Name: cell-free production of proteoliposomes for functional analysis and antibody development targeting membrane proteins
Uploaded: 2020-09-22T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Cell-Free Production of Proteoliposomes for Functional Analysis and Antibody Development Targeting Membrane Proteins at JoVE.com

इस शोध को ग्रांट नंबर जेपी 20 एम 0101077 के तहत एएमईडी से सपोर्टिंग ड्रग डिस्कवरी एंड लाइफ साइंस रिसर्च (आधार) सपोर्टिंग ड्रग डिस्कवरी एंड लाइफ साइंस रिसर्च (आधार) द्वारा समर्थित किया गया था। इस काम को आंशिक रूप से JSPS KAKENHI अनुदान संख्या 20K05709 द्वारा भी समर्थित किया गया था।

1. पीईयू अभिव्यक्ति प्लास्मिड की तैयारी
नोट: पीईयू अभिव्यक्ति प्लास्मिड में स्टार्ट कोडन, लक्ष्य झिल्ली प्रोटीन का ओपन रीडिंग फ्रेम और टुकड़े में स्टॉप कोडन शामिल होना चाहिए ( चित्रा ...

प्रस्तुत प्रोटोकॉल उच्च सफलता दर पर झिल्ली प्रोटीन के उत्पादन की एक विधि प्रदान करता है। यह प्रोटोकॉल सरल, अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है, और स्केल करने में आसान है। इसमें उन प्रयोगों के समय...

