Name: label-free imaging of lipid storage dynamics in caenorhabditis elegans using stimulated raman scattering microscopy
Uploaded: 2021-05-28T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Label-Free Imaging of Lipid Storage Dynamics in Caenorhabditis elegans using Stimulated Raman Scattering Microscopy at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet av NIH tilskudd R01AG045183 (M.C.W.), R01AT009050 (M.C.W.), R01AG062257 (M.C.W.), R01AG062257 (M.C.W.), DP1DK113644 (M.C.W.), March of Dimes Foundation (M.C.W.), Welch Foundation (M.C.W.), og av HHMI-etterforsker (M.C.W.). Vi takker Caenorhabditis Genetics Center (CGC) for C. elegans stammer.

1. Instrumental oppsett for stimulert Raman scattering mikroskopi
MERK: SRS-mikroskopisystemet er bygget på en picosecond-laser med pumpeintegrert optisk parametrisk oscillator og et konfokalt laserskanningsmikroskop. Oscillatoren gir to picosecond pulstog, inkludert en Stokes-stråle på 1064 nm og en pumpestråle som kan justeres mellom 700 og 990 nm. Tidsmessig og romlig overlapping av de to bjelkene oppnås inne i laseren. En innebygd elektrooptisk modulator (EOM) er designet spesielt for S...

