Name: label-free imaging of lipid storage dynamics in caenorhabditis elegans using stimulated raman scattering microscopy
Uploaded: 2021-05-28T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Label-Free Imaging of Lipid Storage Dynamics in Caenorhabditis elegans using Stimulated Raman Scattering Microscopy at JoVE.com

Este trabalho foi apoiado pelas bolsas NIH R01AG045183 (M.C.W.), R01AT009050 (M.C.W.), R01AG062257 (M.C.W..), DP1DK113644 (M.C.W.), Fundação March of Dimes (M.C.W.), Fundação Welch (M.C.W.), e por investigador do HHMI (M.C.W.). Agradecemos ao Centro de Genética de Caenorhabditis (CGC) pelas cepas de C. elegans.

1. Configuração instrumental para Microscopia de Dispersão Raman Estimulada
NOTA: O sistema de microscopia SRS é construído sobre um laser picosegundo com oscilador óptico integrado de bomba e um microscópio de varredura a laser confocal. O oscilador fornece dois trens de pulso picosegundo, incluindo um feixe de Stokes a 1.064 nm e um feixe de bomba incapaz entre 700-990 nm. A sobreposição temporal e espacial dos dois feixes são alcançadas dentro do laser. Um modulador eletro-óptico ...

<ol>
	<li>Luppino, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overweight,+obesity,+and+depression:+a+systematic+review+and+meta-analysis+of+longitudinal+studies.">Overweight, obesity, and depression: a systematic review and meta-analysis of longitudinal studies.</a> Archives of General Psychiatry. 67 (3), 220-229 (2010).</li><li>Eckel, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obesity+and+type+2+diabetes:+what+can+be+unified+and+what+needs+to+be+individualized.">Obesity and type 2 diabetes: what can be unified and what needs to be individualized.</a> Diabetes Care. 34 (6), 1424-1430 (2011).</li><li>Poirier, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obesity+and+cardiovascular+disease:+pathophysiology,+evaluation,+and+effect+of+weight+loss.">Obesity and cardiovascular disease: pathophysiology, evaluation, and effect of weight loss.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 26 (5), 968-976 (2006).</li><li>Bhaskaran, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Body-mass+index+and+risk+of+22+specific+cancers:+a+population-based+cohort+study+of+5.24+million+UK+adults.">Body-mass index and risk of 22 specific cancers: a population-based cohort study of 5.24 million UK adults.</a> Lancet. 384 (9945), 755-765 (2014).</li><li>Shen, Y., Hu, F., Min, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Raman+imaging+of+small+biomolecules.">Raman imaging of small biomolecules.</a> Annual Review of Biophysics. 48, 347-369 (2019).</li><li>Daemen, S., van Zandvoort, M., Parekh, S. H., Hesselink, M. K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microscopy+tools+for+the+investigation+of+intracellular+lipid+storage+and+dynamics.">Microscopy tools for the investigation of intracellular lipid storage and dynamics.</a> Molecular Metabolism. 5 (3), 153-163 (2016).</li><li>Syed, A., Smith, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Raman+imaging+in+cell+membranes,+lipid-rich+organelles,+and+lipid+bilayers.">Raman imaging in cell membranes, lipid-rich organelles, and lipid bilayers.</a> Annual Review of Analytical Chemistry. 10 (1), 271-291 (2017).</li><li>Thomas, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Raman+spectroscopy+of+protein+and+nucleic+acid+assemblies.">Raman spectroscopy of protein and nucleic acid assemblies.</a> Annual Review of Biophysics and Biomolecular Structure. 28, 1-27 (1999).</li><li>Evans, C. L., Xie, X. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coherent+anti-stokes+Raman+scattering+microscopy:+chemical+imaging+for+biology+and+medicine.">Coherent anti-stokes Raman scattering microscopy: chemical imaging for biology and medicine.</a> Annual Review of Analytical Chemistry. 1, 883-909 (2008).</li><li>Freudiger, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+biomedical+imaging+with+high+sensitivity+by+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Label-free biomedical imaging with high sensitivity by stimulated Raman scattering microscopy.</a> Science. 322 (5909), 1857-1861 (2008).</li><li>Hu, F., Shi, L., Min, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+imaging+of+chemical+bonds+by+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Biological imaging of chemical bonds by stimulated Raman scattering microscopy.</a> Nature Methods. 16 (9), 830-842 (2019).</li><li>Wang, M. C., Min, W., Freudiger, C. W., Ruvkun, G., Xie, X. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNAi+screening+for+fat+regulatory+genes+with+SRS+microscopy.">RNAi screening for fat regulatory genes with SRS microscopy.</a> Nature Methods. 8 (2), 135-138 (2011).