Name: label-free imaging of lipid storage dynamics in caenorhabditis elegans using stimulated raman scattering microscopy
Uploaded: 2021-05-28T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Label-Free Imaging of Lipid Storage Dynamics in Caenorhabditis elegans using Stimulated Raman Scattering Microscopy at JoVE.com

Dette arbejde blev støttet af NIH tilskud R01AG045183 (M.C.W.), R01AT009050 (M.C.W.), R01AG062257 (M.C.W.), DP1DK113644 (M.C.W.), Marts Dimes Foundation (M.C.W.), Welch Foundation (M.C.W.), og af HHMI investigator (M.C.W.). Vi takker Caenorhabditis Genetics Center (CGC) for C. elegans stammer.

1. Instrumental opsætning til stimuleret Raman Scattering Mikroskopi
BEMÆRK: SRS mikroskopisystemet er bygget på en picosecond laser med pumpe integreret optisk parametrisk oscillator og en konfokal laserscanning mikroskop. Oscillatoren giver to picosecond pulstog, herunder en Stokes-stråle ved 1.064 nm og en pumpestråle, der kan indstilles mellem 700-990 nm. Tidsmæssige og rumlige overlapning af de to bjælker opnås inde i laseren. En indbygget elektrooptisk modulator (EOM) er designet s...

