Name: measurement of strial blood flow in mouse cochlea utilizing an open vessel-window and intravital fluorescence microscopy
Uploaded: 2021-09-21T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Measurement of Strial Blood Flow in Mouse Cochlea Utilizing an Open Vessel-Window and Intravital Fluorescence Microscopy at JoVE.com

यह शोध एनआईएच / एनआईडीसीडी आर 21 डीसी 016157 (एक्स.शी), एनआईएच / एनआईडीसीडी आर 01 डीसी 015781 (एक्स.शी), एनआईएच / एनआईडीसीडी आर 01-डीसी 010844 (एक्स.शी), और ओरेगन हेल्थ एंड साइंस यूनिवर्सिटी (ओएचएसयू) (एक्स.शि) से मेडिकल रिसर्च फाउंडेशन द्वारा समर्थित था।

नोट: यह एक गैर-उत्तरजीविता सर्जरी है। जानवरों के उपयोग से जुड़ी सभी प्रक्रियाओं की समीक्षा की गई और ओरेगन हेल्थ एंड साइंस यूनिवर्सिटी (आईएसीयूसी अनुमोदन संख्या: TR01_IP00000968) में संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग...

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	<li>Shi, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiopathology+of+the+cochlear+microcirculation.">Physiopathology of the cochlear microcirculation.</a> Hearing Research. 282 (1), 10-24 (2011).</li><li>Brown, J. N., Miller, J. M., Nuttall, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+changes+in+cochlear+vascular+conductance+in+mice.">Age-related changes in cochlear vascular conductance in mice.</a> Hearing Research. 86 (1), 189-194 (1995).</li><li>Gratton, M. A., Schmiedt, R. A., Schulte, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+decreases+in+endocochlear+potential+are+associated+with+vascular+abnormalities+in+the+stria+vascularis+[corrected+and+republished+article+originallly+printed+in+Hearing+Research.">Age-related decreases in endocochlear potential are associated with vascular abnormalities in the stria vascularis [corrected and republished article originallly printed in Hearing Research.</a> Hearing Research. 94 (1-2), 181-190 (1996).</li><li>Le Prell, C. G., Yamashita, D., Minami, S. B., Yamasoba, T., Miller, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+noise-induced+hearing+loss+indicate+multiple+methods+of+prevention.">Mechanisms of noise-induced hearing loss indicate multiple methods of prevention.</a> Hearing Research. 226 (1-2), 22-43 (2007).</li><li>Miller, J., Ren, T. -. Y., Laurikainen, E., Golding-Wood, D., Nuttall, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrops-induced+changes+in+cochlear+blood+flow.">Hydrops-induced changes in cochlear blood flow.</a> The Annals of otology, rhinology, and laryngology. 104 (6), 476-483 (1995).</li><li>Miller, J. M., Ren, T. -. Y., Nuttall, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+of+inner+ear+blood+flow+in+animals+and+human+beings.">Studies of inner ear blood flow in animals and human beings.</a> Otolaryngology-Head and Neck Surgery. 112 (1), 101-113 (1995).</li><li>Nakashima, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disorders+of+cochlear+blood+flow.">Disorders of cochlear blood flow.</a> Brain Research Reviews. 43 (1), 17-28 (2003).</li><li>Nuttall, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sound-induced+cochlear+ischemia/hypoxia+as+a+mechanism+of+hearing+loss.">Sound-induced cochlear ischemia/hypoxia as a mechanism of hearing loss.</a> Noise and Health. 2 (5), 17 (1999).</li><li>Trune, D. R., Nguyen-Huynh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+pathophysiology+in+hearing+disorders.">Vascular pathophysiology in hearing disorders.</a> Seminars in Hearing. , 242-250 (2012).</li><li>Nakashima, T., Hattori, T., Sone, M., Sato, E., Tominaga, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blood+flow+measurements+in+the+ears+of+patients+receiving+cochlear+implants.">Blood flow measurements in the ears of patients receiving cochlear implants.</a> The Annals of otology, rhinology, and laryngology. 111 (11), 998-1001 (2002).</li><li>Ren, T., Brechtelsbauer, P. B., Miller, J. M., Nuttall, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cochlear+blood+flow+measured+by+averaged+laser+Doppler+flowmetry+(ALDF).">Cochlear blood flow measured by averaged laser Doppler flowmetry (ALDF).</a> Hearing Research. 77 (1-2), 200-206 (1994).</li><li>Goodwin, P. C., Miller, J. M., Dengerink, H. A., Wright, J. W., Axelsson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+laser+Doppler:+a+non-invasive+measure+of+cochlear+blood+flow.">The laser Doppler: a non-invasive measure of cochlear blood flow.</a> Acta Otolaryngologica. 98 (5-6), 403-412 (1984).</li><li>Le Floc'h, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Markers+of+cochlear+inflammation+using+MRI.">Markers of cochlear inflammation using MRI.</a> Journal of Magnetic Resonance Imaging. 39 (1), 150-161 (2014).</li><li>Axelsson, A., Nuttall, A. L., Miller, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observations+of+cochlear+microcirculation+using+intravital+microscopy.">Observations of cochlear microcirculation using intravital microscopy.</a> Acta Otolaryngologica. 109 (3-4), 263-270 (1990).</li><li>Monfared, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+mammalian+cochlear+blood+flow+using+fluorescence+microendoscopy.">In vivo imaging of mammalian cochlear blood flow using fluorescence microendoscopy.