</li><li>Wei, L., Yu, Y., Shen, Y., Wang, M. C., Min, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vibrational+imaging+of+newly+synthesized+proteins+in+live+cells+by+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Vibrational imaging of newly synthesized proteins in live cells by stimulated Raman scattering microscopy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (28), 11226-11231 (2013).</li><li>Wei, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-cell+imaging+of+alkyne-tagged+small+biomolecules+by+stimulated+Raman+scattering.">Live-cell imaging of alkyne-tagged small biomolecules by stimulated Raman scattering.</a> Nature Methods. 11 (4), 410-412 (2014).</li><li>Ramachandran, P. V., Mutlu, A. S., Wang, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+biomedical+imaging+of+lipids+by+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Label-free biomedical imaging of lipids by stimulated Raman scattering microscopy.</a> Current Protocols in Molecular Biology. 109, 31 (2015).</li><li>Srinivasan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+body+fat+in+Caenorhabditis+elegans.">Regulation of body fat in Caenorhabditis elegans.</a> Annual Review of Physiology. 77, 161-178 (2015).</li><li>Vrablik, T. L., Petyuk, V. A., Larson, E. M., Smith, R. D., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipidomic+and+proteomic+analysis+of+Caenorhabditis+elegans+lipid+droplets+and+identification+of+ACS-4+as+a+lipid+droplet-associated+protein.">Lipidomic and proteomic analysis of Caenorhabditis elegans lipid droplets and identification of ACS-4 as a lipid droplet-associated protein.</a> Biochimca Et Biophysica Acta. 1851 (10), 1337-1345 (2015).</li><li>Yu, Y., Mutlu, A. S., Liu, H., Wang, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+screens+using+photo-highlighting+discover+BMP+signaling+in+mitochondrial+lipid+oxidation.">High-throughput screens using photo-highlighting discover BMP signaling in mitochondrial lipid oxidation.</a> Nature Communications. 8 (1), 865 (2017).</li><li>Kelley, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-cell+confocal+microscopy+and+quantitative+4D+image+analysis+of+anchor-cell+invasion+through+the+basement+membrane+in+Caenorhabditis+elegans.">Live-cell confocal microscopy and quantitative 4D image analysis of anchor-cell invasion through the basement membrane in Caenorhabditis elegans.</a> Nature Protocols. 12 (10), 2081-2096 (2017).</li><li>Murphy, C. T., Hu, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin/insulin-like+growth+factor+signaling+in+C.+elegans.">Insulin/insulin-like growth factor signaling in C. elegans.</a> WormBook. , 1-43 (2013).</li><li>Shi, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+lipid+droplet+size+and+phospholipid+composition+by+stearoyl-CoA+desaturase.">Regulation of lipid droplet size and phospholipid composition by stearoyl-CoA desaturase.</a> Journal of Lipid Research. 54 (9), 2504-2514 (2013).</li><li>Watts, J. L., Ristow, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+and+carbohydrate+metabolism+in+Caenorhabditis+elegans.">Lipid and carbohydrate metabolism in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 207 (2), 413-446 (2017).</li><li>Kimura, K. D., Tissenbaum, H. A., Liu, Y., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=daf-2,+an+insulin+receptor-like+gene+that+regulates+longevity+and+diapause+in+Caenorhabditis+elegans.">daf-2, an insulin receptor-like gene that regulates longevity and diapause in Caenorhabditis elegans.</a> Science. 277 (5328), 942-946 (1997).</li><li>Kwon, E. S., Narasimhan, S. D., Yen, K., Tissenbaum, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+DAF-16+isoform+regulates+longevity.">A new DAF-16 isoform regulates longevity.</a> Nature. 466 (7305), 498-502 (2010).</li><li>Chen, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longevity+genes+revealed+by+integrative+analysis+of+isoform-specific+daf-16/FoxO+mutants+of+Caenorhabditis+elegans.">Longevity genes revealed by integrative analysis of isoform-specific daf-16/FoxO mutants of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 201 (2), 613-629 (2015).</li><li>Lee, R. Y., Hench, J., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+C.+elegans+DAF-16+and+its+human+ortholog+FKHRL1+by+the+daf-2+insulin-like+signaling+pathway.">Regulation of C. elegans DAF-16 and its human ortholog FKHRL1 by the daf-2 insulin-like signaling pathway.</a> Current Biology. 11 (24), 1950-1957 (2001).</li><li>Mutlu, A. S., Gao, S. M., Zhang, H., Wang, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+specificity+regulates+lipid+metabolism+through+neuroendocrine+signaling+in+Caenorhabditis+elegans.">Olfactory specificity regulates lipid metabolism through neuroendocrine signaling in Caenorhabditis elegans.</a> Nature Communications. 11 (1), 1450 (2020).</li><li>Chen, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fingerprint+Stimulated+Raman+Scattering+imaging+reveals+retinoid+coupling+lipid+metabolism+and+survival.">Fingerprint Stimulated Raman Scattering imaging reveals retinoid coupling lipid metabolism and survival.