Name: label-free imaging of lipid storage dynamics in caenorhabditis elegans using stimulated raman scattering microscopy
Uploaded: 2021-05-28T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Label-Free Imaging of Lipid Storage Dynamics in Caenorhabditis elegans using Stimulated Raman Scattering Microscopy at JoVE.com

Detta arbete stöddes av NIH-bidrag R01AG045183 (M.C.W.), R01AT009050 (M.C.W.), R01AG062257 (M.C.W.), R01AG062257 (M.C.W.), DP1DK113644 (M.C.W.), March of Dimes Foundation (M.C.W.), Welch Foundation (M.C.W.) och av HHMI-utredare (M.C.W.). Vi tackar Caenorhabditis Genetics Center (CGC) för C. elegans stammar.

1. Instrumentell inställning för stimulerad Raman Scattering Microscopy
OBS: SRS-mikroskopisystemet är byggt på en picosecondlaser med pumpintegrerad optisk parametrisk oscillator och ett konfokalt laserskanningsmikroskop. Oscillatorn tillhandahåller två picosecond pulståg, inklusive en Stokes-balk på 1 064 nm och en pumpstråle som kan finjusteras mellan 700-990 nm. Temporal och rumslig överlappning av de två strålarna uppnås inuti lasern. En inbyggd elektrooptisk modulator (EOM) ä...

