Name: fabrication of 3d cardiac microtissue arrays using human ipsc-derived cardiomyocytes, cardiac fibroblasts, and endothelial cells
Uploaded: 2021-03-14T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fabrication of 3D Cardiac Microtissue Arrays using Human iPSC-Derived Cardiomyocytes, Cardiac Fibroblasts, and Endothelial Cells at JoVE.com

Wir danken Dr. Amanda Chase für ihr hilfreiches Feedback zum Manuskript. Finanzielle Unterstützung wurde durch das Tobacco-Related Disease Research Program (TRDRP) der University of California, T29FT0380 (D.T.) und 27IR-0012 (J.C.W.); American Heart Association 20POST35210896 (H.K.) und 17MERIT33610009 (J.C.W.); und National Institutes of Health (NIH) R01 HL126527, R01 HL123968, R01 HL150693, R01 HL141851 und NIH UH3 TR002588 (J.C.W).

1. Medium, Reagenz, Zuchtplattenvorbereitung
<ol><li>Zellwaschlösung für die Zellkultur: Verwenden Sie 1x phosphatgepufferte Kochsalzlösung (PBS) oder Hanks Balanced Salt Solution (HBSS) ohne Calcium oder Magnesium.</li>
	<li>Kardiomyozyten-Differenzierungsmedien<ol>
<li>Bereiten Sie das Differenzierungsmedium Nr. 1 vor, indem Sie 10 ml Ergänzung (50x B27 plus Insulin) zu 500 ml Kardiomyozyten-Basalmedium (RPMI 1640) hinzufügen.</li>
		<li>Bereiten Sie das Differenzierungsmedium Nr. 2 vor, indem Sie 10 ml Ergänzu...

