Name: bone marrow transplantation procedures in mice to study clonal hematopoiesis
Uploaded: 2021-05-26T13:00:00
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이 작품은 K. 월시 (HL131006, HL138014 및 HL132564), S. 사노 (HL152174), M. A. 에반스 (20POST35210098) 및 일본 심장 재단에 대한 미국 심장 보조금에 대한 미국 국립 보건 원에 의해 지원되었습니다.

동물 과목과 관련된 모든 절차는 버지니아 대학의 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에 의해 승인되었습니다.
1. 사전 조정 하기 전에
<ol><li>수신자 마우스를 항생제 보충 수역(5m 설페스토사졸, 0.86 mM trimethoprim)에 배치하여 조사 전에 ~24시간. 이것은 감염을 방지하기 위하여 필요합니다, 면역 계통은 조사 다음 억압될 것이고, 조사 다음 2 주 동안 유지될 것이기 때문에. 이 ?...

<ol>
	<li>Evans, M. A., Sano, S., Walsh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+disease,+aging,+and+clonal+hematopoiesis.">Cardiovascular disease, aging, and clonal hematopoiesis.</a> Annual Review of Pathology: Mechanisms of Disease. 15 (1), 419-438 (2020).</li><li>Welch, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origin+and+evolution+of+mutations+in+acute+myeloid+leukemia.">The origin and evolution of mutations in acute myeloid leukemia.</a> Cell. 150 (2), 264-278 (2012).</li><li>Jaiswal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+clonal+hematopoiesis+associated+with+adverse+outcomes.">Age-related clonal hematopoiesis associated with adverse outcomes.</a> New England Journal of Medicine. 371 (26), 2488-2498 (2014).</li><li>Dorsheimer, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+mutations+contributing+to+conal+hematopoiesis+with+prognosis+in+chronic+ischemic+heart+failure.">Association of mutations contributing to conal hematopoiesis with prognosis in chronic ischemic heart failure.</a> JAMA Cardiology. 4 (1), 25 (2019).</li><li>Genovese, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+hematopoiesis+and+blood-cancer+risk+inferred+from+blood+DNA+sequence.">Clonal hematopoiesis and blood-cancer risk inferred from blood DNA sequence.</a> New England Journal of Medicine. 371 (26), 2477-2487 (2014).</li><li>Jaiswal, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+hematopoiesis+and+risk+of+atherosclerotic+cardiovascular+disease.">Clonal hematopoiesis and risk of atherosclerotic cardiovascular disease.</a> New England Journal of Medicine. 377 (2), 111-121 (2017).</li><li>Bick, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+interleukin+6+signaling+deficiency+attenuates+cardiovascular+risk+in+clonal+hematopoiesis.">Genetic interleukin 6 signaling deficiency attenuates cardiovascular risk in clonal hematopoiesis.</a> Circulation. 141 (2), 124-131 (2020).</li><li>Fuster, J. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+hematopoiesis+associated+with+TET2+deficiency+accelerates+atherosclerosis+development+in+mice.">Clonal hematopoiesis associated with TET2 deficiency accelerates atherosclerosis development in mice.</a> Science. 355 (6327), 842-847 (2017).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tet2-mediated+clonal+hematopoiesis+in+nonconditioned+mice+accelerates+age-associated+cardiac+dysfunction.">Tet2-mediated clonal hematopoiesis in nonconditioned mice accelerates age-associated cardiac dysfunction.</a> JCI Insight. 5 (6), 135204 (2020).</li><li>Sano, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tet2-mediated+clonal+hematopoiesis+accelerates+heart+failure+through+a+mechanism+involving+the+IL-1&#946;/NLRP3+inflammasome.">Tet2-mediated clonal hematopoiesis accelerates heart failure through a mechanism involving the IL-1&#946;/NLRP3 inflammasome.</a> Journal of the American College of Cardiology. 71 (8), 875-886 (2018).</li><li>Sano, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=JAK2-mediated+clonal+hematopoiesis+accelerates+pathological+remodeling+in+murine+heart+failure.">JAK2-mediated clonal hematopoiesis accelerates pathological remodeling in murine heart failure.</a> JACC: Basic to Translational Science. 4 (6), 684-697 (2019).</li><li>Yu, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+impact+of+aging+on+primate+hematopoiesis+as+interrogated+by+clonal+tracking.">The impact of aging on primate hematopoiesis as interrogated by clonal tracking.</a> Blood. 131 (11), 1195-1205 (2018).</li><li>Sano, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR-mediated+gene+editing+to+assess+the+roles+of+Tet2+and+Dnmt3a+in+clonal+hematopoiesis+and+cardiovascular+disease.">CRISPR-mediated gene editing to assess the roles of Tet2 and Dnmt3a in clonal hematopoiesis and cardiovascular disease.</a> Circulation Research. 123 (3), 335-341 (2018).</li><li>Stachura, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+analysis+of+hematopoietic+progenitor+cells+in+the+zebrafish.">Clonal analysis of hematopoietic progenitor cells in the zebrafish.</a> Blood. 118 (5), 1274-1282 (2011).</li><li>Gyurkocza, B., Sandmaier, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditioning+regimens+for+hematopoietic+cell+transplantation:+one+size+does+not+fit+all.">Conditioning regimens for hematopoietic cell transplantation: one size does not fit all.</a> Blood. 124 (3), 344-353 (2014).</li><li>Bacigalupo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+the+intensity+of+conditioning+regimens:+working+definitions.">Defining the intensity of conditioning regimens: working definitions.