Name: cell-free production of proteoliposomes for functional analysis and antibody development targeting membrane proteins
Uploaded: 2020-09-22T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cell-Free Production of Proteoliposomes for Functional Analysis and Antibody Development Targeting Membrane Proteins at JoVE.com

מחקר זה נתמך על ידי פרויקט פלטפורמה לתמיכה בגילוי תרופות ומחקר במדעי החיים (בסיס לתמיכה בגילוי תרופות חדשניות ומחקר במדעי החיים (BINDS)) מ- AMED תחת מענק מספר JP20am0101077. עבודה זו נתמכה חלקית גם על ידי JSPS KAKENHI מענק מספר 20K05709.

1. הכנת פלסמיד ביטוי pEU
הערה: פלסמיד ביטוי pEU צריך לכלול קודון התחלה, מסגרת קריאה פתוחה של חלבון קרום המטרה וקודון עצירה במקטע (ראו איור 1). הוסף רצפי תגי זיהוי/טיהור במיקום המתאים בעת הצורך. עיכול אנזים הגבלה או שיבוט חלק חלים על תת-שבט. כאן אנו מתארים פרוטוקול בש?...

הפרוטוקול המוצג מספק שיטה לייצור חלבוני ממברנה בשיעור הצלחה גבוה. פרוטוקול זה הוא פשוט, ניתן לשחזור מאוד וקל להרחבה. יש לו גם פוטנציאל להפחית את הזמן והעלות של ניסויים הצורכים כמות גדולה של חלבוני ממברנה. שיטת דו-שכבת-דיאליזה משפרת את הפרודוקטיביות פי 4-10 בהשוואה לשיטת דו-שכבתי או שיטת דיאל...

