Name: fabrication of 3d cardiac microtissue arrays using human ipsc-derived cardiomyocytes, cardiac fibroblasts, and endothelial cells
Uploaded: 2021-03-14T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fabrication of 3D Cardiac Microtissue Arrays using Human iPSC-Derived Cardiomyocytes, Cardiac Fibroblasts, and Endothelial Cells at JoVE.com

אנו מודים לד"ר אמנדה צ'ייס על המשוב המועיל שלה על כתב היד. תמיכה במימון ניתנה על ידי התוכנית לחקר מחלות הקשורות לטבק (TRDRP) של אוניברסיטת קליפורניה, T29FT0380 (D.T. ) ו 27IR-0012 (J.C.W.); איגוד הלב האמריקאי 20POST35210896 (H.K.) ו 17MERIT33610009 (J.C.W.); ומכוני הבריאות הלאומיים (NIH) R01 HL126527, R01 HL123968, R01 HL150693, R01 HL141851 ו- NIH UH3 TR002588 (J.C.W).

1. בינוני, ריאגנט, הכנת צלחת תרבות
<ol><li>פתרון לשטיפת תאים לתרבות התאים: יש להשתמש בתמיסת מלח אחת עם חוצץ פוספט (PBS) או ב-Hanks איזון מלח (HBSS) ללא סידן או מגנזיום.</li>
	<li>מדיית בידול קרדיומיוצ'יט<ol>
<li>הכן בידול בינוני #1 על ידי הוספת תוספת 10 מ"ל (50x B27 בתוספת אינסולין) ל 500 מ"ל קרדיומיוציטים בזאלי בינוני (...