मेम्ब्रेन प्रोटीन निदान और चिकित्सीय में सबसे महत्वपूर्ण दवा लक्ष्यों में से एक हैं। दरअसल, छोटे यौगिक दवाओं के लक्ष्य का आधा झिल्ली प्रोटीन है, जैसे जी-प्रोटीन-युग्मित रिसेप्टर्स (जीपीसीआर) और आयन चैनल1। वर्षों से, शोधकर्ता उनकी संरचना और कार्य 2,3 को स्पष्ट करने के लिए झिल्ली प्रोटीन के जैव रासायनिक, बायोफिज़िकल और संरचनात्मक अध्ययन पर काम कर रहे हैं। झिल्ली प्रोटीन के खिलाफ मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का विकास भी कार्यात्मक और संरचनात्मक अध्ययनों में तेजी लाने और चिकित्सीय और नैदानिक अनुप्रयोगों को विकसित करने के लिए सक्रिय रूप से किया जाता है। इन सभी अध्ययनों में उच्च गुणवत्ता वाले झिल्ली प्रोटीन की एक बड़ी मात्रा की आवश्यकता होतीहै। उदाहरण के लिए, एंटीबॉडी विकास के लिए प्राकृतिक रचना के साथ शुद्ध झिल्ली प्रोटीन के कई मिलीग्राम की आवश्यकता होती है। एक्स-रे क्रिस्टलोग्राफी के लिए अत्यधिक शुद्ध झिल्ली प्रोटीन की बहुत बड़ी मात्रा की आवश्यकता होती है। हालांकि, झिल्ली प्रोटीन का बड़े पैमाने पर उत्पादन झिल्लीप्रोटीन अनुसंधान में एक बाधा बना हुआ है। झिल्ली प्रोटीन में एक या अधिक ट्रांसमेम्ब्रेन हेलिकॉप्टरों के साथ जटिल संरचनाएं होती हैं और सेल होमियोस्टैसिस में महत्वपूर्ण भूमिका निभाती हैं। झिल्ली प्रोटीन के हेटरोलॉगस ओवरएक्प्रेशन से कई बाधाएं होती हैं जैसे कि झिल्ली प्रोटीन का एकत्रीकरण जो उच्च स्थानीय सांद्रता या सेलुलर सिग्नल मार्गों की गड़बड़ी पर जमा होता है। यहां तक कि अगर अभिव्यक्ति सफल होती है, तो नमूना तैयार करने के बाद के चरणों को भी कठिनाई का सामना करना पड़ता है। उदाहरण के लिए, प्रोटिओलिपोसोम की तैयारी के लिए झिल्ली प्रोटीन के घुलनशीलता, शुद्धिकरण और स्थिरीकरण में उच्च-स्तरीय कौशल और पेशेवर अनुभवों की आवश्यकता होती है, औरइसमें बहुत प्रयास और समय लगता है।
दूसरी ओर, हाल के दशकों में जीवित कोशिकाओं के उपयोग के बिना प्रोटीन का उत्पादन करने के लिए कुछ उन्नत प्रौद्योगिकियां उभरी हैं 14,15,16,17,18। सेल-मुक्त प्रोटीन संश्लेषण तकनीक एक टेस्ट ट्यूब में अनुवाद प्रतिक्रिया का पुनर्गठन करती है। चूंकि सेलुलर अभिव्यक्ति प्रणाली की कोई सीमा नहीं है, इसलिए सेल-मुक्त प्रणालियों में विभिन्न प्रकार के प्रोटीनों को संश्लेषित करने की क्षमता होती है जो कोशिकाओं में विषाक्तता को व्यक्त करना या दिखाना मुश्किल होता है। शुद्ध सेल अर्क या पुनर्गठित ट्रांसलेशनल मशीनरी को टेम्पलेट एमआरएनए, अमीनो एसिड और ऊर्जा स्रोतों के साथ मिलाया जाता है, और पुनः संयोजक प्रोटीन को थोड़े समय में संश्लेषित किया जाता है। झिल्ली प्रोटीन संश्लेषण के संबंध में, लिपिड या एम्फीफाइल से बने कुछ प्रकार के मचान, जैसे लिपोसोम, बिसेल, नैनोडिस्क, या कॉपोलिमर को सेल-मुक्त प्रतिक्रिया 19,20,21,22,23,24 में जोड़ा जाता है। संश्लेषित झिल्ली प्रोटीन मचानों के साथ बातचीत करते हैं और पानी में स्थिर हो सकते हैं। सेल-मुक्त संश्लेषित झिल्ली प्रोटीन का व्यापक रूप से कार्यात्मक अध्ययन और एंटीबॉडी उत्पादन में उपयोग किया जाता है 25,26,27,28,29,30,31।
इस प्रोटोकॉल में, हम गेहूं सेल-मुक्त प्रणाली और लिपोसोम का उपयोग करके प्रोटिओलिपोसोम उत्पादन की एक कुशल सेल-मुक्त विधि का वर्णन करते हैं। गेहूं कोशिका-मुक्त प्रोटीन संश्लेषण प्रणाली गेहूं के रोगाणु 15,32,33 से अर्क का उपयोग करके एक शक्तिशाली इन विट्रो अनुवाद प्रणाली है। गेहूं के रोगाणु में बड़ी मात्रा में ट्रांसलेशनल मशीनरी और कुछ अनुवाद अवरोधक होते हैं। गेहूं में ट्रांसलेशनल मशीनरी, यूकेरियोट्स का एक सदस्य, यूकेरियोटिक प्रोटीन का अनुवाद करने के लिए उपयुक्त है, और इसकी अनुवाद दक्षता शायद ही टेम्पलेट एमआरएनए के कोडन उपयोग से प्रभावित होती है। गेहूं कोशिका-मुक्त प्रणाली का उपयोग करते हुए, हमने प्रोटीन किनेसेस34,35, यूबिकिटिन लिगेस 36, प्रतिलेखन कारक37 और उच्च सफलता दर वाले झिल्ली प्रोटीन सहित विभिन्न प्रकार केप्रोटीनों को संश्लेषित किया है। झिल्ली प्रोटीन उत्पादन के लिए, हम पाड़19,38 के रूप में अनुवाद मिश्रण में लिपिड पुटिका लिपोसोम जोड़ते हैं। झिल्ली प्रोटीन के हाइड्रोफोबिक डोमेन लिपिड बाइलेयर के साथ बातचीत करते हैं और अनायास लिपोसोम के साथ एकीकृत होते हैं। घनत्व प्रवणता सेंट्रीफ्यूजेशन का उपयोग अंतर्जात गेहूं प्रोटीन से प्रोटिओलिपोसोम को सख्ती से अलग करने के लिए किया जाता है, भले ही अनुवाद प्रतिक्रिया मिश्रण का एक सामान्य सेंट्रीफ्यूजेशन प्रोटिओलिपोसोम20 के सरल शुद्धिकरण के लिए पर्याप्त हो। गेहूं कोशिका-मुक्त प्रणाली का उपयोग करके कई प्रकार के अभिन्न झिल्ली प्रोटीन को संश्लेषित किया गया है और विभिन्न शोधों और विकास के लिए लागू कियागया है 25,38,39,40,41,42,43,44। इसके अलावा, हमने बड़े पैमाने पर उत्पादन45,46 के लिए "बाइलेयर-डायलिसिस विधि" विकसित की। इस विधि में, कप-प्रकार डायलिसिस डिवाइस को सब्सट्रेट फीडिंग बफर में डुबोया जाता है, और कप में अनुवाद प्रतिक्रिया मिश्रण और सब्सट्रेट फीडिंग बफर की दो परतें बनती हैं जैसा कि चित्र 1 में दिखाया गया है। सब्सट्रेट्स की निरंतर आपूर्ति और उपोत्पाद को हटाने को लंबे समय तक प्रतिक्रिया मिश्रण के शीर्ष और निचले दोनों पर कुशलतापूर्वक आयोजित किया जा सकता है, जिससे उत्कृष्ट अनुवाद प्रभावकारिता (चित्रा 2 ए और चित्रा 2 बी) 45 होती है।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>&#215;3 SDS-PAGE sample buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Containing 10% 2-mercaptoethanol</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-20% gradient SDS-PAGE gel</td>
			<td>ATTO</td>
			<td>E-D520L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Diluted ethanol by ultrapure water.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>Takara Bio</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium acetate</td>
			<td>Nakalai tesque</td>
			<td>02406-95</td>
			<td>As this reagent is deliquescent, dissolve all of it in water once opened and store it at -30&#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ampicillin Sodium</td>
			<td>Nakalai tesque</td>
			<td>02739-74</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Asolectin Liposome, lyophilized</td>
			<td>CellFree Sciences</td>
			<td>CFS-PLE-ASL</td>
			<td>A vial contains 10 mg of lyophilized liposomes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA standard</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>1000 ng, 500 ng, 250 ng, 125 ng BSA / 10 &#181;L &#215;1 SDS-PAGE sample buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CBB gel stain</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cDNA clone of interest</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Plasmid harboring cDNA clone or synthetic DNA fragment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform</td>
			<td>Nakalai tesque</td>
			<td>08402-84</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cooled incubator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Temperature ranging from 0 to 40 &#176;C or wider.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Creatine kinase</td>
			<td>Roche Diagnostics</td>
			<td>04524977190</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis cup (0.1 mL)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>69570</td>
			<td>Slide-A-Lyzer MINI Dialysis Device, 10K MWCO, 0.1 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dialysis cup (2 mL)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>88404</td>