<ol>
	<li>Luppino, F. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overweight,+obesity,+and+depression:+a+systematic+review+and+meta-analysis+of+longitudinal+studies.">Overweight, obesity, and depression: a systematic review and meta-analysis of longitudinal studies.</a> Archives of General Psychiatry. 67 (3), 220-229 (2010).</li><li>Eckel, R. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obesity+and+type+2+diabetes:+what+can+be+unified+and+what+needs+to+be+individualized.">Obesity and type 2 diabetes: what can be unified and what needs to be individualized.</a> Diabetes Care. 34 (6), 1424-1430 (2011).</li><li>Poirier, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obesity+and+cardiovascular+disease:+pathophysiology,+evaluation,+and+effect+of+weight+loss.">Obesity and cardiovascular disease: pathophysiology, evaluation, and effect of weight loss.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 26 (5), 968-976 (2006).</li><li>Bhaskaran, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Body-mass+index+and+risk+of+22+specific+cancers:+a+population-based+cohort+study+of+5.24+million+UK+adults.">Body-mass index and risk of 22 specific cancers: a population-based cohort study of 5.24 million UK adults.</a> Lancet. 384 (9945), 755-765 (2014).</li><li>Shen, Y., Hu, F., Min, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Raman+imaging+of+small+biomolecules.">Raman imaging of small biomolecules.</a> Annual Review of Biophysics. 48, 347-369 (2019).</li><li>Daemen, S., van Zandvoort, M., Parekh, S. H., Hesselink, M. K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microscopy+tools+for+the+investigation+of+intracellular+lipid+storage+and+dynamics.">Microscopy tools for the investigation of intracellular lipid storage and dynamics.</a> Molecular Metabolism. 5 (3), 153-163 (2016).</li><li>Syed, A., Smith, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Raman+imaging+in+cell+membranes,+lipid-rich+organelles,+and+lipid+bilayers.">Raman imaging in cell membranes, lipid-rich organelles, and lipid bilayers.</a> Annual Review of Analytical Chemistry. 10 (1), 271-291 (2017).</li><li>Thomas, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Raman+spectroscopy+of+protein+and+nucleic+acid+assemblies.">Raman spectroscopy of protein and nucleic acid assemblies.</a> Annual Review of Biophysics and Biomolecular Structure. 28, 1-27 (1999).</li><li>Evans, C. L., Xie, X. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coherent+anti-stokes+Raman+scattering+microscopy:+chemical+imaging+for+biology+and+medicine.">Coherent anti-stokes Raman scattering microscopy: chemical imaging for biology and medicine.</a> Annual Review of Analytical Chemistry. 1, 883-909 (2008).</li><li>Freudiger, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+biomedical+imaging+with+high+sensitivity+by+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Label-free biomedical imaging with high sensitivity by stimulated Raman scattering microscopy.</a> Science. 322 (5909), 1857-1861 (2008).</li><li>Hu, F., Shi, L., Min, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+imaging+of+chemical+bonds+by+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Biological imaging of chemical bonds by stimulated Raman scattering microscopy.</a> Nature Methods. 16 (9), 830-842 (2019).</li><li>Wang, M. C., Min, W., Freudiger, C. W., Ruvkun, G., Xie, X. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNAi+screening+for+fat+regulatory+genes+with+SRS+microscopy.">RNAi screening for fat regulatory genes with SRS microscopy.</a> Nature Methods. 8 (2), 135-138 (2011).</li><li>Wei, L., Yu, Y., Shen, Y., Wang, M. C., Min, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vibrational+imaging+of+newly+synthesized+proteins+in+live+cells+by+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Vibrational imaging of newly synthesized proteins in live cells by stimulated Raman scattering microscopy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (28), 11226-11231 (2013).</li><li>Wei, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-cell+imaging+of+alkyne-tagged+small+biomolecules+by+stimulated+Raman+scattering.">Live-cell imaging of alkyne-tagged small biomolecules by stimulated Raman scattering.</a> Nature Methods. 11 (4), 410-412 (2014).</li><li>Ramachandran, P. V., Mutlu, A. S., Wang, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+biomedical+imaging+of+lipids+by+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Label-free biomedical imaging of lipids by stimulated Raman scattering microscopy.</a> Current Protocols in Molecular Biology. 109, 31 (2015).</li><li>Srinivasan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+body+fat+in+Caenorhabditis+elegans.">Regulation of body fat in Caenorhabditis elegans.</a> Annual Review of Physiology. 77, 161-178 (2015).</li><li>Vrablik, T. L., Petyuk, V. A., Larson, E. M., Smith, R. D., Watts, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipidomic+and+proteomic+analysis+of+Caenorhabditis+elegans+lipid+droplets+and+identification+of+ACS-4+as+a+lipid+droplet-associated+protein.">Lipidomic and proteomic analysis of Caenorhabditis elegans lipid droplets and identification of ACS-4 as a lipid droplet-associated protein.</a> Biochimca Et Biophysica Acta. 1851 (10), 1337-1345 (2015).</li><li>Yu, Y., Mutlu, A. S., Liu, H., Wang, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+screens+using+photo-highlighting+discover+BMP+signaling+in+mitochondrial+lipid+oxidation.">High-throughput screens using photo-highlighting discover BMP signaling in mitochondrial lipid oxidation.</a> Nature Communications. 8 (1), 865 (2017).</li><li>Kelley, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live-cell+confocal+microscopy+and+quantitative+4D+image+analysis+of+anchor-cell+invasion+through+the+basement+membrane+in+Caenorhabditis+elegans.">Live-cell confocal microscopy and quantitative 4D image analysis of anchor-cell invasion through the basement membrane in Caenorhabditis elegans.</a> Nature Protocols. 12 (10), 2081-2096 (2017).</li><li>Murphy, C. T., Hu, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insulin/insulin-like+growth+factor+signaling+in+C.+elegans.">Insulin/insulin-like growth factor signaling in C. elegans.</a> WormBook. , 1-43 (2013).</li><li>Shi, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+lipid+droplet+size+and+phospholipid+composition+by+stearoyl-CoA+desaturase.">Regulation of lipid droplet size and phospholipid composition by stearoyl-CoA desaturase.</a> Journal of Lipid Research. 54 (9), 2504-2514 (2013).</li><li>Watts, J. L., Ristow, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lipid+and+carbohydrate+metabolism+in+Caenorhabditis+elegans.">Lipid and carbohydrate metabolism in Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 207 (2), 413-446 (2017).