<ol>
	<li>Neofytou, E., O'Brien, C. G., Couture, L. A., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hurdles+to+clinical+translation+of+human+induced+pluripotent+stem+cells.">Hurdles to clinical translation of human induced pluripotent stem cells.</a> Journal of Clinical Investigation. 125 (7), 2551-2557 (2015).</li><li>Lancaster, M. A., Knoblich, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organogenesis+in+a+dish:+Modeling+development+and+disease+using+organoid+technologies.">Organogenesis in a dish: Modeling development and disease using organoid technologies.</a> Science. 345 (6194), 1247125 (2014).</li><li>Liu, C., Oikonomopoulos, A., Sayed, N., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+human+diseases+with+induced+pluripotent+stem+cells:+from+2D+to+3D+and+beyond.">Modeling human diseases with induced pluripotent stem cells: from 2D to 3D and beyond.</a> Development. 145 (5), 156166 (2018).</li><li>Yin, X., Mead, B. E., Safaee, H., Langer, R., Karp, J. M., Levy, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+stem+cell+organoids.">Engineering stem cell organoids.</a> Cell Stem Cell. 18 (1), 25-38 (2016).</li><li>Giacomelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+cardiac+microtissues+composed+of+cardiomyocytes+and+endothelial+cells+co-differentiated+from+human+pluripotent+stem+cells.">Three-dimensional cardiac microtissues composed of cardiomyocytes and endothelial cells co-differentiated from human pluripotent stem cells.</a> Development. 144 (6), 1008-1017 (2017).</li><li>Kurokawa, Y. K., George, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+engineering+the+cardiac+microenvironment:+Multicellular+microphysiological+systems+for+drug+screening.">Tissue engineering the cardiac microenvironment: Multicellular microphysiological systems for drug screening.</a> Advances in Drug Delivery Reviews. 96, 225-233 (2016).</li><li>Cartledge, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+crosstalk+between+cardiac+fibroblasts+and+adult+cardiomyocytes+by+soluble+mediators.">Functional crosstalk between cardiac fibroblasts and adult cardiomyocytes by soluble mediators.</a> Cardiovascular Research. 105 (3), 260-270 (2015).</li><li>Ravenscroft, S. M., Pointon, A., Williams, A. W., Cross, M. J., Sidaway, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+non-myocyte+cells+show+enhanced+pharmacological+function+suggestive+of+contractile+maturity+in+stem+cell+derived+cardiomyocyte+microtissues.">Cardiac non-myocyte cells show enhanced pharmacological function suggestive of contractile maturity in stem cell derived cardiomyocyte microtissues.</a> Toxicology Science. 152 (1), 99-112 (2016).</li><li>Ieda, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+fibroblasts+regulate+myocardial+proliferation+through+beta1+integrin+signaling.">Cardiac fibroblasts regulate myocardial proliferation through beta1 integrin signaling.</a> Developmental Cell. 16 (2), 233-244 (2009).</li><li>Brutsaert, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+endothelial-myocardial+signaling:+its+role+in+cardiac+growth,+contractile+performance,+and+rhythmicity.">Cardiac endothelial-myocardial signaling: its role in cardiac growth, contractile performance, and rhythmicity.</a> Physiological Reviews. 83 (1), 59-115 (2003).</li><li>Huebsch, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+video-based+analysis+of+contractility+and+calcium+flux+in+human-induced+pluripotent+stem+cell-derived+cardiomyocytes+cultured+over+different+spatial+scales.">Automated video-based analysis of contractility and calcium flux in human-induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes cultured over different spatial scales.</a> Tissue Engineering Part C Methods. 21 (5), 467-479 (2015).</li><li>Burridge, P. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemically+defined+generation+of+human+cardiomyocytes.">Chemically defined generation of human cardiomyocytes.</a> Nature Methods. 11 (8), 855-860 (2014).</li><li>Gu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pravastatin+reverses+obesity-induced+dysfunction+of+induced+pluripotent+stem+cell-derived+endothelial+cells+via+a+nitric+oxide-dependent+mechanism.">Pravastatin reverses obesity-induced dysfunction of induced pluripotent stem cell-derived endothelial cells via a nitric oxide-dependent mechanism.</a> European Heart Journal. 36 (13), 806-816 (2015).</li><li>Williams, I. M., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+endothelial+cells+from+human+pluripotent+stem+cells.">Generation of endothelial cells from human pluripotent stem cells.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology. 39 (7), 1317-1329 (2019).</li><li>Zhang, H., Shen, M., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+quiescent+cardiac+fibroblasts+derived+from+human+induced+pluripotent+stem+cells.">Generation of quiescent cardiac fibroblasts derived from human induced pluripotent stem cells.</a> Methods in Molecular Biology. , 1-7 (2020).</li><li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+quiescent+cardiac+fibroblasts+from+human+induced+pluripotent+stem+cells+for+in+vitro+modeling+of+cardiac+fibrosis.">Generation of quiescent cardiac fibroblasts from human induced pluripotent stem cells for in vitro modeling of cardiac fibrosis.</a> Circulation Research. 125 (5), 552-566 (2019).</li><li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+cardiac+fibroblasts+derived+from+human+pluripotent+stem+cells+via+second+heart+field+progenitors.">Functional cardiac fibroblasts derived from human pluripotent stem cells via second heart field progenitors.</a> Nature Communications. 10 (1), 2238-2315 (2019).</li><li>Giacomelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human-iPSC-derived+cardiac+stromal+cells+enhance+maturation+in+3d+cardiac+microtissues+and+reveal+non-cardiomyocyte+contributions+to+heart+disease.">Human-iPSC-derived cardiac stromal cells enhance maturation in 3d cardiac microtissues and reveal non-cardiomyocyte contributions to heart disease.</a> Cell Stem Cell. 26 (6), 862-879 (2020).</li><li>Burridge, P. W., Holmstr&#246;m, A., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemically+defined+culture+and+cardiomyocyte+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells.">Chemically defined culture and cardiomyocyte differentiation of human pluripotent stem cells.</a> Current Protocols in Human Genetics. 87 (1), 1-15 (2015).