<ol>
	<li>Luppino, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overweight,+obesity,+and+depression:+a+systematic+review+and+meta-analysis+of+longitudinal+studies.">Overweight, obesity, and depression: a systematic review and meta-analysis of longitudinal studies.</a> Archives of General Psychiatry. 67 (3), 220-229 (2010).</li><li>Eckel, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obesity+and+type+2+diabetes:+what+can+be+unified+and+what+needs+to+be+individualized.">Obesity and type 2 diabetes: what can be unified and what needs to be individualized.</a> Diabetes Care. 34 (6), 1424-1430 (2011).</li><li>Poirier, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obesity+and+cardiovascular+disease:+pathophysiology,+evaluation,+and+effect+of+weight+loss.">Obesity and cardiovascular disease: pathophysiology, evaluation, and effect of weight loss.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 26 (5), 968-976 (2006).</li><li>Bhaskaran, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Body-mass+index+and+risk+of+22+specific+cancers:+a+population-based+cohort+study+of+5.24+million+UK+adults.">Body-mass index and risk of 22 specific cancers: a population-based cohort study of 5.24 million UK adults.</a> Lancet. 384 (9945), 755-765 (2014).</li><li>Shen, Y., Hu, F., Min, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Raman+imaging+of+small+biomolecules.">Raman imaging of small biomolecules.</a> Annual Review of Biophysics. 48, 347-369 (2019).</li><li>Daemen, S., van Zandvoort, M., Parekh, S. H., Hesselink, M. K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microscopy+tools+for+the+investigation+of+intracellular+lipid+storage+and+dynamics.">Microscopy tools for the investigation of intracellular lipid storage and dynamics.</a> Molecular Metabolism. 5 (3), 153-163 (2016).</li><li>Syed, A., Smith, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Raman+imaging+in+cell+membranes,+lipid-rich+organelles,+and+lipid+bilayers.">Raman imaging in cell membranes, lipid-rich organelles, and lipid bilayers.</a> Annual Review of Analytical Chemistry. 10 (1), 271-291 (2017).</li><li>Thomas, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Raman+spectroscopy+of+protein+and+nucleic+acid+assemblies.">Raman spectroscopy of protein and nucleic acid assemblies.</a> Annual Review of Biophysics and Biomolecular Structure. 28, 1-27 (1999).</li><li>Evans, C. L., Xie, X. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coherent+anti-stokes+Raman+scattering+microscopy:+chemical+imaging+for+biology+and+medicine.">Coherent anti-stokes Raman scattering microscopy: chemical imaging for biology and medicine.</a> Annual Review of Analytical Chemistry. 1, 883-909 (2008).</li><li>Freudiger, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+biomedical+imaging+with+high+sensitivity+by+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Label-free biomedical imaging with high sensitivity by stimulated Raman scattering microscopy.</a> Science. 322 (5909), 1857-1861 (2008).</li><li>Hu, F., Shi, L., Min, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+imaging+of+chemical+bonds+by+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Biological imaging of chemical bonds by stimulated Raman scattering microscopy.</a> Nature Methods. 16 (9), 830-842 (2019).</li><li>Wang, M. C., Min, W., Freudiger, C. W., Ruvkun, G., Xie, X. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNAi+screening+for+fat+regulatory+genes+with+SRS+microscopy.">RNAi screening for fat regulatory genes with SRS microscopy.</a> Nature Methods. 8 (2), 135-138 (2011).</li><li>Wei, L., Yu, Y., Shen, Y., Wang, M. C., Min, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vibrational+imaging+of+newly+synthesized+proteins+in+live+cells+by+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Vibrational imaging of newly synthesized proteins in live cells by stimulated Raman scattering microscopy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (28), 11226-11231 (2013).</li><li>Wei, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-cell+imaging+of+alkyne-tagged+small+biomolecules+by+stimulated+Raman+scattering.">Live-cell imaging of alkyne-tagged small biomolecules by stimulated Raman scattering.</a> Nature Methods. 11 (4), 410-412 (2014).</li><li>Ramachandran, P. V., Mutlu, A. S., Wang, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+biomedical+imaging+of+lipids+by+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Label-free biomedical imaging of lipids by stimulated Raman scattering microscopy.</a> Current Protocols in Molecular Biology. 109, 31 (2015).</li><li>Srinivasan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+body+fat+in+Caenorhabditis+elegans.">Regulation of body fat in Caenorhabditis elegans.</a> Annual Review of Physiology. 77, 161-178 (2015).</li><li>Vrablik, T. L., Petyuk, V. A., Larson, E. M., Smith, R. D., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipidomic+and+proteomic+analysis+of+Caenorhabditis+elegans+lipid+droplets+and+identification+of+ACS-4+as+a+lipid+droplet-associated+protein.">Lipidomic and proteomic analysis of Caenorhabditis elegans lipid droplets and identification of ACS-4 as a lipid droplet-associated protein.</a> Biochimca Et Biophysica Acta. 1851 (10), 1337-1345 (2015).</li><li>Yu, Y., Mutlu, A. S., Liu, H., Wang, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+screens+using+photo-highlighting+discover+BMP+signaling+in+mitochondrial+lipid+oxidation.">High-throughput screens using photo-highlighting discover BMP signaling in mitochondrial lipid oxidation.</a> Nature Communications. 8 (1), 865 (2017).</li><li>Kelley, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-cell+confocal+microscopy+and+quantitative+4D+image+analysis+of+anchor-cell+invasion+through+the+basement+membrane+in+Caenorhabditis+elegans.">Live-cell confocal microscopy and quantitative 4D image analysis of anchor-cell invasion through the basement membrane in Caenorhabditis elegans.</a> Nature Protocols. 12 (10), 2081-2096 (2017).</li><li>Murphy, C. T., Hu, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin/insulin-like+growth+factor+signaling+in+C.+elegans.">Insulin/insulin-like growth factor signaling in C. elegans.</a> WormBook. , 1-43 (2013).</li><li>Shi, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+lipid+droplet+size+and+phospholipid+composition+by+stearoyl-CoA+desaturase.">Regulation of lipid droplet size and phospholipid composition by stearoyl-CoA desaturase.</a> Journal of Lipid Research. 54 (9), 2504-2514 (2013).</li><li>Watts, J. L., Ristow, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+and+carbohydrate+metabolism+in+Caenorhabditis+elegans.">Lipid and carbohydrate metabolism in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 207 (2), 413-446 (2017).