<ol>
	<li>Neofytou, E., O'Brien, C. G., Couture, L. A., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hurdles+to+clinical+translation+of+human+induced+pluripotent+stem+cells.">Hurdles to clinical translation of human induced pluripotent stem cells.</a> Journal of Clinical Investigation. 125 (7), 2551-2557 (2015).</li><li>Lancaster, M. A., Knoblich, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organogenesis+in+a+dish:+Modeling+development+and+disease+using+organoid+technologies.">Organogenesis in a dish: Modeling development and disease using organoid technologies.</a> Science. 345 (6194), 1247125 (2014).</li><li>Liu, C., Oikonomopoulos, A., Sayed, N., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+human+diseases+with+induced+pluripotent+stem+cells:+from+2D+to+3D+and+beyond.">Modeling human diseases with induced pluripotent stem cells: from 2D to 3D and beyond.</a> Development. 145 (5), 156166 (2018).</li><li>Yin, X., Mead, B. E., Safaee, H., Langer, R., Karp, J. M., Levy, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+stem+cell+organoids.">Engineering stem cell organoids.</a> Cell Stem Cell. 18 (1), 25-38 (2016).</li><li>Giacomelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+cardiac+microtissues+composed+of+cardiomyocytes+and+endothelial+cells+co-differentiated+from+human+pluripotent+stem+cells.">Three-dimensional cardiac microtissues composed of cardiomyocytes and endothelial cells co-differentiated from human pluripotent stem cells.</a> Development. 144 (6), 1008-1017 (2017).</li><li>Kurokawa, Y. K., George, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+engineering+the+cardiac+microenvironment:+Multicellular+microphysiological+systems+for+drug+screening.">Tissue engineering the cardiac microenvironment: Multicellular microphysiological systems for drug screening.</a> Advances in Drug Delivery Reviews. 96, 225-233 (2016).</li><li>Cartledge, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+crosstalk+between+cardiac+fibroblasts+and+adult+cardiomyocytes+by+soluble+mediators.">Functional crosstalk between cardiac fibroblasts and adult cardiomyocytes by soluble mediators.</a> Cardiovascular Research. 105 (3), 260-270 (2015).</li><li>Ravenscroft, S. M., Pointon, A., Williams, A. W., Cross, M. J., Sidaway, J. 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L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+endothelial-myocardial+signaling:+its+role+in+cardiac+growth,+contractile+performance,+and+rhythmicity.">Cardiac endothelial-myocardial signaling: its role in cardiac growth, contractile performance, and rhythmicity.</a> Physiological Reviews. 83 (1), 59-115 (2003).</li><li>Huebsch, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+video-based+analysis+of+contractility+and+calcium+flux+in+human-induced+pluripotent+stem+cell-derived+cardiomyocytes+cultured+over+different+spatial+scales.">Automated video-based analysis of contractility and calcium flux in human-induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes cultured over different spatial scales.</a> Tissue Engineering Part C Methods. 21 (5), 467-479 (2015).</li><li>Burridge, P. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemically+defined+generation+of+human+cardiomyocytes.">Chemically defined generation of human cardiomyocytes.</a> Nature Methods. 11 (8), 855-860 (2014).</li><li>Gu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pravastatin+reverses+obesity-induced+dysfunction+of+induced+pluripotent+stem+cell-derived+endothelial+cells+via+a+nitric+oxide-dependent+mechanism.">Pravastatin reverses obesity-induced dysfunction of induced pluripotent stem cell-derived endothelial cells via a nitric oxide-dependent mechanism.</a> European Heart Journal. 36 (13), 806-816 (2015).</li><li>Williams, I. M., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+endothelial+cells+from+human+pluripotent+stem+cells.">Generation of endothelial cells from human pluripotent stem cells.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology. 39 (7), 1317-1329 (2019).</li><li>Zhang, H., Shen, M., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+quiescent+cardiac+fibroblasts+derived+from+human+induced+pluripotent+stem+cells.">Generation of quiescent cardiac fibroblasts derived from human induced pluripotent stem cells.</a> Methods in Molecular Biology. , 1-7 (2020).</li><li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+quiescent+cardiac+fibroblasts+from+human+induced+pluripotent+stem+cells+for+in+vitro+modeling+of+cardiac+fibrosis.">Generation of quiescent cardiac fibroblasts from human induced pluripotent stem cells for in vitro modeling of cardiac fibrosis.</a> Circulation Research. 125 (5), 552-566 (2019).</li><li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+cardiac+fibroblasts+derived+from+human+pluripotent+stem+cells+via+second+heart+field+progenitors.">Functional cardiac fibroblasts derived from human pluripotent stem cells via second heart field progenitors.</a> Nature Communications. 10 (1), 2238-2315 (2019).</li><li>Giacomelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human-iPSC-derived+cardiac+stromal+cells+enhance+maturation+in+3d+cardiac+microtissues+and+reveal+non-cardiomyocyte+contributions+to+heart+disease.">Human-iPSC-derived cardiac stromal cells enhance maturation in 3d cardiac microtissues and reveal non-cardiomyocyte contributions to heart disease.</a> Cell Stem Cell. 26 (6), 862-879 (2020).</li><li>Burridge, P. W., Holmstr&#246;m, A., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemically+defined+culture+and+cardiomyocyte+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells.">Chemically defined culture and cardiomyocyte differentiation of human pluripotent stem cells.</a> Current Protocols in Human Genetics. 87 (1), 1-15 (2015).</li><li>Lian, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+cardiomyocyte+differentiation+from+human+pluripotent+stem+cells+by+modulating+Wnt/&#946;-catenin+signaling+under+fully+defined+conditions.">Directed cardiomyocyte differentiation from human pluripotent stem cells by modulating Wnt/&#946;-catenin signaling under fully defined conditions.</a> Nature Protocols. 8 (1), 162-175 (2013).