היקף הנזק שנרשם באמצעות הדמיה פונדוסקופית נמצא לעתים קרובות בקורלציה הדוקה עם שינויים היסטולוגיים. גישה כפולה זו לניטור והערכת חומרת המחלה מעניקה רגישות רבה יותר ותוצאות מדידה אמינות יותר.
EAU הוא מודל מבוסס היטב ונפוץ לבדיקה פרה-קלינית וחקירה של מחלות עיניים בתיווך מערכת החיסון. מודל זה אמין וניתן לשחזור עם שכיחות מחלה של >95% ומייצר נתונים מקיפים שניתן להשתמש בהם כדי לאמת או לדחות טיפולים חדשים לטיפול במחלה דלקתית תוך עינית המייצגת גורם עיקרי לעיוורון בגיל העבודה ברחבי העולם10.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>antisedan</td>
			<td>ZOETIS, USA</td>
			<td></td>
			<td>for waking up</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete Freund&#8217;s Adjuvant; CFA</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>F5881</td>
			<td>for immunisation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Domitor</td>
			<td>Orion Pharma, Finland</td>
			<td></td>
			<td>for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flourescein</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>F2456</td>
			<td>for Angiography</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IRBP1-20</td>
			<td>Chamberidge peptide, UK</td>
			<td></td>
			<td>peptide;antigen&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Orion Pharma, Finland</td>
			<td></td>
			<td>for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micron III</td>
			<td>Phoenix Research, USA</td>
			<td></td>
			<td>for fundoscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Serum</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>M5905</td>
			<td>for immunisation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mycobacterium terberculosis</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>344289</td>
			<td>for immunisation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pertussis Toxin</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>P2980</td>
			<td>for immunisation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phenylephrine hydrochloride 2.5%&#160;</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb UK&#160;</td>
			<td>PHEN25</td>
			<td>for dilation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide 1%</td>
			<td>SANDOZ</td>
			<td></td>
			<td>for dilation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Viscotears</td>
			<td>WELDRICKS Pharmacy, UK</td>
			<td>2082642</td>
			<td>for eye lubrication</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

experimental autoimmune uveitis: an intraocular inflammatory mouse model

אובאיטיס אוטואימונית ניסיונית (EAU) מונעת על ידי תאי מערכת החיסון המגיבים לאנטיגנים עצמיים. תכונות רבות של מודל מחלות דלקתיות תוך עיניות לא זיהומיות אלה משחזרות את הפנוטיפ הקליני של אובאיטיס אחורית המשפיעה על בני אדם. EAU שימש באופן אמין כדי לחקור את היעילות של טיפולים דלקתיים חדשניים, את אופן הפעולה שלהם ולחקור עוד יותר את המנגנונים העומדים בבסיס התקדמות המחלה של הפרעות תוך עיניות. כאן, אנו מספקים פרוטוקול מפורט על השראת EAU בעכבר C57BL/6J - אורגניזם המודל הנפוץ ביותר עם רגישות למחלה זו. הערכה קלינית של חומרת המחלה והתקדמותה תודגם באמצעות פונדוסקופיה, בדיקה היסטולוגית ואנגיוגרפיה פלואורסצאין. הליך האינדוקציה כולל הזרקה תת עורית של תחליב המכיל פפטיד (IRBP1-20) מחלבון העין אינטרפוטורצפטור רטינואיד (הידוע גם בשם חלבון קושר רטינול 3), אדג'ובנט שלם של פרוינד (CFA) ותוספת של Mycobacterium tuberculosis. הזרקה של תחליב צמיג זה על העורף ואחריה הזרקה intraperitoneal יחיד של Bordetella pertussis toxin . עם תחילת הסימפטומים (יום 12-14) ובהרדמה כללית, נלקחות תמונות פונדוסקופיות כדי להעריך את התקדמות המחלה באמצעות בדיקה קלינית. ניתן להשוות נתונים אלה ישירות לאלה בנקודות זמן מאוחרות יותר ובשיא המחלה (יום 20-22) עם ניתוח הבדלים. יחד עם זאת, פרוטוקול זה מאפשר לחוקר להעריך הבדלים פוטנציאליים בחדירות כלי הדם ובנזק באמצעות אנגיוגרפיה פלואורסצאין. EAU יכול להיות מושרה בזני עכברים אחרים - הן פראיים או מהונדסים גנטית - ובשילוב עם טיפולים חדשניים המציעים גמישות לחקר יעילות התרופה ו / או מנגנוני המחלה.