</a> Biology of Blood and Marrow Transplantation. 15 (12), 1628-1633 (2009).</li><li>Abbuehl, J. P., Tatarova, Z., Held, W., Huelsken, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+engraftment+of+primary+bone+marrow+stromal+cells+repairs+niche+damage+and+improves+hematopoietic+stem+cell+transplantation.">Long-term engraftment of primary bone marrow stromal cells repairs niche damage and improves hematopoietic stem cell transplantation.</a> Cell Stem Cell. 21 (2), 241-255 (2017).</li><li>Shao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Total+body+irradiation+causes+long-term+mouse+BM+injury+via+induction+of+HSC+premature+senescence+in+an+Ink4a-+and+Arf-independent+manner.">Total body irradiation causes long-term mouse BM injury via induction of HSC premature senescence in an Ink4a- and Arf-independent manner.</a> Blood. 123 (20), 3105-3115 (2014).</li><li>Cui, Y. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+protocol+for+total+body+irradiation+for+allogeneic+bone+marrow+transplantation+in+mice.">Optimal protocol for total body irradiation for allogeneic bone marrow transplantation in mice.</a> Bone Marrow Transplantation. 30 (12), 843-849 (2002).</li><li>Koch, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+early+endpoints+in+mouse+total-body+irradiation+model.">Establishment of early endpoints in mouse total-body irradiation model.</a> PLOS One. 11 (8), 0161079 (2016).</li><li>Ismaiel, A., Dumitra&#351;cu, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiovascular+risk+in+fatty+liver+disease:+the+liver-heart+axis-literature+review.">Cardiovascular risk in fatty liver disease: the liver-heart axis-literature review.</a> Frontiers in Medicine. 6, 202 (2019).</li><li>Amann, K., Wanner, C., Ritz, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cross-talk+between+the+kidney+and+the+cardiovascular+system.">Cross-talk between the kidney and the cardiovascular system.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 17 (8), 2112-2119 (2006).</li><li>Liao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+roles+of+resident+and+nonresident+macrophages+in+nonischemic+cardiomyopathy.">Distinct roles of resident and nonresident macrophages in nonischemic cardiomyopathy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 115 (20), 4661-4669 (2018).</li><li>Honold, L., Nahrendorf, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resident+and+monocyte-derived+macrophages+in+cardiovascular+disease.">Resident and monocyte-derived macrophages in cardiovascular disease.</a> Circulation Research. 122 (1), 113-127 (2018).</li><li>Lavine, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+macrophage+in+cardiac+homeostasis+and+disease.">The macrophage in cardiac homeostasis and disease.</a> Journal of the American College of Cardiology. 72 (18), 2213-2230 (2018).</li><li>Ginhoux, F., Guilliams, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-resident+macrophage+ontogeny+and+homeostasis.">Tissue-resident macrophage ontogeny and homeostasis.</a> Immunity. 44 (3), 439-449 (2016).</li><li>Mildner, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+in+the+adult+brain+arise+from+Ly-6C+hi+CCR2++monocytes+only+under+defined+host+conditions.">Microglia in the adult brain arise from Ly-6C hi CCR2+ monocytes only under defined host conditions.</a> Nature Neuroscience. 10 (12), 1544-1553 (2007).</li><li>Cronk, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripherally+derived+macrophages+can+engraft+the+brain+independent+of+irradiation+and+maintain+an+identity+distinct+from+microglia.">Peripherally derived macrophages can engraft the brain independent of irradiation and maintain an identity distinct from microglia.</a> Journal of Experimental Medicine. 215 (6), 1627-1647 (2018).</li><li>Lu, R., Czechowicz, A., Seita, J., Jiang, D., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal-level+lineage+commitment+pathways+of+hematopoietic+stem+cells+in+vivo.">Clonal-level lineage commitment pathways of hematopoietic stem cells in vivo.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 116 (4), 1447-1456 (2019).</li><li>Gibson, B. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+cesium-137+and+X-ray+irradiators+by+using+bone+marrow+transplant+reconstitution+in+C57BL/6J+mice.">Comparison of cesium-137 and X-ray irradiators by using bone marrow transplant reconstitution in C57BL/6J mice.</a> Comparative Medicine. 65 (3), 165-172 (2015).</li><li>Cui, Y. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimal+protocol+for+total+body+irradiation+for+allogeneic+bone+marrow+transplantation+in+mice.">Optimal protocol for total body irradiation for allogeneic bone marrow transplantation in mice.</a> Bone Marrow Transplantation. 30 (12), 843-849 (2002).</li><li>Kim, C. K., Yang, V. W., Bialkowska, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+intestinal+stem+cells+in+epithelial+regeneration+following+radiation-induced+gut+injury.">The role of intestinal stem cells in epithelial regeneration following radiation-induced gut injury.</a> Current Stem Cell Reports. 3 (4), 320-332 (2017).</li></ol>