</li><li>Buikema, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt+activation+and+reduced+cell-cell+contact+synergistically+induce+massive+expansion+of+functional+human+iPSC-derived+cardiomyocytes.">Wnt activation and reduced cell-cell contact synergistically induce massive expansion of functional human iPSC-derived cardiomyocytes.</a> Cell Stem Cell. 27 (1), 50-63 (2020).</li><li>Feyen, D. A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+maturation+media+improve+physiological+function+of+human+iPSC-derived+cardiomyocytes.">Metabolic maturation media improve physiological function of human iPSC-derived cardiomyocytes.</a> Cell Reports. 32 (3), 107925 (2020).</li><li>Karbassi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiomyocyte+maturation:+Advances+in+knowledge+and+implications+for+regenerative+medicine.">Cardiomyocyte maturation: Advances in knowledge and implications for regenerative medicine.</a> Nature Reviews Cardiology. 17 (6), 341-359 (2020).</li><li>Li, Z., Hu, S., Ghosh, Z., Han, Z., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+characterization+and+expression+profiling+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-+and+embryonic+stem+cell-derived+endothelial+cells.">Functional characterization and expression profiling of human induced pluripotent stem cell- and embryonic stem cell-derived endothelial cells.</a> Stem Cells Development. 20 (10), 1701-1710 (2011).</li><li>Lian, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+to+endothelial+progenitors+via+small-molecule+activation+of+WNT+signaling.">Efficient differentiation of human pluripotent stem cells to endothelial progenitors via small-molecule activation of WNT signaling.</a> Stem Cell Report. 3 (5), 804-816 (2014).</li><li>Gu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+to+endothelial+cells.">Efficient differentiation of human pluripotent stem cells to endothelial cells.</a> Current Protocols in Human Genetics. 98 (1), 64 (2018).</li><li>Acharya, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+bHLH+transcription+factor+Tcf21+is+required+for+lineage-specific+EMT+of+cardiac+fibroblast+progenitors.">The bHLH transcription factor Tcf21 is required for lineage-specific EMT of cardiac fibroblast progenitors.</a> Development. 139 (12), 2139-2149 (2012).</li><li>Wessels, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epicardially+derived+fibroblasts+preferentially+contribute+to+the+parietal+leaflets+of+the+atrioventricular+valves+in+the+murine+heart.">Epicardially derived fibroblasts preferentially contribute to the parietal leaflets of the atrioventricular valves in the murine heart.</a> Development Biology. 366 (2), 111-124 (2012).</li><li>Ali, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+heterogeneity+of+cardiac+fibroblasts+does+not+predict+pathological+proliferation+and+activation.">Developmental heterogeneity of cardiac fibroblasts does not predict pathological proliferation and activation.</a> Circulation Research. 115 (7), 625-635 (2014).</li><li>McMurtrey, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analytic+and+numerical+models+of+oxygen+and+nutrient+diffusion,+metabolism+dynamics,+and+architecture+optimization+in+three-dimensional+tissue+constructs+with+applications+and+insights+in+cerebral+organoids.">Analytic and numerical models of oxygen and nutrient diffusion, metabolism dynamics, and architecture optimization in three-dimensional tissue constructs with applications and insights in cerebral organoids.</a> Tissue Engineering Part C Methods. (3), 221-249 (2015).</li><li>Thomas, D., O'Brien, T., Pandit, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+customized+extracellular+niche+engineering:+progress+in+cell-entrapment+technologies.">Toward customized extracellular niche engineering: progress in cell-entrapment technologies.</a> Advanced Materials. 30 (1), 1703948 (2018).</li><li>Thomas, D., Shenoy, S., Sayed, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Building+Multi-dimensional+induced+pluripotent+stem+cells-based+model+platforms+to+assess+cardiotoxicity+in+cancer+therapies.">Building Multi-dimensional induced pluripotent stem cells-based model platforms to assess cardiotoxicity in cancer therapies.</a> Front Pharmacol. 12, 39 (2021).</li><li>Rhee, J. -. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+secondary+iron+overload+cardiomyopathy+with+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+cardiomyocytes.">Modeling secondary iron overload cardiomyopathy with human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes.</a> Cell Reports. 32 (2), 107886 (2020).</li><li>Paik, D. T., Cho, S., Tian, L., Chang, H. Y., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+RNA+sequencing+in+cardiovascular+development,+disease,+and+medicine.">Single-cell RNA sequencing in cardiovascular development, disease, and medicine.</a> Nature Reviews Cardiology. 17 (8), 457-473 (2020).</li><li>Nguyen, Q. H., Pervolarakis, N., Nee, K., Kessenbrock, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+considerations+for+single-cell+RNA+sequencing+approaches.">Experimental considerations for single-cell RNA sequencing approaches.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 6, 108 (2018).</li><li>Lau, E., Paik, D. T., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systems-wide+approaches+in+induced+pluripotent+stem+cell+models.">Systems-wide approaches in induced pluripotent stem cell models.</a> Annual Reviews in Pathology. 14 (1), 395-419 (2019).</li><li>Maddah, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+non-invasive+platform+for+functional+characterization+of+stem-cell-derived+cardiomyocytes+with+applications+in+cardiotoxicity+testing.">A non-invasive platform for functional characterization of stem-cell-derived cardiomyocytes with applications in cardiotoxicity testing.</a> Stem Cell Report. 4 (4), 621-631 (2015).</li><li>Sala, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Musclemotion:+A+versatile+open+software+tool+to+quantify+cardiomyocyte+and+cardiac+muscle+contraction+in+vitro+and+in+vivo.">Musclemotion: A versatile open software tool to quantify cardiomyocyte and cardiac muscle contraction in vitro and in vivo.</a> Circulation Research. 122 (3), 5-16 (2018).</li></ol>

