Name: experimental autoimmune uveitis: an intraocular inflammatory mouse model
Uploaded: 2022-01-12T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Experimental Autoimmune Uveitis: An Intraocular Inflammatory Mouse Model at JoVE.com

JG ble tildelt en UCL Impact Studentship og Rosetrees Trust finansiering for å støtte CB. VC mottok et forskningssamarbeidsstipend fra Akari Therapeutics Inc. Vi vil gjerne takke UCL Institute of Ophthalmology, Biological Service Unit spesielt Ms Alison O'Hara og hennes team for deres tekniske støtte.

Alle forsøkene ble utført i samsvar med UK Animals (Scientific Procedures) Act fra 1986, og institusjonelle retningslinjer for dyrevelferd og etisk gjennomgang (AWERB).
1. Bolig C57BL/6J mus
<ol><li>Husmus i et spesifikt patogenfritt miljø, på en 12 timers lys-mørk syklus og mat og vann tilgjengelig ad libitum.</li>
	<li>Utfør alle eksperimenter på voksne kvinner C57BL/6J (kvinner velges fortrinnsvis da det er en forekomst av kvinner til menn 1,4 til 1 hos uveittpasienter). R...

<ol>
	<li>Lyu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TMP778,+a+selective+inhibitor+of+RORgammat,+suppresses+experimental+autoimmune+uveitis+development,+but+affects+both+Th17+and+Th1+cell+populations.">TMP778, a selective inhibitor of RORgammat, suppresses experimental autoimmune uveitis development, but affects both Th17 and Th1 cell populations.</a> The European Journal of Immunology. 48, 1810-1816 (2018).</li><li>Klaska, I. P., Forrester, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+autoimmune+uveitis.">Mouse models of autoimmune uveitis.</a> Current Pharmaceutical Design. 21, 2453-2467 (2015).</li><li>Eskandarpour, M., Alexander, R., Adamson, P., Calder, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacological+Inhibition+of+Bromodomain+Proteins+Suppresses+Retinal+Inflammatory+Disease+and+Downregulates+Retinal+Th17+Cells.">Pharmacological Inhibition of Bromodomain Proteins Suppresses Retinal Inflammatory Disease and Downregulates Retinal Th17 Cells.</a> The Journal of Immunology. 198, 1093-1103 (2017).</li><li>Mochizuki, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+and+clinical+study+of+FK506+in+uveitis.">Preclinical and clinical study of FK506 in uveitis.</a> Current Eye Research. 11, 87-95 (1992).</li><li>Nguyen, Q. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravitreal+Sirolimus+for+the+Treatment+of+Noninfectious+Uveitis:+Evolution+through+Preclinical+and+Clinical+Studies.">Intravitreal Sirolimus for the Treatment of Noninfectious Uveitis: Evolution through Preclinical and Clinical Studies.</a> Ophthalmology. 125, 1984-1993 (2018).</li><li>Leal, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anti-TNF+Drugs+for+Chronic+Uveitis+in+Adults-A+Systematic+Review+and+Meta-Analysis+of+Randomized+Controlled+Trials.">Anti-TNF Drugs for Chronic Uveitis in Adults-A Systematic Review and Meta-Analysis of Randomized Controlled Trials.</a> Frontiers in Medicine (Lausanne). 6, 104 (2019).</li><li>Chen, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functionally+distinct+IFN-?++IL-17A++Th+cells+in+experimental+autoimmune+uveitis:+T-cell+heterogeneity,+migration,+and+steroid+response.">Functionally distinct IFN-?+ IL-17A+ Th cells in experimental autoimmune uveitis: T-cell heterogeneity, migration, and steroid response.</a> European Journal of Immunology. 50 (12), 1941-1951 (2020).</li><li>Xu, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+clinical+grading+system+for+retinal+inflammation+in+the+chronic+model+of+experimental+autoimmune+uveoretinitis+using+digital+fundus+images.">A clinical grading system for retinal inflammation in the chronic model of experimental autoimmune uveoretinitis using digital fundus images.