</li><li>Kimura, K. D., Tissenbaum, H. A., Liu, Y., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=daf-2,+an+insulin+receptor-like+gene+that+regulates+longevity+and+diapause+in+Caenorhabditis+elegans.">daf-2, an insulin receptor-like gene that regulates longevity and diapause in Caenorhabditis elegans.</a> Science. 277 (5328), 942-946 (1997).</li><li>Kwon, E. S., Narasimhan, S. D., Yen, K., Tissenbaum, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+DAF-16+isoform+regulates+longevity.">A new DAF-16 isoform regulates longevity.</a> Nature. 466 (7305), 498-502 (2010).</li><li>Chen, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longevity+genes+revealed+by+integrative+analysis+of+isoform-specific+daf-16/FoxO+mutants+of+Caenorhabditis+elegans.">Longevity genes revealed by integrative analysis of isoform-specific daf-16/FoxO mutants of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 201 (2), 613-629 (2015).</li><li>Lee, R. Y., Hench, J., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+C.+elegans+DAF-16+and+its+human+ortholog+FKHRL1+by+the+daf-2+insulin-like+signaling+pathway.">Regulation of C. elegans DAF-16 and its human ortholog FKHRL1 by the daf-2 insulin-like signaling pathway.</a> Current Biology. 11 (24), 1950-1957 (2001).</li><li>Mutlu, A. S., Gao, S. M., Zhang, H., Wang, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+specificity+regulates+lipid+metabolism+through+neuroendocrine+signaling+in+Caenorhabditis+elegans.">Olfactory specificity regulates lipid metabolism through neuroendocrine signaling in Caenorhabditis elegans.</a> Nature Communications. 11 (1), 1450 (2020).</li><li>Chen, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fingerprint+Stimulated+Raman+Scattering+imaging+reveals+retinoid+coupling+lipid+metabolism+and+survival.">Fingerprint Stimulated Raman Scattering imaging reveals retinoid coupling lipid metabolism and survival.</a> Chemphyschem: a European Journal of Chemical Physics and Physical Chemistry. 19 (19), 2500-2506 (2018).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+imaging+of+lipid+synthesis+and+lipolysis+dynamics+in+Caenorhabditis+elegans+by+Stimulated+Raman+Scattering+microscopy.">Quantitative imaging of lipid synthesis and lipolysis dynamics in Caenorhabditis elegans by Stimulated Raman Scattering microscopy.</a> Analytical Chemistry. 91 (3), 2279-2287 (2019).</li><li>Lin, C. J., Wang, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+metabolites+regulate+host+lipid+metabolism+through+NR5A-Hedgehog+signalling.">Microbial metabolites regulate host lipid metabolism through NR5A-Hedgehog signalling.</a> Nature Cell Biology. 19 (5), 550-557 (2017).</li><li>Fu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+metabolic+fingerprinting+of+neutral+lipids+with+hyperspectral+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">In vivo metabolic fingerprinting of neutral lipids with hyperspectral stimulated Raman scattering microscopy.</a> Journal of the American Chemical Society. 136 (24), 8820-8828 (2014).</li><li>Perez, C. L., Van Gilst, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+13C+isotope+labeling+strategy+reveals+the+influence+of+insulin+signaling+on+lipogenesis+in+C.+elegans.">A 13C isotope labeling strategy reveals the influence of insulin signaling on lipogenesis in C. elegans.</a> Cell Metabolism. 8 (3), 266-274 (2008).</li><li>Elle, I. C., Rodkaer, S. V., Fredens, J., Faergeman, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+measuring+fatty+acid+oxidation+in+C.+elegans.">A method for measuring fatty acid oxidation in C. elegans.</a> Worm. 1 (1), 26-30 (2012).</li><li>Ezcurra, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=elegans+eats+its+own+intestine+to+make+yolk+leading+to+multiple+senescent+pathologies.">elegans eats its own intestine to make yolk leading to multiple senescent pathologies.</a> Current Biology. 28 (16), 2544-2556 (2018).</li><li>Lu, F. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+DNA+imaging+in+vivo+with+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Label-free DNA imaging in vivo with stimulated Raman scattering microscopy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (37), 11624-11629 (2015).</li><li>Long, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-color+vibrational+imaging+of+glucose+metabolism+using+stimulated+Raman+scattering.">Two-color vibrational imaging of glucose metabolism using stimulated Raman scattering.</a> Chemical Communications. 54 (2), 152-155 (2018).</li><li>Zhao, Z., Shen, Y., Hu, F., Min, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+vibrational+tags+in+biological+imaging+by+Raman+microscopy.">Applications of vibrational tags in biological imaging by Raman microscopy.</a> Analyst. 142 (21), 4018-4029 (2017).</li><li>Liao, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+and+in+situ+spectroscopic+imaging+by+a+handheld+Stimulated+Raman+Scattering+Microscope.">In vivo and in situ spectroscopic imaging by a handheld Stimulated Raman Scattering Microscope.</a> ACS Photonics. 5 (3), 947-954 (2018).</li><li>Lee, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+cholesterol+storage+in+live+cells+and+C.+elegans+by+stimulated+Raman+scattering+imaging+of+phenyl-Diyne+cholesterol.">Assessing cholesterol storage in live cells and C. elegans by stimulated Raman scattering imaging of phenyl-Diyne cholesterol.</a> Scientific Reports. 5, 7930 (2015).</li><li>Wang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+lipid+metabolism+in+live+Caenorhabditis+elegans+using+fingerprint+vibrations.">Imaging lipid metabolism in live Caenorhabditis elegans using fingerprint vibrations.</a> Angewandte Chemie (International Edition in English). 53 (44), 11787-11792 (2014).</li><li>Chen, W. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectroscopic+coherent+Raman+imaging+of+Caenorhabditis+elegans+reveals+lipid+particle+diversity.">Spectroscopic coherent Raman imaging of Caenorhabditis elegans reveals lipid particle diversity.</a> Nature Chemical Biology. 16 (10), 1087-1095 (2020).</li><li>Freudiger, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimulated+Raman+Scattering+microscopy+with+a+robust+fibre+laser+source.">Stimulated Raman Scattering microscopy with a robust fibre laser source.</a> Nature Photonics. 8 (2), 153-159 (2014).</li><li>Brinkmann, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Portable+all-fiber+dual-output+widely+tunable+light+source+for+coherent+Raman+imaging.">Portable all-fiber dual-output widely tunable light source for coherent Raman imaging.</a> Biomedical Optics Express. 10 (9), 4437-4449 (2019).</li></ol>