<ol>
	<li>Luppino, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overweight,+obesity,+and+depression:+a+systematic+review+and+meta-analysis+of+longitudinal+studies.">Overweight, obesity, and depression: a systematic review and meta-analysis of longitudinal studies.</a> Archives of General Psychiatry. 67 (3), 220-229 (2010).</li><li>Eckel, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obesity+and+type+2+diabetes:+what+can+be+unified+and+what+needs+to+be+individualized.">Obesity and type 2 diabetes: what can be unified and what needs to be individualized.</a> Diabetes Care. 34 (6), 1424-1430 (2011).</li><li>Poirier, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obesity+and+cardiovascular+disease:+pathophysiology,+evaluation,+and+effect+of+weight+loss.">Obesity and cardiovascular disease: pathophysiology, evaluation, and effect of weight loss.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 26 (5), 968-976 (2006).</li><li>Bhaskaran, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Body-mass+index+and+risk+of+22+specific+cancers:+a+population-based+cohort+study+of+5.24+million+UK+adults.">Body-mass index and risk of 22 specific cancers: a population-based cohort study of 5.24 million UK adults.</a> Lancet. 384 (9945), 755-765 (2014).</li><li>Shen, Y., Hu, F., Min, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Raman+imaging+of+small+biomolecules.">Raman imaging of small biomolecules.</a> Annual Review of Biophysics. 48, 347-369 (2019).</li><li>Daemen, S., van Zandvoort, M., Parekh, S. H., Hesselink, M. K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microscopy+tools+for+the+investigation+of+intracellular+lipid+storage+and+dynamics.">Microscopy tools for the investigation of intracellular lipid storage and dynamics.</a> Molecular Metabolism. 5 (3), 153-163 (2016).</li><li>Syed, A., Smith, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Raman+imaging+in+cell+membranes,+lipid-rich+organelles,+and+lipid+bilayers.">Raman imaging in cell membranes, lipid-rich organelles, and lipid bilayers.</a> Annual Review of Analytical Chemistry. 10 (1), 271-291 (2017).</li><li>Thomas, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Raman+spectroscopy+of+protein+and+nucleic+acid+assemblies.">Raman spectroscopy of protein and nucleic acid assemblies.</a> Annual Review of Biophysics and Biomolecular Structure. 28, 1-27 (1999).</li><li>Evans, C. L., Xie, X. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coherent+anti-stokes+Raman+scattering+microscopy:+chemical+imaging+for+biology+and+medicine.">Coherent anti-stokes Raman scattering microscopy: chemical imaging for biology and medicine.</a> Annual Review of Analytical Chemistry. 1, 883-909 (2008).</li><li>Freudiger, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+biomedical+imaging+with+high+sensitivity+by+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Label-free biomedical imaging with high sensitivity by stimulated Raman scattering microscopy.</a> Science. 322 (5909), 1857-1861 (2008).</li><li>Hu, F., Shi, L., Min, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+imaging+of+chemical+bonds+by+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Biological imaging of chemical bonds by stimulated Raman scattering microscopy.</a> Nature Methods. 16 (9), 830-842 (2019).</li><li>Wang, M. C., Min, W., Freudiger, C. W., Ruvkun, G., Xie, X. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNAi+screening+for+fat+regulatory+genes+with+SRS+microscopy.">RNAi screening for fat regulatory genes with SRS microscopy.</a> Nature Methods. 8 (2), 135-138 (2011).</li><li>Wei, L., Yu, Y., Shen, Y., Wang, M. C., Min, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vibrational+imaging+of+newly+synthesized+proteins+in+live+cells+by+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Vibrational imaging of newly synthesized proteins in live cells by stimulated Raman scattering microscopy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (28), 11226-11231 (2013).</li><li>Wei, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-cell+imaging+of+alkyne-tagged+small+biomolecules+by+stimulated+Raman+scattering.">Live-cell imaging of alkyne-tagged small biomolecules by stimulated Raman scattering.</a> Nature Methods. 11 (4), 410-412 (2014).</li><li>Ramachandran, P. V., Mutlu, A. S., Wang, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+biomedical+imaging+of+lipids+by+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Label-free biomedical imaging of lipids by stimulated Raman scattering microscopy.</a> Current Protocols in Molecular Biology. 109, 31 (2015).</li><li>Srinivasan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+body+fat+in+Caenorhabditis+elegans.">Regulation of body fat in Caenorhabditis elegans.</a> Annual Review of Physiology. 77, 161-178 (2015).</li><li>Vrablik, T. L., Petyuk, V. A., Larson, E. M., Smith, R. D., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipidomic+and+proteomic+analysis+of+Caenorhabditis+elegans+lipid+droplets+and+identification+of+ACS-4+as+a+lipid+droplet-associated+protein.">Lipidomic and proteomic analysis of Caenorhabditis elegans lipid droplets and identification of ACS-4 as a lipid droplet-associated protein.</a> Biochimca Et Biophysica Acta. 1851 (10), 1337-1345 (2015).</li><li>Yu, Y., Mutlu, A. S., Liu, H., Wang, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+screens+using+photo-highlighting+discover+BMP+signaling+in+mitochondrial+lipid+oxidation.">High-throughput screens using photo-highlighting discover BMP signaling in mitochondrial lipid oxidation.</a> Nature Communications. 8 (1), 865 (2017).</li><li>Kelley, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-cell+confocal+microscopy+and+quantitative+4D+image+analysis+of+anchor-cell+invasion+through+the+basement+membrane+in+Caenorhabditis+elegans.">Live-cell confocal microscopy and quantitative 4D image analysis of anchor-cell invasion through the basement membrane in Caenorhabditis elegans.</a> Nature Protocols. 12 (10), 2081-2096 (2017).</li><li>Murphy, C. T., Hu, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin/insulin-like+growth+factor+signaling+in+C.+elegans.">Insulin/insulin-like growth factor signaling in C. elegans.</a> WormBook. , 1-43 (2013).</li><li>Shi, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+lipid+droplet+size+and+phospholipid+composition+by+stearoyl-CoA+desaturase.">Regulation of lipid droplet size and phospholipid composition by stearoyl-CoA desaturase.</a> Journal of Lipid Research. 54 (9), 2504-2514 (2013).</li><li>Watts, J. L., Ristow, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+and+carbohydrate+metabolism+in+Caenorhabditis+elegans.">Lipid and carbohydrate metabolism in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 207 (2), 413-446 (2017).