</li><li>Lian, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+cardiomyocyte+differentiation+from+human+pluripotent+stem+cells+by+modulating+Wnt/&#946;-catenin+signaling+under+fully+defined+conditions.">Directed cardiomyocyte differentiation from human pluripotent stem cells by modulating Wnt/&#946;-catenin signaling under fully defined conditions.</a> Nature Protocols. 8 (1), 162-175 (2013).</li><li>Buikema, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt+activation+and+reduced+cell-cell+contact+synergistically+induce+massive+expansion+of+functional+human+iPSC-derived+cardiomyocytes.">Wnt activation and reduced cell-cell contact synergistically induce massive expansion of functional human iPSC-derived cardiomyocytes.</a> Cell Stem Cell. 27 (1), 50-63 (2020).</li><li>Feyen, D. A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+maturation+media+improve+physiological+function+of+human+iPSC-derived+cardiomyocytes.">Metabolic maturation media improve physiological function of human iPSC-derived cardiomyocytes.</a> Cell Reports. 32 (3), 107925 (2020).</li><li>Karbassi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiomyocyte+maturation:+Advances+in+knowledge+and+implications+for+regenerative+medicine.">Cardiomyocyte maturation: Advances in knowledge and implications for regenerative medicine.</a> Nature Reviews Cardiology. 17 (6), 341-359 (2020).</li><li>Li, Z., Hu, S., Ghosh, Z., Han, Z., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+characterization+and+expression+profiling+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-+and+embryonic+stem+cell-derived+endothelial+cells.">Functional characterization and expression profiling of human induced pluripotent stem cell- and embryonic stem cell-derived endothelial cells.</a> Stem Cells Development. 20 (10), 1701-1710 (2011).</li><li>Lian, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+to+endothelial+progenitors+via+small-molecule+activation+of+WNT+signaling.">Efficient differentiation of human pluripotent stem cells to endothelial progenitors via small-molecule activation of WNT signaling.</a> Stem Cell Report. 3 (5), 804-816 (2014).</li><li>Gu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+to+endothelial+cells.">Efficient differentiation of human pluripotent stem cells to endothelial cells.</a> Current Protocols in Human Genetics. 98 (1), 64 (2018).</li><li>Acharya, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+bHLH+transcription+factor+Tcf21+is+required+for+lineage-specific+EMT+of+cardiac+fibroblast+progenitors.">The bHLH transcription factor Tcf21 is required for lineage-specific EMT of cardiac fibroblast progenitors.</a> Development. 139 (12), 2139-2149 (2012).</li><li>Wessels, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epicardially+derived+fibroblasts+preferentially+contribute+to+the+parietal+leaflets+of+the+atrioventricular+valves+in+the+murine+heart.">Epicardially derived fibroblasts preferentially contribute to the parietal leaflets of the atrioventricular valves in the murine heart.</a> Development Biology. 366 (2), 111-124 (2012).</li><li>Ali, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+heterogeneity+of+cardiac+fibroblasts+does+not+predict+pathological+proliferation+and+activation.">Developmental heterogeneity of cardiac fibroblasts does not predict pathological proliferation and activation.</a> Circulation Research. 115 (7), 625-635 (2014).</li><li>McMurtrey, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analytic+and+numerical+models+of+oxygen+and+nutrient+diffusion,+metabolism+dynamics,+and+architecture+optimization+in+three-dimensional+tissue+constructs+with+applications+and+insights+in+cerebral+organoids.">Analytic and numerical models of oxygen and nutrient diffusion, metabolism dynamics, and architecture optimization in three-dimensional tissue constructs with applications and insights in cerebral organoids.</a> Tissue Engineering Part C Methods. (3), 221-249 (2015).</li><li>Thomas, D., O'Brien, T., Pandit, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+customized+extracellular+niche+engineering:+progress+in+cell-entrapment+technologies.">Toward customized extracellular niche engineering: progress in cell-entrapment technologies.</a> Advanced Materials. 30 (1), 1703948 (2018).</li><li>Thomas, D., Shenoy, S., Sayed, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Building+Multi-dimensional+induced+pluripotent+stem+cells-based+model+platforms+to+assess+cardiotoxicity+in+cancer+therapies.">Building Multi-dimensional induced pluripotent stem cells-based model platforms to assess cardiotoxicity in cancer therapies.</a> Front Pharmacol. 12, 39 (2021).</li><li>Rhee, J. -. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+secondary+iron+overload+cardiomyopathy+with+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+cardiomyocytes.">Modeling secondary iron overload cardiomyopathy with human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes.</a> Cell Reports. 32 (2), 107886 (2020).</li><li>Paik, D. T., Cho, S., Tian, L., Chang, H. Y., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+RNA+sequencing+in+cardiovascular+development,+disease,+and+medicine.">Single-cell RNA sequencing in cardiovascular development, disease, and medicine.</a> Nature Reviews Cardiology. 17 (8), 457-473 (2020).</li><li>Nguyen, Q. H., Pervolarakis, N., Nee, K., Kessenbrock, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+considerations+for+single-cell+RNA+sequencing+approaches.">Experimental considerations for single-cell RNA sequencing approaches.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 6, 108 (2018).</li><li>Lau, E., Paik, D. T., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systems-wide+approaches+in+induced+pluripotent+stem+cell+models.">Systems-wide approaches in induced pluripotent stem cell models.</a> Annual Reviews in Pathology. 14 (1), 395-419 (2019).</li><li>Maddah, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+non-invasive+platform+for+functional+characterization+of+stem-cell-derived+cardiomyocytes+with+applications+in+cardiotoxicity+testing.">A non-invasive platform for functional characterization of stem-cell-derived cardiomyocytes with applications in cardiotoxicity testing.</a> Stem Cell Report. 4 (4), 621-631 (2015).</li><li>Sala, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Musclemotion:+A+versatile+open+software+tool+to+quantify+cardiomyocyte+and+cardiac+muscle+contraction+in+vitro+and+in+vivo.">Musclemotion: A versatile open software tool to quantify cardiomyocyte and cardiac muscle contraction in vitro and in vivo.</a> Circulation Research. 122 (3), 5-16 (2018).</li></ol>