</a> Otology &amp; Neurotology. 27 (2), 144 (2006).</li><li>Kong, T. H., Yu, S., Jung, B., Choi, J. S., Seo, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+blood-flow+in+the+mouse+cochlea+using+an+endoscopic+laser+speckle+contrast+imaging+system.">Monitoring blood-flow in the mouse cochlea using an endoscopic laser speckle contrast imaging system.</a> PLoS One. 13 (2), 0191978 (2018).</li><li>Angelborg, C., Hillerdal, M., Hultcrantz, E., Larsen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+microsphere+method+for+studies+of+inner+ear+blood+flow.">The microsphere method for studies of inner ear blood flow.</a> ORL. 50 (6), 355-362 (1988).</li><li>Choudhury, N., Chen, F., Shi, X., Nuttall, A. L., Wang, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Volumetric+imaging+of+blood+flow+within+cochlea+in+gerbil+in+vivo.">Volumetric imaging of blood flow within cochlea in gerbil in vivo.</a> IEEE Journal of Selected Topics in Quantum Electronics. 16 (3), 524-529 (2010).</li><li>Subhash, H. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Volumetric+in+vivo+imaging+of+microvascular+perfusion+within+the+intact+cochlea+in+mice+using+ultra-high+sensitive+optical+microangiography.">Volumetric in vivo imaging of microvascular perfusion within the intact cochlea in mice using ultra-high sensitive optical microangiography.</a> IEEE Transactions on Medical Imaging. 30 (2), 224-230 (2011).</li><li>Reif, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+hypoxia+induced+changes+in+cochlear+blood+flow+and+hemoglobin+concentration+using+a+combined+dual-wavelength+laser+speckle+contrast+imaging+and+Doppler+optical+microangiography+system.">Monitoring hypoxia induced changes in cochlear blood flow and hemoglobin concentration using a combined dual-wavelength laser speckle contrast imaging and Doppler optical microangiography system.</a> PLoS One. 7 (12), 52041 (2012).</li><li>Nuttall, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Techniques+for+the+observation+and+measurement+of+red+blood+cell+velocity+in+vessels+of+the+guinea+pig+cochlea.">Techniques for the observation and measurement of red blood cell velocity in vessels of the guinea pig cochlea.</a> Hearing Research. 27 (2), 111-119 (1987).</li><li>Nuttall, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cochlear+blood+flow:+measurement+techniques.">Cochlear blood flow: measurement techniques.</a> American Journal of Otolaryngology. 9 (6), 291-301 (1988).</li><li>Hanna, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+measurement+of+blood+flow+velocity+and+direction+and+hemoglobin+oxygen+saturation+in+the+rat+lung+using+intravital+microscopy.">Automated measurement of blood flow velocity and direction and hemoglobin oxygen saturation in the rat lung using intravital microscopy.</a> American Journal of Physiology. Lung Cellular Molecular Physiology. 304 (2), 86-91 (2013).</li><li>Narciso, M. G., Nasimuzzaman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+platelets+from+mouse+blood.">Purification of platelets from mouse blood.</a> Journal of Visualized Experiments. (147), e59803 (2019).</li><li>Shi, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thin+and+open+vessel+windows+for+intra-vital+fluorescence+imaging+of+murine+cochlear+blood+flow.">Thin and open vessel windows for intra-vital fluorescence imaging of murine cochlear blood flow.</a> Hearing Research. 313, 38-46 (2014).</li><li>Lorenz, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+practical+guide+to+evaluating+cardiovascular,+renal,+and+pulmonary+function+in+mice.">A practical guide to evaluating cardiovascular, renal, and pulmonary function in mice.</a> American Journal of Physiology. Regulatory, Integrative, and Comparative Physiology. 282 (6), 1565-1582 (2002).</li><li>Dai, M., Shi, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibro-vascular+coupling+in+the+control+of+cochlear+blood+flow.">Fibro-vascular coupling in the control of cochlear blood flow.</a> PloS One. 6 (6), 20652 (2011).</li><li>Shi, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cochlear+pericyte+responses+to+acoustic+trauma+and+the+involvement+of+hypoxia-inducible+factor-1alpha+and+vascular+endothelial+growth+factor.">Cochlear pericyte responses to acoustic trauma and the involvement of hypoxia-inducible factor-1alpha and vascular endothelial growth factor.</a> American Journal of Pathology. 174 (5), 1692-1704 (2009).</li><li>Hou, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet-derived+growth+factor+subunit+B+signaling+promotes+pericyte+migration+in+response+to+loud+sound+in+the+cochlear+stria+vascularis.">Platelet-derived growth factor subunit B signaling promotes pericyte migration in response to loud sound in the cochlear stria vascularis.</a> Journal of the Association for Research in Otolaryngology. 19 (4), 363-379 (2018).</li><li>Hultcrantz, E., Nuttall, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+hemodilution+on+cochlear+blood+flow+measured+by+laser-Doppler+flowmetry.">Effect of hemodilution on cochlear blood flow measured by laser-Doppler flowmetry.</a> American Journal of Otolaryngology. 8 (1), 16-22 (1987).</li></ol>

