Name: measurement of strial blood flow in mouse cochlea utilizing an open vessel-window and intravital fluorescence microscopy
Uploaded: 2021-09-21T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Strial Blood Flow in Mouse Cochlea Utilizing an Open Vessel-Window and Intravital Fluorescence Microscopy at JoVE.com

تم دعم هذا البحث من قبل NIH / NIDCD R21 DC016157 (X.Shi) ، NIH / NIDCD R01 DC015781 (X.Shi) ، NIH / NIDCD R01-DC010844 (X.Shi) ، ومؤسسة البحوث الطبية من جامعة أوريغون للصحة والعلوم (OHSU) (X.Shi).

ملاحظة: هذه جراحة عدم البقاء على قيد الحياة. تمت مراجعة جميع الإجراءات التي تنطوي على استخدام الحيوانات والموافقة عليها من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام الحيوانات في جامعة أوريغون للصحة والعلوم (رقم موافقة IACUC: TR01_IP00000968).
1. إعداد خلايا الدم الفلورسنت المسمى
<ol><li>تخدي?...

<ol>
	<li>Shi, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiopathology+of+the+cochlear+microcirculation.">Physiopathology of the cochlear microcirculation.</a> Hearing Research. 282 (1), 10-24 (2011).</li><li>Brown, J. N., Miller, J. M., Nuttall, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+changes+in+cochlear+vascular+conductance+in+mice.">Age-related changes in cochlear vascular conductance in mice.</a> Hearing Research. 86 (1), 189-194 (1995).</li><li>Gratton, M. A., Schmiedt, R. A., Schulte, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+decreases+in+endocochlear+potential+are+associated+with+vascular+abnormalities+in+the+stria+vascularis+[corrected+and+republished+article+originallly+printed+in+Hearing+Research.">Age-related decreases in endocochlear potential are associated with vascular abnormalities in the stria vascularis [corrected and republished article originallly printed in Hearing Research.</a> Hearing Research. 94 (1-2), 181-190 (1996).</li><li>Le Prell, C. G., Yamashita, D., Minami, S. B., Yamasoba, T., Miller, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+noise-induced+hearing+loss+indicate+multiple+methods+of+prevention.">Mechanisms of noise-induced hearing loss indicate multiple methods of prevention.</a> Hearing Research. 226 (1-2), 22-43 (2007).</li><li>Miller, J., Ren, T. -. Y., Laurikainen, E., Golding-Wood, D., Nuttall, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrops-induced+changes+in+cochlear+blood+flow.">Hydrops-induced changes in cochlear blood flow.</a> The Annals of otology, rhinology, and laryngology. 104 (6), 476-483 (1995).</li><li>Miller, J. M., Ren, T. -. Y., Nuttall, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+of+inner+ear+blood+flow+in+animals+and+human+beings.">Studies of inner ear blood flow in animals and human beings.</a> Otolaryngology-Head and Neck Surgery. 112 (1), 101-113 (1995).</li><li>Nakashima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disorders+of+cochlear+blood+flow.">Disorders of cochlear blood flow.</a> Brain Research Reviews. 43 (1), 17-28 (2003).</li><li>Nuttall, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sound-induced+cochlear+ischemia/hypoxia+as+a+mechanism+of+hearing+loss.">Sound-induced cochlear ischemia/hypoxia as a mechanism of hearing loss.</a> Noise and Health. 2 (5), 17 (1999).</li><li>Trune, D. R., Nguyen-Huynh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+pathophysiology+in+hearing+disorders.">Vascular pathophysiology in hearing disorders.</a> Seminars in Hearing. , 242-250 (2012).