Name: a murine model of ischemic retinal injury induced by transient bilateral common carotid artery occlusion
Uploaded: 2020-11-12T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Murine Model of Ischemic Retinal Injury Induced by Transient Bilateral Common Carotid Artery Occlusion at JoVE.com

Detta arbete stöddes av Grants-in-Aid for Scientific Research (KAKENHI) (18K09424 till Toshihide Kurihara och 20K18393 till Yukihiro Miwa) från ministeriet för utbildning, kultur, idrott, vetenskap och teknik (MEXT).

Alla metoder som beskrivs här har godkänts av Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) vid Keio University School of Medicine.
1. Beredning av kirurgiska instrument och djur
<ol><li>Autoklav kirurgiska instrument och hålla dem i 70% etylalkohol. Före varje nytt kirurgiskt ingrepp, rengör kirurgiska instrument noggrant med 70% etylalkohol.</li>
	<li>Förbered manliga BALB/cAJc1 möss (6 veckor gamla, 26-28 kg) i ett specifikt patogenfritt (SPF) rum för att upprätthålla ster...

I studien har vi visat att tBCCAO, med enkla suturer och en klämma, kan inducera retinal ischemi och medföljande näthinnedysfunktion. Dessutom har vi visat att vårt nuvarande protokoll för utveckling av en musmodell av näthinne ischemi är enklare och snabbare i jämförelse med andra tidigare protokoll för utveckling av retinal skandinaviska skador modeller2,3,7.
Anatomiskt kan de vänstra och...

Näthinnan är en neurosensorisk vävnad för visuell funktion. Eftersom en betydande mängd syre behövs för visuell funktion, är näthinnan känd som en av de högsta syrekrävande vävnaderna i kroppen1. Näthinnan är mottaglig för kärlsjukdomar eftersom syre levereras genom blodkärl. Olika typer av kärlsjukdomar, såsom diabetiker retinopati och retinal blodkärl (vener eller artärer) ocklusion, kan inducera retinal ischemi. För att undersöka patologiska mekanismer för retinal ischemi anses reproducerbara och kliniskt relevanta experimentella modeller av retinal ischemi vara nödvändiga. Mellersta cerebrala gatan ocklusion (MCAO) genom införandet av en intraluminal glödtråd är den mest allmänt använda metoden för utveckling av in vivo gnagare modeller av experimentell cerebral ischemi2,3. På grund av närheten av den oftalmiska gatan (OpA) till MCA används MCAO-modeller också samtidigt för att förstå patofysiologin hos retinal ischemi4,5,6. För att inducera cerebral ischemi tillsammans med retinal ischemi, sätts långa filament vanligtvis genom snitt av den gemensamma halsartären (CCA) eller den yttre halsartären (ECA). Dessa metoder är svåra att utföra, kräver lång tid att slutföra operationen (över 60 minuter för en mus) och leder till höga variationer i resultaten efter operationen7. Det är fortfarande viktigt att utveckla en bättre modell för att förbättra dessa problem.
I denna studie använde vi helt enkelt kort övergående bilaterala CCA ocklusion (tBCCAO) med nålar och en klämma för att inducera retinal ischemi hos möss och analyserade typiska resultat av skandinaviska skador i näthinnan. I den här videon kommer vi att ge en demonstration av tBCCAO-förfarandet.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Atipamezole hydrochloride</td>
			<td>Zenoaq</td>
			<td>Antisedan</td>
			<td>For anti-anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Applied Biosystems 7500 Fast</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>-</td>
			<td>For qPCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Butorphanol tartrate</td>
			<td>Meiji Seika Pharma</td>
			<td>Vetorphale</td>
			<td>For anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BZ-II Analyzer</td>
			<td>KEYENCE</td>
			<td>-</td>
			<td>For an image merge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BALB/cAJc1</td>
			<td>CLEA</td>
			<td>-</td>
			<td>Mouse strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Actin (8H10D10) Mouse mAb</td>
			<td>CST</td>
			<td>3700</td>
			<td>For western blot</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clamp Forcep</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>WPI 500451</td>
			<td>For surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont forceps #5</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11251-10</td>
			<td>For surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI solution</td>
			<td>Dojindo</td>
			<td>340-07971</td>
			<td>For IHC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Envisu SD-OCT system</td>
			<td>Leica</td>
			<td>R4310</td>
			<td>For OCT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC-dextran</td>
			<td>Merk</td>
			<td>FD2000S</td>
			<td>For retinal blood perfusion</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>KEYENCE</td>
			<td>BZ-9000</td>
			<td>For fluorescence detection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gatifloxacin hydrate</td>
			<td>Senju Pharmaceutical</td>
			<td>Gachifuro</td>
			<td>For anti-bacterial infection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GFAP Monoclonal Antibody (2.2B10)</td>
			<td>Thermo</td>
			<td>13-0300</td>
			<td>For IHC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Marukan</td>
			<td>RH-200</td>
			<td>For surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HIF-1&#945; (D1S7W) XP Rabbit mAb</td>
			<td>CST</td>
			<td>36169</td>
			<td>For western blot</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ImageQuant LAS 4000 mini</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>-</td>
			<td>For chemiluminescence</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Midazolam</td>
			<td>Sandoz K.K</td>
			<td>SANDOZ</td>
			<td>For anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome Tissue-Tek TEC 6</td>
			<td>Sakura</td>
			<td>-</td>
			<td>For sectioning</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medetomidine</td>
			<td>Orion Corporation</td>
			<td>Domitor</td>
			<td>For anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>Handaya</td>
			<td>HS-2307</td>
			<td>For surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PuREC</td>
			<td>MAYO Corporation</td>
			<td>-</td>
			<td>For ERG</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissor</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>91460-11</td>
			<td>For surgery</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium hyaluronate</td>
			<td>Santen Pharmaceutical</td>
			<td>Hyalein</td>
			<td>For eye lubrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide/Penylephrine hydrochloride</td>
			<td>Santen Pharmaceutical</td>
			<td>Mydrin-P</td>
			<td>For mydriasis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-0 silk suture</td>
			<td>Natsume</td>
			<td>E12-60N2</td>
			<td>For surgery</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a murine model of ischemic retinal injury induced by transient bilateral common carotid artery occlusion