클로날 조혈의 연구를 위해, 우리는 BMT의 세 가지 방법을 설명: 총 몸 조사와 BMT, 부분 차폐와 조사와 BMT, 그리고 더 사전 컨디셔닝을 포함 덜 일반적으로 사용되는 BMT 방법 (입양 BMT). 이 방법은 심혈관 질병에 대한 클로날 혈토포이의 영향을 평가하기 위해 사용되었습니다. 연구원은 그들의 연구 결과의 특정 목적에 맞게 이 방법을 그에 따라 수정할 수 있습니다.
클로날...

클로날 조혈(CH)은 노인 개인에서 자주 관찰되는 상태이며,유전돌연변이를운반하는 확장된 조혈 줄기 및 선조세포(HSPC) 클론의 결과로 발생한다. 그것은 50의 나이에 의해, 대부분의 개별은 각 HSPC2에있는 5개의 엑소닉 돌연변이의 평균을 취득할 것이라는 점을 건의되었습니다, 그러나 이 돌연변이의 대부분은 개별에 거의 또는 전혀 현상상 결과를 초래할 것입니다. 그러나, 우연히 이러한 돌연변이 중 하나가 HSPC에 경쟁 우위를 부여하는 경우-이러한 확산을 촉진 하 여, 자기 갱신, 생존, 또는 이들의 일부 조합-이 다른 HSPC에 비해 돌연변이 클론의 우대 확장으로 이어질 수 있습니다. 그 결과, 돌연변이는 돌연변이된 HSPC가 성숙한 혈액 세포를 초래하기 때문에 조혈 계통을 통해 점점 더 퍼질 것이고, 말초 혈액 내의 돌연변이 된 세포의 뚜렷한 인구로 이끌어 냅니다. 수십 개의 상이한 후보 운전자 유전자에서 돌연변이가 조혈 시스템 내의 클로날 이벤트와 연관되어 있지만, 이들 중 DNA 메틸트랜스퍼라제 3알파(DNMT3A)와1011개의 전좌2(TET2)의돌연변이가 가장 널리 퍼진3이다. 몇몇 역학 연구는 이 유전 돌연변이를 전송하는 개별이 심장 혈관 질병 (CVD), 치기 및 모든 인과 사망률3,4,5,6,7의현저하게 더 높은 리스크가 있다는 것을것을을 발견했습니다. 이 연구 결과는 CH와 CVD와 치기의 증가한 부각 사이 협회가 존재한다는 것을 확인했습니다, 우리는 이 관계가 인과 관계인지 또는 노화 과정과 공유 된 epi현상인지 모릅니다. 이 협회를 더 잘 이해하려면 CH의 인체 상태를 올바르게 재구성하는 적절한 동물 모델이 필요합니다.
몇몇 CH 동물 모형은 제브라피쉬, 마우스 및 비인간 영장류를사용하여 우리 그룹 및 그 외에 의해 설치되었습니다8,9,10, 11,12,13,14. 이 모형은 수시로 유전자 변형된 세포의 이식에 의하여 조혈 재구성 방법을, 때때로 Cre-lox 재조합 또는 CRISPR 시스템을 사용하여 이용합니다. 이 접근은 질병 발달에 기여하는 방법을 평가하기 위하여 조혈 세포에 있는 특정 유전자 돌연변이의 분석을 허용합니다. 또한, 이러한 모델은 종종 정상 또는 야생 형 세포에서 돌연변이 세포의 효과를 구별하기 위해 자생 또는 리포터 세포를 사용합니다. 많은 경우에, 사전 조절 식이요법은 성공적으로 기증자 조혈 줄기 세포를 이식하는 데 필요합니다.
현재, 수취인 마우스에 골수의 이식은 두 가지 주요 범주로 나눌 수 있습니다: 1) 골수 조절 및 2) 비조건 이식. 골수성 컨디셔닝은 두 가지 방법 중 하나에 의해 달성 될 수있다, 즉, 총 신체 조사 (TBI) 또는 화학 요법(15. TBI는 수신자에게 감마 또는 X선 조사의 치명적인 복용량을 복종하여 급속하게 분할하는 세포 내에서 DNA 나누기 또는 교차 링크를 생성하여 돌이킬 수 없는16을렌더링하여 수행됩니다. Busulfan과 사이클로포스파미드는 조혈 틈새 시장을 방해하고 유사하게 세포를 급속하게 분할하는 DNA 손상을 일으키는 두 개의 일반적으로 사용되는 화학요법 약물입니다. 골수성 사전 조절의 결과는 조혈 세포의 세포, 수령인의 조혈 시스템을 파괴. 이 전략은 기증자 HSPC의 성공적인 이식을 허용할 뿐만 아니라 수령인의 면역 체계를 억제하여 이식 거부를 방지할 수 있습니다. 그러나, 골수성 전조는 조직 및 장기 및 그들의 상주 면역 세포에 손상 과 같은 가혹한 부작용을 가지고 있고 토착 골수 틈새 시장17의파괴. 따라서, 이러한 바람직하지 않은 부작용을 극복하기 위해 대안 적 방법이 제안되었습니다, 특히 관심기관의 손상에 관한. 이러한 방법은 비조건마우스9,17에받는 마우스와 입양 BMT의 차폐 조사를 포함한다. 납 장벽의 배치에 의해 조사에서 흉부, 복강, 머리 또는 다른 영역을 차폐하는 것은 조사의 손상 효과로부터 보호 관심의 조직을 유지하고 거주 면역 세포 인구를 유지합니다. 한편, 비조건 마우스에 대한 HSPC의 BMT는 토착 조혈 틈새 시장을 보존하기 때문에 추가적인 이점이 있다. 이 원고에서, 우리는 마우스에 있는 몇몇 이식 식이요법 후에 HSPC 이식의 프로토콜 그리고 결과를 기술합니다, 특히 TBI 마우스에 HSPC의 납품, 방사선으로부터 부분적으로 차폐된 마우스에, 및 비 조건화마우스에. 전반적인 목표는 연구원이 CH와 심장 혈관 질병의 설정에 있는 실험 결과에 어떻게 영향을 미치는지 뿐만 아니라 각 방법의 다른 생리적인 효력을 이해하는 것을 돕는 것입니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5ml microcentrifuge</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-408-121</td>
			<td>general supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5ml microcentrifuge</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-408-129</td>
			<td>general supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1/2 cc LO-DOSE INSULIN SYRINGE</td>
			<td>EXELINT</td>
			<td>26028</td>