</li><li>Nakashima, T., Hattori, T., Sone, M., Sato, E., Tominaga, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+flow+measurements+in+the+ears+of+patients+receiving+cochlear+implants.">Blood flow measurements in the ears of patients receiving cochlear implants.</a> The Annals of otology, rhinology, and laryngology. 111 (11), 998-1001 (2002).</li><li>Ren, T., Brechtelsbauer, P. B., Miller, J. M., Nuttall, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cochlear+blood+flow+measured+by+averaged+laser+Doppler+flowmetry+(ALDF).">Cochlear blood flow measured by averaged laser Doppler flowmetry (ALDF).</a> Hearing Research. 77 (1-2), 200-206 (1994).</li><li>Goodwin, P. C., Miller, J. M., Dengerink, H. A., Wright, J. W., Axelsson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+laser+Doppler:+a+non-invasive+measure+of+cochlear+blood+flow.">The laser Doppler: a non-invasive measure of cochlear blood flow.</a> Acta Otolaryngologica. 98 (5-6), 403-412 (1984).</li><li>Le Floc'h, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Markers+of+cochlear+inflammation+using+MRI.">Markers of cochlear inflammation using MRI.</a> Journal of Magnetic Resonance Imaging. 39 (1), 150-161 (2014).</li><li>Axelsson, A., Nuttall, A. L., Miller, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observations+of+cochlear+microcirculation+using+intravital+microscopy.">Observations of cochlear microcirculation using intravital microscopy.</a> Acta Otolaryngologica. 109 (3-4), 263-270 (1990).</li><li>Monfared, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+mammalian+cochlear+blood+flow+using+fluorescence+microendoscopy.">In vivo imaging of mammalian cochlear blood flow using fluorescence microendoscopy.</a> Otology &amp; Neurotology. 27 (2), 144 (2006).</li><li>Kong, T. H., Yu, S., Jung, B., Choi, J. S., Seo, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+blood-flow+in+the+mouse+cochlea+using+an+endoscopic+laser+speckle+contrast+imaging+system.">Monitoring blood-flow in the mouse cochlea using an endoscopic laser speckle contrast imaging system.</a> PLoS One. 13 (2), 0191978 (2018).</li><li>Angelborg, C., Hillerdal, M., Hultcrantz, E., Larsen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+microsphere+method+for+studies+of+inner+ear+blood+flow.">The microsphere method for studies of inner ear blood flow.</a> ORL. 50 (6), 355-362 (1988).</li><li>Choudhury, N., Chen, F., Shi, X., Nuttall, A. L., Wang, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Volumetric+imaging+of+blood+flow+within+cochlea+in+gerbil+in+vivo.">Volumetric imaging of blood flow within cochlea in gerbil in vivo.</a> IEEE Journal of Selected Topics in Quantum Electronics. 16 (3), 524-529 (2010).</li><li>Subhash, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Volumetric+in+vivo+imaging+of+microvascular+perfusion+within+the+intact+cochlea+in+mice+using+ultra-high+sensitive+optical+microangiography.">Volumetric in vivo imaging of microvascular perfusion within the intact cochlea in mice using ultra-high sensitive optical microangiography.</a> IEEE Transactions on Medical Imaging. 30 (2), 224-230 (2011).</li><li>Reif, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+hypoxia+induced+changes+in+cochlear+blood+flow+and+hemoglobin+concentration+using+a+combined+dual-wavelength+laser+speckle+contrast+imaging+and+Doppler+optical+microangiography+system.">Monitoring hypoxia induced changes in cochlear blood flow and hemoglobin concentration using a combined dual-wavelength laser speckle contrast imaging and Doppler optical microangiography system.