Til forsvar mod fedme og de tilhørende metaboliske lidelser er der gennemført vigtige forskningsindsatser for bedre at forstå de lovgivningsmæssige mekanismer i lipidhomøostase. Til kvantitativ påvisning af lipidmolekyler i biologiske prøver har etiketfri billeddannelse ved SRS-mikroskopi vist sig at være et pålideligt alternativ til biokemiske assays og andre farvningsmetoder. Vores gruppe og andre har afsløret nye biologiske mekanismer i lipid metabolisk regulering ved at kombinere brugen af C. elegans</e...

Fedme er blevet et globalt sundhedsproblem, der truer en tredjedel af befolkningen rundt om i verden, og det udgør en alvorlig medicinsk bekymring i betragtning af dets tilknytning til dårlig mental sundhed1 og dødelige sygdomme, herunder diabetes2, hjerte-kar-sygdomme3 og nogle typer kræft4. Undersøgelse af lipidmetabolisme er afgørende for bedre at forstå de biologiske problemer bag fedme. Hurtig og specifik kvantificering af lipidopbevaring indebærer påvisning af fedtsyrer og derivater heraf samt sterolholdige metabolitter med høj følsomhed og helst med rumlig information. Lipider er udfordrende mål til billedet, fordi de mangler iboende fluorescens og kan ikke let fluorescerende mærkes. De fluorescerende tags er ofte større end lipidmolekylerne og kan derfor være kemisk invasive og upraktiske til in vivo-applikationer. Etiketfri eller minimal mærkningsstrategi er nødvendig for at bevare lipidmolekylernes hydrofobe struktur5. Den seneste udvikling inden for billeddannelsesteknologier har skabt spændende muligheder for etiketfri billeddannelse af lipider i levende celler, væv og organismer.
Traditionelle tilgange til lipidlagringsanalyser i biologiske prøver omfatter biokemiske analyser og farvningsprotokoller med lipofile farvestoffer. Biokemiske kvantificeringsanalyser, der involverer massespektrometri (MS), er uovertruffen i deres molekylære opløsning, men de kræver meget store prøvemængder, og prøveforberedelse tager normalt flere timer, hvilket begrænser deres anvendelse til realtidsbilleddannelse af levende systemer5. En anden væsentlig begrænsning af disse analysemetoder er manglen på geografisk information. På den anden side giver lipofile farvestoffer som Oil Red O og Sudan Black væv og cellulær distribution af lipidopbevaringsorganeller, og sammenlignet med MS-teknikker er disse farvningsmetoder også lave i omkostninger og lette at udføre. Disse farvningsprotokoller kræver imidlertid fiksering, hvilket kan påvirke lipiddråbernes hydrofobe karakter, generere kunstige ændringer i deres struktur og resultere i uoverensstemmelser mellem forsøg6. De tekniske vanskeligheder forbundet med biokemiske og farvning teknikker har ført til søgen efter etiket-fri metoder til at billedet lipid molekyler og til den hurtige stigning i brugen af sammenhængende Raman spredning (CRS) mikroskopi i lipid imaging.
Raman-effekten blev først anerkendt af Raman og Krishnan, hvor de rapporterede, at ved interaktion med en foton kan et molekyle generere spredt lys uden ændring i bølgelængde (kaldet Rayleigh-spredning) eller sjældent med en ændret bølgelængde (kaldet Raman-spredning), og denne ændring i bølgelængde er karakteristisk for de funktionelle kemiske grupper inden formolekylet 7. Når de kemiske bindinger i et molekyle bliver ophidset til et højere vibrationelt energiniveau af en hændelsesfoton, kaldet pumpefoton, bliver energien fra den spredte foton, kaldet Stokes photon, lavere. Ellers kan de kemiske bindinger nå et lavere vibrationelt energiniveau, hvis de oprindeligt er på et højere niveau, og den spredte foton får energi til at være anti-Stokes foton. Frekvensforskellen mellem hændelsen og spredte fotoner er kendt som Raman-skiftet. Hver kemisk binding i et molekyle har et karakteristisk og kvantificerbart Raman-skift. For eksempel har CH2-bindingen et Raman-skift på 2.845 cm-1, hvilket er rigeligt i fedtsyrekæder8. Dette spontane Raman-signal er generelt meget svagt, hvilket har stærkt begrænset billedhastigheden i konventionel spontan Raman-mikroskopi. I årenes løb er der udviklet forskellige tilgange til at øge billedhastigheden og følsomheden af spontan Raman-mikroskopi. Sammenhængende Raman sprede mikroskopi, herunder sammenhængende Anti-Stokes Raman Scattering (CARS) mikroskopi og stimuleret Raman Scattering (SRS) mikroskopi, er den seneste fremskridt. CARS og SRS har lidt forskellige arbejdsprincipper, men begge er etiketfri teknikker, der har levende billeddannelseskapacitet, kan give rumlig og tidsmæssig information om lipidlagringsdynamik og kræver kun lille prøvestørrelse. CARS mikroskopi lider af ikke-resonant baggrund, som kommer fra forskellige ikke-lineære processer, og CARS-signaler har også ikke-lineært forhold til molekylekoncentrationen, hvilket tilsammen komplicerer kvantificeringsprocessen9. I modsætning til CARS mikroskopi genererer SRS-mikroskopi ikke ikke-resonante baggrundssignaler og tilbyder lineær afhængighed af koncentrationen af molekylet af interesse. Således er I øjeblikket SRS mikroskopi mere udbredt til lipid imaging.