			<td>general supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absolute Ethanol (200 prfof)</td>
			<td>Fisher chemical</td>
			<td>200559</td>
			<td>general supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 1mL Tuberculin Syringes 25G 5/8 Inch Needle</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>309626</td>
			<td>general supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD PrecisionGlide Needle 18G (1.22mm X 25mm)</td>
			<td>Becton Dickinson</td>
			<td>395195</td>
			<td>general supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cesium-137 Irradiator</td>
			<td>J. L. Shepherd&#160;</td>
			<td>Mark IV</td>
			<td>equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DietGel 76A</td>
			<td>Clear H2O</td>
			<td>70-01-5022</td>
			<td>general supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 100 mm TC-Treated Cell Culture Dish</td>
			<td>Life Sciences</td>
			<td>353003</td>
			<td>general supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon 50 mL Conical Centrifuge Tubes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>352098</td>
			<td>general supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand sterile cell strainers, 70 &#956;m</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>22363548</td>
			<td>general supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11051-10</td>
			<td>general supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hardened Fine Scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14090-09</td>
			<td>general supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isothesia (Isoflurane) solution</td>
			<td>Henry Schein</td>
			<td>29404</td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>Zoetis</td>
			<td>043-304</td>
			<td>injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kimwipes Delicate Task Wipers</td>
			<td>Kimtech Science</td>
			<td>KCC34155</td>
			<td>general supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS pH7.4 (1X)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010023</td>
			<td>Solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RadDisk &#8211; Rodent Irradiator Disk</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>IRD-P M</td>
			<td>general supply</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI Medium 1640 (1X)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11875-093</td>
			<td>Medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sulfamethoxazole and Trimethoprim</td>
			<td>TEVA</td>
			<td>0703-9526-01</td>
			<td>injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>139-236</td>
			<td>injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>X-ray irradiator</td>
			<td>Rad source</td>
			<td>RS-2000</td>
			<td>equipment</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bone marrow transplantation procedures in mice to study clonal hematopoiesis

