Name: in vitro assessment of myocardial protection following hypothermia-preconditioning in a human cardiac myocytes model
Uploaded: 2020-10-27T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In vitro Assessment of Myocardial Protection following Hypothermia-Preconditioning in a Human Cardiac Myocytes Model at JoVE.com

Detta arbete finansierades delvis av National Natural Science Foundation of China (81970265, 81900281,81700288), China Postdoctoral Science Foundation (2019M651904); och Kinas nationella centrala forsknings- och utvecklingsprogram (2016YFC1101001, 2017YFC1308105).

Information om kommersiella reagenser och instrument finns i materialförteckningen.
AC16 mänskliga kardiomyocyt cellinje härleddes från fusion av primära celler från vuxna Ventrikulärt hjärtat vävnad med SV40-omvandlade mänskliga fibroblaster17, som köptes från BLUEFBIO (Shanghai, Kina). Cellinjen utvecklar många biokemiska och morfologiska egenskaper som är karakteristiska för kardiomyocyter. Dessutom används cellinjen ofta för att utv...

<ol>
	<li>Kim, B. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myocardial+Ischemia+Induces+SDF-1alpha+Release+in+Cardiac+Surgery+Patients.">Myocardial Ischemia Induces SDF-1alpha Release in Cardiac Surgery Patients.</a> Journal of Cardiovascular Translational Research. 9 (3), 230-238 (2016).</li><li>Klein, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Less+invasive+ventricular+reconstruction+for+ischaemic+heart+failure.">Less invasive ventricular reconstruction for ischaemic heart failure.</a> EUROPEAN JOURNAL OF HEART FAILURE. 21 (12), 1638-1650 (2019).</li><li>Otto, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+hypothermia+applicable+to+cardiac+surgery.">Therapeutic hypothermia applicable to cardiac surgery.</a> VETERINARY ANAESTHESIA AND ANALGESIA. 42 (6), 559-569 (2015).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+of+Hypothermic+Circulatory+Arrest+During+Unilateral+Antegrade+Cerebral+Perfusion+for+Aortic+Arch+Surgery.">Safety of Hypothermic Circulatory Arrest During Unilateral Antegrade Cerebral Perfusion for Aortic Arch Surgery.</a> CANADIAN JOURNAL OF CARDIOLOGY. 35 (11), 1483-1490 (2019).</li><li>Leshnower, B. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moderate+Versus+Deep+Hypothermia+With+Unilateral+Selective+Antegrade+Cerebral+Perfusion+for+Acute+Type+A+Dissection.">Moderate Versus Deep Hypothermia With Unilateral Selective Antegrade Cerebral Perfusion for Acute Type A Dissection.</a> ANNALS OF THORACIC SURGERY. 100 (5), 1563-1568 (2015).</li><li>Vallabhajosyula, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moderate+versus+deep+hypothermic+circulatory+arrest+for+elective+aortic+transverse+hemiarch+reconstruction.">Moderate versus deep hypothermic circulatory arrest for elective aortic transverse hemiarch reconstruction.</a> ANNALS OF THORACIC SURGERY. 99 (5), 1511-1517 (2015).</li><li>Keeling, W. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Safety+of+Moderate+Hypothermia+With+Antegrade+Cerebral+Perfusion+in+Total+Aortic+Arch+Replacement.">Safety of Moderate Hypothermia With Antegrade Cerebral Perfusion in Total Aortic Arch Replacement.</a> ANNALS OF THORACIC SURGERY. 105 (1), 54-61 (2018).</li><li>Yan, T. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consensus+on+hypothermia+in+aortic+arch+surgery.">Consensus on hypothermia in aortic arch surgery.</a> Annals of Cardiothoracic Surgery. 2 (2), 163-168 (2013).</li><li>Zhou, J., Empey, P. E., Bies, R. R., Kochanek, P. M., Poloyac, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+arrest+and+therapeutic+hypothermia+decrease+isoform-specific+cytochrome+P450+drug+metabolism.">Cardiac arrest and therapeutic hypothermia decrease isoform-specific cytochrome P450 drug metabolism.</a> DRUG METABOLISM AND DISPOSITION. 39 (12), 2209-2218 (2011).</li><li>Sharp, W. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+the+mitochondrial+fission+protein+dynamin-related+protein+1+improves+survival+in+a+murine+cardiac+arrest+model.">Inhibition of the mitochondrial fission protein dynamin-related protein 1 improves survival in a murine cardiac arrest model.