בפרוטוקול זה, אנו מתארים שיטה שלב אחר שלב לגרימת מודל של אובאיטיס אוטואימונית ניסיונית (EAU) על ידי חיסון עכברים בפפטיד רשתית uveitogenic הנגזר מ- IRBP. הערכת המחלה באמצעות גישות בשימוש נרחב ונגישות מכוסה, אם כי אלה אינן בלעדיות וניתן להוסיף אותן, או להחליף אותן חלקית, על ידי טכניקות הדמיה אחרות. הסי?...

Watch this Scientific Journal Video about Experimental Autoimmune Uveitis: An Intraocular Inflammatory Mouse Model at JoVE.com

Experimental Autoimmune Uveitis: An Intraocular Inflammatory Mouse Model

בדו"ח זה אנו מציגים פרוטוקול המאפשר לחוקר ליצור מודל עכבר של אובאיטיס תוך עינית. מודל מבוסס זה, המכונה בדרך כלל אובאיטיס אוטואימונית ניסיונית (EAU), לוכד היבטים רבים של מחלות אנושיות. במאמר זה נתאר כיצד לגרום ולנטר את התקדמות המחלה באמצעות מספר קריאות.

אובאיטיס אוטואימונית ניסיונית: מודל עכבר דלקתי תוך עיני

Experimental Autoimmune Uveitis (EAU) is driven by immune cells responding to self-antigens. Many features of this non-infectious, intraocular ...