			<td>Slide-A-Lyzer MINI Dialysis Device, 10K MWCO, 2 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA ladder marker</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>SM0311</td>
			<td>GeneRuler 1 kb DNA Ladder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DpnI</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>FD1703</td>
			<td>FastDigest DpnI</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>E. coli strain JM109</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrophoresis chamber</td>
			<td>ATTO</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol (99.5%)</td>
			<td>Nakalai tesque</td>
			<td>14713-95</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethidium bromide</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Evaporation flask, 100 mL</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel imager</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gel scanner</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>We use document scanner and LED immuninator as a substitute.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LB broth</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipids of interest</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro centrifuge</td>
			<td>TOMY</td>
			<td>MX-307</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NTP mix</td>
			<td>CellFree Sciences</td>
			<td>CFS-TSC-NTP</td>
			<td>Mixture of ATP, GTP, CTP, UTP, at 25 mM each</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nuclease-free 25 mL tube</td>
			<td>IWAKI</td>
			<td>362-025-MYP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nucrease-free plastic tubes</td>
			<td>Watson bio labs</td>
			<td></td>
			<td>Do not autoclave. Use them separately from other experiments.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nucrease-free tips</td>
			<td>Watson bio labs</td>
			<td></td>
			<td>Do not autoclave. Use them separately from other experiments.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR purification kit</td>
			<td>MACHEREY-NAGEL</td>
			<td>740609</td>
			<td>NucleoSpin Gel and PCR Clean-up</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pEU-E01-MCS vector</td>
			<td>CellFree Sciences</td>
			<td>CFS-11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol/chloroform/isoamyl alcohol (25:24:1)</td>
			<td>Nippon Gene</td>
			<td>311-90151</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasmid prep Midi kit</td>
			<td>MACHEREY-NAGEL</td>
			<td>740410</td>
			<td>NucleoBond Xtra Midi</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer 1</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Custom oligo synthesis</td>
			<td>5&#8217;-CCAAGATATCACTAGnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnn-3&#8217; 
			Gene specific primer, forward. Upper case shows overlap sequence to be added for seamless cloning. Lower case nnnn&#8230;. (20-30 bp) shows gene specific sequence.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer 2</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Custom oligo synthesis</td>
			<td>5&#39;-CCATGGGACGTCGACnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnnn-3&#8217; 
			Gene specific primer, reverse. Upper case shows overlap sequence to be added for seamless cloning. Lower case nnnn&#8230;. (20-30 bp) shows gene specific sequence.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer 3</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Custom oligo synthesis</td>
			<td>5&#39;-GTCGACGTCCCATGGTTTTGTATAGAAT-3&#39; 
			Forward primer for vector linearization. Underline works as overlap in seamless cloning.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer 4</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Custom oligo synthesis</td>
			<td>5&#39;-CTAGTGATATCTTGGTGATGTAGATAGGTG-3&#39; 
			Reverse primer for vector linearization. Underline works as overlap in seamless cloning.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer 5</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Custom oligo synthesis</td>
			<td>5&#8217;-CAGTAAGCCAGATGCTACAC-3&#8217; 
			Sequencing primer, forward</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer 6</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Custom oligo synthesis</td>
			<td>5&#8217;- CCTGCGCTGGGAAGATAAAC-3&#8217; 
			Sequencing primer, reverse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein size marker</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1610394</td>
			<td>Precision Plus Protein Standard</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rotary evaporator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>seamless cloning enzyme mixture</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>E2611L</td>
			<td>Gibson Assembly Master Mix 
			Other seamless cloning reagents are also avairable.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SP6 RNA Polymerase &#38; RNase Inhibitor</td>
			<td>CellFree Sciences</td>
			<td>CFS-TSC-ENZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Submarine Electrophoresis system</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TAE buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transcription Buffer LM</td>
			<td>CellFree Sciences</td>
			<td>CFS-TSC-5TB-LM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Translation buffer</td>
			<td>CellFree Sciences</td>
			<td>CFS-SUB-SGC</td>
			<td>SUB-AMIX SGC (&#215;40) stock solution (S1, S2, S3, S4). 
			Prepare &#215;1 translation buffer before use by mixing stock S1, S2, S3, S4 stock and ultrapure water.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrapure water</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>We recommend to prepare ultrapure water by using ultrapure water production system every time you do experiment. Do not autoclave. 
			We preparaed ultrapure water by using Milli-Q Reference and Elix10 system. 
			Commercially available nuclease-free water (not DEPC-treated water) can be used as a substitute. Take care of contamination after open the bottle.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic homogenizer</td>
			<td>Branson</td>
			<td>SONIFIER model 450D-Advanced</td>
			<td>Ultrasonic cleaner can be used as a substitute.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV transilluminator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum desiccator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wheat germ extract</td>
			<td>CellFree Sciences</td>
			<td>CFS-WGE-7240</td>
			<td>WEPRO7240</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