</a> CRITICAL CARE MEDICINE. 43 (2), 38-47 (2015).</li><li>Zhu, W. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hsp90aa1:+a+novel+target+gene+of+miR-1+in+cardiac+ischemia/reperfusion+injury.">Hsp90aa1: a novel target gene of miR-1 in cardiac ischemia/reperfusion injury.</a> Sci Rep. 6, 24498 (2016).</li><li>Castedo, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+hypothermia+on+right+atrial+cardiomyocyte+apoptosis+in+patients+undergoing+aortic+valve+replacement.">Influence of hypothermia on right atrial cardiomyocyte apoptosis in patients undergoing aortic valve replacement.</a> Journal of Cardiothoracic Surgery. 2, 7 (2007).</li><li>Krech, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moderate+therapeutic+hypothermia+induces+multimodal+protective+effects+in+oxygen-glucose+deprivation/reperfusion+injured+cardiomyocytes.">Moderate therapeutic hypothermia induces multimodal protective effects in oxygen-glucose deprivation/reperfusion injured cardiomyocytes.</a> Mitochondrion. 35, 1-10 (2017).</li><li>Cooper, W. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothermic+circulatory+arrest+causes+multisystem+vascular+endothelial+dysfunction+and+apoptosis.">Hypothermic circulatory arrest causes multisystem vascular endothelial dysfunction and apoptosis.</a> ANNALS OF THORACIC SURGERY. 69 (3), 696-702 (2000).</li><li>Kajimoto, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+cerebral+perfusion+prevents+abnormalities+in+glutamate+cycling+and+neuronal+apoptosis+in+a+model+of+infant+deep+hypothermic+circulatory+arrest+and+reperfusion.">Selective cerebral perfusion prevents abnormalities in glutamate cycling and neuronal apoptosis in a model of infant deep hypothermic circulatory arrest and reperfusion.</a> JOURNAL OF CEREBRAL BLOOD FLOW AND METABOLISM. 36 (11), 1992-2004 (2016).</li><li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+Hypothermic+Circulatory+Arrest+Does+Not+Show+Better+Protection+for+Vital+Organs+Compared+with+Moderate+Hypothermic+Circulatory+Arrest+in+Pig+Model.">Deep Hypothermic Circulatory Arrest Does Not Show Better Protection for Vital Organs Compared with Moderate Hypothermic Circulatory Arrest in Pig Model.</a> Biomed Research International. 2019, 1420216 (2019).</li><li>Davidson, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+cell+lines+derived+from+adult+human+ventricular+cardiomyocytes.">Novel cell lines derived from adult human ventricular cardiomyocytes.</a> JOURNAL OF MOLECULAR AND CELLULAR CARDIOLOGY. 39 (1), 133-147 (2005).</li><li>Khan, K., Makhoul, G., Yu, B., Schwertani, A., Cecere, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cytoprotective+impact+of+yes-associated+protein+1+after+ischemia-reperfusion+injury+in+AC16+human+cardiomyocytes.">The cytoprotective impact of yes-associated protein 1 after ischemia-reperfusion injury in AC16 human cardiomyocytes.</a> EXPERIMENTAL BIOLOGY AND MEDICINE. 244 (10), 802-812 (2019).</li><li>Pan, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=miR-146a+attenuates+apoptosis+and+modulates+autophagy+by+targeting+TAF9b/P53+pathway+in+doxorubicin-induced+cardiotoxicity.">miR-146a attenuates apoptosis and modulates autophagy by targeting TAF9b/P53 pathway in doxorubicin-induced cardiotoxicity.</a> Cell Death Discovery. 10 (9), 668 (2019).</li><li>Schmitt, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=S100B+modulates+IL-6+release+and+cytotoxicity+from+hypothermic+brain+cells+and+inhibits+hypothermia-induced+axonal+outgrowth.">S100B modulates IL-6 release and cytotoxicity from hypothermic brain cells and inhibits hypothermia-induced axonal outgrowth.</a> NEUROSCIENCE RESEARCH. 59 (1), 68-73 (2007).</li><li>Tong, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+hypothermia+therapy+attenuates+LPS-induced+microglia+neuroinflammation+via+the+STAT3+pathway.">Deep hypothermia therapy attenuates LPS-induced microglia neuroinflammation via the STAT3 pathway.