</li><li>Kimura, K. D., Tissenbaum, H. A., Liu, Y., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=daf-2,+an+insulin+receptor-like+gene+that+regulates+longevity+and+diapause+in+Caenorhabditis+elegans.">daf-2, an insulin receptor-like gene that regulates longevity and diapause in Caenorhabditis elegans.</a> Science. 277 (5328), 942-946 (1997).</li><li>Kwon, E. S., Narasimhan, S. D., Yen, K., Tissenbaum, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+DAF-16+isoform+regulates+longevity.">A new DAF-16 isoform regulates longevity.</a> Nature. 466 (7305), 498-502 (2010).</li><li>Chen, A. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longevity+genes+revealed+by+integrative+analysis+of+isoform-specific+daf-16/FoxO+mutants+of+Caenorhabditis+elegans.">Longevity genes revealed by integrative analysis of isoform-specific daf-16/FoxO mutants of Caenorhabditis elegans.</a> Genetics. 201 (2), 613-629 (2015).</li><li>Lee, R. Y., Hench, J., Ruvkun, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+C.+elegans+DAF-16+and+its+human+ortholog+FKHRL1+by+the+daf-2+insulin-like+signaling+pathway.">Regulation of C. elegans DAF-16 and its human ortholog FKHRL1 by the daf-2 insulin-like signaling pathway.</a> Current Biology. 11 (24), 1950-1957 (2001).</li><li>Mutlu, A. S., Gao, S. M., Zhang, H., Wang, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+specificity+regulates+lipid+metabolism+through+neuroendocrine+signaling+in+Caenorhabditis+elegans.">Olfactory specificity regulates lipid metabolism through neuroendocrine signaling in Caenorhabditis elegans.</a> Nature Communications. 11 (1), 1450 (2020).</li><li>Chen, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fingerprint+Stimulated+Raman+Scattering+imaging+reveals+retinoid+coupling+lipid+metabolism+and+survival.">Fingerprint Stimulated Raman Scattering imaging reveals retinoid coupling lipid metabolism and survival.</a> Chemphyschem: a European Journal of Chemical Physics and Physical Chemistry. 19 (19), 2500-2506 (2018).</li><li>Li, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+imaging+of+lipid+synthesis+and+lipolysis+dynamics+in+Caenorhabditis+elegans+by+Stimulated+Raman+Scattering+microscopy.">Quantitative imaging of lipid synthesis and lipolysis dynamics in Caenorhabditis elegans by Stimulated Raman Scattering microscopy.</a> Analytical Chemistry. 91 (3), 2279-2287 (2019).</li><li>Lin, C. J., Wang, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+metabolites+regulate+host+lipid+metabolism+through+NR5A-Hedgehog+signalling.">Microbial metabolites regulate host lipid metabolism through NR5A-Hedgehog signalling.</a> Nature Cell Biology. 19 (5), 550-557 (2017).</li><li>Fu, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+metabolic+fingerprinting+of+neutral+lipids+with+hyperspectral+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">In vivo metabolic fingerprinting of neutral lipids with hyperspectral stimulated Raman scattering microscopy.</a> Journal of the American Chemical Society. 136 (24), 8820-8828 (2014).</li><li>Perez, C. L., Van Gilst, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+13C+isotope+labeling+strategy+reveals+the+influence+of+insulin+signaling+on+lipogenesis+in+C.+elegans.">A 13C isotope labeling strategy reveals the influence of insulin signaling on lipogenesis in C. elegans.</a> Cell Metabolism. 8 (3), 266-274 (2008).</li><li>Elle, I. C., Rodkaer, S. V., Fredens, J., Faergeman, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+measuring+fatty+acid+oxidation+in+C.+elegans.">A method for measuring fatty acid oxidation in C. elegans.</a> Worm. 1 (1), 26-30 (2012).</li><li>Ezcurra, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=elegans+eats+its+own+intestine+to+make+yolk+leading+to+multiple+senescent+pathologies.">elegans eats its own intestine to make yolk leading to multiple senescent pathologies.</a> Current Biology. 28 (16), 2544-2556 (2018).</li><li>Lu, F. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Label-free+DNA+imaging+in+vivo+with+stimulated+Raman+scattering+microscopy.">Label-free DNA imaging in vivo with stimulated Raman scattering microscopy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (37), 11624-11629 (2015).</li><li>Long, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-color+vibrational+imaging+of+glucose+metabolism+using+stimulated+Raman+scattering.">Two-color vibrational imaging of glucose metabolism using stimulated Raman scattering.</a> Chemical Communications. 54 (2), 152-155 (2018).</li><li>Zhao, Z., Shen, Y., Hu, F., Min, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+vibrational+tags+in+biological+imaging+by+Raman+microscopy.">Applications of vibrational tags in biological imaging by Raman microscopy.</a> Analyst. 142 (21), 4018-4029 (2017).</li><li>Liao, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+and+in+situ+spectroscopic+imaging+by+a+handheld+Stimulated+Raman+Scattering+Microscope.">In vivo and in situ spectroscopic imaging by a handheld Stimulated Raman Scattering Microscope.</a> ACS Photonics. 5 (3), 947-954 (2018).</li><li>Lee, H. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+cholesterol+storage+in+live+cells+and+C.+elegans+by+stimulated+Raman+scattering+imaging+of+phenyl-Diyne+cholesterol.">Assessing cholesterol storage in live cells and C. elegans by stimulated Raman scattering imaging of phenyl-Diyne cholesterol.</a> Scientific Reports. 5, 7930 (2015).</li><li>Wang, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+lipid+metabolism+in+live+Caenorhabditis+elegans+using+fingerprint+vibrations.">Imaging lipid metabolism in live Caenorhabditis elegans using fingerprint vibrations.</a> Angewandte Chemie (International Edition in English). 53 (44), 11787-11792 (2014).</li><li>Chen, W. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectroscopic+coherent+Raman+imaging+of+Caenorhabditis+elegans+reveals+lipid+particle+diversity.">Spectroscopic coherent Raman imaging of Caenorhabditis elegans reveals lipid particle diversity.</a> Nature Chemical Biology. 16 (10), 1087-1095 (2020).</li><li>Freudiger, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stimulated+Raman+Scattering+microscopy+with+a+robust+fibre+laser+source.">Stimulated Raman Scattering microscopy with a robust fibre laser source.</a> Nature Photonics. 8 (2), 153-159 (2014).</li><li>Brinkmann, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Portable+all-fiber+dual-output+widely+tunable+light+source+for+coherent+Raman+imaging.">Portable all-fiber dual-output widely tunable light source for coherent Raman imaging.</a> Biomedical Optics Express. 10 (9), 4437-4449 (2019).</li></ol>