כדי ליצור microtissues לב מ iPSC-CMs מובחנים מראש, iPSC-ECs, ו- iPSC-CFs, זה חיוני כדי להשיג תרבות טהורה מאוד לשליטה טובה יותר של מספרי תאים לאחר דחיסת תאים מעוכבים במגע בתוך microtissues הלב. לאחרונה, ג'אקומלי ואח'. al.18 הדגימו את הייצור של מיקרוטיסויות לב באמצעות iPSC-CMs, iPSC-ECs, ו- iPSC-CFs. מיקרוטיזות לב שנוצרו ...

גילוי תרופות ומודלים של מחלות בתחום המחקר הקרדיווסקולרי מתמודדים עם מספר אתגרים בשל מחסור בדגימות רלוונטיות קלינית וכלים תרגומיים לקויים1. מודלים פרה-קליניים מורכבים ביותר או מודלים פשטניים יתר על המידה במבחנה של תאים חד-תאיים אינם מציגים תנאים פתופיזיולוגיים באופן ניתן לשחזור. לכן, מספר פלטפורמות ממוזערות מהונדסות רקמות התפתחו כדי לעזור לגשר על הפער, במטרה להשיג איזון בין קלות היישום באופן בעל תפוקה גבוהה לבין תקציר נאמן של תפקוד הרקמה2,3. עם הופעתה של טכנולוגיית תאי גזע פלוריפוטנטים המושרים (iPSC), ניתן ליישם כלים להנדסת רקמות על תאים ספציפיים למטופל עם או בלי מחלות לב וכלי דם בסיסיות כדי לענות על שאלות מחקר4,5,6. מודלים מהונדסים רקמות כאלה עם הרכב תאי דומה רקמת הלב יכול להיות מנוצל במאמצי פיתוח תרופות כדי לבדוק cardiotoxicity וחוסר תפקוד הנגרמים על ידי שינויים פתולוגיים בהתנהגות של סוג תא אחד או מרובים.
מיקרוטיסואים או אורגנוידים בהרכבה עצמית שמקורם ב-IPSCs אנושיים הם מבנים תלת-ממדיים (3D) שהם מכלולים זעירים דמויי רקמות המציגים קווי דמיון פונקציונליים למקביליהם ב-vivo . ישנן מספר גישות שונות המאפשרות היווצרות של organoids במקום באמצעות הבחנה מכוונת של iPSCs או באמצעות היווצרות של גופים עובריים4. האורגנוידים המתקבלים הם כלי הכרחי לחקר תהליכים מורפוגנטיים המניעים אורגנוגנזה. עם זאת, נוכחות של מגוון רחב של אוכלוסיות תאים והבדלים בארגון עצמי יכול להוביל לשונות בתוצאות בין organoids שונים5. לחלופין, תאים מובחנים מראש כי הם מורכבים עצמית לתוך microtissues עם סוגי תאים ספציפיים לרקמות כדי ללמוד אינטראקציות תא מקומיות הם מודלים מצוינים, שבו זה אפשרי לבודד את הרכיבים בהרכבה עצמית. במיוחד במחקר לב אנושי, פיתוח של microtissues לב 3D עם רכיבים רב תאיים הוכיח להיות מאתגר כאשר תאים נגזרים מקווי חולים שונים או מקורות מסחריים.
כדי לשפר את ההבנה המכניסטית שלנו של התנהגויות תאים במודל רלוונטי מבחינה פיזיולוגית, מותאם אישית, במבחנה, באופן אידיאלי כל סוגי התאים המרכיבים צריכים להיגזר מאותו קו מטופל. בהקשר של לב אנושי, מודל מבחנה לב מייצג באמת יתפוס את השיח הצולב בין סוגי תאים דומיננטיים, כלומר, קרדיומיוציטים (CMs), תאי אנדותל (ECs) ופיברובלסטים לבביים (CFs)6,7. הסיכום הנאמן של שריר הלב לא רק דורש מתיחה ביופיסית וגירוי אלקטרופיזיולוגי, אלא גם איתות תאי-תא הנובעים מסוגי תאים תומכים כגון ECs ו- CFs8. CFs מעורבים בסינתזה של מטריצה חוץ-תאית ושמירה על מבנה הרקמות; ובמצב פתולוגי, CFs יכול לגרום פיברוזיס ולשנות הולכה חשמלית ב- CMs9. באופן דומה, ECs יכול לווסת תכונות התכווצות של CMs באמצעות איתות paracrine ואספקת דרישות מטבוליות חיוניות10. לפיכך, יש צורך במיקרוטיסות לב אנושיות המורכבות מכל שלושת סוגי התאים העיקריים כדי לאפשר ניסויים רלוונטיים מבחינה פיזיולוגית לתפוקה גבוהה להתבצע.
כאן, אנו מתארים גישה מלמטה למעלה בייצור של microtissues לב על ידי נגזרת של קרדיומיוציטים שמקורם IPSC אנושי (iPSC-CMs), תאי אנדותל שמקורם IPSC (iPSC-ECs), ופיברובלסטים לב נגזר IPSC (iPSC-CFs) ואת התרבות התלת-ממדית שלהם במערכים מיקרוטיזיים לב אחידים. שיטה קלה זו של יצירת מיקרוטיסו לב פועם באופן ספונטני ניתן להשתמש עבור מודלים מחלות ובדיקה מהירה של תרופות להבנה פונקציונלית ומכאניסטית של פיזיולוגיה של הלב. יתר על כן, פלטפורמות מיקרוטיסו לב רב-תאיות כאלה יכולות להיות מנוצלות בטכניקות עריכת גנום כדי לחקות התקדמות מחלות לב לאורך זמן בתנאי תרבות כרוניים או חריפים.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>12-well plates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-772-29</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3D micro-molds</td>
			<td>Microtissues</td>
			<td>12-81 format</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-772-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoMACS Rinsing Solution</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>NC9104697</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 Supplement minus Insulin</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A1895601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 Supplement plus Insulin</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17504-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Cytofix</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>554655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Matrigel, hESC-qualified matrix</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>354277</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cardiac Troponin T Antibody</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-120-403</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD144 (VE-Cadherin) MicroBeads</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-097-857</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD31 Antibody</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-110-670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD31 Microbeads</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-091-935</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHIR-99021</td>
			<td>Selleckchem</td>
			<td>S2924</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DDR2</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-81707</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dead Cell Apoptosis Kit with Annexin V FITC and PI</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>V13242</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase I</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>4942086001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, high glucose (4.5g/L) no glutamine medium</td>
			<td></td>
			<td>11960044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F-12 basal medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11320033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s phosphate buffered saline (DPBS), no calcium, no magnesium</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>14190-136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGM2 BulletKit</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-3124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>10437</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FibroLife Serum-Free Fibroblast LifeFactors Kit</td>
			<td>LifeLIne Cell Technology</td>
			<td>LS-1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose free RPMI medium</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11879-020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat serum</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>16210-064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human FGF-basic</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>13256029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human VEGF-165</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>100-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IWR-1-endo</td>
			<td>Selleckchem</td>
			<td>S7086</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liberase TL</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>5401020001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LS Sorting Columns</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-042-401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MACS BSA Stock solution</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-091-376</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MACS Rinsing Buffer</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-091-222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MidiMACS Separator</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-042-302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI medium</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11835055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SB431542</td>
			<td>Selleckchem</td>
			<td>S1067</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TO-PRO 3</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>R37170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>X100-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE Select 10X</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>red</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vimentin Alexa Fluor&#174; 488-conjugated Antibody</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>IC2105G</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fabrication of 3d cardiac microtissue arrays using human ipsc-derived cardiomyocytes, cardiac fibroblasts, and endothelial cells