חלבוני ממברנה הם אחד מיעדי התרופות החשובים ביותר באבחון ובטיפול. ואכן, מחצית מהתרופות המורכבות הקטנות הן חלבוני ממברנה, כגון קולטנים מצומדים לחלבון G (GPCRs) ותעלות יונים1. במהלך השנים, חוקרים עבדו על מחקרים ביוכימיים, ביופיזיקליים ומבניים של חלבוני ממברנה כדי להבהיר את המבנה והתפקוד שלהם 2,3. פיתוח נוגדנים חד שבטיים כנגד חלבוני ממברנה מתבצע גם הוא באופן פעיל על מנת להאיץ מחקרים תפקודיים ומבניים ולפתח יישומים טיפוליים ואבחוניים 4,5,6,7,8,9. כל המחקרים הללו דורשים כמות גדולה של חלבוני ממברנהבאיכות גבוהה 10. לדוגמה, כמה מיליגרם של חלבוני ממברנה מטוהרים עם קונפורמציה טבעית נדרשים לפיתוח נוגדנים. כמות גדולה בהרבה של חלבוני ממברנה מטוהרים מאוד נדרשת לקריסטלוגרפיה של קרני רנטגן. עם זאת, ייצור המוני של חלבוני ממברנה נותר צוואר בקבוק במחקר חלבוני ממברנה11. לחלבוני ממברנה יש מבנים מורכבים עם הליקיס טרנס-ממברנה אחד או יותר והם ממלאים תפקידים חשובים בהומאוסטזיס של התא. ביטוי יתר הטרולוגי של חלבוני ממברנה מוביל למכשולים מרובים כגון צבירה של חלבוני ממברנה המצטברים בריכוזים מקומיים גבוהים או הפרעה למסלולי האותות התאיים. גם אם ההבעה מוצלחת, גם הצעדים הבאים של הכנת המדגם נתקלים בקושי. לדוגמה, הכנת פרוטאוליפוזום, דורשת מיומנויות ברמה גבוהה וניסיון מקצועי בסולוביליזציה, טיהור וייצוב של חלבוני ממברנה, ועולה הרבה מאמץ וזמן כמו גם12,13.
מצד שני, כמה טכנולוגיות מתקדמות התפתחו בעשורים האחרונים כדי לייצר חלבונים ללא שימוש בתאים חיים 14,15,16,17,18. טכנולוגיית סינתזת חלבונים ללא תאים יוצרת מחדש תגובת תרגום במבחנה. מאחר שאין מגבלות שיש למערכת הביטוי התאית, למערכות נטולות תאים יש פוטנציאל לסנתז מגוון חלבונים שקשה לבטא או להראות רעילות בתאים. תמצית תאים מטוהרים או מכונות תרגום משוחזרות מעורבבות עם mRNA של תבנית, חומצות אמינו ומקורות אנרגיה, וחלבונים רקומביננטיים מסונתזים תוך זמן קצר. לגבי סינתזת חלבון הממברנה, סוגים מסוימים של פיגומים המורכבים מליפידים או אמפיפילים, כגון ליפוזומים, דו-תאים, ננו-דיסקים או קופולימרים מתווספים לתגובה נטולת התאים 19,20,21,22,23,24. חלבוני ממברנה מסונתזים מתקשרים עם הפיגומים וניתן לייצבם במים. חלבוני ממברנה מסונתזים ללא תאים נמצאים בשימוש נרחב במחקרים פונקציונליים ובייצור נוגדנים 25,26,27,28,29,30,31.
בפרוטוקול זה אנו מתארים שיטה יעילה נטולת תאים לייצור פרוטאוליפוזומים באמצעות מערכת נטולת תאי חיטה וליפוזומים. מערכת סינתזת חלבונים נטולת תאי חיטה היא מערכת תרגום חוץ גופית רבת עוצמה המשתמשת בתמצית מנבט חיטה 15,32,33. נבט חיטה מכיל כמות גדולה של מכונות תרגום ומעט מעכבי תרגום. המנגנון התרגומי בחיטה, חבר באאוקריוטים, מתאים לתרגום חלבונים אאוקריוטים, ויעילות התרגום שלו כמעט ואינה מושפעת משימוש קודון בתבנית mRNA. באמצעות מערכת נטולת תאי חיטה, סינתזנו מגוון חלבונים, כולל חלבונים קינאזות 34,35, יוביקוויטין ליגאזות 36, גורמי שעתוק 37 וחלבוני ממברנה עם אחוזי הצלחה גבוהים. לייצור חלבון ממברנה, אנו מוסיפים ליפוזום שלפוחית שומנים לתערובת התרגום כפיגום19,38. תחומים הידרופוביים של חלבון ממברנה אינטראקציה עם bilayer שומנים והם משולבים באופן ספונטני עם ליפוזום. צנטריפוגה הדרגתית צפיפות משמשת להפרדת פרוטאוליפוזום מחלבוני חיטה אנדוגניים, למרות שצנטריפוגה נפוצה של תערובת תגובת התרגום מספיקה לטיהור פשוט של פרוטאוליפוזום20. סוגים רבים של חלבוני ממברנה אינטגרליים סונתזו באמצעות מערכת נטולת תאי חיטה ויושמו למחקרים ופיתוחים שונים 25,38,39,40,41,42,43,44. יתר על כן, פיתחנו את "שיטת דו-שכבתיות-דיאליזה" לייצור בקנה מידה גדולשל 45,46. בשיטה זו, מכשיר דיאליזה מסוג שקוע במאגר הזנת המצע, ושתי שכבות של תערובת תגובת תרגום ומאגר הזנת מצע נוצרות בכוס כפי שמוצג באיור 1. אספקה רציפה של מצעים והסרה של תוצר הלוואי יכולים להתבצע ביעילות הן בחלק העליון והן בחלק התחתון של תערובת התגובה במשך זמן רב, מה שמוביל ליעילות תרגום מצוינת (איור 2A ואיור 2B)45.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>&#215;3 SDS-PAGE sample buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Containing 10% 2-mercaptoethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-20% gradient SDS-PAGE gel</td>
			<td>ATTO</td>
			<td>E-D520L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Diluted ethanol by ultrapure water.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Takara Bio</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium acetate</td>
			<td>Nakalai tesque</td>
			<td>02406-95</td>
			<td>As this reagent is deliquescent, dissolve all of it in water once opened and store it at -30&#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin Sodium</td>
			<td>Nakalai tesque</td>
			<td>02739-74</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Asolectin Liposome, lyophilized</td>
			<td>CellFree Sciences</td>
			<td>CFS-PLE-ASL</td>
			<td>A vial contains 10 mg of lyophilized liposomes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA standard</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>1000 ng, 500 ng, 250 ng, 125 ng BSA / 10 &#181;L &#215;1 SDS-PAGE sample buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CBB gel stain</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cDNA clone of interest</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Plasmid harboring cDNA clone or synthetic DNA fragment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Nakalai tesque</td>
			<td>08402-84</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cooled incubator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Temperature ranging from 0 to 40 &#176;C or wider.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Creatine kinase</td>
			<td>Roche Diagnostics</td>
			<td>04524977190</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis cup (0.1 mL)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>69570</td>
			<td>Slide-A-Lyzer MINI Dialysis Device, 10K MWCO, 0.1 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis cup (2 mL)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>88404</td>
			<td>Slide-A-Lyzer MINI Dialysis Device, 10K MWCO, 2 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA ladder marker</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>SM0311</td>
			<td>GeneRuler 1 kb DNA Ladder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DpnI</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>FD1703</td>
			<td>FastDigest DpnI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E. coli strain JM109</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrophoresis chamber</td>