</a> Chemphyschem: a European Journal of Chemical Physics and Physical Chemistry. 19 (19), 2500-2506 (2018).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+imaging+of+lipid+synthesis+and+lipolysis+dynamics+in+Caenorhabditis+elegans+by+Stimulated+Raman+Scattering+microscopy.">Quantitative imaging of lipid synthesis and lipolysis dynamics in Caenorhabditis elegans by Stimulated Raman Scattering microscopy.</a> Analytical Chemistry. 91 (3), 2279-2287 (2019).</li><li>Lin, C. J., Wang, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+metabolites+regulate+host+lipid+metabolism+through+NR5A-Hedgehog+signalling.">Microbial metabolites regulate host lipid metabolism through NR5A-Hedgehog signalling.</a> Nature Cell Biology. 19 (5), 550-557 (2017).</li><li>Fu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+metabolic+fingerprinting+of+neutral+lipids+with+hyperspectral+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">In vivo metabolic fingerprinting of neutral lipids with hyperspectral stimulated Raman scattering microscopy.</a> Journal of the American Chemical Society. 136 (24), 8820-8828 (2014).</li><li>Perez, C. L., Van Gilst, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+13C+isotope+labeling+strategy+reveals+the+influence+of+insulin+signaling+on+lipogenesis+in+C.+elegans.">A 13C isotope labeling strategy reveals the influence of insulin signaling on lipogenesis in C. elegans.</a> Cell Metabolism. 8 (3), 266-274 (2008).</li><li>Elle, I. C., Rodkaer, S. V., Fredens, J., Faergeman, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+measuring+fatty+acid+oxidation+in+C.+elegans.">A method for measuring fatty acid oxidation in C. elegans.</a> Worm. 1 (1), 26-30 (2012).</li><li>Ezcurra, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=elegans+eats+its+own+intestine+to+make+yolk+leading+to+multiple+senescent+pathologies.">elegans eats its own intestine to make yolk leading to multiple senescent pathologies.</a> Current Biology. 28 (16), 2544-2556 (2018).</li><li>Lu, F. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+DNA+imaging+in+vivo+with+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Label-free DNA imaging in vivo with stimulated Raman scattering microscopy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (37), 11624-11629 (2015).</li><li>Long, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-color+vibrational+imaging+of+glucose+metabolism+using+stimulated+Raman+scattering.">Two-color vibrational imaging of glucose metabolism using stimulated Raman scattering.</a> Chemical Communications. 54 (2), 152-155 (2018).</li><li>Zhao, Z., Shen, Y., Hu, F., Min, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+vibrational+tags+in+biological+imaging+by+Raman+microscopy.">Applications of vibrational tags in biological imaging by Raman microscopy.</a> Analyst. 142 (21), 4018-4029 (2017).</li><li>Liao, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+and+in+situ+spectroscopic+imaging+by+a+handheld+Stimulated+Raman+Scattering+Microscope.">In vivo and in situ spectroscopic imaging by a handheld Stimulated Raman Scattering Microscope.</a> ACS Photonics. 5 (3), 947-954 (2018).</li><li>Lee, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+cholesterol+storage+in+live+cells+and+C.+elegans+by+stimulated+Raman+scattering+imaging+of+phenyl-Diyne+cholesterol.">Assessing cholesterol storage in live cells and C. elegans by stimulated Raman scattering imaging of phenyl-Diyne cholesterol.</a> Scientific Reports. 5, 7930 (2015).</li><li>Wang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+lipid+metabolism+in+live+Caenorhabditis+elegans+using+fingerprint+vibrations.">Imaging lipid metabolism in live Caenorhabditis elegans using fingerprint vibrations.</a> Angewandte Chemie (International Edition in English). 53 (44), 11787-11792 (2014).</li><li>Chen, W. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectroscopic+coherent+Raman+imaging+of+Caenorhabditis+elegans+reveals+lipid+particle+diversity.">Spectroscopic coherent Raman imaging of Caenorhabditis elegans reveals lipid particle diversity.</a> Nature Chemical Biology. 16 (10), 1087-1095 (2020).</li><li>Freudiger, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimulated+Raman+Scattering+microscopy+with+a+robust+fibre+laser+source.">Stimulated Raman Scattering microscopy with a robust fibre laser source.</a> Nature Photonics. 8 (2), 153-159 (2014).</li><li>Brinkmann, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Portable+all-fiber+dual-output+widely+tunable+light+source+for+coherent+Raman+imaging.">Portable all-fiber dual-output widely tunable light source for coherent Raman imaging.</a> Biomedical Optics Express. 10 (9), 4437-4449 (2019).</li></ol>