I SRS mikroskopi, kan de svage spontane Raman signaler forstærkes, når ophidset af to synkroniserede laserstråler med deres frekvens forskel matcher den kemiske binding vibrationelle frekvens. Molekylet vil opleve en forbedret overgang til en ophidset tilstand på grund af sammenhængende excitation. Som et resultat, er antallet af Stokes foton generation boostet. Derfor øges intensiteten af den transmitterede "Stokes" stråle (stimuleret Raman gevinst, SRG) og intensiteten af den transmitterede "pumpe" stråle falder (stimuleret Raman tab, SRL). Påvisning af SRG- eller SRL-signaler ligger til grund for grundlaget for stimuleret Raman Scattering (SRS) mikroskopibilleddannelse af molekyler med specifikke kemiske bindinger10. Hvis frekvensforskellen mellem de to laserstråler ikke svarer til vibrationsfrekvensen for den kemiske binding inden for et molekyle af interesse, genereres der hverken SRG- eller SRL-signaler. Billedhastigheden af SRS-mikroskopi er omkring 2 μsec pr. pixel eller 1 sekund pr. ramme, hvilket er meget hurtigere end spontan Raman-mikroskopi11. Typisk sideværts opløsning for SRS mikroskopi er diffraktion begrænset og omkring 300 nm. Desuden giver de to fotonoptiske processer for SRS-mikroskopi mulighed for volumetrisk 3D-billeddannelse af relative tykke vævsprøver, og billeddybden kan nå op på 300-500 μm. Samlet set præsenterer SRS-mikroskopi en effektiv, etiketfri billedteknik til at opdage specifikke biomolekyler, især lipider.
Lipiddråber er enkeltmembranorganeller, som er det vigtigste cellulære opbevaringssted for neutrale lipider, herunder triacylglyceroler (TAGs) og kolesterolestere (CEs). CH2 bindinger i fedtsyre kæder af disse lipid molekyler generere stærke SRS signaler på 2.845 cm-1, når ophidset8, hvilket gør det muligt at opdage og kvantificere opbevaring lipid niveauer i intakte celler, væv sektioner og endda hele organismer12,13,14,15. Især C. elegans er nyttige til lipidbilledundersøgelser på grund af deres gennemsigtighed. Ligesom pattedyr, C. elegans også gemme lipider i lipid dråber og syntese og nedbrydning veje lipid molekyler er stærkt bevaret16. I denne protokol vil vi levere arbejdsprincippet for SRS-mikroskopi, dets grundlæggende opsætning og beskrive metoderne til dets anvendelse i lipidbilleddannelse i C. elegans.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>A/D converter</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>Analog Unit</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>GeneMate</td>
			<td>3119</td>
			<td>For making agarose pads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alignment tool - adapter</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>SM1A4</td>
			<td>For mounting the tool on scope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alignment tool - target</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>VRC2SM1</td>
			<td>For viewing IR laser</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alignment tool - tube</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>SM1L40</td>
			<td>Length can vary</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autocorrelator (Optional)</td>
			<td>APE</td>
			<td>pulseCheck</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bandpass filter</td>
			<td>minicircuits</td>
			<td>BBP-21.4+ if modulated at 20MHz or KR Electronics 2724 if modulated at 8 MHz</td>
			<td>For signal with modulation frequency filtering</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BNC cables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ800</td>
			<td>For handling and picking worms for imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dodecane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>44010</td>
			<td>Used for calibration of the SRS signal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter</td>
			<td>Chroma Technology</td>
			<td>890/220 CARS</td>
			<td>For removing Stokes beam</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>General purpose laboratory labeling tape</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89097</td>
			<td>For making agarose pads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass coverslips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48393-106</td>
			<td>For covering worms for imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass microscope slide</td>
			<td>VWR</td>
			<td>16004-422</td>
			<td>For making agarose pads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser scanning microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>FV3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lens</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>L1: AC254-050-B 
			L2: AC254-075-B</td>
			<td>For beam expander</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lock-in amplifier</td>
			<td>Zurich</td>
			<td>HF2LI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lowpass filter</td>
			<td>minicircuits</td>
			<td>BLP-1.9+</td>
			<td>For power supply noise suppression</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mirrors</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>BB1-E03</td>
			<td>For relay and periscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>UPlanSAPO 20x 0.75, UPlanSAPO 60XW 1.20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photodiode</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>FDS1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picosecond laser source</td>
			<td>APE</td>
			<td>picoEmerald</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power supply</td>
			<td>TEKPOWER</td>
			<td>TP1342U</td>
			<td>For photodiode, reversed 50V voltage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium azide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S2002</td>
			<td>For anaesthesizing the worms</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Worm picker</td>
			<td>WormStuff</td>
			<td>59-AWP</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