			<td>ATTO</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol (99.5%)</td>
			<td>Nakalai tesque</td>
			<td>14713-95</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethidium bromide</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Evaporation flask, 100 mL</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel imager</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel scanner</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>We use document scanner and LED immuninator as a substitute.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB broth</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipids of interest</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro centrifuge</td>
			<td>TOMY</td>
			<td>MX-307</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NTP mix</td>
			<td>CellFree Sciences</td>
			<td>CFS-TSC-NTP</td>
			<td>Mixture of ATP, GTP, CTP, UTP, at 25 mM each</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclease-free 25 mL tube</td>
			<td>IWAKI</td>
			<td>362-025-MYP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nucrease-free plastic tubes</td>
			<td>Watson bio labs</td>
			<td></td>
			<td>Do not autoclave. Use them separately from other experiments.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nucrease-free tips</td>
			<td>Watson bio labs</td>
			<td></td>
			<td>Do not autoclave. Use them separately from other experiments.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR purification kit</td>
			<td>MACHEREY-NAGEL</td>
			<td>740609</td>
			<td>NucleoSpin Gel and PCR Clean-up</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pEU-E01-MCS vector</td>
			<td>CellFree Sciences</td>
			<td>CFS-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol/chloroform/isoamyl alcohol (25:24:1)</td>
			<td>Nippon Gene</td>
			<td>311-90151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasmid prep Midi kit</td>
			<td>MACHEREY-NAGEL</td>
			<td>740410</td>
			<td>NucleoBond Xtra Midi</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer 1</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Custom oligo synthesis</td>
			<td>5&#8217;-CCAAGATATCACTAGnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnn-3&#8217; 
			Gene specific primer, forward. Upper case shows overlap sequence to be added for seamless cloning. Lower case nnnn&#8230;. (20-30 bp) shows gene specific sequence.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer 2</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Custom oligo synthesis</td>
			<td>5&#39;-CCATGGGACGTCGACnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnn-3&#8217; 
			Gene specific primer, reverse. Upper case shows overlap sequence to be added for seamless cloning. Lower case nnnn&#8230;. (20-30 bp) shows gene specific sequence.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer 3</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Custom oligo synthesis</td>
			<td>5&#39;-GTCGACGTCCCATGGTTTTGTATAGAAT-3&#39; 
			Forward primer for vector linearization. Underline works as overlap in seamless cloning.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer 4</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Custom oligo synthesis</td>
			<td>5&#39;-CTAGTGATATCTTGGTGATGTAGATAGGTG-3&#39; 
			Reverse primer for vector linearization. Underline works as overlap in seamless cloning.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer 5</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Custom oligo synthesis</td>
			<td>5&#8217;-CAGTAAGCCAGATGCTACAC-3&#8217; 
			Sequencing primer, forward</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer 6</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Custom oligo synthesis</td>
			<td>5&#8217;- CCTGCGCTGGGAAGATAAAC-3&#8217; 
			Sequencing primer, reverse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein size marker</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1610394</td>
			<td>Precision Plus Protein Standard</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotary evaporator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>seamless cloning enzyme mixture</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>E2611L</td>
			<td>Gibson Assembly Master Mix 
			Other seamless cloning reagents are also avairable.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SP6 RNA Polymerase &#38; RNase Inhibitor</td>
			<td>CellFree Sciences</td>
			<td>CFS-TSC-ENZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Submarine Electrophoresis system</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TAE buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transcription Buffer LM</td>
			<td>CellFree Sciences</td>
			<td>CFS-TSC-5TB-LM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Translation buffer</td>
			<td>CellFree Sciences</td>
			<td>CFS-SUB-SGC</td>
			<td>SUB-AMIX SGC (&#215;40) stock solution (S1, S2, S3, S4). 
			Prepare &#215;1 translation buffer before use by mixing stock S1, S2, S3, S4 stock and ultrapure water.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>We recommend to prepare ultrapure water by using ultrapure water production system every time you do experiment. Do not autoclave. 
			We preparaed ultrapure water by using Milli-Q Reference and Elix10 system. 
			Commercially available nuclease-free water (not DEPC-treated water) can be used as a substitute. Take care of contamination after open the bottle.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic homogenizer</td>
			<td>Branson</td>
			<td>SONIFIER model 450D-Advanced</td>
			<td>Ultrasonic cleaner can be used as a substitute.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV transilluminator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum desiccator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wheat germ extract</td>
			<td>CellFree Sciences</td>
			<td>CFS-WGE-7240</td>
			<td>WEPRO7240</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