cell-free production of proteoliposomes for functional analysis and antibody development targeting membrane proteins

झिल्ली प्रोटीन विभिन्न सेलुलर प्रक्रियाओं में आवश्यक भूमिका निभाते हैं और महत्वपूर्ण कार्य करते हैं। दवा की खोज में झिल्ली प्रोटीन चिकित्सकीय रूप से महत्वपूर्ण हैं क्योंकि वे सभी दवाओं के आधे से अधिक के लक्ष्य हैं। झिल्ली प्रोटीन के जैव रासायनिक, बायोफिज़िकल और संरचनात्मक अध्ययन के साथ-साथ एंटीबॉडी विकास के संचालन के लिए एक बाधा सही रचना और गतिविधि के साथ उच्च गुणवत्ता वाले झिल्ली प्रोटीन की बड़ी मात्रा का उत्पादन करने में कठिनाई रही है। यहां हम गेहूं के रोगाणु कोशिका-मुक्त प्रणाली, लिपोसोम और डायलिसिस कप का उपयोग करके एक "बाइलेयर-डायलिसिस विधि" का वर्णन करते हैं ताकि झिल्ली प्रोटीन को कुशलतापूर्वक संश्लेषित किया जा सके और उच्च सफलता दर के साथ कम समय में शुद्ध प्रोटियोलिपोसोम तैयार किया जा सके। झिल्ली प्रोटीन का उत्पादन कई मिलीग्राम में किया जा सकता है, जैसे जीपीसीआर, आयन चैनल, ट्रांसपोर्टर और टेट्रास्पैनिन। यह सेल-मुक्त विधि उच्च गुणवत्ता वाले प्रोटियोलिपोसोम तैयार करने के लिए समय, लागत और प्रयास को कम करने में योगदान देती है, और झिल्ली प्रोटीन, दवा लक्ष्य स्क्रीनिंग और एंटीबॉडी विकास के कार्यात्मक विश्लेषण के लिए उपयुक्त साधन प्रदान करती है।

