Name: cell-free production of proteoliposomes for functional analysis and antibody development targeting membrane proteins
Uploaded: 2020-09-22T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cell-Free Production of Proteoliposomes for Functional Analysis and Antibody Development Targeting Membrane Proteins at JoVE.com

تم دعم هذا البحث من قبل مشروع المنصة لدعم اكتشاف الأدوية وأبحاث علوم الحياة (أساس دعم اكتشاف الأدوية المبتكرة وأبحاث علوم الحياة (BINDS)) من AMED تحت رقم المنحة JP20am0101077. كما تم دعم هذا العمل جزئيا من قبل JSPS KAKENHI رقم المنحة 20K05709.

1. إعداد بلازميد تعبير pEU
ملاحظة: يجب أن يتضمن بلازميد تعبير pEU كودون البداية ، وإطار قراءة مفتوح لبروتين الغشاء المستهدف ، وكودون الإيقاف في الجزء (انظر الشكل 1). أضف تسلسل (تسلسلات) علامة الكشف / التنقية في الموضع المناسب عند الحاجة. إما هضم إنزيم التقييد أو الا?...

يوفر البروتوكول المقدم طريقة لإنتاج بروتينات الغشاء بمعدل نجاح مرتفع. هذا البروتوكول بسيط وقابل للتكرار بدرجة كبيرة وسهل التوسع. كما أن لديها القدرة على تقليل وقت وتكلفة التجارب التي تستهلك كمية كبيرة من البروتينات الغشائية. تعمل طريقة غسيل الكلى ثنائية الطبقة على تحسين الإنتاجية بمقدا?...

