Name: a murine model of ischemic retinal injury induced by transient bilateral common carotid artery occlusion
Uploaded: 2020-11-12T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Murine Model of Ischemic Retinal Injury Induced by Transient Bilateral Common Carotid Artery Occlusion at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי מענקים בסיוע למחקר מדעי (KAKENHI) (18K09424 כדי Toshihide Kurihara ו 20K18393 כדי Yukihiro Miwa) ממשרד החינוך, תרבות, ספורט, מדע וטכנולוגיה (MEXT).

כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי הוועדה המוסדית לטיפול ושימוש בבעלי חיים (IACUC) של בית הספר לרפואה של אוניברסיטת קיו.
1. הכנת מכשירים כירורגיים ובעלי חיים
<ol><li>אוטוקלאב מכשירים כירורגיים ולשמור אותם 70% אלכוהול אתיל. לפני כל הליך כירורגי חדש, לנקות מכשירים כירורגיים בזהירות...

במחקר, הראינו כי tBCCAO, באמצעות תפרים פשוטים מהדק, יכול לגרום איסכמיה רשתית נלווית תפקוד הרשתית. יתר על כן, הוכחנו את הפרוטוקול הנוכחי שלנו לפיתוח מודל עכבר של איסכמיה רשתית קל ומהיר יותר בהשוואה לפרוטוקולים קודמים אחרים לפיתוח מודלים של פגיעה איסכמית ברשתית2,3</su...

הרשתית היא רקמה נוירו-חושית לתפקוד חזותי. מאז כמות משמעותית של חמצן נדרש לתפקוד חזותי, הרשתית ידועה כאחת הרקמות תובעניות חמצן הגבוה ביותר בגוף1. הרשתית רגישה למחלות כלי דם כמו חמצן מועבר דרך כלי הדם. סוגים שונים של מחלות כלי דם, כגון רטינופתיה סוכרתית וכלי דם ברשתית (ורידים או עורקים) חסימה, יכול לגרום איסכמיה ברשתית. כדי לחקור מנגנונים פתולוגיים של איסכמיה ברשתית, מודלים ניסיוניים לשחזור ורלוונטיים קלינית של איסכמיה ברשתית נחשבים הכרחיים. חסימת עורק המוח התיכון (MCAO) על ידי החדרת חוט תוך-אלומיניום היא השיטה הנפוצה ביותר לפיתוח מודלים מכרסמים vivo של איסכמיה מוחית ניסיונית2,3. בשל הקרבה של עורק העיניים (OpA) ל MCA, מודלים MCAO משמשים גם בו זמנית כדי להבין את הפתופיזיולוגיה של איסכמיה ברשתית4,5,6. כדי לגרום איסכמיה מוחית יחד עם איסכמיה ברשתית, חוטים ארוכים מוכנסים בדרך כלל באמצעות חתך של העורק הראשי המשותף (CCA) או עורק הראשי החיצוני (ECA). שיטות אלה קשות לביצוע, דורשות זמן רב כדי להשלים את הניתוח (מעל 60 דקות עבור עכבר אחד), ולהוביל שונות גבוהה בתוצאות לאחר הניתוח7. זה עדיין חשוב לפתח מודל טוב יותר כדי לשפר את החששות האלה.
במחקר זה, פשוט השתמשנו בחסימת CCA דו-צדדית חולפת קצרה (tBCCAO) עם מחטים ומהדק כדי לגרום לאיסכמיה ברשתית בעכברים וניתחנו תוצאות אופייניות של פציעות איסכמיות ברשתית. בסרטון זה, אנו נותנים הדגמה של הליך tBCCAO.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Atipamezole hydrochloride</td>
			<td>Zenoaq</td>
			<td>Antisedan</td>
			<td>For anti-anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Applied Biosystems 7500 Fast</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>-</td>
			<td>For qPCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Butorphanol tartrate</td>
			<td>Meiji Seika Pharma</td>
			<td>Vetorphale</td>
			<td>For anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BZ-II Analyzer</td>
			<td>KEYENCE</td>
			<td>-</td>
			<td>For an image merge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BALB/cAJc1</td>
			<td>CLEA</td>
			<td>-</td>
			<td>Mouse strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Actin (8H10D10) Mouse mAb</td>
			<td>CST</td>
			<td>3700</td>
			<td>For western blot</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clamp Forcep</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>WPI 500451</td>
			<td>For surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont forceps #5</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11251-10</td>
			<td>For surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI solution</td>
			<td>Dojindo</td>
			<td>340-07971</td>
			<td>For IHC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Envisu SD-OCT system</td>
			<td>Leica</td>
			<td>R4310</td>
			<td>For OCT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC-dextran</td>
			<td>Merk</td>
			<td>FD2000S</td>
			<td>For retinal blood perfusion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>KEYENCE</td>
			<td>BZ-9000</td>
			<td>For fluorescence detection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gatifloxacin hydrate</td>
			<td>Senju Pharmaceutical</td>
			<td>Gachifuro</td>
			<td>For anti-bacterial infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GFAP Monoclonal Antibody (2.2B10)</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>13-0300</td>
			<td>For IHC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Marukan</td>
			<td>RH-200</td>
			<td>For surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HIF-1&#945; (D1S7W) XP Rabbit mAb</td>
			<td>CST</td>
			<td>36169</td>
			<td>For western blot</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageQuant LAS 4000 mini</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>-</td>
			<td>For chemiluminescence</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam</td>
			<td>Sandoz K.K</td>
			<td>SANDOZ</td>
			<td>For anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome Tissue-Tek TEC 6</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>-</td>
			<td>For sectioning</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine</td>
			<td>Orion Corporation</td>
			<td>Domitor</td>
			<td>For anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>Handaya</td>
			<td>HS-2307</td>
			<td>For surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PuREC</td>
			<td>MAYO Corporation</td>
			<td>-</td>
			<td>For ERG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissor</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>91460-11</td>
			<td>For surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hyaluronate</td>
			<td>Santen Pharmaceutical</td>
			<td>Hyalein</td>
			<td>For eye lubrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide/Penylephrine hydrochloride</td>
			<td>Santen Pharmaceutical</td>
			<td>Mydrin-P</td>
			<td>For mydriasis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 silk suture</td>
			<td>Natsume</td>
			<td>E12-60N2</td>
			<td>For surgery</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a murine model of ischemic retinal injury induced by transient bilateral common carotid artery occlusion