इस प्रोटोकॉल का उपयोग करके, आंशिक रूप से शुद्ध प्रोटियोलिपोसोम कम समय में प्राप्त किए जा सकते हैं। प्रतिनिधि परिणाम चित्रा 2 ए में दिखाए गए हैं। क्लास ए, बी और सी के पच्चीस जीपीसीआर को बाइलेय?...

Watch this Scientific Journal Video about Cell-Free Production of Proteoliposomes for Functional Analysis and Antibody Development Targeting Membrane Proteins at JoVE.com

Cell-Free Production of Proteoliposomes for Functional Analysis and Antibody Development Targeting Membrane Proteins

यह प्रोटोकॉल गेहूं सेल-मुक्त प्रणाली और लिपोसोम का उपयोग करके बाइलेयर-डायलिसिस विधि द्वारा उच्च गुणवत्ता वाले प्रोटियोलिपोसोम के उत्पादन के लिए एक कुशल सेल-मुक्त विधि का वर्णन करता है। यह विधि झिल्ली प्रोटीन, दवा लक्ष्य स्क्रीनिंग और एंटीबॉडी विकास के कार्यात्मक विश्लेषण के लिए उपयुक्त साधन प्रदान करती है।

झिल्ली प्रोटीन को लक्षित करने वाले कार्यात्मक विश्लेषण और एंटीबॉडी विकास के लिए प्रोटियोलिपोसोम का सेल-मुक्त उत्पादन

Membrane proteins play essential roles in a variety of cellular processes and perform vital functions. Membrane proteins are medically important in drug ...

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Bacterial Inner-membrane Display for Screening a Library of Antibody Fragments

एंटीबॉडी टुकड़े की एक लाइब्रेरी स्क्रीनिंग के लिए बैक्टीरियल इनर-झिल्ली प्रदर्शन

Antibodies engineered for intracellular function must not only have affinity for their target antigen, but must also be soluble and correctly folded in ...