</a> PLoS One. 7 (12), 52041 (2012).</li><li>Nuttall, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+for+the+observation+and+measurement+of+red+blood+cell+velocity+in+vessels+of+the+guinea+pig+cochlea.">Techniques for the observation and measurement of red blood cell velocity in vessels of the guinea pig cochlea.</a> Hearing Research. 27 (2), 111-119 (1987).</li><li>Nuttall, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cochlear+blood+flow:+measurement+techniques.">Cochlear blood flow: measurement techniques.</a> American Journal of Otolaryngology. 9 (6), 291-301 (1988).</li><li>Hanna, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+measurement+of+blood+flow+velocity+and+direction+and+hemoglobin+oxygen+saturation+in+the+rat+lung+using+intravital+microscopy.">Automated measurement of blood flow velocity and direction and hemoglobin oxygen saturation in the rat lung using intravital microscopy.</a> American Journal of Physiology. Lung Cellular Molecular Physiology. 304 (2), 86-91 (2013).</li><li>Narciso, M. G., Nasimuzzaman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+platelets+from+mouse+blood.">Purification of platelets from mouse blood.</a> Journal of Visualized Experiments. (147), e59803 (2019).</li><li>Shi, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thin+and+open+vessel+windows+for+intra-vital+fluorescence+imaging+of+murine+cochlear+blood+flow.">Thin and open vessel windows for intra-vital fluorescence imaging of murine cochlear blood flow.</a> Hearing Research. 313, 38-46 (2014).</li><li>Lorenz, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+practical+guide+to+evaluating+cardiovascular,+renal,+and+pulmonary+function+in+mice.">A practical guide to evaluating cardiovascular, renal, and pulmonary function in mice.</a> American Journal of Physiology. Regulatory, Integrative, and Comparative Physiology. 282 (6), 1565-1582 (2002).</li><li>Dai, M., Shi, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibro-vascular+coupling+in+the+control+of+cochlear+blood+flow.">Fibro-vascular coupling in the control of cochlear blood flow.</a> PloS One. 6 (6), 20652 (2011).</li><li>Shi, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cochlear+pericyte+responses+to+acoustic+trauma+and+the+involvement+of+hypoxia-inducible+factor-1alpha+and+vascular+endothelial+growth+factor.">Cochlear pericyte responses to acoustic trauma and the involvement of hypoxia-inducible factor-1alpha and vascular endothelial growth factor.</a> American Journal of Pathology. 174 (5), 1692-1704 (2009).</li><li>Hou, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-derived+growth+factor+subunit+B+signaling+promotes+pericyte+migration+in+response+to+loud+sound+in+the+cochlear+stria+vascularis.">Platelet-derived growth factor subunit B signaling promotes pericyte migration in response to loud sound in the cochlear stria vascularis.</a> Journal of the Association for Research in Otolaryngology. 19 (4), 363-379 (2018).</li><li>Hultcrantz, E., Nuttall, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+hemodilution+on+cochlear+blood+flow+measured+by+laser-Doppler+flowmetry.">Effect of hemodilution on cochlear blood flow measured by laser-Doppler flowmetry.</a> American Journal of Otolaryngology. 8 (1), 16-22 (1987).</li></ol>