Em defesa contra a obesidade e seus distúrbios metabólicos associados, importantes esforços de pesquisa têm sido implementados para entender melhor os mecanismos regulatórios da homeostase lipídica. Para a detecção quantitativa de moléculas lipídicas em amostras biológicas, a imagem livre de rótulos por microscopia srs tem sido comprovadamente uma alternativa confiável para ensaios bioquímicos e outros métodos de coloração. Nosso grupo e outros revelaram novos mecanismos biológicos na regulação metab?...

A obesidade tornou-se um problema de saúde global que ameaça um terço da população em todo o mundo, e apresenta uma séria preocupação médica, dada a sua associação com a saúde mental ruim1 e doenças mortais, incluindo diabetes2, doenças cardiovasculares3 e alguns tipos de câncer4. O estudo do metabolismo lipídico é essencial para entender melhor os problemas biológicos por trás da obesidade. A quantificação rápida e específica do armazenamento lipídico implica a detecção de ácidos graxos e seus derivados, bem como metabólitos contendo esterol, com alta sensibilidade e preferencialmente com informações espaciais. Lipídios são alvos desafiadores para a imagem porque não têm fluorescência intrínseca e não podem ser facilmente marcados fluorescentemente. As etiquetas fluorescentes são muitas vezes maiores que as moléculas lipídicas e, portanto, podem ser quimicamente invasivas e impraticáveis para aplicações in vivo. A estratégia de rotulagem sem rótulos ou mínimas é necessária para preservar a estrutura hidrofóbica das moléculas lipídicas5. Desenvolvimentos recentes em tecnologias de imagem criaram oportunidades emocionantes para imagens sem rótulos de lipídios em células vivas, tecidos e organismos.
Abordagens tradicionais para análises de armazenamento lipídico em amostras biológicas incluem ensaios bioquímicos e protocolos de coloração com corantes lipofílicos. Ensaios de quantificação bioquímica envolvendo espectrometria de massa (MS) são incomparáveis em sua resolução molecular, mas requerem quantidades de amostra muito grandes e a preparação da amostra geralmente leva várias horas, limitando sua aplicação para imagens em tempo real de sistemas vivos5. Outra grande limitação desses ensaios é a falta de informação espacial. Por outro lado, corantes lipofílicos como Oil Red O e Sudan Black fornecem tecido e distribuição celular de organelas de armazenamento lipídico e comparados às técnicas de ESM, esses métodos de coloração também são de baixo custo e fáceis de executar. No entanto, esses protocolos de coloração requerem fixação, que pode impactar a natureza hidrofóbica das gotículas lipídicas, gerar mudanças artificiais em sua estrutura e resultar em inconsistências entre os experimentos6. As dificuldades técnicas associadas às técnicas bioquímicas e de coloração levaram à busca de métodos livres de rótulos para imagens de moléculas lipídicas e ao rápido aumento do uso de microscopia coerente de dispersão de Raman (CRS) em imagens lipídicas.
O efeito Raman foi reconhecido pela primeira vez por Raman e Krishnan, onde eles relataram que ao interagir com um fóton, uma molécula pode gerar luz dispersa sem alteração no comprimento de onda (chamado dispersão de Rayleigh) ou raramente com um comprimento de onda alterado (chamado de dispersão de Raman) e essa mudança no comprimento de onda é característica dos grupos químicos funcionais dentro da molécula7. Quando as ligações químicas dentro de uma molécula ficam excitadas a um nível de energia vibracional mais alto por um fóton incidente, chamado fóton bomba, a energia do fóton disperso, chamado de fóton Stokes, fica mais baixa. Caso contrário, as ligações químicas podem atingir um nível de energia vibracional mais baixo se estiverem originalmente em um nível mais alto, e o fóton disperso ganhar energia para ser o fóton anti-Stokes. A diferença de frequência entre o incidente e os fótons dispersos é conhecida como a mudança de Raman. Cada ligação química dentro de uma molécula tem uma mudança raman característica e quantificável. Por exemplo, o vínculo CH2 tem uma mudança raman de 2.845 cm-1, que é abundante nas cadeias de ácidos graxos8. Este sinal espontâneo de Raman é geralmente muito fraco, o que limitou muito a velocidade de imagem na microscopia espontâneo convencional de Raman. Ao longo dos anos, várias abordagens foram desenvolvidas para aumentar a velocidade de imagem e a sensibilidade da microscopia espontânea de Raman. A microscopia de dispersão de Raman coerente, incluindo microscopia coerente de dispersão de Raman (CARS) e microscopia estimulada de dispersão de Raman (SRS), é o progresso mais recente. Carros e SRS têm princípios de trabalho ligeiramente diferentes, mas ambos são técnicas livres de rótulos que têm capacidade de imagem ao vivo, podem produzir informações espaciais e temporais sobre a dinâmica de armazenamento lipídial, e requerem apenas um pequeno tamanho amostral. A microscopia cars sofre de fundo não ressonante, que vem de vários processos não lineares, e os sinais CARS também têm relação não linear com a concentração da molécula, que juntas complicam o processo de quantificação9. Ao contrário da microscopia CARS, a microscopia SRS não gera sinais de fundo não ressonantes e oferece dependência linear da concentração da molécula de interesse. Assim, atualmente a microscopia SRS é mais amplamente utilizada para imagens lipídicas.