Laboratory Scale Production and Purification of a Therapeutic Antibody

प्रयोगशाला पैमाने पर उत्पादन और एक चिकित्सीय एंटीबॉडी की शुद्धि

Ensuring the successful production of a therapeutic antibody begins early on in the development process. The first stage is vector expression of the ...

Analysis of Histone Antibody Specificity with Peptide Microarrays

पेप्टाइड माइक्रोरायर्स के साथ हिस्टोन एंटीबॉडी विशिष्टता का विश्लेषण

Post-translational modifications (PTMs) on histone proteins are widely studied for their roles in regulating chromatin structure and gene expression. The ...

Detergent-free Ultrafast Reconstitution of Membrane Proteins into Lipid Bilayers Using Fusogenic Complementary-charged Proteoliposomes.

डिटर्जेंट-मुक्त Ultrafast Bilayers में झिल्ली प्रोटीन का पुनर्गठन Fusogenic पूरक का उपयोग कर Proteoliposomes आरोप लगाया ।

Detergents are indispensable for delivery of membrane proteins into 30-100 nm small unilamellar vesicles, while more complex, larger model lipid bilayers ...

Capture and Identification of RNA-binding Proteins by Using Click Chemistry-assisted RNA-interactome Capture (CARIC) Strategy

Capture and Identification of RNA-binding Proteins by Using Click Chemistry-assisted RNA-interactome Capture CARIC Strategy

पर कब्जा और क्लिक करें रसायन-सहायता प्राप्त आरएनए-interactome कैप्चर (CARIC) रणनीति का उपयोग करके आरएनए बाइंडिंग प्रोटीन की पहचान

A comprehensive identification of RNA-binding proteins (RBPs) is key to understanding the posttranscriptional regulatory network in cells. A widely used ...

A Fluorescence Fluctuation Spectroscopy Assay of Protein-Protein Interactions at Cell-Cell Contacts

सेल-सेल संपर्कों में प्रोटीन-प्रोटीन इंटरैक्शन की एक प्रतिदीप्ति अस्थिरता स्पेक्ट्रोस्कोपी परख

A variety of biological processes involves cell-cell interactions, typically mediated by proteins that interact at the interface between neighboring ...

Fluorescent Silver Staining of Proteins in Polyacrylamide Gels

Polyacrylamide जैल में फ्लोरोसेंट चांदी के प्रोटीन के धुंधला

Silver staining is a colorimetric technique widely used to visualize protein bands in polyacrylamide gels following sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide ...

Identification of Functional Protein Regions Through Chimeric Protein Construction

Chimeric प्रोटीन निर्माण के माध्यम से कार्यात्मक प्रोटीन क्षेत्रों की पहचान

The goal of this protocol encompasses the design of chimeric proteins in which distinct regions of a protein are replaced by their corresponding sequences ...

Activated Cross-linked Agarose for the Rapid Development of Affinity Chromatography Resins - Antibody Capture as a Case Study

एफ़िनिटी क्रोमैटोग्राफी रेजिन के तीव्र विकास के लिए सक्रिय क्रॉस-लिंक्ड अगारोस - एक केस स्टडी के रूप में एंटीबॉडी कैप्चर

The purification of monoclonal antibodies (mAbs) is commonly achieved by Protein A affinity chromatography, which can account for up to 25% of the overall ...

Characterization of Membrane Transporters by Heterologous Expression in E. coli and Production of Membrane Vesicles

Characterization of Membrane Transporters by Heterologous Expression in E. coli and Production of Membrane Vesicles

ई. कोलाई में हेटेरोलोगस अभिव्यक्ति और झिल्ली वेसिकल्स के उत्पादन द्वारा झिल्ली ट्रांसपोर्टरों का लक्षण वर्णन

Several methods have been developed to functionally characterize novel membrane transporters. Polyamines are ubiquitous in all organisms, but polyamine ...