För att skydda mot fetma och dess associerade metabola störningar har viktiga forskningsinsatser genomförts för att bättre förstå de regulatoriska mekanismerna för lipidhomeostas. För kvantitativ detektion av lipidmolekyler i biologiska prover har etikettfri avbildning genom SRS-mikroskopi visat sig vara ett tillförlitligt alternativ till biokemiska analyser och andra färgningsmetoder. Vår grupp och andra har avslöjat nya biologiska mekanismer i lipid metabolisk reglering genom att kombinera användningen <e...

Fetma har blivit ett globalt hälsoproblem som hotar en tredjedel av befolkningen runt om i världen, och det utgör ett allvarligt medicinskt problem, med tanke på dess koppling till dålig psykiskhälsa 1 och dödliga sjukdomar inklusive diabetes2, hjärt-kärlsjukdomar3 och vissa typer av cancer4. Studie av lipidmetabolism är avgörande för att bättre förstå de biologiska problemen bakom fetma. Snabb och specifik kvantifiering av lipidlagring innebär påvisande av fettsyror och deras derivat samt sterolhaltiga metaboliter, med hög känslighet och helst med rumslig information. Lipider utmanar mål att avbilda eftersom de saknar inneboende fluorescens och inte lätt kan fluorescerande taggas. De fluorescerande taggarna är ofta större än lipidmolekylerna och kan därför vara kemiskt invasiva och opraktiska för in vivo-applikationer. Etikettfri eller minimal märkningsstrategi är nödvändig för att bevara lipidmolekylens hydrofobiska struktur5. Den senaste utvecklingen inom bildteknik har skapat spännande möjligheter till etikettfri avbildning av lipider i levande celler, vävnader och organismer.
Traditionella metoder för lipidlagringsanalyser i biologiska prover inkluderar biokemiska analyser och färgningsprotokoll med lipofila färgämnen. Biokemiska kvantifieringsanalyser som involverar masspektrometri (MS) är oöverträffade i sin molekylära upplösning, men de kräver mycket stora provmängder och provberedning tar vanligtvis flera timmar, vilket begränsar deras tillämpning för realtidsavbildning av levande system5. En annan viktig begränsning av dessa analyser är bristen på rumslig information. Å andra sidan ger lipofila färgämnen som Oil Red O och Sudan Black vävnad och cellulär distribution av lipidlagringsorganeller och jämfört med MS-tekniker är dessa färgningsmetoder också låga i kostnad och lätta att utföra. Dessa färgningsprotokoll kräver dock fixering, vilket kan påverka lipiddroppornas hydrofobiska natur, generera konstgjorda förändringar i deras struktur och resultera i inkonsekvenser mellan experiment6. De tekniska svårigheterna i samband med biokemiska och färgning tekniker har lett till sökandet efter etikettfria metoder för att avbilda lipid molekyler och till den snabba ökningen av användningen av sammanhängande Raman spridning (CRS) mikroskopi i lipid imaging.
Raman-effekten erkändes först av Raman och Krishnan, där de rapporterade att när de interagerar med en foton kan en molekyl generera spridda ljus utan förändring i våglängd (kallad Rayleigh-spridning) eller sällan med en förändrad våglängd (kallad Raman-spridning) och denna förändring i våglängd är karakteristisk för de funktionella kemiska grupperna inommolekylen 7. När kemikaliebindningarna i en molekyl blir upphetsade till en högre vibrationsenerginivå av en incidentfoton, kallad pumpfoton, blir energin hos den spridda fotonen, kallad Stokes foton, lägre. Annars kan de kemiska bindningarna nå en lägre vibrationsenerginivå om de ursprungligen är på en högre nivå, och den spridda fotonen får energi för att vara anti-Stokes foton. Frekvensskillnaden mellan incidenten och spridda fotoner kallas Raman-skiftet. Varje kemisk bindning i en molekyl har ett karakteristiskt och kvantifierbart Raman-skifte. Till exempel har CH2-bindningen en Raman-förskjutning på 2 845 cm-1, vilket är rikligt i fettsyrakedjor8. Denna spontana Raman signal är i allmänhet mycket svag, vilket har kraftigt begränsat bildhastigheten i konventionella spontana Raman mikroskopi. Under årens lopp har olika tillvägagångssätt utvecklats för att öka bildhastigheten och känsligheten hos spontan Raman-mikroskopi. Sammanhängande Raman spridning mikroskopi, inklusive sammanhängande Anti-Stokes Raman Scattering (CARS) mikroskopi och stimulerad Raman Scattering (SRS) mikroskopi, är de senaste framstegen. CARS och SRS har lite olika arbetsprinciper, men båda är etikettfria tekniker som har levande bildkapacitet, kan ge rumslig och tidsmässig information om lipidlagringsdynamik och kräver endast liten provstorlek. CARS mikroskopi lider av icke-resonansbakgrund, som kommer från olika icke-linjära processer, och CARS-signaler har också icke-linjärt förhållande till molekylkoncentrationen, vilket tillsammans komplicerar kvantifieringsprocessen9. Till skillnad från CARS mikroskopi genererar SRS-mikroskopi inte icke-resonansfulla bakgrundssignaler och erbjuder linjärt beroende av koncentrationen av intressemolekylen. Således används för närvarande SRS mikroskopi mer allmänt för lipid imaging.