דור של קרדיומיוציטים אנושיים (CMs), פיברובלסטים לבביים (CFs) ותאי אנדותל (ECs) מתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים (IPSCs) סיפק הזדמנות ייחודית לחקור את יחסי הגומלין המורכבים בין סוגי תאים לב וכלי דם שונים המניעים התפתחות רקמות ומחלות. בתחום המודלים של רקמת לב, מספר גישות תלת-ממדיות מתוחכמות (3D) משתמשות בקרדיומיוציטים שמקורם בתאי גזע מושרים (iPSC-CMs) כדי לחקות רלוונטיות פיזיולוגית וסביבת רקמות מקומית עם שילוב של מטריצות חוץ-תאיות וקישורים צולבים. עם זאת, מערכות אלה מורכבות כדי לפברק ללא מומחיות microfabrication ודורשים מספר שבועות כדי להרכיב את עצמם. והכי חשוב, לרבות ממערכות אלה חסרים תאי כלי דם ופיברובלסטים לבביים המהווים מעל 60% מהלא-מיוציטים בלב האדם. כאן אנו מתארים את ההפקה של כל שלושת סוגי תאי הלב מ- IPSCs כדי לפברק מיקרוטיסות לב. טכניקת דפוס העתקים קלה זו מאפשרת תרבות מיקרוטיסו לבבית בלוחות תרבית תאים רב-תאיים סטנדרטיים במשך מספר שבועות. הפלטפורמה מאפשרת שליטה מוגדרת על ידי המשתמש בגדלים microtissue בהתבסס על צפיפות זריעה ראשונית ודורש פחות מ 3 ימים להרכבה עצמית כדי להשיג התכווצויות microtisue לב נצפה. יתר על כן, microtissues הלב ניתן לעיכול בקלות תוך שמירה על כדאיות גבוהה של תאים לחקירה של תא יחיד עם שימוש ציטומטריית זרימה ורצף RNA חד-תאי (scRNA-seq). אנו חוזים כי מודל הפריה חוץ גופית זה של מיקרוטיסויות לב יסייע להאיץ מחקרי אימות בגילוי תרופות ומודלים של מחלות.

אפיון ציטומטריה חיסונית וזרימה של CMs, קרנות אלקטרוניות ומסמכי PDF שמקורם ב- IPSC כדי ליצור מיקרוטיסויות לב המורכבות מ- iPSC-CMs, iPSC-ECs ו- iPSC-CFs, כל שלושת סוגי התאים מובחנים ומאופיינים בנפרד. בידול במבחנה של IPSCs ל- iPSC-CMs השתפר במהלך השנים האחרונות. עם זאת, התשואה והטוהר של iPSC-CMs שונים משור?...