</li><li>Kimura, K. D., Tissenbaum, H. A., Liu, Y., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=daf-2,+an+insulin+receptor-like+gene+that+regulates+longevity+and+diapause+in+Caenorhabditis+elegans.">daf-2, an insulin receptor-like gene that regulates longevity and diapause in Caenorhabditis elegans.</a> Science. 277 (5328), 942-946 (1997).</li><li>Kwon, E. S., Narasimhan, S. D., Yen, K., Tissenbaum, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+DAF-16+isoform+regulates+longevity.">A new DAF-16 isoform regulates longevity.</a> Nature. 466 (7305), 498-502 (2010).</li><li>Chen, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longevity+genes+revealed+by+integrative+analysis+of+isoform-specific+daf-16/FoxO+mutants+of+Caenorhabditis+elegans.">Longevity genes revealed by integrative analysis of isoform-specific daf-16/FoxO mutants of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 201 (2), 613-629 (2015).</li><li>Lee, R. Y., Hench, J., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+C.+elegans+DAF-16+and+its+human+ortholog+FKHRL1+by+the+daf-2+insulin-like+signaling+pathway.">Regulation of C. elegans DAF-16 and its human ortholog FKHRL1 by the daf-2 insulin-like signaling pathway.</a> Current Biology. 11 (24), 1950-1957 (2001).</li><li>Mutlu, A. S., Gao, S. M., Zhang, H., Wang, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+specificity+regulates+lipid+metabolism+through+neuroendocrine+signaling+in+Caenorhabditis+elegans.">Olfactory specificity regulates lipid metabolism through neuroendocrine signaling in Caenorhabditis elegans.</a> Nature Communications. 11 (1), 1450 (2020).</li><li>Chen, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fingerprint+Stimulated+Raman+Scattering+imaging+reveals+retinoid+coupling+lipid+metabolism+and+survival.">Fingerprint Stimulated Raman Scattering imaging reveals retinoid coupling lipid metabolism and survival.</a> Chemphyschem: a European Journal of Chemical Physics and Physical Chemistry. 19 (19), 2500-2506 (2018).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+imaging+of+lipid+synthesis+and+lipolysis+dynamics+in+Caenorhabditis+elegans+by+Stimulated+Raman+Scattering+microscopy.">Quantitative imaging of lipid synthesis and lipolysis dynamics in Caenorhabditis elegans by Stimulated Raman Scattering microscopy.</a> Analytical Chemistry. 91 (3), 2279-2287 (2019).</li><li>Lin, C. J., Wang, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+metabolites+regulate+host+lipid+metabolism+through+NR5A-Hedgehog+signalling.">Microbial metabolites regulate host lipid metabolism through NR5A-Hedgehog signalling.</a> Nature Cell Biology. 19 (5), 550-557 (2017).</li><li>Fu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+metabolic+fingerprinting+of+neutral+lipids+with+hyperspectral+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">In vivo metabolic fingerprinting of neutral lipids with hyperspectral stimulated Raman scattering microscopy.</a> Journal of the American Chemical Society. 136 (24), 8820-8828 (2014).</li><li>Perez, C. L., Van Gilst, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+13C+isotope+labeling+strategy+reveals+the+influence+of+insulin+signaling+on+lipogenesis+in+C.+elegans.">A 13C isotope labeling strategy reveals the influence of insulin signaling on lipogenesis in C. elegans.</a> Cell Metabolism. 8 (3), 266-274 (2008).</li><li>Elle, I. C., Rodkaer, S. V., Fredens, J., Faergeman, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+measuring+fatty+acid+oxidation+in+C.+elegans.">A method for measuring fatty acid oxidation in C. elegans.</a> Worm. 1 (1), 26-30 (2012).</li><li>Ezcurra, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=elegans+eats+its+own+intestine+to+make+yolk+leading+to+multiple+senescent+pathologies.">elegans eats its own intestine to make yolk leading to multiple senescent pathologies.</a> Current Biology. 28 (16), 2544-2556 (2018).</li><li>Lu, F. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+DNA+imaging+in+vivo+with+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Label-free DNA imaging in vivo with stimulated Raman scattering microscopy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (37), 11624-11629 (2015).</li><li>Long, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-color+vibrational+imaging+of+glucose+metabolism+using+stimulated+Raman+scattering.">Two-color vibrational imaging of glucose metabolism using stimulated Raman scattering.</a> Chemical Communications. 54 (2), 152-155 (2018).</li><li>Zhao, Z., Shen, Y., Hu, F., Min, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+vibrational+tags+in+biological+imaging+by+Raman+microscopy.">Applications of vibrational tags in biological imaging by Raman microscopy.</a> Analyst. 142 (21), 4018-4029 (2017).</li><li>Liao, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+and+in+situ+spectroscopic+imaging+by+a+handheld+Stimulated+Raman+Scattering+Microscope.">In vivo and in situ spectroscopic imaging by a handheld Stimulated Raman Scattering Microscope.</a> ACS Photonics. 5 (3), 947-954 (2018).</li><li>Lee, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+cholesterol+storage+in+live+cells+and+C.+elegans+by+stimulated+Raman+scattering+imaging+of+phenyl-Diyne+cholesterol.">Assessing cholesterol storage in live cells and C. elegans by stimulated Raman scattering imaging of phenyl-Diyne cholesterol.</a> Scientific Reports. 5, 7930 (2015).</li><li>Wang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+lipid+metabolism+in+live+Caenorhabditis+elegans+using+fingerprint+vibrations.">Imaging lipid metabolism in live Caenorhabditis elegans using fingerprint vibrations.</a> Angewandte Chemie (International Edition in English). 53 (44), 11787-11792 (2014).</li><li>Chen, W. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectroscopic+coherent+Raman+imaging+of+Caenorhabditis+elegans+reveals+lipid+particle+diversity.">Spectroscopic coherent Raman imaging of Caenorhabditis elegans reveals lipid particle diversity.</a> Nature Chemical Biology. 16 (10), 1087-1095 (2020).</li><li>Freudiger, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimulated+Raman+Scattering+microscopy+with+a+robust+fibre+laser+source.">Stimulated Raman Scattering microscopy with a robust fibre laser source.</a> Nature Photonics. 8 (2), 153-159 (2014).</li><li>Brinkmann, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Portable+all-fiber+dual-output+widely+tunable+light+source+for+coherent+Raman+imaging.">Portable all-fiber dual-output widely tunable light source for coherent Raman imaging.</a> Biomedical Optics Express. 10 (9), 4437-4449 (2019).</li></ol>