Um kardiale Mikrogewebe aus vordifferenzierten iPSC-CMs, iPSC-ECs und iPSC-CFs zu erzeugen, ist es unerlässlich, eine hochreine Kultur zur besseren Kontrolle der Zellzahlen nach kontaktinhibierter Zellverdichtung innerhalb der kardialen Mikrogewebe zu erhalten. Kürzlich haben Giacomelli et. al.18 haben die Herstellung von kardialen Mikrogeweben unter Verwendung von iPSC-CMs, iPSC-ECs und iPSC-CFs demonstriert. Kardiale Mikrogewebe, die mit der beschriebenen Methode erzeugt werden, bestehen aus ~...

Die Wirkstoffforschung und Krankheitsmodellierung im Bereich der kardiovaskulären Forschung steht aufgrund des Mangels an klinisch relevanten Proben und unzureichender translationaler Werkzeuge vor mehreren Herausforderungen1. Hochkomplexe präklinische Modelle oder stark vereinfachte in vitro Einzelzellmodelle zeigen keine pathophysiologischen Bedingungen in reproduzierbarer Weise. Daher haben sich mehrere miniaturisierte Tissue-Engineering-Plattformen entwickelt, um die Lücke zu schließen, mit dem Ziel, ein Gleichgewicht zwischen einfacher Anwendung in hochdurchsatziger Weise und einer getreuen Rekapitulation der Gewebefunktion zu erreichen2,3. Mit dem Aufkommen der Technologie der induzierten pluripotenten Stammzellen (iPSC) können Tissue-Engineering-Werkzeuge auf patientenspezifische Zellen mit oder ohne zugrunde liegenden Kardioerkrankungen angewendet werden, um Forschungsfragen zu beantworten4,5,6. Solche Gewebemodelle mit einer zellulären Zusammensetzung, die dem Herzgewebe ähnelt, könnten in der Arzneimittelentwicklung verwendet werden, um auf Kardiotoxizität und Dysfunktion zu testen, die durch pathologische Verhaltensänderungen eines oder mehrerer Zelltypen induziert werden.
Selbstorganisierte Mikrogewebe oder Organoide, die von menschlichen iPS-Zellen abgeleitet sind, sind dreidimensionale (3D) Strukturen, bei denen es sich um gewebeähnliche Miniaturanordnungen handelt, die funktionelle Ähnlichkeiten mit ihren In-vivo-Gegenstücken aufweisen. Es gibt verschiedene Ansätze, die die Bildung von Organoiden in situ durch gerichtete Differenzierung von iPS-Zellen oder durch die Bildung von embryoiden Körpern ermöglichen4. Die resultierenden Organoide sind ein unverzichtbares Werkzeug, um morphogenetische Prozesse zu untersuchen, die die Organogenese antreiben. Das Vorhandensein einer Vielzahl von Zellpopulationen und Unterschiede in der Selbstorganisation können jedoch zu einer Variabilität der Ergebnisse zwischen verschiedenen Organoiden führen5. Alternativ sind vordifferenzierte Zellen, die selbst zu Mikrogeweben mit gewebespezifischen Zelltypen zusammengesetzt sind, um lokale Zell-Zell-Interaktionen zu untersuchen, hervorragende Modelle, bei denen es möglich ist, die selbstorganisierten Komponenten zu isolieren. Insbesondere in der humanen Herzforschung hat sich die Entwicklung von 3D-Herzmikrogeweben mit mehrzelligen Komponenten als Herausforderung erwiesen, wenn Zellen aus verschiedenen Patientenlinien oder kommerziellen Quellen gewonnen werden.
Um unser mechanistisches Verständnis des Zellverhaltens in einem physiologisch relevanten, personalisierten In-vitro-Modell zu verbessern, sollten idealerweise alle Komponentenzelltypen aus derselben Patientenlinie abgeleitet werden. Im Kontext eines menschlichen Herzens würde ein wirklich repräsentatives kardiales In-vitro-Modell das Crosstalk zwischen vorherrschenden Zelltypen erfassen, nämlich Kardiomyozyten (CMs), Endothelzellen (ECs) und Herzfibroblasten (CFs)6,7. Die originalgetreue Rekapitulation eines Myokards erfordert nicht nur biophysikalische Dehnung und elektrophysiologische Stimulation, sondern auch Zell-Zell-Signale, die von unterstützenden Zelltypen wie ECs und CFs8 ausgehen. CFs sind an der Synthese der extrazellulären Matrix und der Aufrechterhaltung der Gewebestruktur beteiligt; und in einem pathologischen Zustand können CFs Fibrose induzieren und die elektrische Leitung im CMs9 verändern. In ähnlicher Weise können ECs die kontraktilen Eigenschaften von CMs durch parakrine Signalgebung regulieren und lebenswichtige Stoffwechselanforderungen liefern10. Daher besteht ein Bedarf an humanen kardialen Mikrogeweben, die aus allen drei Hauptzelltypen bestehen, um physiologisch relevante Hochdurchsatzexperimente durchführen zu können.
Hier beschreiben wir einen Bottom-up-Ansatz bei der Herstellung von kardialen Mikrogeweben durch Ableitung von humanen iPSC-abgeleiteten Kardiomyozyten (iPSC-CMs), iPSC-abgeleiteten Endothelzellen (iPSC-ECs) und iPSC-abgeleiteten kardialen Fibroblasten (iPSC-CFs) und ihrer 3D-Kultur in einheitlichen kardialen Mikrogewebe-Arrays. Diese einfache Methode zur Erzeugung spontan schlagender kardialer Mikrogewebe kann für die Krankheitsmodellierung und das schnelle Testen von Medikamenten zum funktionellen und mechanistischen Verständnis der Herzphysiologie verwendet werden. Darüber hinaus könnten solche mehrzelligen kardialen Mikrogewebeplattformen mit Genom-Editing-Techniken genutzt werden, um das Fortschreiten der Herzkrankheit im Laufe der Zeit unter chronischen oder akuten Kulturbedingungen nachzuahmen.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>12-well plates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-772-29</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3D micro-molds</td>
			<td>Microtissues</td>
			<td>12-81 format</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-772-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoMACS Rinsing Solution</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>NC9104697</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 Supplement minus Insulin</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A1895601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 Supplement plus Insulin</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17504-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Cytofix</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>554655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Matrigel, hESC-qualified matrix</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>354277</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cardiac Troponin T Antibody</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-120-403</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD144 (VE-Cadherin) MicroBeads</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-097-857</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD31 Antibody</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-110-670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD31 Microbeads</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-091-935</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHIR-99021</td>
			<td>Selleckchem</td>
			<td>S2924</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DDR2</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-81707</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dead Cell Apoptosis Kit with Annexin V FITC and PI</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>V13242</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase I</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>4942086001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, high glucose (4.5g/L) no glutamine medium</td>
			<td></td>
			<td>11960044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F-12 basal medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11320033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s phosphate buffered saline (DPBS), no calcium, no magnesium</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>14190-136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGM2 BulletKit</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-3124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>10437</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FibroLife Serum-Free Fibroblast LifeFactors Kit</td>
			<td>LifeLIne Cell Technology</td>
			<td>LS-1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose free RPMI medium</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11879-020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat serum</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>16210-064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human FGF-basic</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>13256029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human VEGF-165</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>100-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IWR-1-endo</td>
			<td>Selleckchem</td>
			<td>S7086</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liberase TL</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>5401020001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LS Sorting Columns</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-042-401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MACS BSA Stock solution</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-091-376</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MACS Rinsing Buffer</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-091-222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MidiMACS Separator</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-042-302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI medium</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11835055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SB431542</td>
			<td>Selleckchem</td>
			<td>S1067</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TO-PRO 3</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>R37170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>X100-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE Select 10X</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>red</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vimentin Alexa Fluor&#174; 488-conjugated Antibody</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>IC2105G</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fabrication of 3d cardiac microtissue arrays using human ipsc-derived cardiomyocytes, cardiac fibroblasts, and endothelial cells