</a> Neuroscience. 358, 201-210 (2017).</li><li>Yu, Z. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Troxerutin+attenuates+oxygenglucose+deprivation+and+reoxygenationinduced+oxidative+stress+and+inflammation+by+enhancing+the+PI3K/AKT/HIF1alpha+signaling+pathway+in+H9C2+cardiomyocytes.">Troxerutin attenuates oxygenglucose deprivation and reoxygenationinduced oxidative stress and inflammation by enhancing the PI3K/AKT/HIF1alpha signaling pathway in H9C2 cardiomyocytes.</a> Molecular Medicine Reports. 22 (2), 1351-1361 (2020).</li><li>Drescher, C., Diestel, A., Wollersheim, S., Berger, F., Schmitt, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+does+hypothermia+protect+cardiomyocytes+during+cardioplegic+ischemia.">How does hypothermia protect cardiomyocytes during cardioplegic ischemia.</a> European journal of cardiothoracic surgery. 40 (2), 352-359 (2011).</li><li>Diestel, A., Drescher, C., Miera, O., Berger, F., Schmitt, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothermia+protects+H9c2+cardiomyocytes+from+H2O2+induced+apoptosis.">Hypothermia protects H9c2 cardiomyocytes from H2O2 induced apoptosis.</a> Cryobiology. 62 (1), 53-61 (2011).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HIF-1alpha/BNIP3+signaling+pathway-induced-autophagy+plays+protective+role+during+myocardial+ischemia-reperfusion+injury.">HIF-1alpha/BNIP3 signaling pathway-induced-autophagy plays protective role during myocardial ischemia-reperfusion injury.</a> BIOMEDICINE &amp; PHARMACOTHERAPY. 120, 109464 (2019).</li><li>An, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exogenous+IL-19+attenuates+acute+ischaemic+injury+and+improves+survival+in+male+mice+with+myocardial+infarction.">Exogenous IL-19 attenuates acute ischaemic injury and improves survival in male mice with myocardial infarction.</a> BRITISH JOURNAL OF PHARMACOLOGY. 176 (5), 699-710 (2019).</li><li>Han, Y. S., Schaible, N., Tveita, T., Sieck, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discontinued+stimulation+of+cardiomyocytes+provides+protection+against+hypothermia-rewarming-induced+disruption+of+excitation-contraction+coupling.">Discontinued stimulation of cardiomyocytes provides protection against hypothermia-rewarming-induced disruption of excitation-contraction coupling.</a> EXPERIMENTAL PHYSIOLOGY. 103 (6), 819-826 (2018).</li><li>Yarbrough, W. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caspase+inhibition+attenuates+contractile+dysfunction+following+cardioplegic+arrest+and+rewarming+in+the+setting+of+left+ventricular+failure.">Caspase inhibition attenuates contractile dysfunction following cardioplegic arrest and rewarming in the setting of left ventricular failure.</a> Journal of cardiovascular pharmacology. 44 (6), 645-650 (2004).</li><li>Egorov, Y. V., Glukhov, A. V., Efimov, I. R., Rosenshtraukh, L. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothermia-induced+spatially+discordant+action+potential+duration+alternans+and+arrhythmogenesis+in+nonhibernating+versus+hibernating+mammals.">Hypothermia-induced spatially discordant action potential duration alternans and arrhythmogenesis in nonhibernating versus hibernating mammals.</a> AMERICAN JOURNAL OF PHYSIOLOGY-HEART AND CIRCULATORY PHYSIOLOGY. 303 (8), 1035-1046 (2012).</li><li>Bobi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Moderate+Hypothermia+Modifies+Coronary+Hemodynamics+and+Endothelium-Dependent+Vasodilation+in+a+Porcine+Model+of+Temperature+Management.">Moderate Hypothermia Modifies Coronary Hemodynamics and Endothelium-Dependent Vasodilation in a Porcine Model of Temperature Management.</a> Journal of the American Heart Association. 9 (3), 014035 (2020).</li><li>Dietrichs, E. S., Tveita, T., Myles, R., Smith, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+ECG-biomarker+for+cardiac+arrest+during+hypothermia.">A novel ECG-biomarker for cardiac arrest during hypothermia.</a> Scandinavian Journal of Trauma Resuscitation &amp; Emergency Medicine. 28 (1), 27 (2020).</li></ol>