Na microscopia SRS, os sinais fracos espontâneos de Raman podem ser amplificados quando excitados por dois raios laser sincronizados com sua diferença de frequência que corresponde à frequência vibracional da ligação química. A molécula experimentará uma transição aprimorada para um estado animado devido à excitação coerente. Como resultado, a taxa de geração de fótons Stokes é aumentada. Consequentemente, a intensidade do feixe "Stokes" transmitido aumenta (estimulado o ganho de Raman, SRG) e a intensidade do feixe de "bomba" transmitido diminui (estimulado perda de Raman, SRL). A detecção de sinais SRG ou SRL está fundamentada para a imagem de microscopia de Dispersão de Raman (SRS) estimulada de moléculas com ligações químicas específicas10. Se a diferença de frequência entre os dois raios laser não corresponder à frequência vibracional da ligação química dentro de uma molécula de interesse, nem sinais SRG nem SRL serão gerados. A velocidade de imagem da microscopia SRS é de cerca de 2 μseg por pixel ou 1 segundo por quadro, o que é muito mais rápido do que a microscopia ramanespontânea 11. A resolução lateral típica para microscopia SRS é limitada e em torno de 300 nm. Além disso, os processos ópticos de dois fótons da microscopia SRS permitem imagens volumostricas 3D de amostras de tecido de espessura relativa e a profundidade de imagem pode chegar a 300-500 μm. No geral, a microscopia SRS apresenta uma técnica de imagem eficiente e livre de rótulos para detectar biomoléculas específicas, especialmente lipídios.
Gotículas lipídicas são organelas de membrana única, que são o principal local de armazenamento celular para lipídios neutros, incluindo os triacylglycerols (TAGs) e ésteres de colesterol (CEs). As ligações CH2 nas cadeias de ácidos graxos dessas moléculas lipídicas geram fortes sinais de SRS a 2.845 cm-1 quando excitadas8, permitindo assim a detecção e quantificação dos níveis lipídicos de armazenamento em células intactas, seções teciduais e até organismos inteiros12,13,14,15. Em particular, c. elegans são úteis para estudos de imagem lipídica devido à sua transparência. Como os mamíferos, os C. elegans também armazenam lipídios em gotículas lipídicas e as vias de síntese e degradação das moléculas lipídicas são altamente conservadas16. Neste protocolo, forneceremos o princípio de trabalho da microscopia SRS, sua configuração fundamental e descreveremos os métodos para seu uso em imagens lipídicas em C. elegans.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>A/D converter</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>Analog Unit</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>GeneMate</td>
			<td>3119</td>
			<td>For making agarose pads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alignment tool - adapter</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>SM1A4</td>
			<td>For mounting the tool on scope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alignment tool - target</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>VRC2SM1</td>
			<td>For viewing IR laser</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alignment tool - tube</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>SM1L40</td>
			<td>Length can vary</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autocorrelator (Optional)</td>
			<td>APE</td>
			<td>pulseCheck</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bandpass filter</td>
			<td>minicircuits</td>
			<td>BBP-21.4+ if modulated at 20MHz or KR Electronics 2724 if modulated at 8 MHz</td>
			<td>For signal with modulation frequency filtering</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BNC cables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ800</td>
			<td>For handling and picking worms for imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dodecane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>44010</td>
			<td>Used for calibration of the SRS signal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter</td>
			<td>Chroma Technology</td>
			<td>890/220 CARS</td>
			<td>For removing Stokes beam</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>General purpose laboratory labeling tape</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89097</td>
			<td>For making agarose pads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass coverslips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48393-106</td>
			<td>For covering worms for imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass microscope slide</td>
			<td>VWR</td>
			<td>16004-422</td>
			<td>For making agarose pads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser scanning microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>FV3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lens</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>L1: AC254-050-B 
			L2: AC254-075-B</td>
			<td>For beam expander</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lock-in amplifier</td>
			<td>Zurich</td>
			<td>HF2LI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lowpass filter</td>
			<td>minicircuits</td>
			<td>BLP-1.9+</td>
			<td>For power supply noise suppression</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mirrors</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>BB1-E03</td>
			<td>For relay and periscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>UPlanSAPO 20x 0.75, UPlanSAPO 60XW 1.20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photodiode</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>FDS1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picosecond laser source</td>
			<td>APE</td>
			<td>picoEmerald</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power supply</td>
			<td>TEKPOWER</td>
			<td>TP1342U</td>
			<td>For photodiode, reversed 50V voltage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium azide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S2002</td>
			<td>For anaesthesizing the worms</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Worm picker</td>
			<td>WormStuff</td>
			<td>59-AWP</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