Die Erzeugung von humanen Kardiomyozyten (CMs), kardialen Fibroblasten (CFs) und Endothelzellen (ECs) aus induzierten pluripotenten Stammzellen (iPSCs) bot eine einzigartige Gelegenheit, das komplexe Zusammenspiel zwischen verschiedenen kardiovaskulären Zelltypen zu untersuchen, das die Gewebeentwicklung und -krankheit antreibt. Im Bereich der Herzgewebemodelle verwenden mehrere ausgeklügelte dreidimensionale (3D) Ansätze induzierte pluripotente Stammzell-abgeleitete Kardiomyozyten (iPSC-CMs), um die physiologische Relevanz und die native Gewebeumgebung mit einer Kombination aus extrazellulären Matrizen und Vernetzern nachzuahmen. Diese Systeme sind jedoch ohne Mikrofabrikationskenntnisse komplex herzustellen und benötigen mehrere Wochen für die Selbstmontage. Am wichtigsten ist, dass vielen dieser Systeme Gefäßzellen und Herzfibroblasten fehlen, die über 60% der Nichtmyozyten im menschlichen Herzen ausmachen. Hier beschreiben wir die Ableitung aller drei Herzzelltypen aus iPS-Zellen zur Herstellung kardialer Mikrogewebe. Diese einfache Replik-Formgebungstechnik ermöglicht die kardiale Mikrobearbeitungskultur in Standard-Multi-Well-Zellkulturplatten für mehrere Wochen. Die Plattform ermöglicht eine benutzerdefinierte Kontrolle über Mikrogewebegrößen basierend auf der anfänglichen Seeding-Dichte und benötigt weniger als 3 Tage für die Selbstorganisation, um beobachtbare kardiale Mikrogewebekontraktionen zu erreichen. Darüber hinaus können die kardialen Mikrogewebe leicht verdaut werden, während eine hohe Zelllebensfähigkeit für die Einzelzellbefragung unter Verwendung von Durchflusszytometrie und Einzelzell-RNA-Sequenzierung (scRNA-seq) erhalten bleibt. Wir stellen uns vor, dass dieses In-vitro-Modell von kardialen Mikrogeweben dazu beitragen wird, Validierungsstudien in der Arzneimittelentdeckung und Krankheitsmodellierung zu beschleunigen.

Immunstaining und Durchflusszytometrie Charakterisierung von iPSC-abgeleiteten CMs, ECs und CFs Um kardiale Mikrogewebe zu erzeugen, die aus iPSC-CMs, iPSC-ECs und iPSC-CFs bestehen, werden alle drei Zelltypen einzeln differenziert und charakterisiert. Die In-vitro-Differenzierung von iPS-Zellen zu iPSC-CMs hat sich in den letzten Jahren verbessert. Die Ausbeute und Reinheit von iPSC-CMs unterscheiden sich jedoch von Linie zu Linie. Das aktuelle Protokoll liefert über 75% reine iPSC-CMs, die...