Til forsvar mot fedme og tilhørende metabolske forstyrrelser, har viktig forskningsinnsats blitt implementert for bedre å forstå reguleringsmekanismene til lipid homeostase. For kvantitativ deteksjon av lipidmolekyler i biologiske prøver har etikettfri avbildning av SRS-mikroskopi vist seg å være et pålitelig alternativ til biokjemiske analyser og andre fargingsmetoder. Vår gruppe og andre har avslørt nye biologiske mekanismer i lipid metabolsk regulering ved å kombinere bruk av C. elegans og SRS mikro...

Fedme har blitt et globalt helseproblem som truer en tredjedel av befolkningen rundt om i verden, og det presenterer en alvorlig medisinsk bekymring, gitt sin tilknytning til dårlig psykisk helse1 og dødelige sykdommer, inkludert diabetes2, kardiovaskulære sykdommer3 og noen typer kreft4. Studie av lipidmetabolisme er viktig for å bedre forstå de biologiske problemene bak fedme. Rask og spesifikk kvantifisering av lipidlagring innebærer påvisning av fettsyrer og deres derivater, samt sterolholdige metabolitter, med høy følsomhet og helst med romlig informasjon. Lipider er utfordrende mål å bilde fordi de mangler egen fluorescens og kan ikke lett fluorescerende merket. De fluorescerende kodene er ofte større enn lipidmolekylene, og kan derfor være kjemisk invasive og upraktiske for in vivo-applikasjoner. Etikettfri eller minimal merkingsstrategi er nødvendig for å bevare den hydrofobe strukturen til lipidmolekylene5. Den siste tidens utvikling innen bildeteknologi har skapt spennende muligheter for etikettfri avbildning av lipider i levende celler, vev og organismer.
Tradisjonelle tilnærminger for lipidlagringsanalyser i biologiske prøver inkluderer biokjemiske analyser og fargingsprotokoller med lipofile fargestoffer. Biokjemiske kvantifiseringsanalyser som involverer massespektrometri (MS) er uovertruffen i deres molekylære løsbarhet, men de krever svært store prøvemengder, og prøvepreparering tar vanligvis flere timer, noe som begrenser søknaden om sanntidsavbildning av levende systemer5. En annen stor begrensning ved disse analysene er mangelen på romlig informasjon. På den annen side gir lipofile fargestoffer som Oil Red O og Sudan Black vev og cellulær distribusjon av lipidlagringsorganeller, og sammenlignet med MS-teknikker er disse fargingsmetodene også lave i pris og enkle å utføre. Imidlertid krever disse fargingsprotokollene fiksering, noe som kan påvirke lipiddråpens hydrofobe natur, generere kunstige endringer i strukturen og resultere i inkonsekvenser mellom eksperimenter6. De tekniske vanskelighetene forbundet med biokjemiske og fargingsteknikker har ført til søket etter etikettfrie metoder for å bilde lipidmolekyler og til den raske økningen i bruken av sammenhengende Raman-spredning (CRS) mikroskopi i lipidavbildning.
Raman-effekten ble først anerkjent av Raman og Krishnan, hvor de rapporterte at ved interaksjon med en foton kan et molekyl generere spredt lys uten endring i bølgelengde (kalt Rayleigh-spredning) eller sjelden med en endret bølgelengde (kalt Raman-spredning), og denne endringen i bølgelengde er karakteristisk for de funksjonelle kjemiske gruppene imolekylet 7. Når de kjemiske bindingene i et molekyl blir begeistret for et høyere vibrasjonsenerginivå av en hendelse foton, kalt pumpefoton, blir energien til den spredte fotonen, kalt Stokes photon, lavere. Ellers kan de kjemiske bindingene nå et lavere vibrasjonsenerginivå hvis de opprinnelig er på et høyere nivå, og den spredte fotonen får energi til å være anti-Stokes foton. Frekvensforskjellen mellom hendelsen og spredte fotoner er kjent som Raman-skiftet. Hver kjemisk binding i et molekyl har et karakteristisk og kvantifiserbart Raman-skift. For eksempel har CH2-bindingen et Raman-skifte på 2845 cm-1, som er rikelig i fettsyrekjeder8. Dette spontane Raman-signalet er generelt veldig svakt, noe som i stor grad har begrenset bildehastigheten i konvensjonell spontan Raman-mikroskopi. Gjennom årene har ulike tilnærminger blitt utviklet for å øke bildehastigheten og følsomheten til spontan Raman-mikroskopi. Sammenhengende Raman spredning mikroskopi, inkludert sammenhengende Anti-Stokes Raman Scattering (CARS) mikroskopi og Stimulert Raman Scattering (SRS) mikroskopi, er den nyeste fremgangen. CARS og SRS har litt forskjellige arbeidsprinsipper, men begge er etikettfrie teknikker som har live avbildningsevne, kan gi romlig og tidsmessig informasjon om lipidlagringsdynamikk, og krever bare liten prøvestørrelse. CARS mikroskopi lider av ikke-resonansbakgrunn, som kommer fra ulike ikke-lineære prosesser, og CARS-signaler har også ikke-lineær forhold til molekylkonsentrasjonen, som sammen kompliserer kvantifiseringsprosessen9. I motsetning til CARS mikroskopi genererer SRS-mikroskopi ikke ikke-resonante bakgrunnssignaler og tilbyr lineær avhengighet av konsentrasjonen av interessemolekylet. Dermed er for tiden SRS-mikroskopi mer brukt til lipidavbildning.