label-free imaging of lipid storage dynamics in caenorhabditis elegans using stimulated raman scattering microscopy

Lipidmetabolisme er en grundlæggende fysiologisk proces, der er nødvendig for cellulær og organisme sundhed. Dysregulering af lipidmetabolisme fremkalder ofte fedme og mange tilknyttede sygdomme, herunder hjerte-kar-sygdomme, type II-diabetes og kræft. For at fremme den nuværende forståelse af lipid metabolisk regulering, kvantitative metoder til præcist at måle in vivo lipid opbevaringsniveauer i tid og rum er blevet stadig vigtigere og nyttige. Traditionelle metoder til at analysere lipidlagring er semiktativ for mikroskopisk vurdering eller mangler spatio-tidsmæssige oplysninger til biokemisk måling. Stimuleret Raman spredning (SRS) mikroskopi er en etiket-fri kemisk billeddannelse teknologi, der muliggør hurtig og kvantitativ påvisning af lipider i levende celler med en subcellulær opløsning. Da kontrasten udnyttes fra iboende molekylære vibrationer, tillader SRS-mikroskopi også firedimensionel sporing af lipider hos levende dyr. I det sidste årti har SRS mikroskopi været meget anvendt til små molekyle billeddannelse i biomedicinsk forskning og overvinde de store begrænsninger af konventionelle fluorescerende farvning og lipid ekstraktion metoder. I laboratoriet har vi kombineret SRS-mikroskopi med de genetiske og biokemiske værktøjer, der er tilgængelige for den magtfulde modelorganisme, Caenorhabditis elegans, for at undersøge fordelingen og heterogeniteten af lipiddråber på tværs af forskellige celler og væv og i sidste ende for at opdage nye bevarede signalveje, der modulerer lipidmetabolisme. Her præsenterer vi arbejdsprincipperne og den detaljerede opsætning af SRS-mikroskopet og giver metoder til dets anvendelse til kvantificering af lipidlagring på forskellige udviklingsmæssige tidspunkter af vildtype og insulinsignalerende mangelfuld mutant C. elegans.

Insulinsignalering er en vigtig endokrine vej, der påvirker udvikling, reproduktion, levetid og stofskifte. I orme består insulinsignalering af ca. 40 insulinlignende peptidetaler, insulinlignende vækstfaktorreceptor ortholog DAF-2, downstream PI3K/AKT kinase kaskade og FoxO transskriptionsfaktor ortholog, DAF-1620. daf-2 mutanter, der mangler insulinreceptoren, har flere lipiddråber i tarmen, ormen lipidopbevaringsvæv21,22. ...

Watch this Scientific Journal Video about Label-Free Imaging of Lipid Storage Dynamics in Caenorhabditis elegans using Stimulated Raman Scattering Microscopy at JoVE.com

Label-Free Imaging of Lipid Storage Dynamics in Caenorhabditis elegans using Stimulated Raman Scattering Microscopy

Stimuleret Raman spredning (SRS) mikroskopi giver mulighed for selektiv, etiket-fri billeddannelse af specifikke kemiske moieties og det er blevet effektivt ansat til at billedet lipid molekyler in vivo. Her giver vi en kort introduktion til princippet om SRS mikroskopi og beskrive metoder til dets anvendelse i billedbehandling lipid opbevaring i Caenorhabditis elegans.

Label-Free Imaging af Lipid Storage Dynamics i Caenorhabditis elegans ved hjælp af stimuleret Raman Scattering Mikroskopi

Lipid metabolism is a fundamental physiological process necessary for cellular and organism health. Dysregulation of lipid metabolism often elicits ...