توضح هذه الورقة كيف يمكن تصور الشعيرات الدموية في الجدار الجانبي للقوقعة الصناعية (وفي ستريا والأوعية الدموية) لنموذج الفأر مع وضع العلامات الفلوروفورية في إعداد نافذة وعاء مفتوح تحت نظام FIVM. يستخدم نموذج الماوس على نطاق واسع ويفضل كنموذج للثدييات للتحقيق في صحة الإنسان ومرضه. البروتوكو?...

تعد الوظيفة الطبيعية لدوران الأوعية الدقيقة في جدار القوقعة الصناعية الجانبي (الذي يضم غالبية الشعيرات الدموية في الرباط الحلزوني والأوعية الدموية المخططة) مهمة للغاية للحفاظ على وظيفة السمع1. CoBF غير طبيعي متورط في الفيزيولوجيا المرضية للعديد من اضطرابات الأذن الداخلية بما في ذلك فقدان السمع الناجم عن الضوضاء ، واستسقاء الأذن ، و presbycusis2،3،4،5،6،7،8،9. سيمكن تصور CoBF داخل الحيوية من فهم أفضل للروابط بين وظيفة السمع وأمراض الأوعية الدموية القوقعية.
على الرغم من أن تعقيد القوقعة وموقعها داخل العظم الصدغي يحول دون التصور المباشر وقياس CoBF ، فقد تم تطوير طرق مختلفة لتقييم CoBF بما في ذلك قياس تدفق الدوبلر بالليزر (LDF) 10،11،12 ، التصوير بالرنين المغناطيسي (MRI) 13 ، المجهر الفلوري داخل الحيوية (FIVM) 14 ، التنظير المجهري الفلوري (FME) 15 ، التصوير بالأشعة بالليزر بالمنظار (LSCI)16 ، والنهج القائمة على حقن العلامات الموسومة والميكروسفير الموسوم إشعاعيا في مجرى الدم (تصوير الأوعية الدقيقة الضوئية، OMAG)17،18،19،20. ومع ذلك ، لم تمكن أي من هذه الطرق من التتبع المطلق في الوقت الفعلي للتغيرات في CoBF في الجسم الحي ، باستثناء FIVM. FIVM ، بالاقتران مع نافذة وعاء في جدار القوقعة الصناعية الجانبي ، هو نهج تم استخدامه والتحقق من صحته في خنزير غينيا في ظل ظروف تجريبية مختلفة من قبل مختبرات مختلفة14،21،22.
تم إنشاء طريقة FIVM بنجاح لدراسة التغيرات الهيكلية والوظيفية في دوران الأوعية الدقيقة القوقعة الصناعية في الفأر باستخدام فلوريسين إيزوثيوسيانات (FITC)-dextran كوسط تباين وصبغة فلورية - إما DiO (3 ، 3′-dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate ، الأخضر) أو Dil (1,1-dioctadecyl-3,3,3,3-tetramethylindocarbocyanine perchlorate ، red) - لوضع العلامات المسبقة على خلايا الدم ، وتصور الأوعية ، وتتبع سرعة تدفق الدم. في هذه الدراسة ، تم وصف بروتوكول هذه الطريقة للتصوير وتحديد التغيرات في CoBF في الفئران في ظل الظروف العادية والمرضية (مثل بعد التعرض للضوضاء). تمنح هذه التقنية الباحث الأدوات اللازمة للتحقيق في الآليات الأساسية ل CoBF المتعلقة بضعف السمع وعلم الأمراض في الأوعية الدموية stria ، خاصة عند تطبيقها بالاقتران مع نماذج الفئران المعدلة وراثيا المتاحة بسهولة.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.9% Sodium Chloride</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>NDC 0409-1966-02</td>
			<td>0.6 mL (for 1 mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1,1&#8242;-Dioctadecyl-3,3,3&#8242;,3&#8242;-tetramethylindocarbocyanine perchlorate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>468495</td>
			<td>20 &#181;M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3,3&#8242;-Dioctadecyloxacarbocyanine perchlorateDio (3,3&#8242;-Dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D4292</td>
			<td>20 &#181;M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CODA Monitor system</td>
			<td>Kent scientific</td>
			<td></td>
			<td>CODA Monitor, for monitoring blood pressure and heartbeat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslip</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-542A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DC Temperature Controller</td>
			<td>FHC</td>
			<td>40-90-8D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji/ImageJ</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td>Measurement of vessel diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC-dextran (2000 kDa)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>FD2000s</td>
			<td>40 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin Sodium Injection, USP MDV</td>
			<td>Mylan</td>
			<td>NDC 67457-374-12</td>
			<td>5000 USP units/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Katathesia (100 mg/mL)</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>NDC 11695-0702-1</td>
			<td>0.2 mL (for 1 mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Objective</td>
			<td>Mitutoyo</td>
			<td>378-823-5</td>
			<td>Model: M Plan Apo NIR 10x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ORCA-ER Camera</td>
			<td>Hamamatsu</td>
			<td></td>
			<td>Model: C4742-80-12AG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>2085387</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xyzaine (100 mg/ml, 5x diluted for use )</td>
			<td>Lloyd</td>
			<td>LPFL04821</td>
			<td>0.2 mL (for 1 mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zoom Stereo Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>Model: SZ61, fluorescent microscope</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measurement of strial blood flow in mouse cochlea utilizing an open vessel-window and intravital fluorescence microscopy