label-free imaging of lipid storage dynamics in caenorhabditis elegans using stimulated raman scattering microscopy

O metabolismo lipídico é um processo fisiológico fundamental necessário para a saúde celular e do organismo. A desregulação do metabolismo lipídico muitas vezes provoca obesidade e muitas doenças associadas, incluindo doenças cardiovasculares, diabetes tipo II e câncer. Para avançar no entendimento atual da regulação metabólica lipídica, os métodos quantitativos para medir precisamente os níveis de armazenamento lipídóide in vivo no tempo e no espaço tornaram-se cada vez mais importantes e úteis. As abordagens tradicionais para analisar o armazenamento lipídico são semi-quantitativas para avaliação microscópica ou falta de informações diarrecenciais para medição bioquímica. A microscopia de dispersão Raman estimulada (SRS) é uma tecnologia de imagem química livre de rótulos que permite a detecção rápida e quantitativa de lipídios em células vivas com resolução subcelular. Como o contraste é explorado a partir de vibrações moleculares intrínsecas, a microscopia SRS também permite o rastreamento quadridimensional de lipídios em animais vivos. Na última década, a microscopia SRS tem sido amplamente utilizada para imagens de pequenas moléculas em pesquisas biomédicas e superar as principais limitações dos métodos convencionais de coloração fluorescente e extração lipídica. Em laboratório, combinamos microscopia srs com as ferramentas genéticas e bioquímicas disponíveis para o poderoso organismo modelo, Caenorhabditis elegans, para investigar a distribuição e heterogeneidade de gotículas lipídicas em diferentes células e tecidos e, finalmente, descobrir novas vias de sinalização conservadas que modulam o metabolismo lipídico. Aqui, apresentamos os princípios de trabalho e a configuração detalhada do microscópio SRS e fornecemos métodos para seu uso na quantificação do armazenamento lipídico em pontos de tempo distintos de desenvolvimento de tipo selvagem e insulina sinalizando mutantes deficientes C. elegans.

A sinalização de insulina é um importante caminho endócrino que impacta o desenvolvimento, a reprodução, a vida útil e o metabolismo. Em vermes, a sinalização de insulina consiste em cerca de 40 ligantes de peptídeo semelhantes à insulina, ortopal receptor de fator de crescimento semelhante à insulina DAF-2, cascata de quinase PI3K/AKT a jusante, e ortopal do fator de transcrição FoxO, DAF-1620. mutantes daf-2, que não possuem o receptor de insulina, têm mais gotículas li...

Watch this Scientific Journal Video about Label-Free Imaging of Lipid Storage Dynamics in Caenorhabditis elegans using Stimulated Raman Scattering Microscopy at JoVE.com

Label-Free Imaging of Lipid Storage Dynamics in Caenorhabditis elegans using Stimulated Raman Scattering Microscopy

A microscopia de dispersão de Raman estimulada (SRS) permite imagens seletivas e livres de rótulos de moieties químicos específicos e tem sido efetivamente empregada para imagens de moléculas lipídicas in vivo. Aqui, fornecemos uma breve introdução ao princípio da microscopia SRS e descrevemos métodos para seu uso no armazenamento lipídeto de imagem em Caenorhabditis elegans.

Imagem livre de rótulos da Dinâmica de Armazenamento Lipídido em Elegans caenorhabditis usando microscopia de dispersão raman estimulada

Lipid metabolism is a fundamental physiological process necessary for cellular and organism health. Dysregulation of lipid metabolism often elicits ...