Watch this Scientific Journal Video about Fabrication of 3D Cardiac Microtissue Arrays using Human iPSC-Derived Cardiomyocytes, Cardiac Fibroblasts, and Endothelial Cells at JoVE.com

Fabrication of 3D Cardiac Microtissue Arrays using Human iPSC-Derived Cardiomyocytes, Cardiac Fibroblasts, and Endothelial Cells

כאן, אנו מתארים מתודולוגיה קלה לשימוש כדי ליצור מערכי מיקרוטיסו לבביים תלת-ממדיים בהרכבה עצמית המורכבים מקרדיומיוציטים פלואוריפוטנטיים מובחנים מראש המושרים על ידי בני אדם, קרדיומיוציטים שמקורם בתאי גזע, פיברובלסטים לבביים ותאי אנדותל. תא זה ידידותי למשתמש ונמוך הדורש טכניקה כדי ליצור microtissues לב ניתן ליישם עבור מידול מחלות ושלבים מוקדמים של פיתוח תרופות.

ייצור מערכי מיקרוטיסו לב תלת-ממדיים באמצעות קרדיומיוציטים אנושיים שמקורם ב-IPSC, פיברובלסטים לבביים ותאי אנדותל

Generation of human cardiomyocytes (CMs), cardiac fibroblasts (CFs), and endothelial cells (ECs) from induced pluripotent stem cells (iPSCs) has provided ...