يتطلب نقل الصوت عملية التمثيل الغذائي ، والوظيفة الطبيعية للأوعية الدموية الدقيقة في الجدار الجانبي أمر بالغ الأهمية للحفاظ على إمكانات القوقعة الداخلية ، ونقل الأيونات ، وتوازن السوائل. تم الإبلاغ عن أشكال مختلفة من اضطرابات السمع تنطوي على دوران الأوعية الدقيقة غير الطبيعي في القوقعة. يعد التحقيق في كيفية تأثير أمراض تدفق الدم القوقعي (CoBF) على وظيفة السمع أمرا صعبا بسبب عدم وجود طرق استجواب مجدية وصعوبة الوصول إلى الأذن الداخلية. تم استخدام نافذة وعاء مفتوحة في جدار القوقعة الصناعية الجانبي ، جنبا إلى جنب مع المجهر الفلوري داخل الحيوية ، لدراسة تغيرات CoBF في الجسم الحي ، ولكن في الغالب في خنزير غينيا ومؤخرا فقط في الفأر. تصف هذه الورقة والفيديو المرتبط بها طريقة نافذة الأوعية المفتوحة لتصور تدفق الدم في قوقعة الفأر. وتشمل التفاصيل 1) إعداد تعليق خلايا الدم المسمى بالفلورسنت من الفئران. 2) بناء نافذة وعاء مفتوحة للفحص المجهري داخل الحيوية في فأر مخدر ، و 3) قياس سرعة تدفق الدم وحجمه باستخدام تسجيل غير متصل بالإنترنت للتصوير. يتم تقديم الطريقة في شكل فيديو لإظهار كيفية استخدام نهج النافذة المفتوحة في الماوس للتحقيق في التغيرات الهيكلية والوظيفية في دوران الأوعية الدقيقة للقوقعة الصناعية في ظل الظروف العادية والمرضية.

بعد التعرض الجراحي للشعيرات الدموية القوقعية في الجدار الجانبي (الشكل 1) ، كانت المراقبة المجهرية الفلورية عالية الدقة داخل الحيوية لخلايا الدم التي تحمل علامة ديل في الأوعية التي تحمل علامة FITC-dextran ممكنة من خلال نافذة وعاء مفتوحة. الشكل 2A...

Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Strial Blood Flow in Mouse Cochlea Utilizing an Open Vessel-Window and Intravital Fluorescence Microscopy at JoVE.com

Measurement of Strial Blood Flow in Mouse Cochlea Utilizing an Open Vessel-Window and Intravital Fluorescence Microscopy

يوفر نهج نافذة الأوعية المفتوحة باستخدام مقتفيات الفلورسنت دقة كافية لقياس تدفق الدم في القوقعة الصناعية (CoBF). تسهل هذه الطريقة دراسة التغيرات الهيكلية والوظيفية في CoBF في الفئران في ظل الظروف الطبيعية والمرضية.

قياس تدفق الدم الغريلي في قوقعة الفئران باستخدام نافذة الأوعية المفتوحة والمجهر الفلوري داخل الحيوية

Transduction of sound is metabolically demanding, and the normal function of the microvasculature in the lateral wall is critical for maintaining ...