Komplexiteten hos intakta djur, inklusive interaktioner mellan olika typer av celler, förhindrar ofta detaljerade studier av specifika komponenter i I/R-skada. Därför är det nödvändigt att upprätta en in vitro-cellmodell som exakt kan återspegla de molekylära förändringarna efter ischemi in vivo. Forskning om OGD-modeller har tidigarerapporterats 13,22, och många sofistikerade metoder haretablerats 23,<sup class="xre...

Ischemi/reperfusion-härledd hjärtmuskeldysfunktion är ett vanligt kliniskt scenario hos patienter efter hjärtkirurgi1,2. Under nonpulsatile låg flöde perfusion och perioder av totala cirkulations gripande, skador som omfattar alla typer av hjärtceller fortfarande uppstår. I synnerhet är känsligheten hos kardiomyocyter för ischemisk skada högre än för andra cellpopulationer. För närvarande ger terapeutisk hypotermi (TH) betydande skydd mot en förväntad ischemisk förolämpning hos patienter som genomgår hjärtkirurgi3,4. TH definieras som en kärnkroppstemperatur på 14-34 °C, även om det inte finns någon konsensus om en definition av kylning under hjärtkirurgi5,6,7. År 2013 föreslog en internationell expertpanel ett standardiserat rapporteringssystem för att klassificera olika temperaturintervall för systemiskt hypotermiskt cirkulationsstopp8. Baserat på elektroencefalografi och metabolism studier av hjärnan delade de hypotermi i fyra nivåer: djupgående hypotermi (≤ 14 °C), djup hypotermi (14,1-20 °C), måttlig hypotermi (20,1-28 °C) och mild hypotermi (28,1-34 °C). Expertkonsensus gav en tydlig och enhetlig klassificering, vilket gjorde det möjligt för studier att vara mer jämförbara och ge mer kliniskt relevanta resultat. Detta skydd som TH ger bygger på dess förmåga att minska cellernas metaboliska aktivitet, vilket ytterligare begränsar deras frekvens av högenergifosfatförbrukning9,10. TH: s roll i skador skydd är dock kontroversiell och kan ha flera effekter beroende på graden av hypotermi.
Hjärtinfarkt I/R är välkänt för att åtföljas av ökad cellapoptis11. Nya rapporter har observerat att programmerad kardiomyocyt död ökar under öppen hjärtkirurgi, och kan sammanfalla med nekros, vilket ökar antalet döda hjärtmuskelceller12. Därför, minska kardiomyocyt apoptos är ett användbart terapeutiskt tillvägagångssätt i klinisk praxis. I musen förmaksflimmer HL-1 kardiomyocyt modell, terapeutisk hypotermi visade sig minska mitokondriell frisättning av cytokrom c och apoptos-inducerande faktor (AIF) under reperfusion13. Effekten av temperaturen vid reglering av apoptos är dock kontroversiell och verkar bero på graden av hypotermi. Cooper och kollegor observerade att jämfört med en normoterm cardiopulmonary bypass kontrollgrupp, apoptos frekvensen av skador vävnad från grisar med djupa hypotermiska cirkulations gripandeökades 14. Dessutom har resultaten från vissa studier föreslagit att djup hypotermi kan aktivera apoptosvägen, medan mindre aggressiv hypotermi verkar hämma vägen12,15,16. Anledningen till detta resultat kan bero på förvirrande effekter i samband med skandinaviska skada och brist på förståelse för mekanismerna genom vilka temperaturen påverkar hjärtinfarktvävnad. Därför bör de temperaturgränser vid vilka apoptos förstärks eller dämpas definieras noggrant.
För att få en bättre förståelse för mekanismerna i samband med effekten av hypotermi och ge en rationell grund för dess genomförande hos människor, är det viktigt att identifiera ett odlingstillstånd som liknar in vivo-tillstånd som kan producera skador som liknar de som observerats för det kliniska tillståndet på ett reproducerbart sätt. Ett viktigt steg mot att uppnå detta mål är att fastställa de optimala förutsättningarna för att inducera kardiomyocytapoptos. Följaktligen undersökte vi i den aktuella studien metodologiska detaljer om syre-glukos deprivation experiment med odlade celler, en lätt in vitro-modell av ischemi-reperfusion. Dessutom utvärderade vi effekten av olika hypoxic-skandinaviska tider på kardiomyocyt apoptos och verifierade vår hypotes om effekten av olika temperaturförhållanden på cell apoptos in vitro.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Annexin V-FITC cell apoptosis detection kit</td>
			<td>Bio-Technology,China</td>
			<td>C1062M</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cardiac myocyte growth supplement</td>
			<td>Sciencell,USA</td>
			<td>6252</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caspase 3 activity assay kit</td>
			<td>Bio-Technology,China</td>
			<td>C1115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caspase 8 activity assay kit</td>
			<td>Bio-Technology,China</td>
			<td>C1151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, no glucose</td>
			<td>Gibco,USA</td>
			<td>11966025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified eagle medium</td>
			<td>Gibco,USA</td>
			<td>11960044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco,USA</td>
			<td>16140071</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow cytometry</td>
			<td>CytoFLEX,USA</td>
			<td>B49007AF</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human myocardial cells</td>
			<td>BLUEFBIO,China</td>
			<td>BFN60808678</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mitochondrial membrane potential assay kit with JC-1</td>
			<td>Bio-Technology,China</td>
			<td>C2006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin solution</td>
			<td>Gibco,USA</td>
			<td>10378016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reactive oxygen species assay kit</td>
			<td>Bio-Technology,China</td>
			<td>S0033S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Three-gas incubator</td>
			<td>Memmert,Germany</td>
			<td>ICO50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA (0.25%)</td>
			<td>Gibco,USA</td>
			<td>25200056</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro assessment of myocardial protection following hypothermia-preconditioning in a human cardiac myocytes model