Ved SRS-mikroskopi kan de svake spontane Raman-signalene forsterkes når de forsterkes av to synkroniserte laserstråler med frekvensforskjellen som samsvarer med vibrasjonsfrekvensen for kjemisk binding. Molekylet vil oppleve en forbedret overgang til en spent tilstand på grunn av sammenhengende eksitasjon. Som et resultat økes frekvensen av Stokes fotongenerasjon. Følgelig øker intensiteten til den overførte "Stokes" strålen (stimulert Raman gain, SRG) og intensiteten til den overførte "pumpe" strålen minker (stimulert Raman tap, SRL). Påvisning av SRG- eller SRL-signaler ligger til grunn for SRS-mikroskopiavbildning av molekyler med spesifikke kjemiske bindinger10. Hvis frekvensforskjellen mellom de to laserstrålene ikke samsvarer med vibrasjonsfrekvensen til den kjemiske bindingen innenfor et molekyl av interesse, vil verken SRG- eller SRL-signaler bli generert. Bildehastigheten til SRS-mikroskopi er rundt 2 μsec per piksel eller 1 sekund per ramme, noe som er mye raskere enn spontan Raman-mikroskopi11. Typisk lateral oppløsning for SRS mikroskopi er diffraksjon begrenset og rundt 300 nm. I tillegg tillater de to-foton optiske prosessene til SRS-mikroskopi volumetrisk 3D-avbildning av relative tykke vevsprøver, og bildedybden kan nå 300-500 μm. Totalt sett presenterer SRS-mikroskopi en effektiv, etikettfri bildeteknikk for å oppdage spesifikke biomolekyler, spesielt lipider.
Lipiddråper er enkeltmembranorganeller, som er det viktigste cellulære lagringsstedet for nøytrale lipider, inkludert triacylglyseroler (TAG) og kolesterolestere (CE). CH2-bindinger i fettsyrekjedene til disse lipidmolekylene genererer sterke SRS-signaler på 2845 cm-1 når de er begeistret8, og muliggjør dermed deteksjon og kvantifisering av lagringslipidnivåer i intakte celler, vevsseksjoner og til og med hele organismer12,13,14,15. Spesielt er C. elegans nyttige for lipidavbildningsstudier på grunn av deres gjennomsiktighet. Som pattedyr lagrer C. elegans også lipider i lipiddråper, og syntesen og nedbrytningsveiene til lipidmolekyler er høyt bevart16. I denne protokollen vil vi gi arbeidsprinsippet for SRS-mikroskopi, det grunnleggende oppsettet og beskrive metodene for bruk i lipidavbildning i C. elegans.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>A/D converter</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>Analog Unit</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>GeneMate</td>
			<td>3119</td>
			<td>For making agarose pads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alignment tool - adapter</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>SM1A4</td>
			<td>For mounting the tool on scope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alignment tool - target</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>VRC2SM1</td>
			<td>For viewing IR laser</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alignment tool - tube</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>SM1L40</td>
			<td>Length can vary</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autocorrelator (Optional)</td>
			<td>APE</td>
			<td>pulseCheck</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bandpass filter</td>
			<td>minicircuits</td>
			<td>BBP-21.4+ if modulated at 20MHz or KR Electronics 2724 if modulated at 8 MHz</td>
			<td>For signal with modulation frequency filtering</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BNC cables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ800</td>
			<td>For handling and picking worms for imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dodecane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>44010</td>
			<td>Used for calibration of the SRS signal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter</td>
			<td>Chroma Technology</td>
			<td>890/220 CARS</td>
			<td>For removing Stokes beam</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>General purpose laboratory labeling tape</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89097</td>
			<td>For making agarose pads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass coverslips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48393-106</td>
			<td>For covering worms for imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass microscope slide</td>
			<td>VWR</td>
			<td>16004-422</td>
			<td>For making agarose pads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser scanning microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>FV3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lens</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>L1: AC254-050-B 
			L2: AC254-075-B</td>
			<td>For beam expander</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lock-in amplifier</td>
			<td>Zurich</td>
			<td>HF2LI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lowpass filter</td>
			<td>minicircuits</td>
			<td>BLP-1.9+</td>
			<td>For power supply noise suppression</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mirrors</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>BB1-E03</td>
			<td>For relay and periscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>UPlanSAPO 20x 0.75, UPlanSAPO 60XW 1.20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photodiode</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>FDS1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picosecond laser source</td>
			<td>APE</td>
			<td>picoEmerald</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power supply</td>
			<td>TEKPOWER</td>
			<td>TP1342U</td>
			<td>For photodiode, reversed 50V voltage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium azide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S2002</td>
			<td>For anaesthesizing the worms</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Worm picker</td>
			<td>WormStuff</td>
			<td>59-AWP</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