מחלות כלי דם מגוונות כגון רטינופתיה סוכרתית, חסימה של ורידים ברשתית או עורקים ותסמונת איסכמית עינית יכול להוביל איסכמיה ברשתית. כדי לחקור מנגנונים פתולוגיים של איסכמיה ברשתית, יש לפתח מודלים ניסיוניים רלוונטיים. מבחינה אנטומית, כלי אספקת דם רשתית עיקרי הוא עורק עיניים (OpA) ו OpA מקורו בעורק הראשי הפנימי של העורק הראשי המשותף (CCA). לכן, שיבוש של CCA יכול לגרום ביעילות איסכמיה ברשתית. כאן, הקמנו מודל העכבר של איסכמיה רשתית על ידי חסימה חולפת של עורק ראשי משותף דו-צדדי (tBCCAO) כדי לקשור את CCA הימני עם 6-0 תפרי משי ולחסום את CCA שמאל לזמן חולף במשך 2 שניות באמצעות מהדק, והראה כי tBCCAO יכול לגרום איסכמיה רשתית חריפה המובילה לתפקוד רשתית. השיטה הנוכחית מפחיתה את ההסתמכות על מכשירים כירורגיים רק באמצעות מחטים כירורגיות ומהדק, מקצרת את זמן החסימה כדי למזער מוות בלתי צפוי של בעלי חיים, אשר נתפס לעתים קרובות במודלים של עכבר של חסימת עורק המוח האמצעי, ושומר על יכולת רבייה של ממצאים איסכמיים ברשתית נפוצה. המודל יכול להיות מנוצל כדי לחקור את הפתופיזיולוגיה של רטינופתיות איסכמי בעכברים, עוד יותר יכול לשמש הקרנת סמים vivo.

לאחר תפוצה מערכתית של FITC-dextran במשך 2 דקות, נבדקו כלי דם ברשתית הרשתית הימנית והשמאלית בעכברים המופעלים על ידי תרמית ועכברים המופעלים באמצעות tBCCAO (איור משלים 1). FITC-dextran היה גלוי לחלוטין בשני הרשתית בעכברים המופעלים על ידי זיוף ואת הרשתית השמאלית בעכברים המופעלים tBCCAO, בעוד זה היה מזו?...