यह पेपर दर्शाता है कि माउस मॉडल की कॉक्लियर पार्श्व दीवार (और स्ट्रिया संवहनी में) में केशिकाओं को एफआईवीएम प्रणाली के तहत एक खुले पोत-खिड़की की तैयारी में फ्लोरोफोर लेबलिंग के साथ कैसे देखा जा सकता है?...

पार्श्व कोक्लियर दीवार में माइक्रोसर्कुलेशन का सामान्य कार्य (सर्पिल स्नायुबंधन और स्ट्रिया संवहनी में अधिकांश केशिकाओं को शामिल करना) श्रवण समारोह1 को बनाए रखने के लिए गंभीर रूप से महत्वपूर्ण है। असामान्य सीओबीएफ शोर-प्रेरित सुनवाई हानि, कान हाइड्रोप्स और प्रेस्बिक्यूसिस 2,3,4,5,6,7,8,9 सहित कई आंतरिक कान विकारों के पैथोफिजियोलॉजी में फंसा हुआ है। इंट्रावाइटल सीओबीएफ का विज़ुअलाइज़ेशन श्रवण समारोह और कॉक्लियर संवहनी विकृति विज्ञान के बीच संबंधों की बेहतर समझ को सक्षम करेगा।
यद्यपि लौकिक हड्डी के भीतर कोक्लीआ की जटिलता और स्थान सीओबीएफ के प्रत्यक्ष दृश्य और माप को रोकता है, लेजर-डॉपलर फ्लोमेट्री (एलडीएफ) 10,11,12, चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग (एमआरआई) 13, प्रतिदीप्ति इंट्रावाइटल माइक्रोस्कोपी (एफआईवीएम) 14, प्रतिदीप्ति माइक्रोएंडोस्कोपी (एफएमई) सहित सीओबीएफ के मूल्यांकन के लिए विभिन्न तरीकों को विकसित किया गया है। , और रक्तप्रवाह में लेबल मार्करों और रेडियोधर्मी रूप से टैग किए गए माइक्रोस्फीयर के इंजेक्शन के आधार पर दृष्टिकोण (ऑप्टिकल माइक्रोएंजियोग्राफी, ओएमएजी) 17,18,19,20। हालांकि, इनमें से किसी भी विधि ने एफआईवीएम के अपवाद के साथ विवो में सीओबीएफ में परिवर्तनों की पूर्ण वास्तविक समय ट्रैकिंग को सक्षम नहीं किया है। एफआईवीएम, पार्श्व कॉक्लियर दीवार में एक पोत-खिड़की के साथ संयोजन में, एक दृष्टिकोण है जिसका उपयोग विभिन्न प्रयोगशालाओं14,21,22 द्वारा विभिन्न प्रयोगात्मक स्थितियों के तहत गिनी पिग में किया गया है और मान्य किया गया है।
फ्लोरोसिन आइसोथियोसाइनेट (एफआईटीसी) -डेक्सट्रान का उपयोग करके माउस में कॉक्लियर माइक्रोसर्कुलेशन में संरचनात्मक और कार्यात्मक परिवर्तनों का अध्ययन करने के लिए एक एफआईवीएम विधि सफलतापूर्वक स्थापित की गई थी- एक विपरीत माध्यम और एक प्रतिदीप्ति डाई-या तो डीआईओ (3, 3'-डायोक्टाडेसिलोक्साकार्बोसायनिन परक्लोरेट, हरा) या दिल (1,1-डायोक्टाडेसिल -3,3,3,3)- वर्तमान अध्ययन में, इस पद्धति के प्रोटोकॉल को सामान्य और रोग स्थितियों (जैसे शोर जोखिम के बाद) के तहत माउस में सीओबीएफ में इमेजिंग और परिवर्तनों की मात्रा निर्धारित करने के लिए वर्णित किया गया है। यह तकनीक शोधकर्ता को स्ट्रिया संवहनी में श्रवण शिथिलता और विकृति विज्ञान से संबंधित सीओबीएफ के अंतर्निहित तंत्र की जांच करने के लिए आवश्यक उपकरण देती है, खासकर जब आसानी से उपलब्ध ट्रांसजेनिक माउस मॉडल के साथ संयोजन के रूप में लागू किया जाता है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.9% Sodium Chloride</td>
			<td>Hospira</td>
			<td>NDC 0409-1966-02</td>
			<td>0.6 mL (for 1 mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1,1&#8242;-Dioctadecyl-3,3,3&#8242;,3&#8242;-tetramethylindocarbocyanine perchlorate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>468495</td>
			<td>20 &#181;M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3,3&#8242;-Dioctadecyloxacarbocyanine perchlorateDio (3,3&#8242;-Dioctadecyloxacarbocyanine perchlorate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D4292</td>
			<td>20 &#181;M</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CODA Monitor system</td>
			<td>Kent scientific</td>
			<td></td>
			<td>CODA Monitor, for monitoring blood pressure and heartbeat</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslip</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-542A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DC Temperature Controller</td>
			<td>FHC</td>
			<td>40-90-8D</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiji/ImageJ</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td>Measurement of vessel diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC-dextran (2000 kDa)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>FD2000s</td>
			<td>40 mg/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin Sodium Injection, USP MDV</td>
			<td>Mylan</td>
			<td>NDC 67457-374-12</td>
			<td>5000 USP units/mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Katathesia (100 mg/mL)</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>NDC 11695-0702-1</td>
			<td>0.2 mL (for 1 mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Objective</td>
			<td>Mitutoyo</td>
			<td>378-823-5</td>
			<td>Model: M Plan Apo NIR 10x</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ORCA-ER Camera</td>
			<td>Hamamatsu</td>
			<td></td>
			<td>Model: C4742-80-12AG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>2085387</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xyzaine (100 mg/ml, 5x diluted for use )</td>
			<td>Lloyd</td>
			<td>LPFL04821</td>
			<td>0.2 mL (for 1 mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zoom Stereo Microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td>Model: SZ61, fluorescent microscope</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

measurement of strial blood flow in mouse cochlea utilizing an open vessel-window and intravital fluorescence microscopy