Olika vaskulär sjukdomar såsom diabetiker retinopati, ocklusion av retinal vener eller artärer och okulär skandinaviska syndrom kan leda till retinal ischemi. För att undersöka patologiska mekanismer för retinal ischemi måste relevanta experimentella modeller utvecklas. Anatomiskt är ett huvudsakligt retinalt blodkärl den oftalmiska artären (OpA) och OpA härstammar från den inre halsartären i den gemensamma halsartären (CCA). Således kan störningar av CCA effektivt orsaka retinal ischemi. Här etablerade vi en musmodell av retinal ischemi av transient bilaterala gemensamma halsartären ocklusion (tBCCAO) att binda rätt CCA med 6-0 silke suturer och att ockludera den vänstra CCA övergående i 2 sekunder via en klämma, och visade att tBCCAO kunde inducera akut retinal ischemi leder till retinal dysfunktion. Den nuvarande metoden minskar beroendet av kirurgiska instrument genom att endast använda kirurgiska nålar och en klämma, förkortar ocklusionstiden för att minimera oväntad djurdöd, vilket ofta ses i musmodeller av mellersta cerebrala gatan ocklusion, och upprätthåller reproducerbarhet av gemensamma retinal skandinaviska fynd. Modellen kan användas för att undersöka patofysiologin hos ischemiska retinopatier hos möss och kan vidare användas för in vivo-läkemedelsscreening.

Efter systemisk cirkulation av FITC-dextran i 2 minuter undersöktes retinala vaskulaturer av vänster och höger näthinnorna hos de skenstyrda mössen och tBCCAO-drivna mössen (kompletterande figur 1). FITC-dextran var fullt synlig i de båda näthinnan i de sham-operated mössen och den vänstra näthinnan i tBCCAO-drivna möss, medan det delvis var detekterbart i rätt näthinnan i tBCCAO-drivna möss.
Efter tBCCAO undersöktes ögonlocksdroppar(figur...