البروتينات الغشائية هي واحدة من أهم أهداف الأدوية في التشخيص والعلاجات. في الواقع ، نصف الأدوية المركبة الصغيرة المستهدفة هي بروتينات غشائية ، مثل المستقبلات المقترنة بالبروتين G (GPCRs) والقنوات الأيونية1. على مر السنين ، كان الباحثون يعملون على دراسات كيميائية حيوية وفيزيائية وهيكلية للبروتينات الغشائية لتوضيح هيكلها ووظيفتها 2,3. كما يتم تطوير الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ضد البروتينات الغشائية بنشاط من أجل تسريع الدراسات الوظيفية والهيكلية وتطوير التطبيقات العلاجية والتشخيصية4،5،6،7،8،9. كل هذه الدراسات تتطلب كمية كبيرة من البروتينات الغشائية عالية الجودة10. على سبيل المثال ، هناك حاجة إلى عدة ملليغرامات من بروتينات الغشاء المنقى ذات التشكل الطبيعي لتطوير الأجسام المضادة. هناك حاجة إلى كمية أكبر بكثير من البروتينات الغشائية عالية النقاء لعلم البلورات بالأشعة السينية. ومع ذلك ، لا يزال الإنتاج الضخم للبروتينات الغشائية يمثل عنق الزجاجة في أبحاث البروتين الغشائي11. تحتوي البروتينات الغشائية على تراكيب معقدة مع حلزونات عبر غشائية واحدة أو أكثر، وتلعب أدوارا مهمة في الاتزان الخلوي. يؤدي الإفراط في التعبير غير المتجانس للبروتينات الغشائية إلى عقبات متعددة مثل تجميع البروتينات الغشائية التي تتراكم بتركيزات محلية عالية أو اضطراب مسارات الإشارات الخلوية. حتى لو كان التعبير ناجحا ، فإن الخطوات اللاحقة لإعداد العينة تواجه صعوبة أيضا. على سبيل المثال ، يتطلب تحضير البروتيوليبوزوم مهارات عالية المستوى وخبرات مهنية في إذابة البروتينات الغشائية وتنقيتها وتثبيتها ، ويكلف الكثير من الجهد والوقت أيضا12,13.
من ناحية أخرى ، ظهرت بعض التقنيات المتقدمة في العقود الأخيرة لإنتاج البروتينات دون استخدام الخلايا الحية14،15،16،17،18. تعيد تقنية تخليق البروتين الخالي من الخلايا تكوين تفاعل الترجمة في أنبوب اختبار. نظرا لعدم وجود قيود على نظام التعبير الخلوي ، فإن الأنظمة الخالية من الخلايا لديها القدرة على تصنيع مجموعة متنوعة من البروتينات التي يصعب التعبير عنها أو إظهار سميتها في الخلايا. يتم خلط مستخلص الخلايا المنقى أو الآلات الانتقالية المعاد تشكيلها مع قالب mRNAs والأحماض الأمينية ومصادر الطاقة ، ويتم تصنيع البروتينات المؤتلفة في وقت قصير. فيما يتعلق بتخليق البروتين الغشائي ، تتم إضافة بعض أنواع السقالات المكونة من الدهون أو البرمائيات ، مثل الجسيمات الشحمية أو البيسيلات أو الأقراص النانوية أو البوليمرات المشتركة إلى التفاعل الخالي من الخلايا19،20،21،22،23،24. تتفاعل بروتينات الغشاء المركبة مع السقالات ويمكن تثبيتها في الماء. تستخدم بروتينات الغشاء المركبة الخالية من الخلايا على نطاق واسع في الدراسات الوظيفية وإنتاج الأجسام المضادة 25،26،27،28،29،30،31.
في هذا البروتوكول ، نصف طريقة فعالة خالية من الخلايا لإنتاج البروتيوليبوزوم باستخدام نظام خال من خلايا القمح والجسيمات الشحمية. نظام تخليق البروتين الخالي من خلايا القمح هو نظام ترجمة قوي في المختبر باستخدام مستخلص من جنين القمح15،32،33. تحتوي جنين القمح على كمية كبيرة من الآلات الانتقالية وعدد قليل من مثبطات الترجمة. الآلية الانتقالية في القمح ، وهي عضو في حقيقيات النوى ، مناسبة لترجمة البروتينات حقيقية النواة ، ولا تتأثر كفاءتها في الترجمة باستخدام الكودون للقالب mRNA. باستخدام نظام خال من خلايا القمح ، قمنا بتجميع مجموعة متنوعة من البروتينات بما في ذلك كينازات البروتين34،35 ، و ubiquitinligases 36 ، وعوامل النسخ37 ، والبروتينات الغشائية ذات معدلات النجاح العالية. لإنتاج البروتين الغشائي ، نضيف ليبوزوم حويصلة دهنية إلى خليط الترجمة مثل سقالة19,38. تتفاعل المجالات الكارهة للماء للبروتين الغشائي مع طبقة ثنائية الدهون ويتم دمجها تلقائيا مع الجسيمات الشحمية. يستخدم الطرد المركزي المتدرج الكثافة لفصل البروتينات البروتينية بدقة عن بروتينات القمح الداخلية ، على الرغم من أن الطرد المركزي المشترك لخليط تفاعل الترجمة يكفي لتنقية بسيطة للبروتين20. تم تصنيع العديد من أنواع البروتينات الغشائية المتكاملة باستخدام نظام خال من خلايا القمح وتطبيقها على مختلف الأبحاث والتطورات25،38،39،40،41،42،43،44. علاوة على ذلك ، قمنا بتطوير "طريقة غسيل الكلى ثنائية الطبقة" للإنتاج على نطاق واسع45،46. في هذه الطريقة ، يتم غمر جهاز غسيل الكلى من نوع الكوب في مخزن تغذية الركيزة ، ويتم تشكيل طبقتين من خليط تفاعل الترجمة ومخزن تغذية الركيزة في الكوب كما هو موضح في الشكل 1. يمكن إجراء الإمداد المستمر للركائز وإزالة المنتج الثانوي بكفاءة في كل من الجزء العلوي والسفلي من خليط التفاعل لفترة طويلة ، مما يؤدي إلى فعالية ترجمة ممتازة (الشكل 2A والشكل 2B)45.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>&#215;3 SDS-PAGE sample buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Containing 10% 2-mercaptoethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-20% gradient SDS-PAGE gel</td>
			<td>ATTO</td>
			<td>E-D520L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Diluted ethanol by ultrapure water.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Takara Bio</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium acetate</td>
			<td>Nakalai tesque</td>
			<td>02406-95</td>
			<td>As this reagent is deliquescent, dissolve all of it in water once opened and store it at -30&#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin Sodium</td>
			<td>Nakalai tesque</td>
			<td>02739-74</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Asolectin Liposome, lyophilized</td>
			<td>CellFree Sciences</td>
			<td>CFS-PLE-ASL</td>
			<td>A vial contains 10 mg of lyophilized liposomes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA standard</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>1000 ng, 500 ng, 250 ng, 125 ng BSA / 10 &#181;L &#215;1 SDS-PAGE sample buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CBB gel stain</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cDNA clone of interest</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Plasmid harboring cDNA clone or synthetic DNA fragment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Nakalai tesque</td>
			<td>08402-84</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cooled incubator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Temperature ranging from 0 to 40 &#176;C or wider.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Creatine kinase</td>
			<td>Roche Diagnostics</td>
			<td>04524977190</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis cup (0.1 mL)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>69570</td>
			<td>Slide-A-Lyzer MINI Dialysis Device, 10K MWCO, 0.1 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis cup (2 mL)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>88404</td>
			<td>Slide-A-Lyzer MINI Dialysis Device, 10K MWCO, 2 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA ladder marker</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>SM0311</td>