</a> Experimental Eye Research. 87, 319-326 (2008).</li><li>Copland, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+time-course+of+experimental+autoimmune+uveoretinitis+using+topical+endoscopic+fundal+imaging+with+histologic+and+cellular+infiltrate+correlation.">The clinical time-course of experimental autoimmune uveoretinitis using topical endoscopic fundal imaging with histologic and cellular infiltrate correlation.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 49, 5458-5465 (2008).</li><li>Dick, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Doyne+lecture+2016:+intraocular+health+and+the+many+faces+of+inflammation.">Doyne lecture 2016: intraocular health and the many faces of inflammation.</a> Eye (Lond). 31, 87-96 (2017).</li><li>Agarwal, R. K., Silver, P. B., Caspi, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+experimental+autoimmune+uveitis.">Rodent models of experimental autoimmune uveitis.</a> Methods in Molecular Biology. 900, 443-469 (2012).</li><li>Caspi, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+look+at+autoimmunity+and+inflammation+in+the+eye.">A look at autoimmunity and inflammation in the eye.</a> Journal of Clininical Investigation. 120, 3073-3083 (2010).</li><li>Caspi, R. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+experimental+autoimmune+uveitis.">Mouse models of experimental autoimmune uveitis.</a> Ophthalmic Research. 40, 169-174 (2008).</li><li>Shao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severe+chronic+experimental+autoimmune+uveitis+(EAU)+of+the+C57BL/6+mouse+induced+by+adoptive+transfer+of+IRBP1-20-specific+T+cells.">Severe chronic experimental autoimmune uveitis (EAU) of the C57BL/6 mouse induced by adoptive transfer of IRBP1-20-specific T cells.</a> Experimental Eye Research. 82, 323-331 (2006).</li><li>Horai, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiota-Dependent+Activation+of+an+Autoreactive+T+Cell+Receptor+Provokes+Autoimmunity+in+an+Immunologically+Privileged+Site.">Microbiota-Dependent Activation of an Autoreactive T Cell Receptor Provokes Autoimmunity in an Immunologically Privileged Site.</a> Immunity. 43, 343-353 (2015).</li><li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+induced+vs.+spontaneous+models+of+autoimmune+uveitis+targeting+the+interphotoreceptor+retinoid+binding+protein.">Comparative analysis of induced vs. spontaneous models of autoimmune uveitis targeting the interphotoreceptor retinoid binding protein.</a> PLoS One. 8, 72161 (2013).</li><li>Chen, J., Qian, H., Horai, R., Chan, C. C., Caspi, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+optical+coherence+tomography+and+electroretinography+to+evaluate+retinal+pathology+in+a+mouse+model+of+autoimmune+uveitis.">Use of optical coherence tomography and electroretinography to evaluate retinal pathology in a mouse model of autoimmune uveitis.</a> PLoS One. 8, 63904 (2013).</li><li>Harry, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+autoimmune+retinal+disease+by+lovastatin+does+not+require+Th2+cytokine+induction.">Suppression of autoimmune retinal disease by lovastatin does not require Th2 cytokine induction.</a> Journal of Immunology. 174, 2327-2335 (2005).</li></ol>

Eksperimentelle dyremodeller er nødvendige verktøy for å studere sykdomspatogenese og preklinisk testing av nye terapeutiske paradigmer. I den nåværende protokollen har vi diskutert en metodikk for å indusere, overvåke og score EAU, en eksperimentell modell for intraokulær inflammatorisk uveitt. Denne EAU-modellen har mer enn 95% sykdomsforekomst når alle prosedyrer utføres i henhold til protokollen som er skissert her, og resulterer i utvikling av kronisk, monofasisk EAU. For å oppnå dette insidensnivået un...

