Name: a murine model of ischemic retinal injury induced by transient bilateral common carotid artery occlusion
Uploaded: 2020-11-12T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Murine Model of Ischemic Retinal Injury Induced by Transient Bilateral Common Carotid Artery Occlusion at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af Grants-in-Aid for Scientific Research (KAKENHI) (18K09424 til Toshihide Kurihara og 20K18393 til Yukihiro Miwa) fra Ministeriet for Uddannelse, Kultur, Sport, Videnskab og Teknologi (MEXT).

Alle de metoder, der er beskrevet her, er blevet godkendt af Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) på Keio University School of Medicine.
1. Fremstilling af kirurgiske instrumenter og dyr
<ol><li>Autoklave kirurgiske instrumenter og holde dem i 70% ethylalkohol. Forud for hver ny kirurgisk procedure, rene kirurgiske instrumenter omhyggeligt ved hjælp af 70% ethylalkohol.</li>
	<li>Forbered han-BALB/cAJc1-mus (6 uger gamle, 26-28 kg) i et specifikt patogenfrit (SPF) rum for at...

I undersøgelsen har vi vist, at tBCCAO ved hjælp af enkle suturer og en klemme kan fremkalde nethindeisk iskæmi og ledsagende nethindedysfunktion. Desuden har vi vist, at vores nuværende protokol for udvikling af en musemodel af nethindeisk iskæmi er lettere og hurtigere sammenlignet med andre tidligere protokoller til udvikling af nethindeisk iskæmisk skadesmodel2,3,7.
Anatomisk, venstre og hø...

Nethinden er et neurosensorisk væv til visuel funktion. Da en betydelig mængde ilt er nødvendig for visuel funktion, nethinden er kendt som en af de højeste ilt krævende væv i kroppen1. Nethinden er modtagelig for vaskulære sygdomme som ilt leveres gennem blodkarrene. Forskellige typer af vaskulære sygdomme, såsom diabetisk retinopati og nethinde blodkar (vener eller arterier) okklusion, kan fremkalde nethinde iskæmi. For at undersøge patologiske mekanismer for nethindeiskæmi anses reproducerbare og klinisk relevante eksperimentelle modeller af nethindeisk iskæmi for nødvendig. Middle cerebral arterie okklusion (MCAO) ved indsættelse af en intraluminal filament er den mest almindeligt anvendte metode til udvikling af in vivo gnaver modeller af eksperimentel cerebral iskæmi2,3. På grund af nærheden af den oftalmiske arterie (OpA) til MCA bruges MCAO-modeller også samtidigt til at forstå patofysiologien af nethindeisk iskæmi4,5,6. For at fremkalde cerebral iskæmi sammen med nethinde iskæmi, lange filamenter er typisk indsættes gennem indsnit i den fælles halspulsåren (CCA) eller den eksterne halspulsåren (ECA). Disse metoder er vanskelige at udføre, kræver lang tid at afslutte operationen (over 60 minutter for en mus) og fører til høje variabiliteter i resultaterne efter operationen7. Det er fortsat vigtigt at udvikle en bedre model til at forbedre disse bekymringer.
I denne undersøgelse brugte vi simpelthen kort forbigående bilateral CCA okklusion (tBCCAO) med nåle og en klemme til at fremkalde nethindeisk iskæmi hos mus og analyserede typiske resultater af iskæmiske skader i nethinden. I denne video vil vi give en demonstration af tBCCAO-proceduren.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Atipamezole hydrochloride</td>
			<td>Zenoaq</td>
			<td>Antisedan</td>
			<td>For anti-anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Applied Biosystems 7500 Fast</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>-</td>
			<td>For qPCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Butorphanol tartrate</td>
			<td>Meiji Seika Pharma</td>
			<td>Vetorphale</td>
			<td>For anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BZ-II Analyzer</td>
			<td>KEYENCE</td>
			<td>-</td>
			<td>For an image merge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BALB/cAJc1</td>
			<td>CLEA</td>
			<td>-</td>
			<td>Mouse strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Actin (8H10D10) Mouse mAb</td>
			<td>CST</td>
			<td>3700</td>
			<td>For western blot</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clamp Forcep</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>WPI 500451</td>
			<td>For surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont forceps #5</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11251-10</td>
			<td>For surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI solution</td>
			<td>Dojindo</td>
			<td>340-07971</td>
			<td>For IHC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Envisu SD-OCT system</td>
			<td>Leica</td>
			<td>R4310</td>
			<td>For OCT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC-dextran</td>
			<td>Merk</td>
			<td>FD2000S</td>
			<td>For retinal blood perfusion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>KEYENCE</td>
			<td>BZ-9000</td>
			<td>For fluorescence detection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gatifloxacin hydrate</td>
			<td>Senju Pharmaceutical</td>
			<td>Gachifuro</td>
			<td>For anti-bacterial infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GFAP Monoclonal Antibody (2.2B10)</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>13-0300</td>
			<td>For IHC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Marukan</td>
			<td>RH-200</td>
			<td>For surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HIF-1&#945; (D1S7W) XP Rabbit mAb</td>
			<td>CST</td>
			<td>36169</td>
			<td>For western blot</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageQuant LAS 4000 mini</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>-</td>
			<td>For chemiluminescence</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam</td>
			<td>Sandoz K.K</td>
			<td>SANDOZ</td>
			<td>For anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome Tissue-Tek TEC 6</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>-</td>
			<td>For sectioning</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine</td>
			<td>Orion Corporation</td>
			<td>Domitor</td>
			<td>For anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>Handaya</td>
			<td>HS-2307</td>
			<td>For surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PuREC</td>
			<td>MAYO Corporation</td>
			<td>-</td>
			<td>For ERG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissor</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>91460-11</td>
			<td>For surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hyaluronate</td>
			<td>Santen Pharmaceutical</td>
			<td>Hyalein</td>
			<td>For eye lubrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide/Penylephrine hydrochloride</td>
			<td>Santen Pharmaceutical</td>
			<td>Mydrin-P</td>
			<td>For mydriasis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 silk suture</td>
			<td>Natsume</td>
			<td>E12-60N2</td>
			<td>For surgery</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a murine model of ischemic retinal injury induced by transient bilateral common carotid artery occlusion