ध्वनि का पारगमन चयापचय की मांग है, और पार्श्व दीवार में माइक्रोवास्कुलचर का सामान्य कार्य एंडोकोक्लियर क्षमता, आयन परिवहन और द्रव संतुलन बनाए रखने के लिए महत्वपूर्ण है। श्रवण विकारों के विभिन्न रूपों में कोक्लीआ में असामान्य माइक्रोसर्कुलेशन शामिल होने की सूचना है। कॉक्लियर रक्त प्रवाह (सीओबीएफ) विकृति सुनवाई समारोह को कैसे प्रभावित करती है, इसकी जांच व्यवहार्य पूछताछ विधियों की कमी और आंतरिक कान तक पहुंचने में कठिनाई के कारण चुनौतीपूर्ण है। पार्श्व कॉक्लियर दीवार में एक खुली पोत-खिड़की, प्रतिदीप्ति इंट्रावाइटल माइक्रोस्कोपी के साथ संयुक्त, विवो में सीओबीएफ परिवर्तनों का अध्ययन करने के लिए उपयोग की गई है, लेकिन ज्यादातर गिनी पिग में और हाल ही में माउस में। यह पेपर और संबंधित वीडियो माउस कोक्लीआ में रक्त प्रवाह की कल्पना करने के लिए खुले पोत-खिड़की विधि का वर्णन करते हैं। विवरण में 1) चूहों से फ्लोरोसेंट-लेबल रक्त कोशिका निलंबन की तैयारी शामिल है; 2) एक संवेदनाहारी माउस में इंट्रावाइटल माइक्रोस्कोपी के लिए एक खुली पोत-खिड़की का निर्माण, और 3) इमेजिंग की ऑफ़लाइन रिकॉर्डिंग का उपयोग करके रक्त प्रवाह वेग और मात्रा का माप। विधि को वीडियो प्रारूप में प्रस्तुत किया जाता है ताकि यह दिखाया जा सके कि सामान्य और रोग स्थितियों के तहत कॉक्लियर माइक्रोसर्कुलेशन में संरचनात्मक और कार्यात्मक परिवर्तनों की जांच करने के लिए माउस में खुली खिड़की दृष्टिकोण का उपयोग कैसे किया जाए।

पार्श्व दीवार (चित्रा 1) में कोक्लियर केशिकाओं के सर्जिकल एक्सपोजर के बाद, एफआईटीसी-डेक्सट्रान-लेबल वाले जहाजों में दिल-लेबल वाले रक्त कोशिकाओं के इंट्रावाइटल उच्च-रिज़ॉल्यूश?...

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Measurement of Strial Blood Flow in Mouse Cochlea Utilizing an Open Vessel-Window and Intravital Fluorescence Microscopy

फ्लोरोसेंट ट्रेसर का उपयोग करके एक खुली पोत-खिड़की दृष्टिकोण कोक्लियर रक्त प्रवाह (सीओबीएफ) माप के लिए पर्याप्त संकल्प प्रदान करता है। विधि सामान्य और रोग स्थितियों के तहत माउस में सीओबीएफ में संरचनात्मक और कार्यात्मक परिवर्तनों के अध्ययन की सुविधा प्रदान करती है।

माउस कोक्लीआ में स्ट्रियल रक्त प्रवाह का मापन एक ओपन वेसल-विंडो और इंट्रावाइटल फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी का उपयोग करना

Transduction of sound is metabolically demanding, and the normal function of the microvasculature in the lateral wall is critical for maintaining ...