클론 조혈은 조혈 줄기 및 선조 세포 (HSPC)에서 체세포 돌연변이의 축적에서 유래 널리 퍼지는 연령 관련 상태입니다. 드라이버 유전자에 있는 돌연변이, 그 세포 적합성을 부여하는, 점점 체세포 돌연변이를 품고 자손 백혈구를 초래하는 HSPC 클론확장의 발달로 이끌어 낼 수 있습니다. 클로날 조혈은 심장 질환, 뇌졸중 및 사망률과 관련이 있기 때문에 이러한 프로세스를 모델링하는 실험 시스템의 개발은 이 새로운 위험 요소의 밑에 있는 메커니즘을 이해하는 데 핵심적입니다. 총 신체 조사 (TBI)와 같은 마우스에서 골수 이식 과 관련된 골수 이식 절차는 일반적으로 심혈관 질환에서 면역 세포의 역할을 연구하기 위해 사용됩니다. 그러나, 골수 틈새 시장 및 관심의 다른 사이트에 동시 손상, 심장과 두뇌 등, 이러한 절차와 피할 수. 따라서, 우리의 실험실은 TBI에 기인한 가능한 부작용을 최소화하거나 피하기 위하여 2개의 다른 방법을 개발했습니다: 1) 조사 차폐를 가진 골수 이식 및 2) 비 조건화 마우스에 입양 BMT. 보호 된 기관에서, 지역 환경은 상주 면역 세포의 기능이 흔들리지 않는 동안 클로날 혈종의 분석을 허용 보존된다. 대조적으로, 비조건 마우스에 대한 채택 BMT는 장기와 조혈 틈새 시장이 모두 보존된다는 추가적인 이점이 있다. 여기에서, 우리는 3개의 다른 조혈 세포 재구성 접근을 비교하고 심장 혈관 질병에 있는 클론 조혈의 연구 결과를 위한 그들의 강점 그리고 한계를 토론합니다.