Forskellige vaskulære sygdomme såsom diabetisk retinopati, okklusion af nethinde vener eller arterier og okulær iskæmisk syndrom kan føre til nethinde iskæmi. For at undersøge patologiske mekanismer for nethindekemi skal der udvikles relevante eksperimentelle modeller. Anatomisk, en vigtigste retinale blod leverer fartøj er den oftalmiske arterie (OpA) og OpA stammer fra den indre halspulsåren af den fælles halspulsåren (CCA). Således kan afbrydelse af CCA effektivt forårsage nethindeisk iskæmi. Her etablerede vi en musemodel af nethindeiskæmi ved forbigående bilateral fælles halspulsåre okklusion (tBCCAO) for at binde den rigtige CCA med 6-0 silke suturer og for at okkludere venstre CCA forbigående i 2 sekunder via en klemme, og viste, at tBCCAO kunne fremkalde akut nethindeiskæmi, der fører til nethinde dysfunktion. Den nuværende metode reducerer afhængigheden af kirurgiske instrumenter ved kun at bruge kirurgiske nåle og en klemme, forkorter okklusion tid til at minimere uventede dyrs død, som ofte ses i mus modeller af midten cerebral arterie okklusion, og fastholder reproducerbarhed af fælles retinal iskæmiske fund. Modellen kan bruges til at undersøge patofysiologien af iskæmiske retinopatier hos mus og yderligere kan bruges til in vivo lægemiddelscreening.

Efter systemisk cirkulation af FITC-dextran i 2 minutter blev nethindevakulaturer fra venstre og højre nethinde i de sham-opererede mus og tBCCAO-opererede mus undersøgt (Supplerende figur 1). FITC-dextran var fuldt synlig i begge nethinder i de sham-opererede mus og den venstre nethinde i de tBCCAO-opererede mus, mens den delvist kunne påvises i højre nethinde i de tBCCAO-opererede mus.
Efter tBCCAO blev øjenlåg hængende undersøgt (Figur 2</strong...