يعد إمداد الدم الطبيعي إلى القوقعة أمرا بالغ الأهمية لمرض القوقعة الصناعية Meniere خاصة للحفاظ على إمكانات القوقعة الصناعية الداخلية التي تعد القوة الدافعة الأساسية لمعاملة خلايا الشعر. وقد ارتبطت هذه الوظيفة من الدورة الدموية ارتباطا وثيقا مع أشكال مختلفة من فقدان السمع. إن الفهم الأفضل لتدفق الدم في القوقعة الصناعية سيمكن من إدارة أكثر فعالية لاضطرابات السمع الناتجة عن خلل تدفق الدم.ومع ذلك ، فإن قياس تدفق الدم المباشر يمثل تحديا كبيرا للغاية بسبب صعوبة تقييم الأذن الداخلية. لا تزال تقنيات تقييم تدفق الدم القوقعة الصناعية قيد التطوير حاليا. نوضح هنا إحدى الطرق الحديثة التي تم إنشاؤها في مختبرنا تفتح نافذة العضلات في الإقامة مع المجهر الفلوري عالي الدقة لتضييق تدفق دم القوقعة الصناعية في أنواع الحيوانات الصغيرة مثل الفئران.تطبيق هذه التقنية مع نماذج الكتلة عبر الجينية لديه القدرة على تطوير البحوث لكشف الروابط بين وظيفة السمع وعلم الأمراض المتعلقة بتدفق الدم القوقعة الصناعية في المخاطر داخل الأوعية الدموية. يجب أن تتم إجراءاتنا بحذر. بالإضافة إلى نزيف الجسم اللحظي ، يجب مراقبة العلامات الحيوية للحيوانات ، بما في ذلك ضغط الدم وضربات القلب ، أثناء الجراحة.ابدأ بجمع ما يقرب من ملليمتر واحد من الدم في الهيبارين عن طريق ثقب القلب. الطرد المركزي للدم في 3000 مرة G لمدة ثلاث دقائق عند أربع درجات مئوية. قم بإزالة البلازما ، ثم اغسل حبيبة خلايا الدم بملليلتر واحد من PBS ثلاث مرات عن طريق الطرد المركزي عند 3000 مرة G لمدة ثلاث دقائق عند أربع درجات مئوية.قم بتسمية خلايا الدم بملليلتر واحد من 20 ميكرومولار DiO أو Dil في PBS ، واحتضنها في الظلام لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. اغسل خلايا الدم المصنفة بملليلتر واحد من PBS وأجهزة الطرد المركزي ثلاث مرات في 3000 مرة G لمدة ثلاث دقائق. أعد تعليق بيليه الخلية في 30٪ هيماتوكريت مع ما يقرب من 0.9 ملليلتر من PBS قبل الحقن.قم بإعداد أدوات جراحية معقمة ومنصة تصوير ووضع وسادة تدفئة أسفل الستائر. راقب رد الفعل الضعيف وقوة العضلات العامة للفئران المخدرة للتحقق من عمق التخدير. ضع الحيوان على وسادة التدفئة الدافئة وذيله في نظام المراقبة لمراقبة ضغط الدم وضربات القلب.الحفاظ على درجة حرارة المستقيم عند 37 درجة مئوية وتسجيل ضغط الدم الانقباضي للحيوان وضغط الدم الانبساطي ومتوسط ضغط الدم في حالة التخدير. افتح الثورا الطبلية اليسرى عبر نهج جانبي وبطني تحت مجهر ستيريو تاركا الغشاء الطبلي والعظيمات سليمة. قم بعمل شق على طول خط الوسط من عنق الحيوان مع شل حركة رأسه لتقليل الحركة.إزالة الغدة تحت الفك السفلي اليسرى والبطن الخلفي للعضلة digastric والكي. حدد موقع الفقاعة العظمية وكشفها عن طريق تحديد العضلة القصية والعصب الوجهي الممتد أماميا نحو الفولا. افتح البولا العظمية بإبرة قياس 30 وقم بإزالة العظم المحيط بعناية باستخدام ملاقط جراحية لتوفير رؤية واضحة للشريان القوقعي والشريان المستقر مع وجود هامشه الإنسي على حافة مكان النافذة المستديرة ويسبب تفوقا أماميا نحو النافذة البيضاوية.