I SRS-mikroskopi kan de svaga spontana Raman-signalerna förstärkas när de upphetsades av två synkroniserade laserstrålar med deras frekvensskillnad som matchar den kemiska bindningsvibrationsfrekvensen. Molekylen kommer att uppleva en förbättrad övergång till ett upphetsad tillstånd på grund av sammanhängande excitation. Som ett resultat ökar andelen Stokes fotongeneration. Följaktligen ökar intensiteten hos den överförda "Stokes" -strålen (stimulerad Raman-förstärkning, SRG) och intensiteten hos den överförda "pump" -strålen minskar (stimulerad Raman-förlust, SRL). Detektion av SRG- eller SRL-signaler ligger till grund för SRS-mikroskopiavbildning (Stimulated Raman Scattering) med specifika kemiskabindningar 10. Om frekvensskillnaden mellan de två laserstrålarna inte matchar den kemiska bindningens vibrationsfrekvens inom en molekyl av intresse, kommer varken SRG- eller SRL-signaler att genereras. Bildhastigheten för SRS-mikroskopi är cirka 2 μsec per pixel eller 1 sekund per bildruta, vilket är mycket snabbare än spontan Raman-mikroskopi11. Typisk lateral upplösning för SRS mikroskopi är diffraktion begränsad och cirka 300 nm. Dessutom möjliggör de två-foton optiska processerna av SRS mikroskopi volymetrisk 3D-avbildning av relativa tjocka vävnadsprover och bilddjupet kan nå 300-500 μm. Sammantaget presenterar SRS-mikroskopi en effektiv, etikettfri bildteknik för att upptäcka specifika biomolekyler, särskilt lipider.
Lipiddroppar är enmembranorganeller, som är den huvudsakliga cellulära lagringsplatsen för neutrala lipider, inklusive triacylglyceroler (TAGs) och kolesterolestrar (CEs). CH2 bindningar i fettsyrakedjorna i dessa lipidmolekyler genererar starka SRS-signaler vid 2 845 cm-1 när de ärupphetsade 8, vilket möjliggör detektion och kvantifiering av lagringsfettnivåer i intakta celler, vävnadssektioner och till och med hela organismer12,13,14,15. I synnerhet C. elegans är användbara för lipid imaging studier på grund av deras öppenhet. Liksom däggdjur lagrar C. elegans också lipider i lipiddroppar och syntes- och nedbrytningsvägarna för lipidmolekyler är mycket bevarade16. I detta protokoll kommer vi att tillhandahålla arbetsprincipen för SRS mikroskopi, dess grundläggande inställning och beskriva metoderna för dess användning i lipid imaging i C. elegans.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>A/D converter</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>Analog Unit</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>GeneMate</td>
			<td>3119</td>
			<td>For making agarose pads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alignment tool - adapter</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>SM1A4</td>
			<td>For mounting the tool on scope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alignment tool - target</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>VRC2SM1</td>
			<td>For viewing IR laser</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alignment tool - tube</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>SM1L40</td>
			<td>Length can vary</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Autocorrelator (Optional)</td>
			<td>APE</td>
			<td>pulseCheck</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bandpass filter</td>
			<td>minicircuits</td>
			<td>BBP-21.4+ if modulated at 20MHz or KR Electronics 2724 if modulated at 8 MHz</td>
			<td>For signal with modulation frequency filtering</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BNC cables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>SMZ800</td>
			<td>For handling and picking worms for imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dodecane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>44010</td>
			<td>Used for calibration of the SRS signal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Filter</td>
			<td>Chroma Technology</td>
			<td>890/220 CARS</td>
			<td>For removing Stokes beam</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>General purpose laboratory labeling tape</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89097</td>
			<td>For making agarose pads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass coverslips</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48393-106</td>
			<td>For covering worms for imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass microscope slide</td>
			<td>VWR</td>
			<td>16004-422</td>
			<td>For making agarose pads</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser scanning microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>FV3000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lens</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>L1: AC254-050-B 
			L2: AC254-075-B</td>
			<td>For beam expander</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lock-in amplifier</td>
			<td>Zurich</td>
			<td>HF2LI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lowpass filter</td>
			<td>minicircuits</td>
			<td>BLP-1.9+</td>
			<td>For power supply noise suppression</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mirrors</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>BB1-E03</td>
			<td>For relay and periscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objective</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>UPlanSAPO 20x 0.75, UPlanSAPO 60XW 1.20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Photodiode</td>
			<td>Thorlabs</td>
			<td>FDS1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picosecond laser source</td>
			<td>APE</td>
			<td>picoEmerald</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power supply</td>
			<td>TEKPOWER</td>
			<td>TP1342U</td>
			<td>For photodiode, reversed 50V voltage</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium azide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S2002</td>
			<td>For anaesthesizing the worms</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Worm picker</td>
			<td>WormStuff</td>
			<td>59-AWP</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