Denne protokollen vil demonstrere hvordan man induserer eksperimentell autoimmun uveitt (EAU) i C57BL/6J-musen ved en enkelt subkutan injeksjon av et retinaantigen i et emulgert adjuvans. Metoder for overvåking og vurdering av sykdomsprogresjon vil bli detaljert gjennom fundoskopisk avbildning og histologisk undersøkelse, med måleparametere skissert innenfor. I tillegg vil fluoresceinangiografi, en teknikk for å undersøke retinal blodkarstruktur og permeabilitet bli diskutert.
Denne EAU-modellen rekapitulerer sentrale trekk ved ikke-infeksiøs bakre uveitt hos mennesker med hensyn til kliniskpatologiske egenskaper og de grunnleggende cellulære og molekylære mekanismene som driver sykdom. EAU medieres av Th1- og/eller Th17-undergrupper av selvreaktive CD4+T-lymfocytter, som vist i adoptivoverføringseksperimenter og med IFNγ-utarmede mus1. Mye av vår forståelse av de potensielle rollene for disse cellene i uveitt kommer fra å studere EAU2 hvor både Th1 og Th17 celler oppdages i retinal vev3. Ofte brukes EAU som en preklinisk modell for å vurdere nytten av nye terapier i dempende sykdom. Terapeutiske tilnærminger som har lykkes modulert EAU sykdom har vist noen effekt i klinikken og nådd FDA godkjent status. Eksempler på disse er grupper av immunregulerende legemidler som T-cellemålrettede terapier: ciklosporin, FK-506 og rapamycin 4,5,6. Nylig har intervensjoner rettet mot nye veier også blitt utforsket i denne modellen for å undersøke både mekanisme og effekt på sykdomsutfall. Disse inkluderer målretting av transkripsjonsregulering gjennom kromatinleser Bromodomain Extra-Terminal (BET) proteiner og P-TEFb-hemmere3. Videre har mer konvensjonelle tilnærminger som en VLA-4-hemmer nylig vist undertrykkelse i EAU via modulering av effektor CD4 + T-celler7. I tillegg har målretting av Th17-celler med TMP778, en RORγt invers agonist, også blitt funnet å undertrykke EAU8 betydelig. Videre gir denne modellen en mulighet til å studere kronisk autoimmun betennelse i netthinnen og de medfølgende underliggende mekanismene som lymfocyttpriming.
De primære avlesningene for EAU prekliniske studier er klinisk vurdering ved å utføre retinal fundoskopiavbildning og sjeldnere ved å vurdere retinal integritet ved optisk koherenstomografi (OCT). Retinal histopatologisk utredning og immunfenotyping av retinale celler ved flowcytometri gjøres da ved seponering. Fundoskopi er et brukervennlig live bildebehandlingssystem som muliggjør rask og reproduserbar klinisk vurdering av hele netthinnen. For immunhistokjemiske vurderinger er teknikkene basert på fremstilling av retinale seksjoner som tillater oss å studere vevsarkitektur for graden av betennelse og strukturell skade9. Vurderingskriteriene og konvensjonelle poengsystemer, for alle teknikker som brukes, vil bli skissert i denne protokollen. Skadeomfanget registrert ved hjelp av fundoskopisk avbildning korrelerer ofte nært med histologiske forandringer. Denne doble tilnærmingen til overvåking og vurdering av sykdommens alvorlighetsgrad gir større sensitivitet og mer pålitelige måleresultater.
EAU er en veletablert, ofte brukt modell for preklinisk testing og undersøkelse av immunmediert øyesykdom. Denne modellen er pålitelig og reproduserbar med >95% sykdomsforekomst og genererer omfattende data som kan brukes til å validere eller avvise nye terapier for behandling av intraokulær inflammatorisk sykdom som representerer en viktig årsak til arbeidstidsblindhet over hele verden10.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>antisedan</td>
			<td>ZOETIS, USA</td>
			<td></td>
			<td>for waking up</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Complete Freund&#8217;s Adjuvant; CFA</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>F5881</td>
			<td>for immunisation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Domitor</td>
			<td>Orion Pharma, Finland</td>
			<td></td>
			<td>for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flourescein</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>F2456</td>
			<td>for Angiography</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IRBP1-20</td>
			<td>Chamberidge peptide, UK</td>
			<td></td>
			<td>peptide;antigen&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Orion Pharma, Finland</td>
			<td></td>
			<td>for anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micron III</td>
			<td>Phoenix Research, USA</td>
			<td></td>
			<td>for fundoscopy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Serum</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>M5905</td>
			<td>for immunisation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mycobacterium terberculosis</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>344289</td>
			<td>for immunisation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pertussis Toxin</td>
			<td>Sigma, UK</td>
			<td>P2980</td>
			<td>for immunisation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phenylephrine hydrochloride 2.5%&#160;</td>
			<td>Bausch &#38; Lomb UK&#160;</td>
			<td>PHEN25</td>
			<td>for dilation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide 1%</td>
			<td>SANDOZ</td>
			<td></td>
			<td>for dilation&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Viscotears</td>
			<td>WELDRICKS Pharmacy, UK</td>
			<td>2082642</td>
			<td>for eye lubrication</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