Stimuleret Raman sprede mikroskopi er en kemisk billeddannelse teknologi, der muliggør hurtig og kvantitativ påvisning af lipider og gør det muligt at spore lipider i levende dyr i en etiket-fri måde. Den vigtigste fordel ved SRS mikroskopi over traditionelle lipid detektion teknikker er, at det er etiket-fri og derfor ikke er så bæredygtig til foto blegning som andre fluorescens og farvning spørgsmål. Brugen af SRS-mikroskopi i forbindelse med de genetiske og biokemiske værktøjer, der er tilgængelige for modelorganismer, især Caenorhabditis elegans, giver en stærk ramme for at studere normale regulatorer af lipidbiologi og metabolisme.Hvis du vil føre laserstråler ind i SRS-mikroskopet, skal du først indstille periskopet til at løfte strålen fra en picosecond lyskildeudgang til den infrarøde laserindgangsport på scanneren af mikroskopet og åbne laserstyringssoftwaren for at starte laserne. Sænk pumpens lasereffekt til 50 milliwatt, og indstil pumpesignalet til 750 nanometer. Brug en stråleudvider til at justere strålediameteren, så den passer til mikroskopmålenes bagåbning.Brug to relæspejle, M1 og M2, til at guide laserstrålen til periskopet og indstille periskopets nikker i midten af tuningområdet. Vælg den oprindelige position og vinkel på hvert spejl, således at laserstrålen ca rammer midten af spejlet for at starte strålen i mikroskopet og bruge en tom port på mikroskopets objektive tårn for at udføre banejusteringen. Placer effektmålersonden i den objektive port for at måle kraften i det transmitterede lys og indstille scanneren af mikroskopet ved den højeste zoom, 50X.Mål kraften i det transmitterede lys med det fokuserede laserstrålepunkt og optimer knopperne på spejle M1 og M2 iterativt for at opnå den højeste transmitterede lasereffekt. Brug justeringsværktøjet til at udføre den fine justering af det transmitterede lys for at sikre, at lyset passerer gennem midten af målet, og placer fluorescensmåljusteringshætten på det tomme objektive sæde. Juster knapperne på det første styrespejl, M1, for at centrere laserstrålepletten og introducere forlængerrøret med justeringshætten i den anden ende til et tomt objektivt sæde til overvågning af laserstrålepletten.Stil derefter knapperne på det andet styrespejl, M2, for at centrere laserstrålepletten igen i den anden ende af forlængerrøret. Hvis du vil konfigurere SRS-detektionsmodulet, skal du placere en stråledelerkube efter kondensatoren for at dirigere den overførte laser til fotodiodemodulet. For at konfigurere elektronikforbindelsen skal du bruge en indbygget elektrooptisk modulator ved 20 megahertz inde i picosecond tune-able laseren for at modulere intensiteten af Stokes-strålen og fodre fotodiodens udgangssignal ind i låseforstærkeren til demodulation af det stimulerede Raman-tab.Derefter føres lock-in forstærkerudgangen ind i mikroskopets analoge boks for at konvertere det elektriske analoge signal til et digitalt signal. For at optimere billedforholdene tilsættes fem mikroliter oliesyre til et minimikroskopdiaskammer og dækslet prøven med en dæksedlen. Placer prøven på mikroskopstadiet, og brug pudens kant til at finde og fokusere på dråben.Juster kondensatoren til Kohler-belysning, og brug et infrarødt sensorkort og infrarød fremviser til at kontrollere, om pumpestrålestien stadig er korrekt. Bekræft, at forsinkelsesfasen er indstillet til nul femtosekunder, og indstil pumpestrålebølgelængden til 795,8 nanometer. Sæt pumpestrålens effekt til 50 milliwatt, og sæt Stoke-strålen til 100 milliwatt.Åbn lukkeren for både bjælker, samt de vigtigste lukkeren af laseren. Scan eksemplet, og kontroller billedet på computerskærmen. Skift skærmtilstanden til høj lav, og juster området for at se en ca. 50 % mætning.Kontroller, om mætningen er centreret i billedet, og juster omhyggeligt styrespejlene inde i picosecond tune-able lasersystemet for optimeret overlapning af pumpen og Stokes for at maksimere billedintensiteten og centrere topintensiteten efter behov. Før hver billedsession skal du tilføje 100 mikroliter varm 2%agarose til et rent glasrutsjebane placeret mellem støttedias med to lag laboratoriebånd og hurtigt placere et andet dias oven på det første dias. Forsigtigt presset for at skabe en tynd, jævn agarose pad og lad agarose køle af.For at montere ormene til billeddannelse skal du placere en fire til fem mikroliter dråbe bedøvelsesmiddel pr. 10 til 20 orme på en dæksedler og bruge et dissektionsmikroskop til at vælge de orme, der skal afbildes, og placere ormene på anæstesidråben, når de indsamles. Når alle ormene er indsamlet, skal du dække ormene med glasrutsjebanen med agarosepuden. Til billeddannelse skal ormens prøve monteres med dækslet glide mod den objektive linse og direkte det lyse felt lyskilde til okularet for at finde orme.Bring ormene i fokus og juster kondensatorens position i overensstemmelse hermed. Juster laserkræfterne ved at indstille pumpens lasereffekt til 200 milliwatt og den amerikanske IR-effekt til 400 milliwatt. Indstil låseforstærkeren til demodulation af ormenS-signalet.Begynd at scanne den første orm med en hurtig scanningshastighed, og juster det fine fokus for at finde interesseområdet. Når signalet er optimeret, skal du skifte til en langsommere scanningshastighed og en højere pixelopløsning for at hente SRS-billedet og gemme billedet i et format, der muliggør høj opløsning. Når alle prøverne er afbildet, skal du sætte laserkilden på standby og slukke for alt det tilhørende udstyr.Hvis du vil analysere billederne, skal du åbne filerne i ImageJ og vælge analysere og indstille målinger for at vælge de egenskaber, der skal analyseres. Brug polygonmarkeringsværktøjet til at skitsere det område af ormens tarm, der skal kvantificeres, og klik på Analysér og mål igen. Målingerne vises i resultatvinduet.Når alle ormene er blevet skitseret, skal du kopiere og indsætte målingerne for hver orme i en given genotype i et regneark. For baggrundsmålingsværdien skal du vælge et område i nærheden af ormen, der ikke har noget SRS-signal, og trække den gennemsnitlige grå baggrundsværdi fra målingen for hver enkelt orm for at beregne den gennemsnitlige og standardafvigelse for baggrundsen fratrækkede gennemsnitlige grå værdier fra alle orme i en given genotype eller testgruppe. Disse værdier kan derefter normaliseres til gennemsnittet af kontrolgruppen.I denne repræsentative analyse blev tarmlæbeindholdet i alderssynkronerede orme af vild type og daf-2-mutanter, der manglede insulinreceptoren, kvantificeret i voksenalderen. Som forventet observeres et fald i lipidniveauer i vilde type orme, der starter på dag ét og fortsætter indtil dag ni i voksenalderen. Lipid niveauer i daf-2 mutanter, dog stige, indtil de er fem dage gamle, på hvilket tidspunkt de forbliver konstant på omkring 2,5 til tre gange højere end den vilde type.Daf-16 inaktivering undertrykker stigningen i lipid niveauer af daf-2 mutanter. Udtryk for daf-16a a eller daf-16b isoform i daf-2, daf-16 dobbelt mutanter ikke genoprette lipid niveauer. Udtrykket af daf-16d/f/h isoform er imidlertid tilstrækkeligt til at genoprette lipidniveauerne i daf-2, daf-16 dobbelt mutanter til de niveauer, der observeres i daf-2 enkelt mutanter.Disse resultater viser, at daf-16d/f/h isoform specifikt modulerer lipidmetabolisme i daf-2 mutant orme. Det er vigtigt at bruge den samme laserkraft til pumpe- og Stokes-bjælker under hele billedsessionen og inkludere en kontrolgruppe i hver seks og fire konsekvente kvantificering. Ud over at kvantificere lipidlagring kan SRS-mikroskopi kombineres med bioorthogonale tags, såsom deuterium, og implementeres for at visualisere dynamikken i lipidinkorporering, syntese og nedbrydning.SRS mikroskopi tillader multiplexing og kan implementeres til at afbilde flere biomolekyler i forskellige subcellulære rum. Såkaldt hyperspektral SRS mikroskopi har en stor fremtid i at udforske den metaboliske dynamik.