Ischemi/reperfusion-härledda skador dysfunktion är ett vanligt kliniskt scenario hos patienter efter hjärtkirurgi. I synnerhet är känsligheten hos kardiomyocyter för ischemisk skada högre än för andra cellpopulationer. För närvarande ger hypotermi ett betydande skydd mot en förväntad ischemisk förolämpning. Undersökningar av komplexa hypotermi-inducerad molekylära förändringar är dock fortfarande begränsade. Det är därför viktigt att identifiera ett odlingstillstånd som liknar in vivo-tillstånd som kan inducera skador som liknar dem som observerats i det kliniska tillståndet på ett reproducerbart sätt. För att efterlikna ischemiliknande tillstånd in vitro behandlades cellerna i dessa modeller av syre/ glukosbrist (OGD). Dessutom tillämpade vi ett standard tidstemperatur protokoll som används under hjärtkirurgi. Dessutom föreslår vi en metod för att använda en enkel men omfattande metod för kvantitativ analys av skador på skador. Apoptos och uttryck nivåer av apoptos-associerade proteiner bedömdes av flöde cytometri och med hjälp av en ELISA kit. I denna modell testade vi en hypotes om effekterna av olika temperaturförhållanden på kardiomyocyt apoptos in vitro. Tillförlitligheten hos denna modell beror på strikt temperaturkontroll, kontrollerbara experimentella procedurer och stabila experimentella resultat. Dessutom kan denna modell användas för att studera den molekylära mekanismen för hypotermisk kardioprotection, vilket kan ha viktiga konsekvenser för utvecklingen av kompletterande terapier för användning med hypotermi.