experimental autoimmune uveitis: an intraocular inflammatory mouse model

Eksperimentell autoimmun uveitt (EAU) drives av immunceller som reagerer på selvantigener. Mange funksjoner i denne ikke-smittsomme, intraokulære inflammatoriske sykdomsmodellen rekapitulerer den kliniske fenotypen av bakre uveitt som påvirker mennesker. EAU har blitt brukt pålitelig for å studere effekten av nye inflammatoriske terapier, deres virkemåte og for å undersøke mekanismene som ligger til grunn for sykdomsprogresjon av intraokulære lidelser. Her gir vi en detaljert protokoll om EAU-induksjon i C57BL/6J-musen - den mest brukte modellorganismen med følsomhet for denne sykdommen. Klinisk vurdering av sykdommens alvorlighetsgrad og progresjon vil bli demonstrert ved hjelp av fundoskopi, histologisk undersøkelse og fluoresceinangiografi. Induksjonsprosedyren innebærer subkutan injeksjon av en emulsjon inneholdende et peptid (IRBP1-20) fra det okulære proteininterfotoreceptor retinoidbindende protein (også kjent som retinolbindende protein 3), Complete Freund's Adjuvant (CFA) og supplert med drept Mycobacterium tuberculosis. Injeksjon av denne viskøse emulsjonen på baksiden av nakken etterfølges av en enkelt intraperitoneal injeksjon av Bordetella kikhostetoksin . Ved symptomdebut (dag 12-14) og under generell anestesi tas fundoskopiske bilder for å vurdere sykdomsprogresjon gjennom klinisk undersøkelse. Disse dataene kan direkte sammenlignes med de på senere tidspunkter og topp sykdom (dag 20-22) med analyserte forskjeller. Samtidig tillater denne protokollen etterforskeren å vurdere potensielle forskjeller i fartøypermeabilitet og skade ved hjelp av fluoresceinangiografi. EAU kan induseres i andre musestammer - både villtype eller genetisk modifisert - og kombineres med nye terapier som gir fleksibilitet for å studere legemiddeleffektivitet og / eller sykdomsmekanismer.

I denne protokollen beskriver vi en trinnvis metode for å indusere en modell av eksperimentell autoimmun uveitt (EAU) ved immunisering av mus med et uveitogent retinalt peptid avledet fra IRBP. Vurdering av sykdom ved bruk av mye brukte og lett tilgjengelige tilnærminger dekkes, selv om disse ikke er eksklusive og kan legges til eller delvis erstattes av andre bildebehandlingsteknikker. De første tegnene på EAU hos C57BL/6J-mus kan påvises to uker etter immunisering og maksimal sykdom nådd innen tre uker som illust...

Watch this Scientific Journal Video about Experimental Autoimmune Uveitis: An Intraocular Inflammatory Mouse Model at JoVE.com

Experimental Autoimmune Uveitis: An Intraocular Inflammatory Mouse Model

I denne rapporten presenterer vi en protokoll som gjør det mulig for etterforskeren å generere en musemodell av intraokulær uveitt. Mer ofte referert til som eksperimentell autoimmun uveitt (EAU), fanger denne etablerte modellen mange aspekter av menneskelig sykdom. Her vil vi beskrive hvordan man induserer og overvåker sykdomsprogresjon ved hjelp av flere avlesninger.

Eksperimentell autoimmun uveitt: En intraokulær inflammatorisk musemodell

Experimental Autoimmune Uveitis (EAU) is driven by immune cells responding to self-antigens. Many features of this non-infectious, intraocular ...