कोक्लीआ को सामान्य रक्त की आपूर्ति कोक्लीआ मेनियर रोग के लिए गंभीर रूप से महत्वपूर्ण है, विशेष रूप से इनडोर कोक्लियर क्षमता को बनाए रखने के लिए जो बालों की कोशिकाओं के लेनदेन के लिए आवश्यक प्रेरक शक्ति है। रक्त परिसंचरण का यह कार्य सुनवाई हानि के विभिन्न रूपों के साथ निकटता से जुड़ा हुआ है। कॉक्लियर रक्त प्रवाह की बेहतर समझ रक्त प्रवाह की शिथिलता के परिणामस्वरूप श्रवण विकारों के अधिक प्रभावी प्रबंधन को सक्षम करेगी।हालांकि, आंतरिक कान का आकलन करने में कठिनाई के कारण प्रत्यक्ष रक्त प्रवाह माप बहुत चुनौतीपूर्ण है। कॉक्लियर रक्त प्रवाह का आकलन करने की तकनीक वर्तमान में अभी भी विकास के अधीन है। यहां हम माउस जैसे छोटे जानवरों की प्रजातियों में कोक्लियर रक्त प्रवाह को संकीर्ण करने के लिए उच्च रिज़ॉल्यूशन प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप के साथ आवास में हमारी प्रयोगशाला खुली मांसपेशियों की खिड़की में स्थापित हालिया तरीकों में से एक का प्रदर्शन करते हैं।ट्रांसजेनेटिक द्रव्यमान मॉडल के साथ इस तकनीक के अनुप्रयोग में श्रवण समारोह और इंट्रावास्कुलर जोखिम में कोक्लियर रक्त प्रवाह से संबंधित विकृति के बीच संबंधों को उजागर करने के लिए अनुसंधान को आगे बढ़ाने की क्षमता है। हमारी प्रक्रियाओं को सावधानी के साथ संचालित किया जाना चाहिए। क्षणिक शरीर रक्तस्राव के अलावा, आपकी सर्जरी के दौरान रक्तचाप और दिल की धड़कन सहित जानवरों के महत्वपूर्ण संकेतों की निगरानी की जानी चाहिए।कार्डियक पंचर द्वारा हेपरिन में लगभग एक मिलीमीटर रक्त एकत्र करके शुरू करें। चार डिग्री सेल्सियस पर तीन मिनट के लिए 3000 बार जी पर रक्त अपकेंद्रित्र। प्लाज्मा निकालें, फिर चार डिग्री सेल्सियस पर तीन मिनट के लिए 3000 बार जी पर सेंट्रीफ्यूजेशन द्वारा तीन बार पीबीएस के एक मिलीलीटर के साथ रक्त कोशिका गोली धो लें।पीबीएस में 20 माइक्रोमोलर डीआईओ या दिल के एक मिलीलीटर के साथ रक्त कोशिकाओं को लेबल करें, और कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए अंधेरे में सेते हैं। लेबल वाली रक्त कोशिकाओं को एक मिलीलीटर पीबीएस और अपकेंद्रित्र के साथ तीन मिनट के लिए 3000 गुना जी पर तीन बार धो लें। इंजेक्शन से पहले पीबीएस के लगभग 0.9 मिलीलीटर के साथ 30% हेमटोक्रिट में सेल गोली को फिर से निलंबित करें।