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Fabrication of 3D Cardiac Microtissue Arrays using Human iPSC-Derived Cardiomyocytes, Cardiac Fibroblasts, and Endothelial Cells

Hier beschreiben wir eine einfach zu bedienende Methodik zur Erzeugung von 3D-selbstorganisierten kardialen Mikrogewebe-Arrays, die aus vordifferenzierten humaninduzierten pluripotenten Stammzell-abgeleiteten Kardiomyozyten, Herzfibroblasten und Endothelzellen bestehen. Diese benutzerfreundliche und zellarme Technik zur Erzeugung kardialer Mikrogewebe kann für die Krankheitsmodellierung und frühe Stadien der Arzneimittelentwicklung implementiert werden.

Herstellung von 3D-Cardiac Microtissue Arrays unter Verwendung von humanen iPSC-abgeleiteten Kardiomyozyten, kardialen Fibroblasten und Endothelzellen

Generation of human cardiomyocytes (CMs), cardiac fibroblasts (CFs), and endothelial cells (ECs) from induced pluripotent stem cells (iPSCs) has provided ...

Das Protokoll kombiniert die Kraft der Erzeugung menschlicher kardiovaskulärer Zelltypen unter Verwendung induzierter pluripotenter Stammzellen und einer vielseitigen Technik, um schlagende Herzsphäroide in weniger als 72 Stunden zu erzeugen. Diese kardialen Sphäroide können für die Krankheitsmodellierung und Drogentests verwendet werden. Einer der Hauptvorteile dieser einfachen Technik besteht darin, dass man fast 1000 schlagende Herzsphäroide in einer Standard-12-Well-Platte erzeugen konnte.Und am wichtigsten ist, dass jedes einzelne Herzsphäroid mit bildgebender Technik auf seine kontraktile Funktion untersucht werden kann. Nachdem Sie Agarose in der Mikrowelle geschmolzen haben, legen Sie sie in die Biosicherheitswerkbank und lassen Sie sie drei Minuten abkühlen. 700 Mikroliter der geschmolzenen Agarose pipettieren und in die Silikonmikroformung eines neun mal neun Arrays geben, wobei darauf zu achten ist, dass keine Blasen entstehen.Legen Sie die Form vorsichtig auf den vorkalten Eisblock, um die Agarosedauer zu beschleunigen. Sobald die Agarose durchscheinend ist, biegen Sie vorsichtig die Kanten der Mikroform, um die Agarose-Replik zu verlieren, und schälen Sie die Replik vorsichtig von allen Seiten, um sie von der Silikon-Mikroform zu lösen. Übertragen Sie das Agarose-Mikrogewebetablett mit 81 kreisförmigen Aussparungen in eine sterile 12-Well-Platte, geben Sie dann zwei Milliliter PBS in das Agarose-Mikrogewebetablett und untersuchen Sie es unter dem Mikroskop auf eingeschlossene Blasen oder unregelmäßig geformte Vertiefungen.Tauchen Sie die Agaroseschale über Nacht in zwei Milliliter 70% Ethanol, gefolgt von einer UV-Behandlung in der Biosicherheitswerkbank für eine Stunde. Entfernen Sie das 70% ige Ethanol und waschen Sie es zweimal mit destilliertem Wasser und einmal mit zwei Millilitern PBS. Sobald die induzierten pluripotenten Stammzell-abgeleiteten Kardiomyozyten, Herzfibroblasten und Endothelzellen nach Trypsinisierung und Neutralisation gezählt sind, legen Sie die Zellsuspensionen auf das Eis.Mischen Sie in einem neuen Röhrchen die induzierten pluripotenten Stammzellen aus Kardiomyozyten, Kardioblasten und Endothelzellen. Entfernen Sie dann das PBS aus dem Brunnen und der Zellsaatkammer, ohne die Vertiefungen zu berühren, und fügen Sie 200 Mikroliter der Zellsuspension tropfenweise hinzu. Lassen Sie die Zellen bei 37 Grad Celsius in einem Kohlendioxid-Inkubator für zwei Stunden absetzen.Fügen Sie mikrogewebtes Herstellungsmedium hinzu, das die Agaroseform umgibt, um die Oberfläche der inneren Kammer zu bedecken. Nach 24 Stunden auf selbstorganisierte und kompakte Sphäroide in den kreisförmigen Vertiefungen achten. Wechseln Sie das Medium alle zwei Tage, um die Sphäroide zu erhalten.Typischerweise kann nach 48 Stunden ein spontanes Schlagen der Sphäroide beobachtet werden. Kultivieren Sie die einzelnen Zelltypen separat auf Basalmembranmatrixmedium oder gelatinebeschichteten Kammerobjektträgern. Spülen Sie die Herzmikrogewebe vorsichtig aus den kreisförmigen Vertiefungen und sammeln Sie sie in einem 15-Milliliter-Chronikröhrchen.Aspirieren Sie das Medium und spülen Sie die Zellen oder die Mikrogewebe mit einem Milliliter PBS ab. Fixieren Sie dann die Zellen oder die Mikrogewebe mit einem Fixationspuffer, der 4,2% PFA enthält, und inkubieren Sie bei Raumtemperatur. Aspirieren Sie die PFA und inkubieren Sie die Zellen oder die Mikrogewebe mit einem Milliliter permeabilisierender Lösung.Dann die Lösung absaugen und mit zwei bis drei Millilitern PBS abspülen. 