label-free imaging of lipid storage dynamics in caenorhabditis elegans using stimulated raman scattering microscopy

Lipidmetabolism är en grundläggande fysiologisk process som är nödvändig för cellulär och organismhälsa. Dysregulation av lipidmetabolism framkallar ofta fetma och många associerade sjukdomar inklusive hjärt-kärlsjukdomar, typ II-diabetes och cancer. För att främja den nuvarande förståelsen av lipidmetabolisk reglering har kvantitativa metoder för att exakt mäta in vivo lipidlagringsnivåer i tid och rum blivit allt viktigare och användbarare. Traditionella metoder för att analysera lipid lagring är semi-kvantitativa för mikroskopisk bedömning eller saknar spatio-temporal information för biokemisk mätning. Stimulerad Raman-sprutmikroskopi (SRS) är en etikettfri kemisk bildteknik som möjliggör snabb och kvantitativ detektion av lipider i levande celler med subcellulär upplösning. Eftersom kontrasten utnyttjas från inneboende molekylära vibrationer tillåter SRS-mikroskopi också fyrdimensionell spårning av lipider hos levande djur. Under det senaste decenniet har SRS-mikroskopi använts i stor utsträckning för små molekylers avbildning i biomedicinsk forskning och övervinner de stora begränsningarna i konventionella fluorescerande färgning och lipidextraktionsmetoder. I laboratoriet har vi kombinerat SRS-mikroskopi med de genetiska och biokemiska verktyg som finns tillgängliga för den kraftfulla modellorganismen Caenorhabditis elegans för att undersöka fördelningen och heterogeniteten hos lipiddroppar över olika celler och vävnader och i slutändan upptäcka nya bevarade signalvägar som modulerar lipidmetabolism. Här presenterar vi arbetsprinciperna och den detaljerade inställningen av SRS-mikroskopet och tillhandahåller metoder för dess användning för att kvantifiera lipidlagring vid distinkta utvecklingsidpunkter för vilda och insulinsignalerande bristfällig mutant C. elegans.

Insulinsignalering är en viktig endokrin väg som påverkar utveckling, reproduktion, livslängd och ämnesomsättning. I maskar består insulinsignalering av cirka 40 insulinliknande peptidligands, insulinliknande tillväxtfaktorreceptor ortolog DAF-2, nedströms PI3K/ AKT kinas kaskad och FoxO transkription faktor ortolog, DAF-1620. daf-2 mutanter, som saknar insulinreceptorn, har fler lipiddroppar i tarmen, maskfettlagringsvävnaden21,<sup class="xre...

Watch this Scientific Journal Video about Label-Free Imaging of Lipid Storage Dynamics in Caenorhabditis elegans using Stimulated Raman Scattering Microscopy at JoVE.com

Label-Free Imaging of Lipid Storage Dynamics in Caenorhabditis elegans using Stimulated Raman Scattering Microscopy

Stimulerad Raman-spridning (SRS) mikroskopi möjliggör selektiv, etikettfri avbildning av specifika kemiska moieties och det har använts effektivt för att avbilda lipidmolekyler in vivo. Här ger vi en kort introduktion till principen om SRS mikroskopi och beskriver metoder för dess användning i imaging lipid lagring i Caenorhabditis elegans.

Etikettfri bildbehandling av Lipid Storage Dynamics i Caenorhabditis elegans med stimulerad Raman Scattering Microscopy

Lipid metabolism is a fundamental physiological process necessary for cellular and organism health. Dysregulation of lipid metabolism often elicits ...