label-free imaging of lipid storage dynamics in caenorhabditis elegans using stimulated raman scattering microscopy

Lipidmetabolisme er en grunnleggende fysiologisk prosess som er nødvendig for cellulær og organismehelse. Dysregulering av lipidmetabolisme fremkaller ofte fedme og mange tilknyttede sykdommer, inkludert kardiovaskulære lidelser, type II diabetes og kreft. For å fremme den nåværende forståelsen av lipid metabolsk regulering, kvantitative metoder for å nøyaktig måle in vivo lipid lagringsnivåer i tid og rom har blitt stadig viktigere og nyttig. Tradisjonelle tilnærminger for å analysere lipidlagring er semi-kvantitative for mikroskopisk vurdering eller mangler romlig-temporal informasjon for biokjemisk måling. Stimulert Raman-spredning (SRS) mikroskopi er en etikettfri kjemisk bildeteknologi som muliggjør rask og kvantitativ deteksjon av lipider i levende celler med subcellulær oppløsning. Ettersom kontrasten utnyttes av indre molekylære vibrasjoner, tillater SRS-mikroskopi også firedimensjonal sporing av lipider hos levende dyr. I løpet av det siste tiåret har SRS-mikroskopi blitt mye brukt til små molekylavbildninger i biomedisinsk forskning og overvinne de store begrensningene ved konvensjonelle fluorescerende fargings- og lipidutvinningsmetoder. I laboratoriet har vi kombinert SRS-mikroskopi med de genetiske og biokjemiske verktøyene som er tilgjengelige for den kraftige modellorganismen, Caenorhabditis elegans, for å undersøke fordelingen og heterogeniteten til lipiddråper på tvers av forskjellige celler og vev og til slutt oppdage nye bevarte signalveier som modulerer lipidmetabolismen. Her presenterer vi arbeidsprinsippene og det detaljerte oppsettet av SRS-mikroskopet og gir metoder for bruk i kvantifisering av lipidlagring ved distinkte utviklingstidspunkter av villtype og insulinsignalering mangelfull mutant C. elegans.

Insulinsignalering er en viktig endokrine vei som påvirker utvikling, reproduksjon, levetid og metabolisme. I ormer består insulinsignalering av ca. 40 insulinlignende peptidligaler, insulinlignende vekstfaktorreseptor ortolog DAF-2, nedstrøms PI3K/AKT kinase kaskade og FoxO transkripsjonsfaktor ortholog, DAF-1620. daf-2 mutanter, som mangler insulinreseptoren, har flere lipiddråper i tarmen, ormen lipid lagringsvev21,22. Ved ...

Watch this Scientific Journal Video about Label-Free Imaging of Lipid Storage Dynamics in Caenorhabditis elegans using Stimulated Raman Scattering Microscopy at JoVE.com

Label-Free Imaging of Lipid Storage Dynamics in Caenorhabditis elegans using Stimulated Raman Scattering Microscopy

Stimulert Raman-spredning (SRS) mikroskopi tillater selektiv, etikettfri avbildning av spesifikke kjemiske moieties, og det har effektivt blitt brukt til å bilde lipidmolekyler in vivo. Her gir vi en kort introduksjon til prinsippet om SRS-mikroskopi og beskriver metoder for bruk i avbildning av lipidlagring i Caenorhabditis elegans.

Etikettfri bildebehandling av Lipidlagringsdynamikk i Caenorhabditis elegans ved hjelp av stimulert Raman Scattering Microscopy

Lipid metabolism is a fundamental physiological process necessary for cellular and organism health. Dysregulation of lipid metabolism often elicits ...