cell-free production of proteoliposomes for functional analysis and antibody development targeting membrane proteins

חלבוני ממברנה ממלאים תפקידים חיוניים במגוון תהליכים תאיים ומבצעים תפקידים חיוניים. חלבוני ממברנה חשובים מבחינה רפואית בגילוי תרופות מכיוון שהם המטרות של יותר ממחצית מכל התרופות. מכשול לביצוע מחקרים ביוכימיים, ביופיזיקליים ומבניים של חלבוני ממברנה, כמו גם פיתוח נוגדנים, היה הקושי לייצר כמויות גדולות של חלבון ממברנה באיכות גבוהה עם קונפורמציה ופעילות נכונה. כאן אנו מתארים "שיטת דיאליזה דו-שכבתית" המשתמשת במערכת נטולת תאי נבט חיטה, ליפוזומים וכוסות דיאליזה כדי לסנתז ביעילות חלבוני ממברנה ולהכין פרוטאוליפוזומים מטוהרים בזמן קצר עם אחוזי הצלחה גבוהים. חלבוני ממברנה יכולים להיות מיוצרים עד כמה מיליגרם, כגון GPCRs, תעלות יונים, טרנספורטרים וטטרספאנינים. שיטה נטולת תאים זו תורמת להפחתת הזמן, העלות והמאמץ להכנת פרוטאוליפוזומים באיכות גבוהה, ומספקת אמצעים מתאימים לניתוח פונקציונלי של חלבוני ממברנה, סינון מטרות תרופות ופיתוח נוגדנים.

באמצעות פרוטוקול זה ניתן להשיג פרוטאוליפוזומים מטוהרים חלקית תוך זמן קצר. תוצאות מייצגות מוצגות באיור 2A. עשרים וחמישה GPCRs של Class A, B ו- C סונתזו בהצלחה בשיטת הדיאליזה הדו-שכבתית (בקנה מידה קטן) וטוהרו חלקית על ידי צנטריפוגה ושטיפת חיץ. למרות כמות חלבונים מסונתזים משתנה בהתאם ?...

Watch this Scientific Journal Video about Cell-Free Production of Proteoliposomes for Functional Analysis and Antibody Development Targeting Membrane Proteins at JoVE.com

Cell-Free Production of Proteoliposomes for Functional Analysis and Antibody Development Targeting Membrane Proteins

פרוטוקול זה מתאר שיטה יעילה ללא תאים לייצור פרוטאוליפוזום באיכות גבוהה בשיטת דו-שכבתית-דיאליזה באמצעות מערכת נטולת תאי חיטה וליפוזומים. שיטה זו מספקת אמצעים מתאימים לניתוח פונקציונלי של חלבוני ממברנה, סינון מטרות תרופות ופיתוח נוגדנים.