Stimulerad Raman-spridningsmikroskopi är en kemisk bildteknik som möjliggör snabb och kvantitativ detektion av lipider och möjliggör spårning av lipider hos levande djur på ett etikettfritt sätt. Den viktigaste fördelen med SRS-mikroskopi jämfört med traditionella lipiddetekteringstekniker är att den är etikettfri och därför inte är lika hållbar för fotoblekning som andra fluorescens- och färgningsfrågor. Användningen av SRS-mikroskopi i kombination med de genetiska och biokemiska verktyg som finns tillgängliga för modellorganismer, särskilt Caenorhabditis elegans ger ett kraftfullt ramverk för att studera normala regulatorer av lipidbiologi och metabolism.För att mata laserstrålar in i SRS-mikroskopet, ställ först in periskopet för att lyfta strålen från en picosecond ljuskälla utgång till den infraröda laseringångsporten på mikroskopets skanner och öppna laserkontrollprogramvaran för att starta lasrarna. Sänk pumplasereffekten till 50 milliwatt och ställ in pumpsignalen på 750 nanometer. Använd en strål expander för att justera stråldiametern för att passa mikroskopmålens bakre bländare.Använd två reläspeglar, M1 och M2, för att styra laserstrålen till periskopet och ställa in periskopets nickar i mitten av inställningsområdet. Välj den ursprungliga positionen och vinkeln för varje spegel så att laserstrålen ungefär träffar spegelns mitt för att skjuta upp strålen i mikroskopet och använd en tom port på mikroskopets objektiva torn för att utföra kursjusteringen. Placera kraftmätarsonden vid objektivporten för att mäta kraften hos det överförda ljuset och ställ in mikroskopets skanner på högsta zoom, 50X.Mät kraften hos det överförda ljuset med den fokuserade laserstråleplatsen och optimera speglarna M1 och M2 iterativt för att uppnå den högsta överförda lasereffekten. Använd justeringsverktyget för att utföra den fina justeringen av det överförda ljuset för att se till att ljuset passerar genom mitten av målet och placera rökpunktens måljusteringslock på det tomma objektivsätet. Justera rattarna på den första styrspegeln, M1, för att centrera laserstråleplatsen och föra in förlängningsröret med inriktningslocket i andra änden till ett tomt objektivt säte för övervakning av laserstråleplatsen.Justera sedan rattarna på den andra styrspegeln, M2, för att centrera laserstråleplatsen igen i andra änden av förlängningsröret. Om du vill konfigurera SRS-detektionsmodulen placerar du en stråldelare efter kondensorn för att rikta den överförda lasern till fotodiodmodulen. För att ställa in elektronikanslutningen, använd en inbyggd elektrooptisk modulator vid 20 megahertz inuti picosecond tune-able laser för att modulera intensiteten hos Stokes-strålen och mata in utgångssignalen för fotodioden i inlåsningsförstärkaren för demodulering av den stimulerade Raman-förlusten.Mata sedan inlåsningsförstärkarens utgång i mikroskopets analoga låda för att konvertera den elektriska analoga signalen till en digital signal. För att optimera avbildningsförhållandena, tillsätt fem mikroliter oljesyra till en bildkammare i minimikroskopet och täck provet med en täckspillning. Placera provet på mikroskopstadiet och använd kanten på dynan för att lokalisera och fokusera på droppen.Justera kondensorn för Kohler-belysning och använd ett infrarött sensorkort och infraröd betraktare för att kontrollera om pumpstrålens bana fortfarande är korrekt. Bekräfta att fördröjningssteget är inställt på noll femtosekeringar och ställ in pumpstrålens våglängd på 795,8 nanometer. Ställ in pumpstrålens effekt på 50 milliwatt och ställ in Stoke-balken på 100 milliwatt.Öppna slutaren för både balkarna och laserns huvudlucka. Skanna exemplet och kontrollera bilden på datorskärmen. Ändra visningsläget till högt lågt och justera intervallet så att det ser en mättnad på cirka 50 %.Kontrollera om mättnaden är centrerad i bilden, justera försiktigt styrspeglarna inuti picosecond tune-able lasersystemet för optimerad överlappning av pumpen och Stokes för att maximera bildintensiteten och för att centrera toppintensiteten efter behov. Före varje bildsession lägger du till 100 mikroliter varm 2%agarose till en ren glasbild placerad mellan stödbilder med två lager laboratorietejp och placera snabbt en andra bild ovanpå den första bilden. Pressa försiktigt för att skapa en tunn, jämn agarose pad och låt agarose svalna.För att montera maskarna för avbildning, placera en fyra till fem mikroskoperingsdroppe av bedövningsmedel per 10 till 20 maskar på en täckglimt och använd ett dissektionsmikroskop för att välja maskarna som ska avbildas, placera maskarna på anestesidroppar när de samlas in. När alla maskar har samlats in, täck maskarna med glasrutschbanan med agarosplattan. För avbildning, montera maskprovet med täcksnederettet mot objektivlinsen och rikta den ljusa fältljuskällan till okularet för att hitta maskarna.Sätt maskarna i fokus och justera kondensorns läge i enlighet därmed. Justera laserkrafterna genom att ställa in pumplasereffekten på 200 milliwatt och IR-kraften till 400 milliwatt. Ställ in låsförstärkaren för demodulering av maskens SRS-signal.Börja skanna den första masken med en snabb skanningshastighet och justera det fina fokuset för att hitta intresseområdet. När signalen har optimerats växlar du till en långsammare skanningshastighet och en högre pixelupplösning för att hämta SRS-bilden och spara bilden i ett format som möjliggör hög upplösning. När alla prover har avbildats, placera laserkällan i vänteläge och stäng av all tillhörande utrustning.Om du vill analysera bilderna öppnar du filerna i ImageJ och väljer analysera och ställer in mått för att välja de egenskaper som ska analyseras. Använd polygonmarkeringsverktyget för att beskriva området i masktarmen som ska kvantifieras och klicka på analysera och mäta igen. Mätningarna visas i resultatfönstret.När alla maskar har beskrivits kopierar och klistrar du in måtten för var och en av maskarna i en viss genotyp i ett kalkylblad. För bakgrundsmätningsvärdet väljer du ett område i närheten av masken som inte har någon SRS-signal och subtraherar bakgrundsgenomsnittet grått värde från mätningen för varje enskild mask för att beräkna medelvärdet och standardavvikelsen för bakgrunds subtraherade genomsnittliga grå värden från alla maskar i en viss genotyp eller testgrupp. Dessa värden kan sedan normaliseras till medelvärdet för kontrollgruppen.I denna representativa analys kvantifierades intestinala lipidnivåer i ålderssynkronerade vilda typmaskar och daf-2 mutanter som saknade insulinreceptorn under vuxen ålder. Som förväntat observeras en minskning av lipidnivåerna hos vilda maskar, från dag ett och fortsätter till dag nio av vuxenlivet. Lipidnivåerna i daf-2-mutanter ökar dock tills de är fem dagar gamla, då de förblir konstanta vid cirka 2,5 till tre gånger högre än den vilda typen.Daf-16 inaktivering undertrycker ökningen av lipidnivåer av daf-2 mutanter. Uttryck av daf-16a a eller daf-16b isoform i daf-2, daf-16 dubbel mutanter återställer inte lipidnivåerna. Uttrycket av daf-16d/f/h isoform, är dock tillräckligt för att återställa lipidnivåerna i daf-2, daf-16 dubbel mutanter till de nivåer som observerats i daf-2 singel mutanter.Dessa resultat tyder på att daf-16d/f/h isoform specifikt modulerar lipid metabolism i daf-2 mutant maskar. Det är viktigt att använda samma laserkraft för pump- och Stokes-balkar under hela bildsessionen och att inkludera en kontrollgrupp i var sjätte och fjärde konsekvent kvantifiering. Förutom att kvantifiera lipidlagring kan SRS-mikroskopi kopplas till bioortogonala taggar, såsom deuterium, och implementeras för att visualisera dynamiken i lipidinkorporering, syntes och nedbrytning.SRS mikroskopi tillåter multiplexering och kan implementeras för att avbilda flera biomolekyler i olika subcellulära fack. Så kallad hyperspektral SRS-mikroskopi har en stor framtid när det gäller att utforska den metaboliska dynamiken.