הפרוטוקול משלב את הכוח של יצירת סוגי תאי לב וכלי דם אנושיים באמצעות תאי גזע pluripotent המושרה וטכניקה רב-תכליתית ליצירת כדורי לב פועמים בפחות מ -72 שעות. כדורי לב אלה יכולים לשמש למידול מחלות ובדיקות סמים. אחד היתרונות העיקריים של טכניקה קלה זו היא שאפשר ליצור כמעט 1000 כדורי לב פועמים בלוח סטנדרטי של 12 בארות.והכי חשוב, כל ספרואיד לב יכול להיבדק על תפקודו התכווצות באמצעות טכניקה מבוססת הדמיה. לאחר המסת agarose במיקרוגל, מניחים אותו בארון biosafety ולאפשר לו להתקרר במשך שלוש דקות. פיפטה 700 מיקרוליטרים של האגרוז המותך ומוסיפים אותו למיקרומולד הסיליקון של מערך תשע על תשע, תוך הקפדה על הימנעות מיצירת בועות.בזהירות מניחים את התבנית על גוש הקרח הקר מראש כדי להאיץ את משך האגרוז. ברגע שהאגרוז הופך שקוף למחצה, כופף בזהירות את קצות המיקרומוד כדי לאבד את העתק האגרוז ולקלף בעדינות את העותק המשוכפל מכל הצדדים כדי לנתק אותו מהמיקרומוד הסיליקון. העבירו את מגש המיקרוטיסו האגרוז המכיל 81 שקעים עגולים לצלחת סטרילית של 12 בארות, ולאחר מכן הוסיפו שני מיליליטרים של PBS למגש המיקרוטיסו של האגרוז, ובדקו אותו מתחת למיקרוסקופ לאיתור בועות לכודות או בארות בצורת לא סדירה.הטביעו את מגש האגרוז בשני מיליליטרים של 70% אתנול בן לילה, ואחריו טיפול UV בארון הבטיחות הביולוגית למשך שעה אחת. הסר את 70% אתנול ולשטוף פעמיים עם מים מזוקקים, ופעם עם שני מיליליטר של PBS. לאחר שתאי הגזע הפלוריפוטנטיים המושרים שמקורם בקרדיומיוציטים, פיברובלסטים לבביים ותאי אנדותל נספרים לאחר טריפסיניזציה ונטרול, מניחים את ההשעיות של התאים על הקרח.בצינור חדש, ערבבו את תאי הגזע המושרים שמקורם בקרדיומיוציטים, פיברובלסטים לבביים ותאי אנדותל. לאחר מכן, הסר את ה- PBS מהבאר ומחדר זריעת התא מבלי לגעת בשקעים, והוסף 200 מיקרוליטרים של השעיית התא כלפי טיפה. אפשר לתאים להתיישב ב-37 מעלות צלזיוס באינקובטור דו תחמוצת הפחמן למשך שעתיים.הוסף מדיום ייצור רקמות מיקרו המקיף את עובש האגרוז כדי לכסות את פני השטח של החדר הפנימי. לאחר 24 שעות, שימו לב לספרואידים מורכבים וקומפקטיים בשקעים המעגליים. לשנות את המדיום כל יומיים כדי לשמור על הספרואידים.בדרך כלל, לאחר 48 שעות, ניתן לראות מכות ספונטניות של הספרואידים. תרבית את סוגי התאים הבודדים בנפרד על מדיום מטריצת ממברנה במרתף, או שקופיות תא מצופה ג'לטין. לשטוף בעדינות את microtissues הלב מתוך השקועים המעגליים, ולאסוף אותם בצינור כרוניקה 15 מיליליטר.לשאוף את המדיום ולשטוף את התאים או microtissues, עם מיליליטר אחד של PBS. לאחר מכן, לתקן את התאים או microtissues עם מאגר קיבוע המכיל 4.2%PFA ודגור בטמפרטורת החדר. לשאוף את PFA ולדגור את התאים או microtissues עם מיליליטר אחד של פתרון permeabilizing.לאחר מכן, לשאוף את הפתרון ולשטוף עם שניים עד שלושה מיליליטר של PBS. הוסף 500 עד 1000 מיקרוליטרים של תמיסת חסימה לתאים ודגר לפחות שעה אחת עבור שקופיות התא, ולמשך שלוש עד ארבע שעות עבור microtissues. דגרו את הדגימות עם נוגדנים מצומדים בתמיסת החסימה למשך שעה אחת למגלשות התא, ובלילה בארבע מעלות צלזיוס למיקרוטיסו הלבבי.לשטוף את שקופיות התא שלוש פעמים עם 500 microliters של 0.1% Tween 20, עם חמש דקות משכים בין כל לשטוף, ולאחר מכן לבצע שטיפה סופית עם PBS. לשטוף את רקמות מיקרו הלב חמש פעמים עם שני מיליליטר של 0.1% Tween 20, עם משך של 20 דקות בין כל לשטוף. לאחר מכן, בצע שטיפה סופית במשך 20 דקות נוספות.לדגור על התאים או microtissues עם DAPI לפני מיקרוסקופיה קונפוקלי, ולאחר מכן להעביר בזהירות את microtissues הלב לצלחת תחתונה זכוכית 35 מילימטר, ולהוסיף PBS כדי להטביע את microtissue. לשטוף את microtissues מתוך שקעים עגולים עם בינוני אחד באמצעות קצה פיפטה רחב או מיליליטר אחד לתוך צינור כרוני 15 מיליליטר, ולאפשר להם להתיישב. לאחר מכן, לשאוף את המדיום ולשטוף עם PBS מיליליטר אחד.הוסף 200 עד 300 מיקרוליטרים של מאגר עיכול האנזים ודגר במשך 10 דקות ב 37 מעלות צלזיוס. לאחר מכן מערבבים את microtissues בעדינות במשך דקה אחת, ולחזור על הדגירה. לאחר הדגירה, מערבבים את המיקרוטיסו במרץ עם טיפ פיפטה מיליליטר רגיל כדי לעכל אותו לתאים בודדים.להשיג השעיית תא עכור, ומיד לנטרל את ההשעיה התא עם חמישה מיליליטר של בינוני המכיל 5%FBS. מסננים את ההשעיה של התא דרך מסננת תאים של 40 מיקרומטר, וסופרים את המספר הכולל של התאים. צנטריפוגה ההשעיה של תא יחיד ב 300 פעמים G במשך חמש דקות בארבע מעלות צלזיוס.שאפו את הסופר-נאנט והגדילו מחדש את התאים במאגר מחייב נספח עם FITC Annexin V ו-propidium iodide, או צבע הרחקת תאים מתים TO-PRO-3, ודגרו במשך 10 דקות על קרח. לאחר הדגירה, הוסיפו 300 מיקרוליטרים של מאגר איגוד הסיפוח למתלי התא והעבירו אותו לצינור FACS תחתון עגול לניתוח ציטומטריית זרימה. קרדיומיוציטים שמקורם בתאי גזע, תאי אנדותל ופיברובלסטים לבביים נוצלו באמצעות מיקרוסקופיה של ניגודיות פאזה.הטוהר של סוגי תאים שונים נקבע באמצעות כתמי אימונו וציטומטריית זרימה. טרופונין T שימש כסמן עבור cardiomyocytes, מעל 90% טוהר הושג. מולקולת הידבקות תאי אנדותל טסיות דם CD31 ו vimentin שימשו כסמנים עבור תאי אנדותל ופיברובלסטים לב, והצביעו על טוהר מעל 98 ו 96% בהתאמה.כתמי אימונופלואורסצנטיות גילו כי הקרדיומיוציטים היו הכבדים ביותר וכבשו את מרכז המיקרוטיסו, בעוד שתאי האנדותל היו משולבים בכל המיקרו-טיסות, ופיברובלסטים לבביים כבשו בעיקר את הפריפריה. העיכול של microtissues באמצעות קצב זה אחד ו Liberase TL הביא פרופורציות תאים קיימא מאוד עם פחות תאים אפופטוטיים לאחר שבועיים בתרבית. החשיפה של שעה אחת של microtissues הלב לריכוז גבוה של doxorubicin המושרה במינון תלוי cardiotoxicity.התכווצות רקמות המיקרו, ותנועת הווקטורים יצרו מפת חום מדומה שהמחישה את פרופיל ההתכווצות הממוצע על פני המיקרו-טיסו. תנועת ההתכווצות של מיקרוטיסות הלב יצרה פסגות חיוביות שנמדדו כמהירות ההתכווצות, מהירות ההרפיה וקצב הקצב, אשר חושב כזמן בין שני מחזורי התכווצות. ההתכווצות של מיקרוטיסויות הלב הייתה עקבית במשך ארבעה שבועות בתרבות.חימום תאים הוא אחד השלבים החשובים ביותר בפרוטוקול המסוים הזה, שבו יש להקפיד לוותר בזהירות על השעיית התא לתוך מערך האגרוזים להפצה אפילו בתוך המיקרווולים, וכדי למנוע גלישה. באמצעות פרוטוקול הקרינה הממוטב של microtissues אלה, אפשר לחשוף אלה לטכנולוגיות ריצוף תפוקה גבוהה, כגון RNA-seq תא יחיד או אטאק-seq תא יחיד כדי להבין דפוסי ביטוי גנים ספציפיים לתא וכתוצאה מכך עקב תנאי טיפול שונים.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Encapsulation of Cardiomyocytes in a Fibrin Hydrogel for Cardiac Tissue Engineering