Watch this Scientific Journal Video about A Murine Model of Ischemic Retinal Injury Induced by Transient Bilateral Common Carotid Artery Occlusion at JoVE.com

A Murine Model of Ischemic Retinal Injury Induced by Transient Bilateral Common Carotid Artery Occlusion

Här beskriver vi en mus modell av retinal ischemi av transient bilaterala gemensamma halsartären ocklusion med enkla suturer och en klämma. Denna modell kan vara användbar för att förstå de patologiska mekanismerna för retinal ischemi orsakas av kardiovaskulära avvikelser.

En murin modell av skandinaviska retinal skada framkallas av transient bilaterala gemensamma halsartären ocklusion

Diverse vascular diseases such as diabetic retinopathy, occlusion of retinal veins or arteries and ocular ischemic syndrome can lead to retinal ischemia. ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A Model of Disturbed Flow-Induced Atherosclerosis in Mouse Carotid Artery by Partial Ligation and a Simple Method of RNA Isolation from Carotid Endothelium

En modell av Disturbed Flow-Induced ateroskleros hos mus Carotid Artery genom partiell Ligation och en enkel metod för RNA Isolering från Carotid endotelet

Despite the well-known close association, direct evidence linking disturbed flow to atherogenesis has been lacking. We have recently used a modified ...

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

Bilateralt gemensamma halspulsådern Ocklusion som en fullgod Konditioneringscykel Stimulus att framkalla tidig ischemisk tolerans till Focal cerebral ischemi

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

Endotelin-1 inducerad Middle cerebral artärocklusion modell för ischemisk stroke med laser Doppler Flowmetry Vägledning i råtta

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Adult Mouse Venous Hypertension Model: Common Carotid Artery to External Jugular Vein Anastomosis.

Adult Mouse Venös Hypertoni Modell: gemensamma halspulsådern till extern halsvenen Anastomos.

The understanding of the pathophysiology of brain arteriovenous malformations and arteriovenous fistulas has improved thanks to animal models. A rat model ...

Ferric Chloride-induced Thrombosis Mouse Model on Carotid Artery and Mesentery Vessel

Järnklorid-inducerad Trombos musmodell på Carotid Artery och tarmkäx Vessel

Severe thrombosis and its ischemic consequences such as myocardial infarction, pulmonary embolism and stroke are major worldwide health issues. The ferric ...

Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability

Utföra ständiga Distal Middle Cerebral med gemensamma hals artärocklusion i åldrade råttor för att studera kortikal ischemi med fördröjd funktionshinder

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, ...

Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Model of Neonatal Stroke in P10 Rats

Transient Middle Cerebral artärocklusion Modell av Neonatal Stroke i P10 råttor

A number of animal models have been used to study hypoxic-ischemic injury, traumatic injury, global hypoxia, or permanent ischemia in both the immature ...

In Vivo Gene Transfer to the Rabbit Common Carotid Artery Endothelium

In Vivo Gene Transfer to the Rabbit Common Carotid Artery Endothelium

In Vivo Genöverföring till kanin gemensamma halspulsådern endotelet

The goal of this method is to introduce a transgene into the endothelium of isolated segments of both rabbit common carotid arteries. The method achieves ...

A Rabbit Model of Durable Transgene Expression in Jugular Vein to Common Carotid Artery Interposition Grafts

En kanin modell av hållbara transgenens uttryck i halsvenen till gemensamma halspulsådern Interposition grafter

Vein graft bypass surgery is a common treatment for occlusive arterial disease; however, long-term success is limited by graft failure due to thrombosis, ...

Phase Contrast Magnetic Resonance Imaging in the Rat Common Carotid Artery

Magnetröntgen i fas kontrast i den gemensamma halspulsådern råtta

Phase contrast magnetic resonance imaging (PC-MRI) is a noninvasive approach that can quantify flow-related parameters such as blood flow. Previous ...