Denne modellen kan brukes til å studere cellulære mekanismer som involverer patogenesen av immunmediert human bakre uveitt. Implikasjonen av denne teknikken strekker seg mot translasjonsstudie av menneskelig uveitt i overvåking av ny legemiddeleffektivitet og for å gi mekanistisk innsikt i kjemisk sykdomsprogresjon. Den største fordelen ved å bruke denne modellen er påliteligheten av sykdomsinduksjon og bruk av ikke-invasive endoskopiske teknikker som tillater oss å overvåke sykdomsprogresjon.Her beskriver vi hvordan man induserer sykdommen og vurderer patologien ved hjelp av flere avlesninger For å forberede IRBP 1-20 komplett Freunds adjuvans eller CFA, resuspendere en beregnet mengde av peptidet i et minimumsvolum på 100% DMSO. Når pulveret er fullstendig oppløst, tilsett små volumer PBS til røret til det når det endelige beregnede volumet av PBS i henhold til antall mus som skal injiseres ved hjelp av forsiktig omrøring for å blande oppløsningen. Etter å ha tilberedt hele Freunds adjuvans, pipetterer oppløsningen forsiktig og ofte for å danne en viscus og jevnt fordelt emulsjon mens DMSO PBS peptidoppløsning tilsettes dråpevis i et en-til-en-forhold til suspensjonen.For å lufte løsningene, bruk en 1000 mikroliter pipette satt til 700 mikroliter for gjentatte ganger å pipette løsningen til en tykk, kremaktig emulsjon er oppnådd. Før du injiserer peptidsuspensjonen, plasser hver mus som skal injiseres i et separat bur og bruk en milliliter sprøyte utstyrt med en 23 gauge nål for å intraperitoneal levere 1,5 mikrogram Bordetella kikhostetoksin i 100 mikroliter RPMI 1640 medium supplert med 1% museserum til hvert dyr. Når kikhostetoksinoppløsning har blitt injisert, bør musen holdes i en skrubblignende stilling og huden klemt for å danne en teltlignende struktur på baksiden av nakken.Tre nålen til mellomrommet mellom fingeren og tommelen, og injiser 200 mikroliter av IRBP-emulsjonen på telthuden, oppretthold trykket etter injeksjonen og roter nålehodet for å lukke huden før tilbaketrekning. For å score den kliniske sykdommen, på dag 21 etter injeksjon, bekreft mangel på respons på kronbladrefleks i den bedøvede peptidinjiserte musen og hold dyret i en scruff. Påfør topisk 1% tropikamid og 2% fenylefrin på hornhinnen i hvert øye umiddelbart etter injeksjon.Når elevene har utvidet seg helt, plasser musen på et spesialbygd mikroskoptrinn. Plasser mikroskopet for full tilgang til netthinnen. Juster okularet gjennom hele bildeprosessen etter behov for å se optisk plate og netthinnen og ta bilder av hele retinalområdet, justere og dekke alle hjørner av periferien.For å måle fartøylekkasje, administrer 100 mikroliter 2% fluorescein subkutant på baksiden av nakken og plasser musen slik at netthinnen er midt på det levende bildet. Sett fundoskopet til et eksitasjonsfilter for blått lys på 465 til 490 nanometer før du tar et bilde av hver ved 1,5 og syv minutter etter fluorescerende injeksjon. Når alle bildene er anskaffet, intraperitonealt levere en anti sedasjon injiserbare for utvinning og plassere musen i et bur på en forvarmet matte med tilgang til våt gjennomvåt diett med overvåking før musen gjenvinner bevisstheten.For klinisk sykdomsskåring av bildene, baser den kliniske vurderingen på alvorlighetsgraden av optisk platebetennelse, retinal kar cuffing, retinal vevsinfiltrat og strukturell skade. Score hver av disse parametrene på en skala fra en til fem. Den samlede totalen er representativ for den kliniske sykdommen for hele øyet med en maksimal score på 20 oppnåelig per øye.Etter fundusavbildning for det siste kliniske endepunktet i studien, avlive musen. For histologisk analyse, pris fra hverandre øyelokkene for tilgang til hele øyet, plasser deretter buede tang bak kloden for å gripe orbitalt bindevev og optisk nerve og enucleate øyet. Plasser det enucleated øyet i en til fem milliliter 4% glutaraldehyd i minst 15 minutter før du overfører orgelet til en til fem milliliter 10% formaldehyd i minst 24 timer.Etter histologisk vevfarging, i henhold til standardprotokoller, tildelte poeng på en skala fra null til tre basert på nivået av immuncelleinfiltrasjon og graden av retinal skade. Fundoskopiske endringer klassifiseres under sykdomsprogresjon som inflammatoriske forandringer som inkluderer retinalt vev og vaskulær og optisk skivebetennelse og retinal strukturell skade i tillegg til histologiske endringer basert på infiltrerende immunceller og strukturelle funksjonsnedsettelser. Disse kliniske og histopatologiske endringene kan graderes og skåres for å vurdere sykdomsprogresjon og evaluere effekt av terapeutisk intervensjon.Vaskulær lekkasje er også et patologisk trekk ved modellen og av menneskelig uveitt. Som illustrert i denne analysen, kan fluorescein brukes til å visualisere vaskulær lekkasje som en annen avlesning av denne modellen. Det er viktig for forskere å sikre at emulsjonen fremstilles riktig uten tegn på separasjon mellom løsningene.De skal blandes grundig og sluttproduktet skal være glatt i tekstur. Denne prosedyren kan kombineres med andre administrasjonsmetoder og med for cytometri for fenotyping av infiltrerende retinale immuncellepopulasjoner.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Experimental Metastasis and CTL Adoptive Transfer Immunotherapy Mouse Model