استخدم شفرة سكين صغيرة لكشط عظم الجدار الجانبي عند المنعطف الأوسط العلوي لقوقعة الفأر على بعد حوالي 1.25 ملم من القمة حتى يتم تكسير بقعة رقيقة. قم بإزالة رقائق العظام باستخدام خطافات سلكية صغيرة. قم بتغطية نافذة الوعاء بغطاء مقطوع للحفاظ على الظروف الفسيولوجية الطبيعية وتوفير رؤية بصرية لتسجيل صور السفينة.قم بعمل شق سنتيمتر واحد على طول الوريد الصافن الأيمن لفضح الوعاء. على التوالي غرس 100 ميكرولتر كل من محلول FITC-Dextran وتعليق خلايا الدم في الحيوان من خلال الوريد الصافن لتمكين تصور الأوعية الدموية وتتبع تدفق الدم. راقب تدفق الدم في الوقت الفعلي على شاشة فيديو بعد خمس دقائق من الحقن.صور الأوعية الدموية باستخدام مجهر فلوري مجهز بهدف مسافة عمل طويلة وغلاف مصباح يحتوي على مرشح إثارة متعدد النطاقات ومرشح انبعاثات متوافق. سجل الفيديو باستخدام كاميرا جهاز رقمية عالية الدقة بالأبيض والأسود تحصل على أكثر من 350 صورة لكل فيديو. لضمان التحليل الناجح لسرعة التدفق.قياس قطر السفينة باستخدام البرامج المناسبة وتحديد المسافة بين نقطتين ثابتتين عبر السفينة في الصور التي تم الحصول عليها. افتح فيديو تدفق الدم في البرنامج واضبط مقياس الصور. تتبع خلايا الدم الملطخة DiO المحددة باستخدام وظيفة التتبع.ثم استخدم المسافة التي تحركت بها الخلايا والفاصل الزمني بين إطارات الصور في الفيديو للحساب التلقائي لسرعة التدفق. احسب التدفق الحجمي باستخدام المعادلة الواردة في مخطوطة النص. لإنشاء نموذج التعرض للضوضاء قبل تسجيل تدفق الدم ، ضع الحيوانات في أقفاص شبكية سلكية وعرضها لضوضاء النطاق العريض عند مستوى ضغط صوت 120 ديسيبل في كشك التعرض للصوت لمدة ثلاث ساعات.ثم لمدة ثلاث ساعات إضافية في اليوم التالي. سجل تدفق الدم بعد أسبوعين من التعرض للضوضاء. بعد التعرض الجراحي للشعيرات الدموية القوقعية في الجدار الجانبي، تم إجراء مراقبة مجهرية فلورية عالية الدقة داخل الحيوية لخلايا الدم المسماة DiL في الأوعية التي تحمل علامة FITC Dextran من خلال نافذة وعاء مفتوحة.تظهر هنا خلايا الدم المصنفة DiL في أوعية ستريا الموسومة ب FITC Dextran. تظهر خلايا الدم المسماة Dio الموسومة ب FITC Dextran أن كثافة الأوعية الدموية للرباط الحلزوني أقل من كثافة الأوعية الدموية الأكثر كثافة. يظهر IVM عالي الدقة أنماط تدفق الدم في المجموعات الضابطة والضوضاء المعرضة للضوضاء.يمكن رؤية النمط المضطرب للدورة الدموية في المجموعات المعرضة للضوضاء. وشملت الحالات الشاذة انخفاض قطر الوعاء وزيادة التباين في قطر السفينة. تم حساب سرعات تدفق الدم في مجموعات التحكم والضوضاء المعرضة عن طريق تتبع جذور خلايا الدم المسماة DiO.كانت سرعة الدم وحجمه في المجموعة المكشوفة للضوضاء أقل بكثير مما كانت عليه في المجموعة الضابطة. يتطلب الإنشاء الناجح لنافذة السفينة المفتوحة درجة عالية من المهارة الجراحية. يجب توخي الحذر في إزالة عظم الجدار الجانبي للقوقعة الصناعية.