बाँझ सर्जिकल उपकरणों और इमेजिंग मंच तैयार करें और पर्दे के नीचे एक हीटिंग पैड रखें। संज्ञाहरण की गहराई की जांच करने के लिए संज्ञाहरण चूहों के गरीब पलटा और सामान्य मांसपेशी टोन की निगरानी करें। रक्तचाप और दिल की धड़कन की निगरानी के लिए मॉनिटर सिस्टम में गर्म हीटिंग पैड और उसकी पूंछ पर जानवर रखें।मलाशय के तापमान को 37 डिग्री सेल्सियस पर बनाए रखें और जानवर के सिस्टोलिक रक्तचाप, डायस्टोलिक रक्तचाप और संवेदनाहारी स्थिति में औसत रक्तचाप रिकॉर्ड करें। एक स्टीरियो माइक्रोस्कोप के तहत एक पार्श्व और वेंटल दृष्टिकोण के माध्यम से बाएं टिम्पैनिक बुला को खोलें जो टिम्पैनिक झिल्ली और ओसिकल्स को बरकरार रखता है। आंदोलन को कम करने के लिए अपने सिर को स्थिर करने के साथ जानवर की गर्दन की मध्य रेखा के साथ एक चीरा बनाएं।डिगैस्ट्रिक मांसपेशियों के बाएं उप मैंडिबुलर ग्रंथि और पीछे के पेट को हटा दें और कॉटराइज़ करें। बुल्ला की ओर पूर्वकाल का विस्तार करने वाली स्टर्नोक्लिडोमास्टोइड मांसपेशियों और चेहरे की तंत्रिका की पहचान करके बोनी बुला का पता लगाएं और उजागर करें। एक 30 गेज सुई के साथ बोनी बुला खोलें और सावधानीपूर्वक सर्जिकल चिमटी के साथ आसपास की हड्डी को हटा दें ताकि गोल खिड़की आला के किनारे पर झूठ बोलने वाले औसत दर्जे का मार्जिन के साथ कॉक्लियर और स्टेपेडियल धमनी का स्पष्ट दृश्य प्रदान किया जा सके और अंडाकार खिड़की की ओर पूर्वकाल बेहतर हो सके।माउस कोक्लीआ के शीर्ष मध्य मोड़ पर पार्श्व दीवार की हड्डी को खुरचने के लिए एक छोटे चाकू ब्लेड का उपयोग करें शीर्ष से लगभग 1.25 मिलीमीटर जब तक कि एक पतली जगह टूट न जाए। छोटे तार हुक के साथ हड्डी चिप्स निकालें। सामान्य शारीरिक स्थितियों को संरक्षित करने और पोत छवियों को रिकॉर्ड करने के लिए एक ऑप्टिकल दृश्य प्रदान करने के लिए एक कट कवर पर्ची के साथ पोत खिड़की को कवर करें।पोत को उजागर करने के लिए दाहिने सैफेनस नस के साथ एक सेंटीमीटर चीरा बनाएं। रक्त वाहिकाओं के दृश्य और रक्त प्रवाह पर नज़र रखने में सक्षम बनाने के लिए सैफेनस नस के माध्यम से जानवर में एफआईटीसी-डेक्सट्रान समाधान और रक्त कोशिका निलंबन में से प्रत्येक में 100 माइक्रोलीटर लगाता है। इंजेक्शन के पांच मिनट बाद वीडियो मॉनिटर पर वास्तविक समय में रक्त प्रवाह का निरीक्षण करें।एक लंबी दूरी के उद्देश्य और एक कई बैंड उत्तेजना फिल्टर और संगत उत्सर्जन फिल्टर युक्त एक दीपक आवास से लैस प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप का उपयोग कर रक्त वाहिकाओं की छवि। प्रति वीडियो 350 से अधिक छवियों को प्राप्त करने वाले उच्च रिज़ॉल्यूशन डिजिटल ब्लैक एंड व्हाइट चार्ज युग्मित डिवाइस कैमरा का उपयोग करके वीडियो रिकॉर्ड करें। प्रवाह वेग का सफल विश्लेषण सुनिश्चित करने के लिए।