ייצור ללא תאים של פרוטאוליפוזומים לניתוח פונקציונלי ופיתוח נוגדנים המכוונים לחלבוני ממברנה

Membrane proteins play essential roles in a variety of cellular processes and perform vital functions. Membrane proteins are medically important in drug ...

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Bacterial Inner-membrane Display for Screening a Library of Antibody Fragments

Inner-קרום חיידקי תצוגה להקרנת ספרייה של שברי נוגדן

Antibodies engineered for intracellular function must not only have affinity for their target antigen, but must also be soluble and correctly folded in ...

Laboratory Scale Production and Purification of a Therapeutic Antibody

הפקה בקנה מידה מעבדתי וטיהור של נוגדן רפואי

Ensuring the successful production of a therapeutic antibody begins early on in the development process. The first stage is vector expression of the ...

Analysis of Histone Antibody Specificity with Peptide Microarrays

ניתוח של היסטון נוגדנים היסטון עם Microprays פפטיד

Post-translational modifications (PTMs) on histone proteins are widely studied for their roles in regulating chromatin structure and gene expression. The ...

Detergent-free Ultrafast Reconstitution of Membrane Proteins into Lipid Bilayers Using Fusogenic Complementary-charged Proteoliposomes.

ללא דטרגנט מרביים להתחדשות ומבנה של קרום חלבונים לתוך השומנים Bilayers באמצעות Fusogenic משלימים טעונה Proteoliposomes.

Detergents are indispensable for delivery of membrane proteins into 30-100 nm small unilamellar vesicles, while more complex, larger model lipid bilayers ...

Capture and Identification of RNA-binding Proteins by Using Click Chemistry-assisted RNA-interactome Capture (CARIC) Strategy

Capture and Identification of RNA-binding Proteins by Using Click Chemistry-assisted RNA-interactome Capture CARIC Strategy

לכידת וזיהוי של RNA-מחייב חלבונים באמצעות לחץ בסיוע כימיה RNA-interactome ללכוד אסטרטגיה (CARIC)

A comprehensive identification of RNA-binding proteins (RBPs) is key to understanding the posttranscriptional regulatory network in cells. A widely used ...

A Fluorescence Fluctuation Spectroscopy Assay of Protein-Protein Interactions at Cell-Cell Contacts

Assay ספקטרוסקופיה התנודות זריחה של אינטראקציות חלבון-חלבון באנשי קשר תא-תא

A variety of biological processes involves cell-cell interactions, typically mediated by proteins that interact at the interface between neighboring ...

Fluorescent Silver Staining of Proteins in Polyacrylamide Gels

צביעת כסף פלורסנט של חלבונים בג'לים לזיהוי

Silver staining is a colorimetric technique widely used to visualize protein bands in polyacrylamide gels following sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide ...

Identification of Functional Protein Regions Through Chimeric Protein Construction

זיהוי של חלבון פונקציונלי אזורים באמצעות חלבון Chimeric בנייה

The goal of this protocol encompasses the design of chimeric proteins in which distinct regions of a protein are replaced by their corresponding sequences ...

Activated Cross-linked Agarose for the Rapid Development of Affinity Chromatography Resins - Antibody Capture as a Case Study

הופעל מקושרת צולבת מקושרת לפיתוח מהיר של שרפים כרומטוגרפיה של אהדה-לכידת נוגדן כמחקר מקרה

The purification of monoclonal antibodies (mAbs) is commonly achieved by Protein A affinity chromatography, which can account for up to 25% of the overall ...

Characterization of Membrane Transporters by Heterologous Expression in E. coli and Production of Membrane Vesicles

Characterization of Membrane Transporters by Heterologous Expression in E. coli and Production of Membrane Vesicles

אפיון מובילי הממברנה על ידי ביטוי הטרוולוגי ב -E. coli וייצור ממברנה ושלפוחיות

Several methods have been developed to functionally characterize novel membrane transporters. Polyamines are ubiquitous in all organisms, but polyamine ...