A microscopia de dispersão de Raman estimulada é uma tecnologia de imagem química que permite a detecção rápida e quantitativa de lipídios e permite o rastreamento de lipídios em animais vivos de forma livre de rótulos. A vantagem mais importante da microscopia SRS sobre as técnicas tradicionais de detecção de lipídios é que ela é livre de rótulos e, portanto, não é tão sustentável para branqueamento fotográfico como outras questões de fluorescência e coloração. O uso de microscopia SRS em conjunto com as ferramentas genéticas e bioquímicas disponíveis para organismos modelo, particularmente Caenorhabditis elegans fornece uma estrutura poderosa para estudar reguladores normais da biologia lipídica e metabolismo.Para alimentar raios laser no microscópio SRS, primeiro, defina o periscópio para levantar o feixe de uma saída de fonte de luz picosegundo para a porta de entrada a laser infravermelha no scanner do microscópio e abra o software de controle a laser para iniciar os lasers. Abaixe a potência do laser da bomba para 50 miliwatts e coloque o sinal da bomba em 750 nanômetros. Use um expansor de feixe para ajustar o diâmetro do feixe para se adequar à abertura traseira dos objetivos do microscópio.Use dois espelhos de relé, M1 e M2, para guiar o raio laser até o periscópio e definir os acenos do periscópio no centro da faixa de sintonia. Selecione a posição inicial e o ângulo de cada espelho de tal forma que o raio laser atinja aproximadamente o centro do espelho para lançar o feixe no microscópio e use uma porta vazia na torre objetiva do microscópio para realizar o alinhamento do curso. Coloque a sonda do medidor de energia na porta objetiva para medir a potência da luz transmitida e coloque o scanner do microscópio no zoom mais alto, 50X.Meça o poder da luz transmitida com o ponto de raio laser focalado e otimize os botões dos espelhos M1 e M2 iterativamente para alcançar a maior potência laser transmitida. Use a ferramenta de alinhamento para realizar o alinhamento fino da luz transmitida para garantir que a luz esteja passando pelo centro do objetivo e coloque a tampa de alinhamento do alvo da fluorescência no assento objetivo vazio. Ajuste os botões do primeiro espelho de direção, M1, para centralizar o ponto de raio laser e introduza o tubo de extensão com a tampa de alinhamento na outra extremidade para um assento objetivo vazio para monitorar o ponto de feixe de laser.Em seguida, sintonize os botões do segundo espelho de direção, M2, para centralizar novamente o ponto do feixe de laser na outra extremidade do tubo de extensão. Para configurar o módulo de detecção srs, coloque um cubo divisor de feixe após o condensador para direcionar o laser transmitido para o módulo de diodo fotográfico. Para configurar a conexão eletrônica, use um modulador eletro óptico embutido a 20 mega-hertz dentro do laser picosegundo para modular a intensidade do feixe stokes e alimentar o sinal de saída do diodo fotográfico no amplificador lock-in para demodulação da perda estimulada de Raman.Em seguida, alimente a saída do amplificador de travamento na caixa analógica do microscópio para converter o sinal analógico elétrico em um sinal digital. Para otimizar as condições de imagem, adicione cinco microlitros de ácido oleico a uma mini câmara de slides de microscópio e cubra a amostra com um deslizamento de tampa. Coloque a amostra no estágio do microscópio e use a borda da almofada para localizar e focar na gota.Ajuste o condensador para iluminação Kohler e use uma placa de sensor infravermelho e um visualizador infravermelho para verificar se o caminho do feixe da bomba ainda está correto. Confirme se o estágio de atraso é definido como zero femtosegundos e definir o comprimento de onda do feixe da bomba para 795,8 nanômetros. Defina a potência do feixe da bomba para 50 miliwatts e coloque o feixe de Stoke em 100 miliwatts.Abra o obturador tanto para os feixes, quanto para o obturador principal do laser. Escaneie a amostra e verifique a imagem na tela do computador. Mude o modo de exibição para alto baixo e ajuste o alcance para ver uma saturação de aproximadamente 50%.Verifique se a saturação está centrada na imagem, ajustando cuidadosamente os espelhos de direção dentro do sistema laser picosegundo para uma sobreposição otimizada da bomba e dos Stokes para maximizar a intensidade da imagem e centralizar a intensidade máxima conforme necessário. Antes de cada sessão de imagem, adicione 100 microliters de 2% de água quente a uma lâmina de vidro limpa colocada entre slides de suporte com duas camadas de fita de laboratório e coloque rapidamente um segundo slide em cima do primeiro slide. Gentilmente pressionado para criar uma almofada fina, uniforme, agarose e permitir que a agarose esfrie.Para montar os vermes para imagens, coloque uma gota de quatro a cinco microliter de agente anestésico por 10 a 20 vermes em um deslizamento de cobertura e use um microscópio de dissecção para escolher os vermes a serem imagens, colocando os vermes na gota de anestesia à medida que são coletados. Quando todos os vermes tiverem sido coletados, cubra os vermes com o deslizamento de vidro com a almofada de agarose. Para imagens, monte a amostra de verme com o deslizamento de tampa voltado para a lente objetiva e direcione a fonte de luz de campo brilhante para a ocular para localizar os vermes.Coloque os vermes em foco e ajuste a posição do condensador de acordo. Ajuste os poderes de laser ajustando a potência laser da bomba para 200 miliwatts e a energia IR para 400 miliwatts. Defina o amplificador de travamento para desmodulação do sinal SRS do worm.Comece a digitalizar o primeiro worm a uma taxa de varredura rápida, ajustando o foco fino para encontrar a área de interesse. Quando o sinal for otimizado, mude para uma taxa de varredura mais lenta e uma resolução de pixels mais alta para obter a imagem SRS e salvar a imagem em um formato que permite alta resolução. Quando todas as amostras tiverem sido imagens, coloque a fonte de laser em prontidão e desligue todos os equipamentos associados.Para analisar as imagens, abra os arquivos no ImageJ e selecione analisar e definir medidas para selecionar as propriedades a serem analisadas. Use a ferramenta de seleção de polígonos para delinear a região do intestino do verme a ser quantificada e clique em analisar e medir novamente. As medidas aparecerão na janela de resultados.Quando todos os worms tiverem sido delineados, copie e cole as medidas para cada um dos vermes em um determinado genótipo em uma planilha. Para obter o valor de medição de fundo, selecione uma área nas proximidades do worm que não tenha nenhum sinal SRS e subtraia o valor cinzento médio de fundo da medição de cada verme individual para calcular o desvio médio e padrão dos valores médios de cinza subtraídos de todos os vermes em um determinado genótipo ou grupo de teste. Esses valores podem então ser normalizados para a média do grupo controle.Nesta análise representativa, os níveis lipídicos intestinais em vermes do tipo selvagem sincronizados por idade e mutantes daf-2 sem o receptor de insulina foram quantificados durante a idade adulta. Como esperado, observa-se um declínio nos níveis lipídes de lipídios em vermes do tipo selvagem, começando no primeiro dia e continuando até o nono dia da idade adulta. Os níveis lipídes em mutantes daf-2, no entanto, aumentam até que tenham cinco dias de idade, momento em que permanecem constantes em cerca de 2,5 a 3 vezes mais alto que o tipo selvagem.A inativação daF-16 suprime o aumento dos níveis lipídes de mutantes daf-2. Expressão do daf-16a a ou daf-16b isoform no daf-2, daf-16 mutantes duplos não restaura os níveis lipídes. A expressão da isoforma daf-16d/f/h, no entanto, é suficiente para restaurar os níveis lipídes em daf-2, daf-16 mutantes duplos aos níveis observados em mutantes solteiros daf-2.Estes resultados indicam que a isoforme daf-16d/f/h modula especificamente o metabolismo lipídico em vermes mutantes daf-2. É importante usar a mesma potência laser para bombas e feixes de Stokes durante toda a sessão de imagem e incluir um grupo de controle em cada seis e quatro quantificações consistentes. Além de quantificar o armazenamento lipídico, a microscopia SRS pode ser acoplado a etiquetas bioortogonais, como o deutério, e implementada para visualizar a dinâmica da incorporação lipídica, síntese e degradação.A microscopia SRS permite multiplexagem e pode ser implementada para imagem de múltiplas biomoléculas em diferentes compartimentos subcelulares. A chamada microscopia srs hiperespectral SRS tem um grande futuro na exploração da dinâmica metabólica.