उपयुक्त सॉफ्टवेयर का उपयोग करके पोत व्यास को मापें और अधिग्रहित छवियों में पोत में दो निश्चित बिंदुओं के बीच की दूरी निर्धारित करें। सॉफ्टवेयर में रक्त प्रवाह का वीडियो खोलें और छवियों के पैमाने को सेट करें। ट्रैकिंग फ़ंक्शन का उपयोग करके चयनित डीआईओ दाग रक्त कोशिकाओं को ट्रैक करें।फिर प्रवाह वेग की ऑटो गणना के लिए कोशिकाओं को स्थानांतरित कर दिया है दूरी और वीडियो में छवि फ्रेम के बीच समय के अंतराल का उपयोग करें। पाठ पांडुलिपि में दिए गए समीकरण का उपयोग करके वॉल्यूमेट्रिक प्रवाह की गणना करें। रक्त प्रवाह रिकॉर्डिंग से पहले शोर एक्सपोजर मॉडल बनाने के लिए, जानवरों को तार जाल पिंजरों में रखें और उन्हें तीन घंटे के लिए ध्वनि एक्सपोजर बूथ में 120 डेसिबल ध्वनि दबाव स्तर पर ब्रॉडबैंड शोर में उजागर करें।फिर अगले दिन अतिरिक्त तीन घंटे के लिए। शोर जोखिम के दो सप्ताह बाद रिकॉर्ड रक्त प्रवाह। पार्श्व दीवार में कोक्लियर केशिकाओं के सर्जिकल एक्सपोजर के बाद, एफआईटीसी डेक्सट्रान लेबल वाले जहाजों में डीआईएल लेबल वाली रक्त कोशिकाओं के इंट्रावाइटल उच्च रिज़ॉल्यूशन प्रतिदीप्ति सूक्ष्म अवलोकन को एक खुली पोत खिड़की के माध्यम से किया गया था।एफआईटीसी डेक्सट्रान के साथ लेबल किए गए स्ट्रिया वाहिकाओं में डीआईएल लेबल वाली रक्त कोशिकाओं को यहां दिखाया गया है। एफआईटीसी डेक्सट्रान के साथ लेबल की गई डियो लेबल वाली रक्त कोशिकाओं से पता चलता है कि सर्पिल स्नायुबंधन का पोत घनत्व सघन स्ट्रिया संवहनी की तुलना में विरल है। उच्च रिज़ॉल्यूशन आईवीएम नियंत्रण और शोर उजागर समूहों में रक्त प्रवाह पैटर्न दिखाता है।रक्त परिसंचरण का परेशान पैटर्न शोर उजागर समूहों में देखा जा सकता है। विसंगतियों में पोत व्यास में कमी और पोत व्यास में भिन्नता में वृद्धि शामिल थी। नियंत्रण और शोर उजागर समूहों में रक्त प्रवाह वेग की गणना डीआईओ लेबल रक्त कोशिकाओं की जड़ों को ट्रैक करके की गई थी।शोर उजागर समूह में रक्त वेग और मात्रा नियंत्रण समूह की तुलना में काफी कम थी। खुले पोत खिड़की की सफल स्थापना के लिए उच्च स्तर के सर्जिकल कौशल की आवश्यकता होती है। कॉक्लियर पार्श्व दीवार की हड्डी को हटाने में देखभाल की जानी चाहिए।