Experimental metastasis mouse model is a simple and yet physiologically relevant metastasis model. The tumor cells are injected intravenously (i.v) into ...

Preparation of Mouse Pituitary Immunogen for the Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis

Autoimmune hypophysitis is a chronic inflammation of the pituitary gland caused or accompanied by autoimmunity1.  It has traditionally been considered a ...

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Overvinne manglende respons i Eksperimentelle Autoimmune encefalomyelitt (EAE) Resistente musestammer av adoptivforeldre Transfer og antigen Challenge

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an inflammatory disease of the central nervous system (CNS) and has been used as an animal model for ...

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein (MOG35-55) Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) in C57BL/6 Mice

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein MOG35-55 Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE in C57BL/6 Mice

Myelin oligodendrocyte Glycoprotein (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) Induced Eksperimentell autoimmun encefalomyelitt (EAE) i C57BL / 6 Mus

Multiple sclerosis is a chronic neuroinflammatory demyelinating disorder of the central nervous system with a strong neurodegenerative component. While ...

Isolation of Infiltrating Leukocytes from Mouse Skin Using Enzymatic Digest and Gradient Separation

Isolering av infiltrerende Leukocytter fra Mouse Skin Bruke Enzymatisk Digest og Gradient Separation

Dissociating murine skin into a single cell suspension is essential for downstream cellular analysis such as the characterization of infiltrating immune ...

Simple and Efficient Production and Purification of Mouse Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein for Experimental Autoimmune Encephalomyelitis Studies

Enkel og effektiv produksjon og rensing av Mouse Myelin oligodendrocyte glykoprotein for eksperimentell autoimmun encefalomyelitt Studier

Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS), thought to occur as a result of autoimmune responses ...

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

En IL-8 Transient Transgenized Mouse Model for<em&gt; In vivo</em&gt; Langsiktig overvåking av inflammatoriske responser

Airway inflammation is often associated with bacterial infections and represents a major determinant of lung disease. The in vivo determination of the ...

Effects of Taste Signaling Protein Abolishment on Gut Inflammation in an Inflammatory Bowel Disease Mouse Model

Effekter av smak signalering Protein oppløsning på Gut betennelse i en inflammatorisk tarm sykdom musemodell

Inflammatory bowel disease (IBD) is one of the immune-related gastrointestinal disorders, including ulcerative colitis and Crohn's disease, that affects ...

High-Efficiency Generation of Antigen-Specific Primary Mouse Cytotoxic T Cells for Functional Testing in an Autoimmune Diabetes Model

Høy-effektivitet generasjon av antigen-spesifikke primær mus cytotoksisk T celler for funksjonell testing i en autoimmun diabetes modell

Type 1 Diabetes (T1D) is characterized by islet-specific autoimmunity leading to beta cell destruction and absolute loss of insulin production. In the ...