Research

JoVE Journal

Biology

Label-Free Imaging of Lipid Storage Dynamics in Caenorhabditis elegans using Stimulated Raman Scattering Microscopy

Label-free in situ Imaging of Lignification in Plant Cell Walls

Label-free in situ Imaging of Lignification in Plant Cell Walls

Label-free På plats Avbildning av Lignification i växternas cellväggar

Meeting growing energy demands safely and efficiently is a pressing global challenge. Therefore, research into biofuels production that seeks to find ...

Differential Imaging of Biological Structures with Doubly-resonant Coherent Anti-stokes Raman Scattering (CARS)

Differential Imaging of Biological Structures with Doubly-resonant Coherent Anti-stokes Raman Scattering CARS

Differential avbildning av biologiska strukturer med dubbeldestillerat-resonant Coherent Anti-Stokes Ramanspridning (CARS)

Coherent Raman imaging techniques have seen a dramatic increase in activity over the past decade due to their promise to enable label-free optical imaging ...

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Microscopy of Early Embryogenesis in Caenorhabditis elegans

Time-lapse Mikroskopi av tidig embryogenesen i Caenorhabditis elegans

Caenorhabditis elegans has often been used as a model system in studies of early developmental processes.  The transparency of the 
embryos, the genetic ...

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basic Caenorhabditis elegans Methods: Synchronization and Observation

Basisk<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Metoder: Synkronisering och miljöövervakning

Research into the molecular and developmental biology of the nematode Caenorhabditis elegans was begun in the early seventies by Sydney Brenner and it has ...

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

Prostaglandin Extraction and Analysis in Caenorhabditis elegans

Prostaglandin Extraktion och analys i<em&gt; Caenorhabditis elegans</em

Caenorhabditis elegans is emerging as a powerful animal model to study the biology of lipids1-9. Prostaglandins are an important class of eicosanoids, ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...

Quantification of Lipid Abundance and Evaluation of Lipid Distribution in Caenorhabditis elegans by Nile Red and Oil Red O Staining

Quantification of Lipid Abundance and Evaluation of Lipid Distribution in Caenorhabditis elegans by Nile Red and Oil Red O Staining

Kvantifiering av Lipid överflöd och utvärdering av Lipid Distribution i Caenorhabditis elegans av Nile rött och olja röd O färgning

Caenorhabditis elegans is an exceptional model organism in which to study lipid metabolism and energy homeostasis. Many of its lipid genes are conserved ...

Measurement of Oxygen Consumption Rates in Intact Caenorhabditis elegans

Measurement of Oxygen Consumption Rates in Intact Caenorhabditis elegans

Mätning av syre förbrukning i intakt Caenorhabditis elegans

Optimal mitochondrial function is critical for healthy cellular activity, particularly in cells that have high energy demands like those in the nervous ...

Oligomerization Dynamics of Cell Surface Receptors in Living Cells by Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy Combined with Number and Brightness Analysis

Oligomerisering dynamik cellytan receptorer i levande celler av total inre reflektion fluorescens mikroskopi kombinerat med antal och ljusstyrka analys

Despite the importance and ubiquity of receptor oligomerization, few methods are applicable for detecting clustering events and measuring the degree of ...

Using Caenorhabditis elegans to Screen for Tissue-Specific Chaperone Interactions

Using Caenorhabditis elegans to Screen for Tissue-Specific Chaperone Interactions

Använda Caenorhabditis elegans för att screena för vävnadsspecifika förkläde interaktioner

Correct folding and assembly of proteins and protein complexes are essential for cellular function. Cells employ quality control pathways that correct, ...