Research

JoVE Journal

Medicine

Visualization and Analysis of Blood Flow and Oxygen Consumption in Hepatic Microcirculation: Application to an Acute Hepatitis Model

विज़ुअलाइज़ेशन और यकृत microcirculation में रक्त और ऑक्सीजन की खपत के प्रवाह का विश्लेषण: एक तीव्र हेपेटाइटिस मॉडल के लिए आवेदन

There is a considerable discrepancy between oxygen supply and demand in the liver because hepatic oxygen consumption is relatively high but about 70% of ...

An Orthotopic Glioblastoma Mouse Model Maintaining Brain Parenchymal Physical Constraints and Suitable for Intravital Two-photon Microscopy

एक orthotopic Glioblastoma माउस मॉडल मस्तिष्क parenchymal शारीरिक बाधाओं को बनाए रखने और intravital दो photon माइक्रोस्कोपी के लिए उपयुक्त

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most aggressive form of brain tumors with no curative treatments available to date.
Murine models of this pathology ...

Intravital Video Microscopy Measurements of Retinal Blood Flow in Mice

Alterations in retinal blood flow can contribute to, or be a consequence of, ocular disease and visual dysfunction. Therefore, quantitation of altered ...

Automated Measurement of Microcirculatory Blood Flow Velocity in Pulmonary Metastases of Rats

चूहे के फेफड़े Metastases में microcirculatory रक्त प्रवाह वेग से स्वचालित माप

Because the lung is a major target organ of metastatic disease, animal models to study the physiology of pulmonary metastases are of great importance. ...

Evaluation of Planar-Cell-Polarity Phenotypes in Ciliopathy Mouse Mutant Cochlea

Ciliopathy माउस उत्परिवर्ती कोक्लीअ में Planar सेल Polarity phenotypes का मूल्यांकन

In recent years, primary cilia have emerged as key regulators in development and disease by influencing numerous signaling pathways. One of the earliest ...

Combined Intravital Microscopy and Contrast-enhanced Ultrasonography of the Mouse Hindlimb to Study Insulin-induced Vasodilation and Muscle Perfusion

संयुक्त Intravital माइक्रोस्कोपी और कंट्रास्ट-माउस Hindlimb की बढ़ी हुई स् ट्रा इंसुलिन प्रेरित Vasodilation और मांसपेशी छिड़काव का अध् ययन करने के लिए

It has been demonstrated that insulin's vascular actions contribute to regulation of insulin sensitivity. Insulin's effects on muscle perfusion regulate ...

Intravital Microscopy and Thrombus Induction in the Earlobe of a Hairless Mouse

Intravital माइक्रोस्कोपी और एक हेयरलैस माउस के कान के सिरे में thrombus प्रेरण

Thrombotic complications of vascular diseases are one leading cause of morbidity and mortality in industrial nations. Due to the complex interactions ...

A Chronic Cardiac Ischemia Model in Swine Using an Ameroid Constrictor

सूअर में एक क्रोनिक कार्डियक Ischemia मॉडल एक Ameroid कसना का उपयोग

Cardiovascular disease remains the number one cause of mortality in the United States. There are numerous approaches to treating these diseases, but ...

Simultaneous Electrocardiography Recording and Invasive Blood Pressure Measurement in Rats

चूहों में एक साथ जी॰ रिकॉर्डिंग और इनवेसिव रक्तचाप माप

For studies related to cardiovascular physiology or pathophysiology, blood pressure (BP) and electrocardiography are basic observational parameters. ...

Simultaneous Flow Cytometric Characterization of Multiple Cell Types Retrieved from Mouse Brain/Spinal Cord Through Different Homogenization Methods

माउस ब्रेन/स्पाइनल कॉर्ड से विभिन्न समरूपीकरण विधियों के माध्यम से प्राप्त कई सेल प्रकारों का एक साथ प्रवाह साइटोमेट्रिक लक्षण वर्णन

Recent advances in viral vector and nanomaterial sciences have opened the way for new cutting-edge approaches to investigate or manipulate the central ...