기증자 세포 이식에 대한 3개의 BMT/사전 컨디셔닝 방법의 효력을 비교하기 위하여는, 말초 혈액 및 심장 조직에 있는 기증자 세포의 분획은 BMT 후 1 달에서 혈류 세포측정에 의해 분석되었습니다. 분리된 세포는 백혈구의 상이한 하위 집합을 확인하기 위해 특정 백혈구 마커를 위해 염색하였다. 이러한 실험에서,야생형(WT) C57BL/6(CD45.2) 기증자 골수 세포는 WT B6로 전달되었다. SJL-Ptprc...

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Bone Marrow Transplantation Procedures in Mice to Study Clonal Hematopoiesis

우리는 골수 이식의 세 가지 방법을 설명 (BMT): 총 몸 조사와 BMT, 차폐 조사와 BMT, 그리고 마우스 모델에서 클로날 조혈의 연구를위한 사전 컨디셔닝 (입양 BMT)와 BMT 방법.

클로날 조혈을 연구하기 위해 마우스에 있는 골수 이식 절차

Clonal hematopoiesis is a prevalent age-associated condition that results from the accumulation of somatic mutations in hematopoietic stem and progenitor ...

우리의 프로토콜은 연구원이 3개의 다른 골수 이식 방법의 생리적인 효력 및 복제 조혈 조정에 있는 실험 결과에 어떻게 영향을 미치는지 이해하는 것을 도울 것입니다. 총 신체 방사선 골수 이식은 심혈관 장기에 부정적인 영향을 미치고 질병 병인을 변화시킬 수 있습니다. 따라서, 우리의 실험실 최소화 하거나 가능한 부작용을 방지 하기 위해 두 가지 다른 방법을 개발 했다.절차를 시연하는 것은 대학원생 은비 파크와 박사 후 동료인 메건 에반스(Megan Evans)가 내 실험실에서 흉부와 복부 차폐를 위해 조정 가능한 트레이와 엑스레이 조사기를 올바른 거리에 배치하여 균일한 조사를 달성합니다. 그리고 마취된 마우스를 평평한 led 플레이트에 놓고, 양봉포 위치에 서로 반전한다. 테이프로 플레이트에 발을 고정하고, 아래쪽 끝이 시피스테넘 뼈와 정렬되도록 led 차폐를 배치하고 리드 쉴드의 상단은 흉선 근처에 앉아 있다.차폐 후, 마우스를 조사관에 넣고 동물을 4~24시간 간격으로 분리한 조사의 2개, 5.5회색 분획에 노출시한다. 머리 차폐의 경우 마우스의 네 발을 복부에 조심스럽게 테이프로 테이프로 두세요. 마우스를 원상 억제제에 넣고 제지기를 리드 쉴드 내슬롯에 밀어 넣어 마우스의 머리와 귀가 완전히 덮어 마우스의 나머지 신체가 방사선에 노출되도록 합니다.차폐 후 마우스를 세디에이터에 넣고 동물을 노출시키고, 4~24시간 간격으로 분리된 방사선의 5.5 회색 분획에 노출한다. 각 방사선 처리 후에, 완전히 복구될 때까지 감시와 가열된 매트에 마취한 마우스를 두는. 뼈를 분리하려면 기증자 마우스의 피부를 70%에탄올로 소독하고 갈비뼈 아래에 작은 횡방향 피부 절개를 만듭니다.절개 의 양쪽에 피부를 단단히 잡고, 머리와 발을 향해 반대 방향으로 찢어 모든 사지에서 피부를 껍질. 어깨와 팔꿈치 관절을 잘라, 그리고 상미에서 부착 된 근육과 결합 조직을 제거하기 위해 실험실 닦아를 사용합니다. 대퇴골과 엉덩이 뼈 사이에 관절을 조심스럽게 탈바니다.