Watch this Scientific Journal Video about A Murine Model of Ischemic Retinal Injury Induced by Transient Bilateral Common Carotid Artery Occlusion at JoVE.com

A Murine Model of Ischemic Retinal Injury Induced by Transient Bilateral Common Carotid Artery Occlusion

Her beskriver vi en musemodel af nethindeiskæmi ved forbigående bilateral fælles halspulsåre okklusion ved hjælp af enkle suturer og en klemme. Denne model kan være nyttig til at forstå de patologiske mekanismer i nethindeiskæmi forårsaget af hjerte-kar-abnormiteter.

En Murine Model af iskæmisk Retinal Skade induceret af forbigående bilaterale fælles halspulsåren Okklusion

Diverse vascular diseases such as diabetic retinopathy, occlusion of retinal veins or arteries and ocular ischemic syndrome can lead to retinal ischemia. ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A Model of Disturbed Flow-Induced Atherosclerosis in Mouse Carotid Artery by Partial Ligation and a Simple Method of RNA Isolation from Carotid Endothelium

Despite the well-known close association, direct evidence linking disturbed flow to atherogenesis has been lacking. We have recently used a modified ...

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

Bilateral carotis communis Occlusion som en passende Konditioneringskørsel Stimulus for at tilskynde til iskæmisk Tolerance til Focal cerebral iskæmi

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

Endothelin-1-induceret mellem-cerebral arterieokklusion Model for iskæmisk slagtilfælde med laser-doppler-flowmetri Vejledning i Rat

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Adult Mouse Venous Hypertension Model: Common Carotid Artery to External Jugular Vein Anastomosis.

Voksen Mouse Venøs Hypertension Model: carotis communis til eksterne halsvene anastomose.

The understanding of the pathophysiology of brain arteriovenous malformations and arteriovenous fistulas has improved thanks to animal models. A rat model ...

Ferric Chloride-induced Thrombosis Mouse Model on Carotid Artery and Mesentery Vessel

Ferric Chloride-induceret Trombose Mouse Model på Arteria carotis og mesenterium Vessel

Severe thrombosis and its ischemic consequences such as myocardial infarction, pulmonary embolism and stroke are major worldwide health issues. The ferric ...

Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability

Udførelse Permanent Distal Mellemøsten Cerebral med Common Arteria carotis Okklusion i Aged Rotter at studere Kortikal Iskæmi med vedvarende handicap

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, ...

Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Model of Neonatal Stroke in P10 Rats

Forbigående Mellemøsten cerebralarterieokklusion Model of Neonatal slagtilfælde i P10 Rotter

A number of animal models have been used to study hypoxic-ischemic injury, traumatic injury, global hypoxia, or permanent ischemia in both the immature ...

In Vivo Gene Transfer to the Rabbit Common Carotid Artery Endothelium

In Vivo Gene Transfer to the Rabbit Common Carotid Artery Endothelium

In Vivo Genoverførsel til kanin fælles halspulsåren endotelet

The goal of this method is to introduce a transgene into the endothelium of isolated segments of both rabbit common carotid arteries. The method achieves ...

A Rabbit Model of Durable Transgene Expression in Jugular Vein to Common Carotid Artery Interposition Grafts

En kanin Model af holdbare transgen udtryk i halsfedt til fælles halspulsåren Interposition Grafts

Vein graft bypass surgery is a common treatment for occlusive arterial disease; however, long-term success is limited by graft failure due to thrombosis, ...

Phase Contrast Magnetic Resonance Imaging in the Rat Common Carotid Artery

Fase kontrast magnetisk resonans i rotte fælles halspulsåren

Phase contrast magnetic resonance imaging (PC-MRI) is a noninvasive approach that can quantify flow-related parameters such as blood flow. Previous ...