Research

JoVE Journal

Medicine

Visualization and Analysis of Blood Flow and Oxygen Consumption in Hepatic Microcirculation: Application to an Acute Hepatitis Model

التصور والتحليل من تدفق الدم واستهلاك الأكسجين في دوران الأوعية الدقيقة كبدي: تطبيق نموذج لالتهاب الكبد الحاد

There is a considerable discrepancy between oxygen supply and demand in the liver because hepatic oxygen consumption is relatively high but about 70% of ...

An Orthotopic Glioblastoma Mouse Model Maintaining Brain Parenchymal Physical Constraints and Suitable for Intravital Two-photon Microscopy

ومثلي الأشكال ورم أرومي نموذج الفأر القيود الحفاظ على الدماغ متني البدنية ومناسبة لحيوي داخلي ثنائي الفوتون المجهري

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most aggressive form of brain tumors with no curative treatments available to date.
Murine models of this pathology ...

Intravital Video Microscopy Measurements of Retinal Blood Flow in Mice

Alterations in retinal blood flow can contribute to, or be a consequence of, ocular disease and visual dysfunction. Therefore, quantitation of altered ...

Automated Measurement of Microcirculatory Blood Flow Velocity in Pulmonary Metastases of Rats

القياس الآلي من الأوعية الدقيقة سرعة تدفق الدم في الرئة الانبثاث من الجرذان

Because the lung is a major target organ of metastatic disease, animal models to study the physiology of pulmonary metastases are of great importance. ...

Evaluation of Planar-Cell-Polarity Phenotypes in Ciliopathy Mouse Mutant Cochlea

تقييم مستو خلية-التقاطب الظواهر في Ciliopathy ماوس المسخ القوقعة

In recent years, primary cilia have emerged as key regulators in development and disease by influencing numerous signaling pathways. One of the earliest ...

Combined Intravital Microscopy and Contrast-enhanced Ultrasonography of the Mouse Hindlimb to Study Insulin-induced Vasodilation and Muscle Perfusion

جنبا إلى جنب إينترافيتال المجهري وتخطيط الصدى محسنة على النقيض من اللكتات الماوس على دراسة توسع الأوعية التي يسببها الأنسولين ونضح العضلات

It has been demonstrated that insulin's vascular actions contribute to regulation of insulin sensitivity. Insulin's effects on muscle perfusion regulate ...

Intravital Microscopy and Thrombus Induction in the Earlobe of a Hairless Mouse

حيوي داخلي المجهري والجلطة التعريفي في شحمة الأذن ماوس بلا شعر

Thrombotic complications of vascular diseases are one leading cause of morbidity and mortality in industrial nations. Due to the complex interactions ...

A Chronic Cardiac Ischemia Model in Swine Using an Ameroid Constrictor

نموذج الاسكيمية القلب مزمنة في الخنازير باستخدام العاصرة أميرويد

Cardiovascular disease remains the number one cause of mortality in the United States. There are numerous approaches to treating these diseases, but ...

Simultaneous Electrocardiography Recording and Invasive Blood Pressure Measurement in Rats

تسجيل كهربية متزامنة والدم الغازية الضغط القياس في الفئران

For studies related to cardiovascular physiology or pathophysiology, blood pressure (BP) and electrocardiography are basic observational parameters. ...

Simultaneous Flow Cytometric Characterization of Multiple Cell Types Retrieved from Mouse Brain/Spinal Cord Through Different Homogenization Methods

توصيف التدفق الخلوي المتزامن لأنواع الخلايا المتعددة التي تم استردادها من الدماغ/الحبل الشوكي من خلال أساليب تجانس مختلفه

Recent advances in viral vector and nanomaterial sciences have opened the way for new cutting-edge approaches to investigate or manipulate the central ...