Research

JoVE Journal

Biology

Label-Free Imaging of Lipid Storage Dynamics in Caenorhabditis elegans using Stimulated Raman Scattering Microscopy

Label-free in situ Imaging of Lignification in Plant Cell Walls

Label-free in situ Imaging of Lignification in Plant Cell Walls

Label-free In situ Imaging de lignificação na parede celular das plantas

Meeting growing energy demands safely and efficiently is a pressing global challenge. Therefore, research into biofuels production that seeks to find ...

Biologia

Differential Imaging of Biological Structures with Doubly-resonant Coherent Anti-stokes Raman Scattering (CARS)

Differential Imaging of Biological Structures with Doubly-resonant Coherent Anti-stokes Raman Scattering CARS

Imagem diferencial de estruturas biológicas com Duplamente-ressonante Scattering Anti-Stokes Raman coerente (CARS)

Coherent Raman imaging techniques have seen a dramatic increase in activity over the past decade due to their promise to enable label-free optical imaging ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Lapso de tempo Microscopia de embriogênese inicial em Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Básico<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Métodos: Sincronização e observação

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

Extração de prostaglandina e Análise em<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Caenorhabditis elegans is emerging as a powerful animal model to study the biology of lipids1-9. Prostaglandins are an important class of eicosanoids, ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Quantification of Lipid Abundance and Evaluation of Lipid Distribution in Caenorhabditis elegans by Nile Red and Oil Red O Staining

Quantification of Lipid Abundance and Evaluation of Lipid Distribution in Caenorhabditis elegans by Nile Red and Oil Red O Staining

Quantificação de lipídios abundância e avaliação da distribuição de lipídios em Caenorhabditis elegans por Nilo vermelho e coloração do óleo vermelho O

Caenorhabditis elegans is an exceptional model organism in which to study lipid metabolism and energy homeostasis. Many of its lipid genes are conserved ...

Measurement of Oxygen Consumption Rates in Intact Caenorhabditis elegans

Measurement of Oxygen Consumption Rates in Intact Caenorhabditis elegans

Medição das taxas de consumo de oxigênio em intacta Caenorhabditis elegans

Optimal mitochondrial function is critical for healthy cellular activity, particularly in cells that have high energy demands like those in the nervous ...

Oligomerization Dynamics of Cell Surface Receptors in Living Cells by Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy Combined with Number and Brightness Analysis

Dinâmica de oligomerização dos receptores de superfície celular em células vivas pela microscopia de fluorescência de reflexão interna total combinada com análise de número e brilho

Despite the importance and ubiquity of receptor oligomerization, few methods are applicable for detecting clustering events and measuring the degree of ...

Using Caenorhabditis elegans to Screen for Tissue-Specific Chaperone Interactions

Using Caenorhabditis elegans to Screen for Tissue-Specific Chaperone Interactions

Usando elegans caenorhabditis para tela para interações de acompanhantes específicas de tecido

Correct folding and assembly of proteins and protein complexes are essential for cellular function. Cells employ quality control pathways that correct, ...