			<td>GeneRuler 1 kb DNA Ladder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DpnI</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>FD1703</td>
			<td>FastDigest DpnI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E. coli strain JM109</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrophoresis chamber</td>
			<td>ATTO</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol (99.5%)</td>
			<td>Nakalai tesque</td>
			<td>14713-95</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethidium bromide</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Evaporation flask, 100 mL</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel imager</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel scanner</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>We use document scanner and LED immuninator as a substitute.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB broth</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipids of interest</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro centrifuge</td>
			<td>TOMY</td>
			<td>MX-307</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NTP mix</td>
			<td>CellFree Sciences</td>
			<td>CFS-TSC-NTP</td>
			<td>Mixture of ATP, GTP, CTP, UTP, at 25 mM each</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclease-free 25 mL tube</td>
			<td>IWAKI</td>
			<td>362-025-MYP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nucrease-free plastic tubes</td>
			<td>Watson bio labs</td>
			<td></td>
			<td>Do not autoclave. Use them separately from other experiments.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nucrease-free tips</td>
			<td>Watson bio labs</td>
			<td></td>
			<td>Do not autoclave. Use them separately from other experiments.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR purification kit</td>
			<td>MACHEREY-NAGEL</td>
			<td>740609</td>
			<td>NucleoSpin Gel and PCR Clean-up</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pEU-E01-MCS vector</td>
			<td>CellFree Sciences</td>
			<td>CFS-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol/chloroform/isoamyl alcohol (25:24:1)</td>
			<td>Nippon Gene</td>
			<td>311-90151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasmid prep Midi kit</td>
			<td>MACHEREY-NAGEL</td>
			<td>740410</td>
			<td>NucleoBond Xtra Midi</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer 1</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Custom oligo synthesis</td>
			<td>5&#8217;-CCAAGATATCACTAGnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnn-3&#8217; 
			Gene specific primer, forward. Upper case shows overlap sequence to be added for seamless cloning. Lower case nnnn&#8230;. (20-30 bp) shows gene specific sequence.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer 2</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Custom oligo synthesis</td>
			<td>5&#39;-CCATGGGACGTCGACnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnn-3&#8217; 
			Gene specific primer, reverse. Upper case shows overlap sequence to be added for seamless cloning. Lower case nnnn&#8230;. (20-30 bp) shows gene specific sequence.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer 3</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Custom oligo synthesis</td>
			<td>5&#39;-GTCGACGTCCCATGGTTTTGTATAGAAT-3&#39; 
			Forward primer for vector linearization. Underline works as overlap in seamless cloning.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer 4</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Custom oligo synthesis</td>
			<td>5&#39;-CTAGTGATATCTTGGTGATGTAGATAGGTG-3&#39; 
			Reverse primer for vector linearization. Underline works as overlap in seamless cloning.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer 5</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Custom oligo synthesis</td>
			<td>5&#8217;-CAGTAAGCCAGATGCTACAC-3&#8217; 
			Sequencing primer, forward</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer 6</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Custom oligo synthesis</td>
			<td>5&#8217;- CCTGCGCTGGGAAGATAAAC-3&#8217; 
			Sequencing primer, reverse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein size marker</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1610394</td>
			<td>Precision Plus Protein Standard</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotary evaporator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>seamless cloning enzyme mixture</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>E2611L</td>
			<td>Gibson Assembly Master Mix 
			Other seamless cloning reagents are also avairable.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SP6 RNA Polymerase &#38; RNase Inhibitor</td>
			<td>CellFree Sciences</td>
			<td>CFS-TSC-ENZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Submarine Electrophoresis system</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TAE buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transcription Buffer LM</td>
			<td>CellFree Sciences</td>
			<td>CFS-TSC-5TB-LM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Translation buffer</td>
			<td>CellFree Sciences</td>
			<td>CFS-SUB-SGC</td>
			<td>SUB-AMIX SGC (&#215;40) stock solution (S1, S2, S3, S4). 
			Prepare &#215;1 translation buffer before use by mixing stock S1, S2, S3, S4 stock and ultrapure water.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>We recommend to prepare ultrapure water by using ultrapure water production system every time you do experiment. Do not autoclave. 
			We preparaed ultrapure water by using Milli-Q Reference and Elix10 system. 
			Commercially available nuclease-free water (not DEPC-treated water) can be used as a substitute. Take care of contamination after open the bottle.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic homogenizer</td>
			<td>Branson</td>
			<td>SONIFIER model 450D-Advanced</td>
			<td>Ultrasonic cleaner can be used as a substitute.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV transilluminator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum desiccator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wheat germ extract</td>
			<td>CellFree Sciences</td>
			<td>CFS-WGE-7240</td>
			<td>WEPRO7240</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