Encapsulation של cardiomyocytes ב Hydrogel הפיברין עבור הנדסת רקמות לב

Culturing cells in a three dimensional hydrogel environment is an important technique for developing constructs for tissue engineering as well as studying ...

Anatomical Reconstructions of the Human Cardiac Venous System using Contrast-computed Tomography of Perfusion-fixed Specimens

שחזורים אנטומיים של מערכת ורידי לב האנושית באמצעות ניגודיות, טומוגרפיה ממוחשבת של דגימות זלוף-קבועות

A detailed  understanding of the complexity and relative variability within the human  cardiac venous system is crucial for the development of cardiac ...

Construction of Defined Human Engineered Cardiac Tissues to Study Mechanisms of Cardiac Cell Therapy

בניית רקמות לב Engineered האנושית תחם לחקור מנגנונים של טיפול בתאי לב

Human cardiac tissue engineering can fundamentally impact therapeutic discovery through the development of new species-specific screening systems that ...

Creation of Cardiac Tissue Exhibiting Mechanical Integration of Spheroids Using 3D Bioprinting

יצירת רקמת הלב מציגה שילוב מכני של Spheroids באמצעות 3D Bioprinting

This protocol describes 3D bioprinting of cardiac tissue without the use of biomaterials, using only cells. Cardiomyocytes, endothelial cells and ...

Using Extraordinary Optical Transmission to Quantify Cardiac Biomarkers in Human Serum

באמצעות תמסורת אופטית יוצאת דופן לכמת סמנים לב בנסיוב אדם

For a biosensing platform to have clinical relevance in point-of-care (POC) settings, assay sensitivity, reproducibility, and ability to reliably monitor ...

Protocol for MicroRNA Transfer into Adult Bone Marrow-derived Hematopoietic Stem Cells to Enable Cell Engineering Combined with Magnetic Targeting

פרוטוקול להעברת MicroRNA לתוך למבוגרים הנגזרות מח עצם Hematopoietic תאי גזע כדי לאפשר הנדסה תא בשילוב עם מיקוד מגנטי

While CD133+ hematopoietic stem cells (SCs) have been proven to provide high potential in the field of regenerative medicine, their low retention rates ...

A Net Mold-based Method of Scaffold-free Three-Dimensional Cardiac Tissue Creation

שיטה המבוססת על עובש נטו הבריאה ברקמת הלב לגרדום ללא תלת מימדי

This protocol describes a novel and easy net mold-based method to create three-dimensional (3-D) cardiac tissues without additional scaffold material. ...

Standardized and Scalable Assay to Study Perfused 3D Angiogenic Sprouting of iPSC-derived Endothelial Cells In Vitro

שיטת הלימוד הסטנדרטית והמדמדית למחקר בלבלוב אנגיוגנטית בתלת-ממד של התאים הנגזרים מתוך מבחנה

Pre-clinical drug research of vascular diseases requires in vitro models of vasculature that are amendable to high-throughput screening. However, current ...

Human iPSC-Derived Cardiomyocyte Networks on Multiwell Micro-electrode Arrays for Recurrent Action Potential Recordings

האדם הנגזר iPSC האנטי נטוורקס רשתות על Multiwell מיקרו מערכים אלקטרודה לפעולה ונשנים הקלטות פוטנציאליות

Cardiac safety screening is of paramount importance for drug discovery and therapeutics. Therefore, the development of novel high-throughput ...

Preclinical Cardiac Electrophysiology Assessment by Dual Voltage and Calcium Optical Mapping of Human Organotypic Cardiac Slices

מיפוי אופטי של הערכת החשמל לניתוחי לב באמצעות מתח כפול וסידן

Human cardiac slice preparations have recently been developed as a platform for human physiology studies and therapy testing to bridge the gap between ...