500 bis 1000 Mikroliter Blocklösung in die Zellen geben und mindestens eine Stunde für die Kammerobjektträger und für drei bis vier Stunden für die Mikrogewebe inkubieren. Inkubieren Sie die Proben mit konjugierten Antikörpern in der Blocklösung für eine Stunde für die Kammerobjektträger und über Nacht bei vier Grad Celsius für die kardialen Mikrogewebe.Waschen Sie die Kammerschieber dreimal mit 500 Mikrolitern von 0,1% Tween 20, mit fünf Minuten Dauer zwischen jeder Wäsche, und führen Sie dann eine letzte Wäsche mit PBS durch. Waschen Sie das Herzmikrogewebe fünfmal mit zwei Millilitern von 0,1% Tween 20, mit einer Dauer von 20 Minuten zwischen jeder Wäsche. Führen Sie dann eine letzte Wäsche für weitere 20 Minuten durch.Inkubieren Sie die Zellen oder die Mikrogewebe vor der konfokalen Mikroskopie mit DAPI, übertragen Sie dann die kardialen Mikrogewebe vorsichtig auf eine 35-Millimeter-Glasbodenschale und fügen Sie PBS hinzu, um das Mikrogewebe unterzutauchen. Spülen Sie die Mikrogewebe mit einer breiten oder einer Milliliter-Pipettenspitze aus den kreisförmigen Vertiefungen mit mittlerer oder einer Milliliter-Pipettenspitze in ein chronisches 15-Milliliter-Röhrchen und lassen Sie sie sich absetzen. Dann das Medium absaugen und mit einem Milliliter PBS abspülen.200 bis 300 Mikroliter des Enzymaufschlusspuffers zugeben und 10 Minuten bei 37 Grad Celsius inkubieren. Mischen Sie dann die Mikrogewebe vorsichtig für eine Minute und wiederholen Sie die Inkubation. Nach der Inkubation mischen Sie die Mikrogewebe kräftig mit einer normalen Pipettenspitze von einem Milliliter, um sie in einzelne Zellen zu verdauen.Erhalten Sie eine trübe Zellsuspension und neutralisieren Sie die Zellsuspension sofort mit fünf Millilitern Medium, das 5% FBS enthält. Die Zellsuspension durch ein 40 Mikrometer großes Zellsieb abseihen und die Gesamtzahl der Zellen zählen. Zentrifugieren Sie die Einzelzellsuspension bei 300 mal G für fünf Minuten bei vier Grad Celsius.Den Überstand aspirieren und die Zellen im Annexin-Bindungspuffer mit FITC Annexin V und Propidiumiodid oder TO-PRO-3-Totzellausschlussfarbstoff resuspendieren und 10 Minuten auf Eis inkubieren. Nach der Inkubation werden 300 Mikroliter des Annexin-Bindungspuffers in die Zellsuspension gegeben und zur durchflusszytometrischen Analyse in ein FACS-Röhrchen mit rundem Boden überführt. Gereinigte induzierte pluripotente Stammzell-abgeleitete Kardiomyozyten, Endothelzellen und Herzfibroblasten wurden mittels Phasenkontrastmikroskopie visualisiert.Die Reinheit verschiedener Zelltypen wurde mittels Immunfärbung und Durchflusszytometrie bestimmt. Troponin T wurde als Marker für Kardiomyozyten verwendet, und es wurde eine Reinheit von über 90% erreicht. Das Thrombozyten-Endothelzelladhäsionsmolekül CD31 und Vimentin wurden als Marker für Endothelzellen und kardiale Fibroblasten verwendet und zeigten eine Reinheit von über 98% bzw. 96% an.Die Immunfluoreszenzfärbung ergab, dass die Kardiomyozyten am schwersten waren und das Zentrum der Mikrogewebe einnahmen, während die Endothelzellen in den Mikrogeweben eingestreut waren und die Herzfibroblasten überwiegend die Peripherie besetzten. Die Verdauung der Mikrogewebe mit diesem Tempo eins und Liberase TL führte nach zwei Wochen in Kultur zu hoch lebensfähigen Zellproportionen mit weniger apoptotischen Zellen. Die einstündige Exposition der kardialen Mikrobeschwerden gegenüber einer hohen Konzentration von Doxorubicin induzierte dosisabhängige Kardiotoxizität.Die Kontraktilität des Mikrogewebes und die Bewegung der Vektoren erzeugten eine Pseudo-Wärmekarte, die das durchschnittliche Kontraktionsprofil über das Mikrogewebe veranschaulichte. Die kontraktile Bewegung der kardialen Mikrogewebe erzeugte positive Spitzen, die als Kontraktionsgeschwindigkeit, Relaxationsgeschwindigkeit und Schlagfrequenz gemessen wurden, die als Zeit zwischen zwei Kontraktionszyklen berechnet wurde. Die Kontraktilität der kardialen Mikrobeschwerden war über vier Wochen in Kultur konsistent.Die Erwärmung der Zellen ist einer der wichtigsten Schritte in diesem speziellen Protokoll, bei dem darauf geachtet werden muss, die Zellsuspension tropfenweise in das Agarose-Array zu dosieren, um eine gleichmäßige Verteilung innerhalb der Mikrotiterwerke zu gewährleisten und ein Überlaufen zu verhindern. Mit dem optimierten Bestrahlungsprotokoll dieser Mikrogewebe könnte man diese Hochdurchsatz-Sequenzierungstechnologien wie Einzelzell-RNA-seq oder Einzelzell-ATAC-seq unterziehen, um zellspezifische Genexpressionsmuster zu verstehen, die sich aus unterschiedlichen Behandlungsbedingungen ergeben.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Encapsulation of Cardiomyocytes in a Fibrin Hydrogel for Cardiac Tissue Engineering