cell-free production of proteoliposomes for functional analysis and antibody development targeting membrane proteins

تلعب البروتينات الغشائية أدوارا أساسية في مجموعة متنوعة من العمليات الخلوية وتؤدي وظائف حيوية. البروتينات الغشائية مهمة طبيا في اكتشاف الأدوية لأنها أهداف لأكثر من نصف جميع الأدوية. كانت إحدى العقبات التي تحول دون إجراء الدراسات البيوكيميائية والفيزيائية الحيوية والهيكلية للبروتينات الغشائية وكذلك تطوير الأجسام المضادة هي صعوبة إنتاج كميات كبيرة من البروتين الغشائي عالي الجودة مع التشكل والنشاط الصحيحين. هنا نصف "طريقة غسيل الكلى ثنائية الطبقة" باستخدام نظام خال من خلايا جنين القمح ، والجسيمات الشحمية ، وأكواب غسيل الكلى لتصنيع البروتينات الغشائية بكفاءة وإعداد البروتينات البروتينية المنقاة في وقت قصير بمعدل نجاح مرتفع. يمكن إنتاج البروتينات الغشائية بقدر ما تنتج في عدة ملليغرام ، مثل GPCRs ، والقنوات الأيونية ، والناقلات ، و tetraspanins. تساهم هذه الطريقة الخالية من الخلايا في تقليل الوقت والتكلفة والجهد لإعداد البروتينات عالية الجودة ، وتوفر وسائل مناسبة للتحليل الوظيفي للبروتينات الغشائية ، وفحص أهداف الأدوية ، وتطوير الأجسام المضادة.

باستخدام هذا البروتوكول ، يمكن الحصول على البروتيوليبوسومات المنقاة جزئيا في وقت قصير. النتائج التمثيلية موضحة في الشكل 2 أ. تم تصنيع خمسة وعشرين GPCRs من الفئة A و B و C بنجاح باستخدام طريقة غسيل الكلى ثنائية الطبقة (على نطاق صغير) وتنقيتها جزئيا عن طريق الطرد المركزي والغسيل ا...

Watch this Scientific Journal Video about Cell-Free Production of Proteoliposomes for Functional Analysis and Antibody Development Targeting Membrane Proteins at JoVE.com

Cell-Free Production of Proteoliposomes for Functional Analysis and Antibody Development Targeting Membrane Proteins

يصف هذا البروتوكول طريقة فعالة خالية من الخلايا لإنتاج بروتيوليبوزوم عالي الجودة عن طريق طريقة غسيل الكلى ثنائية الطبقة باستخدام نظام خال من خلايا القمح والليبوزومات. توفر هذه الطريقة وسيلة مناسبة للتحليل الوظيفي للبروتينات الغشائية ، وفحص أهداف الأدوية ، وتطوير الأجسام المضادة.