Stimulert Raman spredningsmikroskopi er en kjemisk bildeteknologi som muliggjør rask og kvantitativ deteksjon av lipider og tillater sporing av lipider hos levende dyr på en etikettfri måte. Den viktigste fordelen med SRS-mikroskopi over tradisjonelle lipiddeteksjonsteknikker er at den er etikettfri og derfor ikke er like bærekraftig for fotobleking som andre fluorescens- og fargingssaker. Bruken av SRS-mikroskopi i forbindelse med de genetiske og biokjemiske verktøyene som er tilgjengelige for modellorganismer, spesielt Caenorhabditis elegans gir et kraftig rammeverk for å studere normale regulatorer av lipidbiologi og metabolisme.For å mate laserstråler inn i SRS-mikroskopet, må du først stille inn periskopet for å løfte strålen fra en picosecond lyskildeutgang til den infrarøde laserinngangsporten på skanneren til mikroskopet og åpne laserkontrollprogramvaren for å starte laserne. Senk pumpelaserkraften til 50 milliwatt og sett pumpesignalet til 750 nanometer. Bruk en stråleutvidelse til å justere strålediameteren slik at den passer til ryggåpningen til mikroskopmålene.Bruk to reléspeil, M1 og M2, for å lede laserstrålen til periskopet og angi nikkene til periskopet i midten av innstillingsområdet. Velg den opprinnelige posisjonen og vinkelen til hvert speil slik at laserstrålen omtrent treffer midten av speilet for å starte strålen i mikroskopet og bruke en tom port på mikroskopets objektive tårn for å utføre kursjusteringen. Plasser kraftmålersonden ved målporten for å måle kraften i det overførte lyset og stille inn skanneren på mikroskopet ved høyeste zoom, 50X.Mål kraften til det overførte lyset med det fokuserte laserstrålepunktet og optimaliser knottene på speil M1 og M2 iterativt for å oppnå den høyeste overførte laserkraften. Bruk justeringsverktøyet til å utføre den finjusteringen av det overførte lyset for å sikre at lyset passerer gjennom midten av målet og plasser fluorescensmålets justeringshette på det tomme objektivsetet. Juster knottene på det første styrespeilet, M1, for å midtstille laserstrålepunktet og introdusere forlengelsesrøret med justeringshetten i den andre enden til et tomt objektivt sete for overvåking av laserstrålepunktet.Deretter justerer du knottene på det andre styrespeilet, M2, for å midtstille laserstrålepunktet igjen i den andre enden av forlengelsesrøret. For å sette opp SRS-deteksjonsmodulen, plasser en strålesplitterkube etter kondensatoren for å lede den overførte laseren til fotodiodemodulen. For å sette opp elektronikktilkoblingen, bruk en innebygd elektrooptisk modulator på 20 megahertz inne i picosecond tune-able laser for å modulere intensiteten til Stokes-strålen og mate utgangssignalet til fotodioden inn i låseforsterkeren for demodulering av det stimulerte Raman-tapet.Før deretter innlåsingsforsterkerutgangen inn i mikroskopets analoge boks for å konvertere det elektriske analogsignalet til et digitalt signal. For å optimalisere bildeforholdene, legg til fem mikroliter oljesyre i et minimikroskopsk lysbildekammer og dekk prøven med en dekselslipp. Plasser prøven på mikroskopstadiet og bruk kanten av puten til å finne og fokusere på dråpen.Juster kondensatoren for Kohler-belysning og bruk et infrarødt sensorkort og infrarød seer for å sjekke om pumpestrålebanen fortsatt er riktig. Bekreft at forsinkelsesstadiet er satt til null femtosekonds og sett pumpestrålebølgelengden til 795,8 nanometer. Sett pumpstrålens kraft til 50 milliwatt og sett Stoke-strålen til 100 milliwatt.Åpne lukkeren for både bjelkene og hovedlukkeren på laseren. Skann eksemplet og kontroller bildet på dataskjermen. Endre visningsmodusen til høy lav, og juster området for å se en metning på ca. 50 %.Kontroller om metningen er sentrert i bildet, og juster styrespeilene forsiktig inne i picosecond-lasersystemet for optimalisert overlapping av pumpen og Stokes for å maksimere bildeintensiteten og for å midtstille toppintensiteten etter behov. Før hver bildeøkt legger du til 100 mikroliter varme 2 % agarose i et rent glasssklie plassert mellom støttelysbilder med to lag laboratoriebånd, og plasserer raskt et nytt lysbilde oppå det første lysbildet. Trykk forsiktig for å skape en tynn, jevn, agarosepute og la agarose avkjøles.For å montere ormene for avbildning, plasser en fire til fem mikroliterdråpe bedøvelsesmiddel per 10 til 20 ormer på en dekselslipp og bruk et disseksjonsmikroskop for å velge ormene som skal avbildes, og plasser ormene på anestesidråpen når de samles inn. Når alle ormene er samlet, dekk ormene med glasssklie med agaroseputen. For avbildning monterer du ormeprøven med dekselslippet vendt mot objektivet og leder den lyse feltlyskilden til okularet for å finne ormene.Sett ormene i fokus og juster kondensatorposisjonen tilsvarende. Juster lasereffektene ved å sette pumpelaserkraften til 200 milliwatt og IR-kraften til 400 milliwatt. Still inn låseforsterkeren for demodulering av ormens SRS-signal.Begynn å skanne den første ormen med en rask skannehastighet, og juster det fine fokuset for å finne interesseområdet. Når signalet er optimalisert, bytter du til en lavere skannehastighet og en høyere pikseloppløsning for å hente SRS-bildet og lagre bildet i et format som muliggjør høy oppløsning. Når alle prøvene er avbildet, setter du laserkilden i ventemodus og slår av alt tilhørende utstyr.Hvis du vil analysere bildene, åpner du filene i ImageJ og velger analyser og angir mål for å velge egenskapene som skal analyseres. Bruk markeringsverktøyet for mangekant til å skissere området i ormetarmen som skal kvantifiseres, og klikk analyser og mål på nytt. Målingene vises i resultatvinduet.Når alle ormene er omrisset, kopierer og limer du inn målene for hver av ormene i en gitt genotype i et regneark. For bakgrunnsmålingsverdien velger du et område i nærheten av ormen som ikke har noe SRS-signal, og trekker bakgrunnsgjennomsnittets grå verdi fra målingen for hver enkelt orm for å beregne gjennomsnittet og standardavviket for bakgrunnsavhendingsgjennomsnittet grå verdier fra alle ormene i en gitt genotype eller testgruppe. Disse verdiene kan deretter normaliseres til gjennomsnittet av kontrollgruppen.I denne representative analysen ble tarmlipidnivåene i alderssynkroniserte villtype ormer og daf-2 mutanter som mangler insulinreseptoren kvantifisert under voksen alder. Som forventet observeres en nedgang i lipidnivåer i villtype ormer, som starter på dag én og fortsetter til dag ni av voksen alder. Lipidnivåene i daf-2 mutanter øker imidlertid til de er fem dager gamle, og da forblir de konstante på ca 2,5 til tre ganger høyere enn den ville typen.Daf-16 inaktivering undertrykker økningen i lipidnivåer av daf-2 mutanter. Uttrykk for daf-16a a eller daf-16b isoform i daf-2, daf-16 doble mutanter gjenoppretter ikke lipidnivåene. Uttrykket av daf-16d / f / t isoform er imidlertid tilstrekkelig til å gjenopprette lipidnivåene i daf-2, daf-16 doble mutanter til nivåene observert i daf-2 enkeltmutanter.Disse resultatene indikerer at daf-16d / f / t isoform spesielt modulerer lipidmetabolisme i daf-2 mutant ormer. Det er viktig å bruke samme lasereffekt for pumpe- og Stokes-bjelker gjennom bildebehandlingsøkten og inkludere en kontrollgruppe i hver sjette og fjerde konsistent kvantifisering. I tillegg til kvantifisering av lipidlagring, kan SRS-mikroskopi kombineres med bioortogonale koder, for eksempel deuterium, og implementeres for å visualisere dynamikken i lipidinkorporering, syntese og nedbrytning.SRS-mikroskopi tillater multipleksing og kan implementeres for å avbilde flere biomolekyler i forskjellige subcellulære rom. Såkalt hyperspektral SRS mikroskopi har en stor fremtid i å utforske metabolsk dynamikk.