מודל זה יכול לשמש לחקר מנגנונים תאיים המערבים את הפתוגנזה של אובאיטיס אחורית אנושית בתיווך מערכת החיסון. המשמעות של טכניקה זו מתרחבת למחקר תרגומי של אובאיטיס אנושית בניטור יעילות תרופות חדשות ובמתן תובנה מכניסטית להתקדמות מחלות כימיות. היתרון העיקרי בשימוש במודל זה הוא האמינות של השראת המחלה ושימוש בטכניקות אנדוסקופיות לא פולשניות המאפשרות לנו לעקוב אחר התקדמות המחלה.כאן אנו מתארים כיצד לגרום למחלה ולהעריך את הפתולוגיה באמצעות מספר קריאות כדי להכין IRBP 1-20 להשלים את האדג'ובנט של פרוינד או CFA, להשעות כמות מחושבת של הפפטיד בנפח מינימלי של 100% DMSO. כאשר האבקה התמוססה לחלוטין, הוסיפו כמויות קטנות של PBS לצינור עד שתגיעו לנפח המחושב הסופי של PBS בהתאם למספר העכברים שיש להזריק באמצעות תסיסה עדינה כדי לערבב את התמיסה. לאחר הכנת האדג'ובנט המלא של פרוינד, פיפטה בעדינות ובתדירות גבוהה את התמיסה ליצירת ויסקוס ותחליב מפוזר באופן שווה תוך הוספת תמיסת הפפטיד DMSO PBS ביחס של אחד לאחד לתרחיף.כדי לאוורר את התמיסות, השתמש פיפטה 1000 מיקרוליטר להגדיר 700 מיקרוליטר כדי פיפטה שוב ושוב את התמיסה עד לקבלת תחליב סמיך וקרמי. לפני הזרקת מתלה הפפטידים, הניחו כל עכבר להזרקה לכלוב נפרד והשתמשו במזרק של מיליליטר אחד המצויד במחט 23 מד כדי לספק 1.5 מיקרוגרם של רעלן Bordetella pertussis ב-100 מיקרוליטר של RPMI 1640 בינוני בתוספת נסיוב עכבר 1% לכל חיה. כאשר תמיסת רעלן שעלת מוזרקת, העכבר צריך להיות מוחזק במצב כמו קשקוש ואת העור צובט כדי ליצור מבנה דמוי אוהל על העורף.השחילו את המחט לרווח שבין האצבע לאגודל, והזריקו 200 מיקרוליטר של תחליב IRBP לעור האוהל, תוך שמירה על לחץ לאחר ההזרקה וסיבוב ראש המחט כדי לסגור את העור לפני הנסיגה. כדי להבקיע את המחלה הקלינית, ביום 21 לאחר ההזרקה, לאשר חוסר תגובה לרפלקס הכותרת בעכבר המוזרק פפטיד מורדם ולרסן את החיה בקשקוש. יש למרוח באופן מקומי 1% טרופיקמיד ו-2% פנילפרין על הקרנית של כל עין מיד לאחר ההזרקה.כאשר האישונים התרחבו במלואם, הניחו את העכבר על במת מיקרוסקופ ייעודי. מקמו את המיקרוסקופ לגישה מלאה לרשתית. יש לכוונן את פיסת העין לאורך כל תהליך ההדמיה לפי הצורך כדי לראות את הדיסק האופטי והרשתית ולקבל תמונות של כל אזור הרשתית, תוך התאמה וכיסוי של כל פינות הפריפריה.כדי למדוד דליפת כלי דם, יש לתת 100 מיקרוליטר של 2% פלואורסצאין תת עורית בחלק האחורי של הצוואר ולמקם מחדש את העכבר כך שהרשתית תהיה במרכז התמונה החיה. הגדר את הפונדוסקופ למסנן עירור אור כחול ב 465 עד 490 ננומטר לפני קבלת תמונה של כל אחד מהם ב 1.5 ושבע דקות לאחר הזרקת פלורסנט. לאחר שכל התמונות נרכשו, יש לספק הזרקת אנטי טשטוש להתאוששות ולהניח את העכבר בכלוב על מחצלת שחוממה מראש עם גישה לתזונה רטובה עם ניטור עד שהעכבר חוזר להכרה.לניקוד המחלה הקלינית של התמונות, בססו את ההערכה הקלינית על חומרת דלקת הדיסק הראייתי, איזוק כלי הדם ברשתית, חדירת רקמת הרשתית ונזק מבני. ציון כל אחד מהפרמטרים הללו בסולם מאחד עד חמישה. הסך הכולל מייצג את המחלה הקלינית לכל העין עם ציון מקסימלי של 20 שניתן להשיג לכל עין.לאחר הדמיית פונדוס לנקודת הסיום הקלינית הסופית של המחקר, יש להרדים את העכבר. לצורך ניתוח היסטולוגי, יש להפריד בין העפעפיים לגישה לעין כולה, ולאחר מכן להניח מלקחיים מעוקלים מאחורי הגלובוס כדי לתפוס את רקמת החיבור המסלולית ואת עצב הראייה ולחנך את העין. הניחו את העין המוחדרת במיליליטר אחד עד חמישה מיליליטר של 4% גלוטראלדהיד למשך 15 דקות לפחות לפני העברת האיבר לאחד עד חמישה מיליליטר של 10% פורמלדהיד למשך 24 שעות לפחות.לאחר צביעת רקמות היסטולוגית, על פי פרוטוקולים סטנדרטיים, הוקצו ציונים בסולם של אפס עד שלוש בהתבסס על רמת חדירת תאי מערכת החיסון ומידת הנזק לרשתית. שינויים פונדוסקופיים מסווגים במהלך התקדמות המחלה כשינויים דלקתיים הכוללים רקמת רשתית ודלקת בכלי דם ודיסק אופטי ונזק מבני ברשתית בנוסף לשינויים היסטולוגיים המבוססים על חדירת תאי מערכת החיסון וליקויים מבניים. שינויים קליניים והיסטופתולוגיים אלה יכולים להיות מדורגים ומדורגים כדי להעריך את התקדמות המחלה ולהעריך את יעילות ההתערבות הטיפולית.דליפת כלי דם היא גם תכונה פתולוגית של המודל ושל uveitis האדם. כפי שמודגם בניתוח זה, ניתן להשתמש בפלואורסצאין כדי לדמיין דליפת כלי דם כקריאה נוספת של מודל זה. חיוני לחוקרים לוודא שהאמולסיה מוכנה כראוי ללא סימני הפרדה בין התמיסות.הם צריכים להיות מעורבבים ביסודיות המוצר הסופי צריך להיות חלק במרקם. הליך זה יכול להיות משולב עם שיטות אחרות של מתן תרופות ועם עבור ציטומטריה עבור פנוטיפ חודר אוכלוסיות תאי החיסון ברשתית.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Experimental Metastasis and CTL Adoptive Transfer Immunotherapy Mouse Model