إنتاج البروتينات الخالية من الخلايا للتحليل الوظيفي وتطوير الأجسام المضادة التي تستهدف البروتينات الغشائية

Membrane proteins play essential roles in a variety of cellular processes and perform vital functions. Membrane proteins are medically important in drug ...

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Bacterial Inner-membrane Display for Screening a Library of Antibody Fragments

العرض الداخلية غشاء البكتيريا لفحص مكتبة من الأجسام المضادة شظايا

Antibodies engineered for intracellular function must not only have affinity for their target antigen, but must also be soluble and correctly folded in ...

Laboratory Scale Production and Purification of a Therapeutic Antibody

مختبر إنتاج مقياس وتنقية من الأجسام المضادة العلاجية

Ensuring the successful production of a therapeutic antibody begins early on in the development process. The first stage is vector expression of the ...

Analysis of Histone Antibody Specificity with Peptide Microarrays

تحليل هيستون الأجسام المضادة خصوصية مع ميكروأرس الببتيد

Post-translational modifications (PTMs) on histone proteins are widely studied for their roles in regulating chromatin structure and gene expression. The ...

Detergent-free Ultrafast Reconstitution of Membrane Proteins into Lipid Bilayers Using Fusogenic Complementary-charged Proteoliposomes.

خالية من المنظفات فائق السرعة إعادة تشكيل بروتينات الغشاء إلى بليرس الدهن باستخدام فوسوجينيك بروتيوليبوسوميس تكميلية مشحونة.

Detergents are indispensable for delivery of membrane proteins into 30-100 nm small unilamellar vesicles, while more complex, larger model lipid bilayers ...

Capture and Identification of RNA-binding Proteins by Using Click Chemistry-assisted RNA-interactome Capture (CARIC) Strategy

Capture and Identification of RNA-binding Proteins by Using Click Chemistry-assisted RNA-interactome Capture CARIC Strategy

التقاط وتحديد البروتينات الحمض النووي الريبي ملزم باستخدام نقرة الكيمياء-وساعدت الجيش الملكي النيبالي-إينتيراكتومي التقاط استراتيجية (كاريك)

A comprehensive identification of RNA-binding proteins (RBPs) is key to understanding the posttranscriptional regulatory network in cells. A widely used ...

A Fluorescence Fluctuation Spectroscopy Assay of Protein-Protein Interactions at Cell-Cell Contacts

تحليل الطيفي تقلب Fluorescence من تفاعلات البروتين البروتين في الخلية جهات الاتصال

A variety of biological processes involves cell-cell interactions, typically mediated by proteins that interact at the interface between neighboring ...

Fluorescent Silver Staining of Proteins in Polyacrylamide Gels

تلوين الفضة الفلورسنت من البروتينات في المواد الهلامية Polyacrylamide

Silver staining is a colorimetric technique widely used to visualize protein bands in polyacrylamide gels following sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide ...

Identification of Functional Protein Regions Through Chimeric Protein Construction

تحديد المناطق الوظيفية البروتين من خلال تشييد البروتين تشيميريك

The goal of this protocol encompasses the design of chimeric proteins in which distinct regions of a protein are replaced by their corresponding sequences ...

Activated Cross-linked Agarose for the Rapid Development of Affinity Chromatography Resins - Antibody Capture as a Case Study

تنشيط عبر مرتبطة Agarose للتنمية السريعة من الراتنجات الكروماتوغرافيا تقارب - التقاط الأجسام المضادة كدراسة حالة

The purification of monoclonal antibodies (mAbs) is commonly achieved by Protein A affinity chromatography, which can account for up to 25% of the overall ...

Characterization of Membrane Transporters by Heterologous Expression in E. coli and Production of Membrane Vesicles

Characterization of Membrane Transporters by Heterologous Expression in E. coli and Production of Membrane Vesicles

توصيف الناقلات غشاء بواسطة تعبير مغاير في كولاي وإنتاج الحويصلات الغشائية

Several methods have been developed to functionally characterize novel membrane transporters. Polyamines are ubiquitous in all organisms, but polyamine ...