Research

JoVE Journal

Biology

Label-Free Imaging of Lipid Storage Dynamics in Caenorhabditis elegans using Stimulated Raman Scattering Microscopy

Label-free in situ Imaging of Lignification in Plant Cell Walls

Label-free in situ Imaging of Lignification in Plant Cell Walls

Meeting growing energy demands safely and efficiently is a pressing global challenge. Therefore, research into biofuels production that seeks to find ...

Differential Imaging of Biological Structures with Doubly-resonant Coherent Anti-stokes Raman Scattering (CARS)

Differential Imaging of Biological Structures with Doubly-resonant Coherent Anti-stokes Raman Scattering CARS

Coherent Raman imaging techniques have seen a dramatic increase in activity over the past decade due to their promise to enable label-free optical imaging ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Grunnleggende<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Metoder: Synkronisering og observasjon

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

Prostaglandin Utvinning og analyse i<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Caenorhabditis elegans is emerging as a powerful animal model to study the biology of lipids1-9. Prostaglandins are an important class of eicosanoids, ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Quantification of Lipid Abundance and Evaluation of Lipid Distribution in Caenorhabditis elegans by Nile Red and Oil Red O Staining

Quantification of Lipid Abundance and Evaluation of Lipid Distribution in Caenorhabditis elegans by Nile Red and Oil Red O Staining

Kvantifisering av Lipid overflod og evaluering av Lipid distribusjon i Caenorhabditis elegans av Nilen rød og olje Red O flekker

Caenorhabditis elegans is an exceptional model organism in which to study lipid metabolism and energy homeostasis. Many of its lipid genes are conserved ...

Measurement of Oxygen Consumption Rates in Intact Caenorhabditis elegans

Measurement of Oxygen Consumption Rates in Intact Caenorhabditis elegans

Måling av oksygen inntak priser på intakt Caenorhabditis elegans

Optimal mitochondrial function is critical for healthy cellular activity, particularly in cells that have high energy demands like those in the nervous ...

Oligomerization Dynamics of Cell Surface Receptors in Living Cells by Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy Combined with Number and Brightness Analysis

Oligomerisering Dynamics av Cell Surface reseptorer i levende celler av total intern refleksjon fluorescens mikroskopi kombinert med tall og lysstyrke analyse

Despite the importance and ubiquity of receptor oligomerization, few methods are applicable for detecting clustering events and measuring the degree of ...

Using Caenorhabditis elegans to Screen for Tissue-Specific Chaperone Interactions

Using Caenorhabditis elegans to Screen for Tissue-Specific Chaperone Interactions

Bruke Caenorhabditis elegans til å screene for vevsspesifikke chaperone interaksjoner

Correct folding and assembly of proteins and protein complexes are essential for cellular function. Cells employ quality control pathways that correct, ...