Effekten av OGD-exponering på hcms livskraft fastställdes genom CCK-8-analys. Jämfört med den som observerades i kontrollgruppen minskade cellens livskraft avsevärt på ett tidsberoende sätt (figur 2A). Apoptosfrekvensen hos HCMs vid olika tidpunkter efter reperfusion visade en specifik trend, där apoptosfrekvensen gradvis ökade från 0 till 16 timmar och nådde den maximala hastigheten vid 16 h-tidpunkten (figur 2B). Som OGD för 12 h minskad cellaktivi...

Watch this Scientific Journal Video about In vitro Assessment of Myocardial Protection following Hypothermia-Preconditioning in a Human Cardiac Myocytes Model at JoVE.com

In vitro Assessment of Myocardial Protection following Hypothermia-Preconditioning in a Human Cardiac Myocytes Model

De distinkta effekterna av olika grader av hypotermi på skador skydd har inte utvärderats grundligt. Målet med den aktuella studien var att kvantifiera nivåerna av celldöd efter olika hypotermibehandlingar i en human kardiomyocytbaserad modell, vilket lade grunden för framtida djupgående molekylär forskning.

In vitro-bedömning av myokardskydd efter hypotermiförkonditionering i en human hjärt myocytmodell

Ischemia/reperfusion-derived myocardial dysfunction is a common clinical scenario in patients after cardiac surgery. In particular, the sensitivity of ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Stamcellstransplantation i en In vitro Simulerad ischemi / Reperfusion Modell

Stem cell transplantation protocols are finding their way into clinical practice1,2,3. Getting better results, making the protocols more robust, and ...

Assessment of Cardiac Function and Myocardial Morphology Using Small Animal Look-locker Inversion Recovery (SALLI) MRI in Rats

Assessment of Cardiac Function and Myocardial Morphology Using Small Animal Look-locker Inversion Recovery SALLI MRI in Rats

Bedömning av hjärtfunktionen och Myocardial morfologi Använda Small Animal Look-skåp Inversion Recovery (SALLI) MRT i råttor

Small animal magnetic resonance  imaging is an important tool to study cardiac function and changes in myocardial  tissue. The high heart rates of small ...

Myocardial Infarction and Functional Outcome Assessment in Pigs

Hjärtinfarkt och bedömning Funktionell Utfall i Grisar

Introduction of newly discovered cardiovascular therapeutics into first-in-man trials depends on a strictly regulated ethical and legal roadmap. One ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Excitotoxisk Stimulering av Brain Microslices som en<em&gt; In vitro</em&gt; Modell av stroke

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Quantification of Neurovascular Protection Following Repetitive Hypoxic Preconditioning and Transient Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Kvantifiering av neurovaskulär skydd Efter Repetitiva Hypoxisk Förkonditionering och Transient Middle Cerebral artärocklusion hos möss

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week ...

Primary Outcome Assessment in a Pig Model of Acute Myocardial Infarction

Primära effektvariabeln i en grismodell av akut hjärtinfarkt

Mortality after acute myocardial infarction remains substantial and is associated with significant morbidity, like heart failure. Novel therapeutics are ...

Myocardial Infarction in Neonatal Mice, A Model of Cardiac Regeneration

Hjärtinfarkt i neonatala möss, en modell av Cardiac Regeneration

Myocardial infarction induced by coronary artery ligation has been used in many animal models as a tool to study the mechanisms of cardiac repair and ...

A Flow Cytometry-based Assay for Measuring Mitochondrial Membrane Potential in Cardiac Myocytes After Hypoxia/Reoxygenation

Ett flöde flödescytometri-baserad analys för att mäta mitokondriella membranet Potential i hjärt myocyter efter hypoxi/Reoxygenation

Timely and efficient reperfusion of the occluded coronary artery is the best strategy for decreasing myocardial infarct size in patients with a ST-segment ...

Implantation of hiPSC-derived Cardiac-muscle Patches after Myocardial Injury in a Guinea Pig Model

Implantation av hiPSC-derived hjärtmuskulatur fläckar efter Myokardskada i marsvin modell

Due to the limited regeneration capacity of the heart in adult mammals, myocardial infarction results in an irreversible loss of cardiomyocytes. This loss ...