그리고 무딘 가위를 사용하여 대퇴머리를 따라 다리를 분리합니다. 대퇴골과 경골을 분리하기 위해 무릎 관절을 잘라냅니다. 그리고 실험실 와이프를 사용하여 부착 된 근육과 뼈에서 결합 조직을 조심스럽게 제거하십시오.그런 다음 동일한 유전자형의 마우스에서 뼈를 얼음에 얼음 냉멸 균 PBS 20 밀리리터를 포함하는 개별 50 밀리리터 원추형 튜브로 끌어당깁니다. 골수 세포를 바이오 안전 클래스 2개의 캐비닛에 분리하려면 18 게이지 바늘을 사용하여 멸균 500 마이크로리터 마이크로 튜브의 바닥에 작은 구멍을 만듭니다. 그리고 튜브를 1.5 밀리리터 마이크로 원심분리기 튜브에 넣고 100 마이크로리터의 얼음 냉멸 균 PBS를 함유한다.모든 튜브가 준비되면, 분리된 뼈를 포함하는 튜브에서 PBS를 제거하고 뼈를 멸균 100mm 세포 배양 접시에 옮기십시오. 미세 한 집게와 작은 가위를 사용하여 각 뼈의 끝에서 epiphysis를 조심스럽게 제거하고 각 500 마이크로 리터 튜브에 최대 6 개의 뼈를 배치하십시오. 모든 뼈가 절단되면 골수 세포를 원심분리로 추출합니다.모든 골수 내용이 제거된 경우, 뼈는 1.5 밀리리터 마이크로 원심분리기 튜브의 바닥에 상대적으로 큰 빨간 펠릿으로 흰색과 반투명으로 나타나야 한다. 골수 세포 이식의 경우, 혈청 이없는 RPMI 매체에서 격리된 골수 세포를 희석시키고, 세포 현탁액의 200마이크로리터를 마우스당 0.5 밀리리터 인슐린 주사기1개에 적재하여 주입한다. 페달 반사에 대한 반응의 부족을 확인 한 후, 천천히 각 마취 받는 사람의 복고풍 궤도 정맥에 세포의 전체 볼륨을 주입한다.그런 다음 통증 완화를 위해 프로파라카인 한 방울을 눈에 놓습니다. 그리고 모니터링되는 동안 마우스가 의식을 회복 할 수 있습니다. 기증자 세포 이식에 대한 세 가지 BMT 사전 조절 방법의 효과를 비교합니다.말초 혈액 및 심장 조직에 있는 기증자 세포의 분획은 BMT 포스트 1 달에 혈류 세포측정에 의해 분석되었습니다. 본 대표적인 분석에서, 총 체내 조사를 받은 수신자 마우스의 말초 혈액에서, 단핵구, 호중구 및 B 세포는 기증자 골수 유래 세포의 자손에 의해 크게 절단되고 대체되었다. 또한, 상주 수혜자 심장 단세포 및 호중구 인구는 거의 완전히 기증자 유래 세포에 의해 대체되었다.부분적으로 차폐된 조사 단에서, 기증자 유래 심장 면역 세포 교체는 겸손했습니다. 수용자 마우스 골수 세포는 총 신체 조사를 받은 마우스에 비해 말초 혈액 재구성의 낮은 수준에 기여할 가능성이 있다. BMT 사전 조절이 없는 그룹에서, 기증자 유래 세포는 BMT 이후 4주 동안 수신자 마우스의 말초 혈액및 심혼에서 검출되었다.또한, Tet2 결핍 기증자 세포는 시간이 지남에 따라 점차 확장. 비교에서, 야생 형 기증자 세포로 이식 된 받는 사람 마우스는 기증자 세포의 최소한의 복제 확장을 보였다. 이러한 실험 모델의 최적화는 심장 대사 질환및 암과 같은 모든 원인에 기여하는 클론 조혈 드라이버 유전자의 보다 엄격한 연구를 가능하게 할 것입니다.우리는 우리의 프로토콜이 연구원이 심혈관 질병 및 그밖 질병 국가에 어떻게 기여하는지 조사하기 위하여 클로날 혈토포이스를 공부하는 것을 허용할 것이라는 점을 희망합니다.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions

Toxoplasma gondii Cyst Wall Formation in Activated Bone Marrow-derived Macrophages and Bradyzoite Conditions

활성 골수 - 유래 Macrophages과 Bradyzoite Toxoplasma gondii 약관의 낭종의 벽 형성

Toxoplasma gondii is an obligate intracellular parasite that can invade any nucleated cell of warm-blooded animals. During infection, T. gondii ...

연구

면역학 및 감염병학

Differentiating Functional Roles of Gene Expression from Immune and Non-immune Cells in Mouse Colitis by Bone Marrow Transplantation

골수 이식으로 마우스 대장염에서 면역 및 비 면역 세포에서 유전자 발현의 기능 역할을 차별화

To understand the role of a gene in the development of colitis, we compared the responses of wild-type mice and gene-of-interest deficient knockout mice ...

Investigation of Macrophage Polarization Using Bone Marrow Derived Macrophages

골수 유래 대 식세포를 사용하여 대식 세포 분극 조사

The article describes a readily easy adaptive in vitro model to investigate macrophage polarization. In the presence of GM-CSF/M-CSF, hematopoietic ...

Bone Marrow-derived Macrophage Production

뼈 대식 세포 생산에게 골수 유래

Macrophages are critical components of the innate and adaptive immune responses, and they are the first line of defense against foreign invaders because ...

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

Long Term Chronic Pseudomonas aeruginosa Airway Infection in Mice

장기 만성<em&gt; 녹농균</em마우스의&gt;기도 감염

A mouse model of chronic airway infection is a key asset in cystic fibrosis (CF) research, although there are a number of concerns regarding the model ...

Transplantation of Tail Skin to Study Allogeneic CD4 T Cell Responses in Mice

마우스에 동종 CD4 T 세포 반응을 연구하기 위해 테일 피부 이식

The study of T cell responses and their consequences during allo-antigen recognition requires a model that enables one to distinguish between donor and ...

Isolation and Intravenous Injection of Murine Bone Marrow Derived Monocytes

분리 및 설치류 골수의 정맥 주사 유래 단핵구

As a subtype of leukocytes and progenitors of macrophages, monocytes are involved in many important processes of organisms and are often the subject of ...

Tracking Mouse Bone Marrow Monocytes In Vivo

Tracking Mouse Bone Marrow Monocytes In Vivo

마우스 골수 단핵구를 추적<em&gt; 생체</em

Real time multiphoton imaging provides a great opportunity to study cell trafficking and cell-to-cell interactions in their physiological 3-dimensionnal ...

Murine Hind Limb Long Bone Dissection and Bone Marrow Isolation

쥐 뒷다리 긴 뼈 해부 및 골수 격리

Investigation of the bone and the bone marrow is critical in many research fields including basic bone biology, immunology, hematology, cancer metastasis, ...

Retroviral Transduction of Bone Marrow Progenitor Cells to Generate T-cell Receptor Retrogenic Mice

골수 전구 세포의 레트로 바이러스 형질 도입은 T 세포 수용체 Retrogenic 마우스를 생성하는

T cell receptor (TCR) signaling is essential in the development and differentiation of T cells in the thymus and periphery, respectively.  The vast array ...