Watch this Scientific Journal Video about A Murine Model of Ischemic Retinal Injury Induced by Transient Bilateral Common Carotid Artery Occlusion at JoVE.com

A Murine Model of Ischemic Retinal Injury Induced by Transient Bilateral Common Carotid Artery Occlusion

כאן, אנו מתארים דגם עכבר של איסכמיה רשתית על ידי חסימת עורקים דו-צדדית נפוצה חולפת באמצעות תפרים פשוטים ומהדק. מודל זה יכול להיות שימושי להבנת המנגנונים הפתולוגיים של איסכמיה ברשתית הנגרמת על ידי מומים קרדיווסקולריים.

דגם מורין של פגיעה איסכמית ברשתית הנגרמת על ידי חסימת עורקים דו-צדדית משותפת חולפת

Diverse vascular diseases such as diabetic retinopathy, occlusion of retinal veins or arteries and ocular ischemic syndrome can lead to retinal ischemia. ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A Model of Disturbed Flow-Induced Atherosclerosis in Mouse Carotid Artery by Partial Ligation and a Simple Method of RNA Isolation from Carotid Endothelium

המודל של טרשת עורקים Flow-induced מופרע על העורק הראשי עכבר ידי קשירת חלקי שיטה פשוטה של ​​בידוד RNA מן התרדמה האנדותל

Despite the well-known close association, direct evidence linking disturbed flow to atherogenesis has been lacking. We have recently used a modified ...

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

ספיגה דו צדדי משותף עורק תרדמה כגירוי נפשית מראש מספיק כדי לגרום סובלנות איסכמי מוקדמת לאיסכמיה מוחית מיקוד

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

אנדותלין-1 דגם מושרה מזרח מוחות עורקים ספיגים לשבץ איסכמי עם הדרכת Flowmetry ליזר דופלר בעכברוש

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Adult Mouse Venous Hypertension Model: Common Carotid Artery to External Jugular Vein Anastomosis.

למבוגרים עכבר ורידי יתר לחץ דם דגם: עורק תרדמה משותף לחיצוני הצוואר וריד השקה.

The understanding of the pathophysiology of brain arteriovenous malformations and arteriovenous fistulas has improved thanks to animal models. A rat model ...

Ferric Chloride-induced Thrombosis Mouse Model on Carotid Artery and Mesentery Vessel

פקקת עכבר דגם על עורק ראשי וכלי לפדר מושרה כלוריד Ferric

Severe thrombosis and its ischemic consequences such as myocardial infarction, pulmonary embolism and stroke are major worldwide health issues. The ferric ...

Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability

Performing מוחות תיכונים דיסטלי קבוע עם ספיגה עורקת Common הראש אצל חולדות בנים לחקר קורטיקלי איסכמיה עם נכות קבועה זה

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, ...

Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Model of Neonatal Stroke in P10 Rats

עורקי חלוף דגם ספיג תיכון שיתוק של שבץ ילודים אצל חולדות P10

A number of animal models have been used to study hypoxic-ischemic injury, traumatic injury, global hypoxia, or permanent ischemia in both the immature ...

In Vivo Gene Transfer to the Rabbit Common Carotid Artery Endothelium

In Vivo Gene Transfer to the Rabbit Common Carotid Artery Endothelium

אין ויוו העברה גנטית כדי אנדותל העורק נפוצות הארנב

The goal of this method is to introduce a transgene into the endothelium of isolated segments of both rabbit common carotid arteries. The method achieves ...

A Rabbit Model of Durable Transgene Expression in Jugular Vein to Common Carotid Artery Interposition Grafts

דגם ארנב של ביטוי Transgene עמיד ומוחלף כדי שתלי Interposition נפוצים של העורק הראשי

Vein graft bypass surgery is a common treatment for occlusive arterial disease; however, long-term success is limited by graft failure due to thrombosis, ...

Phase Contrast Magnetic Resonance Imaging in the Rat Common Carotid Artery

שלב ניגודיות תהודה מגנטית בעורק החולדה נפוצים

Phase contrast magnetic resonance imaging (PC-MRI) is a noninvasive approach that can quantify flow-related parameters such as blood flow. Previous ...