גרורה ניסויית חיסוני CTL המאמצת העברת דגם עכבר

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into ...

Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis

הכנת Immunogen עכבר יותרת המוח עבור אינדוקציה של Hypophysitis אוטואימונית ניסויית

Autoimmune hypophysitis is a chronic inflammation of the pituitary gland caused or accompanied by autoimmunity1.  It has traditionally been considered a ...

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

אינדוקציה של Hypophysitis אוטואימוניות הניסויי עכברים SJL

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

התגברות על חוסר התגובה של ניסיוני אוטואימוניות Encephalomyelitis (EAE) זנים עמידים עכבר ידי העברת המאמצת אתגר אנטיגני

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an inflammatory disease of the central nervous system (CNS) and has been used as an animal model for ...

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein (MOG35-55) Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) in C57BL/6 Mice

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein MOG35-55 Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE in C57BL/6 Mice

המיאלין oligodendrocyte גליקופרוטאין (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) מושרה ניסויי אוטואימוניות Encephalomyelitis (EAE) בעכברים C57BL / 6

Multiple sclerosis is a chronic neuroinflammatory demyelinating disorder of the central nervous system with a strong neurodegenerative component. While ...

Isolation of Infiltrating Leukocytes from Mouse Skin Using Enzymatic Digest and Gradient Separation

בידוד של ההסתננות Leukocytes מעור העכבר באמצעות אנזימתי לעכל והפרדת צבע

Dissociating murine skin into a single cell suspension is essential for downstream cellular analysis such as the characterization of infiltrating immune ...

Simple and Efficient Production and Purification of Mouse Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein for Experimental Autoimmune Encephalomyelitis Studies

ייצור טיהור פשוט ויעיל של עכבר המיאלין Oligodendrocyte גליקופרוטאין עבור ניסיוני אוטואימוניות Encephalomyelitis מחקרים

Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS), thought to occur as a result of autoimmune responses ...

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

דגם IL-8 עכבר transgenized חולף עבור<em&gt; בויבו</emמעקב ארוך טווח אחר תגובות דלקתיות

Airway inflammation is often associated with bacterial infections and represents a major determinant of lung disease. The in vivo determination of the ...

Effects of Taste Signaling Protein Abolishment on Gut Inflammation in an Inflammatory Bowel Disease Mouse Model

ההשפעות של טעם איתות חלבון ביטול על דלקת מעיים במודל עכבר מחלות מעי דלקתיות

Inflammatory bowel disease (IBD) is one of the immune-related gastrointestinal disorders, including ulcerative colitis and Crohn's disease, that affects ...

High-Efficiency Generation of Antigen-Specific Primary Mouse Cytotoxic T Cells for Functional Testing in an Autoimmune Diabetes Model

יעילות גבוהה הדור של העכבר העיקרי של אנטיגן בתאי T ציטוטוקסיים לבדיקות פונקציונליות במודל סוכרת אוטואימוניות

Type 1 Diabetes (T1D) is characterized by islet-specific autoimmunity leading to beta cell destruction and absolute loss of insulin production. In the ...