Verkapselung von Kardiomyozyten in einer Fibrin-Hydrogel für Cardiac Tissue Engineering

Culturing cells in a three dimensional hydrogel environment is an important technique for developing constructs for tissue engineering as well as studying ...

Forschung

Biotechnik

Anatomical Reconstructions of the Human Cardiac Venous System using Contrast-computed Tomography of Perfusion-fixed Specimens

Anatomische Rekonstruktionen des menschlichen Cardiac Venensystem mit Kontrast-Computertomographie Perfusion-fixierten Proben

A detailed  understanding of the complexity and relative variability within the human  cardiac venous system is crucial for the development of cardiac ...

Construction of Defined Human Engineered Cardiac Tissues to Study Mechanisms of Cardiac Cell Therapy

Bau von Defined Menschen Engineered Herzgewebe zur Untersuchung Mechanismen der Herzzelltherapie

Human cardiac tissue engineering can fundamentally impact therapeutic discovery through the development of new species-specific screening systems that ...

Creation of Cardiac Tissue Exhibiting Mechanical Integration of Spheroids Using 3D Bioprinting

Schaffung von Herzgewebe, die mechanische Integration von Sphäroiden mit 3D-Bioprinting ermöglicht

This protocol describes 3D bioprinting of cardiac tissue without the use of biomaterials, using only cells. Cardiomyocytes, endothelial cells and ...

Using Extraordinary Optical Transmission to Quantify Cardiac Biomarkers in Human Serum

Verwendung von außergewöhnlichen optischen Übertragung kardiale Biomarker in humanem Serum quantifizieren

For a biosensing platform to have clinical relevance in point-of-care (POC) settings, assay sensitivity, reproducibility, and ability to reliably monitor ...

Protocol for MicroRNA Transfer into Adult Bone Marrow-derived Hematopoietic Stem Cells to Enable Cell Engineering Combined with Magnetic Targeting

Protokoll für MicroRNA Transfer an adulten Knochenmark gewonnenen Hämatopoetischen Stammzellen Zelle Engineering kombiniert mit magnetischen Ausrichtung ermöglichen

While CD133+ hematopoietic stem cells (SCs) have been proven to provide high potential in the field of regenerative medicine, their low retention rates ...

A Net Mold-based Method of Scaffold-free Three-Dimensional Cardiac Tissue Creation

Eine Net Schimmel basierende Methode der dreidimensionalen Gerüst-freie Herzgewebe Schöpfung

This protocol describes a novel and easy net mold-based method to create three-dimensional (3-D) cardiac tissues without additional scaffold material. ...

Standardized and Scalable Assay to Study Perfused 3D Angiogenic Sprouting of iPSC-derived Endothelial Cells In Vitro

Standardisierter und skalierbarer Assay zur Untersuchung perfused 3D Angiogenic Sprouting of iPSC-derived Endothelial Cells In Vitro

Pre-clinical drug research of vascular diseases requires in vitro models of vasculature that are amendable to high-throughput screening. However, current ...

Human iPSC-Derived Cardiomyocyte Networks on Multiwell Micro-electrode Arrays for Recurrent Action Potential Recordings

Human iPSC-Derived Cardiomyozyte Networks auf Multiwell Micro-Elektroden-Arrays für recurrent Action Potential Recordings

Cardiac safety screening is of paramount importance for drug discovery and therapeutics. Therefore, the development of novel high-throughput ...

Preclinical Cardiac Electrophysiology Assessment by Dual Voltage and Calcium Optical Mapping of Human Organotypic Cardiac Slices

Präklinische Kardiale Elektrophysiologie Bewertung durch Dual Voltage und Calcium Optical Mapping of Human Organotypic Cardiac Slices

Human cardiac slice preparations have recently been developed as a platform for human physiology studies and therapy testing to bridge the gap between ...