Research

JoVE Journal

Biology

Label-Free Imaging of Lipid Storage Dynamics in Caenorhabditis elegans using Stimulated Raman Scattering Microscopy

Label-free in situ Imaging of Lignification in Plant Cell Walls

Label-free in situ Imaging of Lignification in Plant Cell Walls

Meeting growing energy demands safely and efficiently is a pressing global challenge. Therefore, research into biofuels production that seeks to find ...

Differential Imaging of Biological Structures with Doubly-resonant Coherent Anti-stokes Raman Scattering (CARS)

Differential Imaging of Biological Structures with Doubly-resonant Coherent Anti-stokes Raman Scattering CARS

Coherent Raman imaging techniques have seen a dramatic increase in activity over the past decade due to their promise to enable label-free optical imaging ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Grundlæggende<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Metoder: Synkronisering og Observation

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

Prostaglandin Udvinding og Analyse i<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Caenorhabditis elegans is emerging as a powerful animal model to study the biology of lipids1-9. Prostaglandins are an important class of eicosanoids, ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Quantification of Lipid Abundance and Evaluation of Lipid Distribution in Caenorhabditis elegans by Nile Red and Oil Red O Staining

Quantification of Lipid Abundance and Evaluation of Lipid Distribution in Caenorhabditis elegans by Nile Red and Oil Red O Staining

Kvantificering af Lipid overflod og evaluering af Lipid Distribution i Caenorhabditis elegans af Nilen rød og olie røde O farvning

Caenorhabditis elegans is an exceptional model organism in which to study lipid metabolism and energy homeostasis. Many of its lipid genes are conserved ...

Measurement of Oxygen Consumption Rates in Intact Caenorhabditis elegans

Measurement of Oxygen Consumption Rates in Intact Caenorhabditis elegans

Måling af ilt forbrug satser i intakt Caenorhabditis elegans

Optimal mitochondrial function is critical for healthy cellular activity, particularly in cells that have high energy demands like those in the nervous ...

Oligomerization Dynamics of Cell Surface Receptors in Living Cells by Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy Combined with Number and Brightness Analysis

Oligomerization dynamik af celleoverflade receptorer i levende celler ved total intern refleksion Fluorescens mikroskopi kombineret med tal og lysstyrke analyse

Despite the importance and ubiquity of receptor oligomerization, few methods are applicable for detecting clustering events and measuring the degree of ...

Using Caenorhabditis elegans to Screen for Tissue-Specific Chaperone Interactions

Using Caenorhabditis elegans to Screen for Tissue-Specific Chaperone Interactions

Brug caenorhabditis elegans til skærmen for vævsspecifikke chaperone interaktioner

Correct folding and assembly of proteins and protein complexes are essential for cellular function. Cells employ quality control pathways that correct, ...