Name: fabrication of 3d cardiac microtissue arrays using human ipsc-derived cardiomyocytes, cardiac fibroblasts, and endothelial cells
Uploaded: 2021-03-14T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fabrication of 3D Cardiac Microtissue Arrays using Human iPSC-Derived Cardiomyocytes, Cardiac Fibroblasts, and Endothelial Cells at JoVE.com

हम पांडुलिपि पर उनकी उपयोगी प्रतिक्रिया के लिए डॉ अमांडा चेस को धन्यवाद देते हैं। वित्त पोषण सहायता कैलिफोर्निया विश्वविद्यालय के तम्बाकू से संबंधित रोग अनुसंधान कार्यक्रम (TRDRP), T29FT0380 (D.T.) और 27IR-0012 (J.C.W.) द्वारा प्रदान की गई थी; अमेरिकन हार्ट एसोसिएशन 20POST35210896 (H.K.) और 17MERIT33610009 (J.C.W.); और राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (एनआईएच) R01 HL126527, R01 HL123968, R01 HL150693, R01 HL141851, और NIH UH3 TR002588 (J.C.W).

1. मध्यम, अभिकर्मक, संस्कृति प्लेट तैयारी
<ol><li>सेल संस्कृति के लिए सेल धोने का समाधान: कैल्शियम या मैग्नीशियम के बिना 1x फॉस्फेट बफ़र्ड खारा (पीबीएस) या हैंक्स संतुलित नमक समाधान (HBSS) का उपयोग करें।</li>
	<li>कार्?...

<ol>
	<li>Neofytou, E., O'Brien, C. G., Couture, L. A., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hurdles+to+clinical+translation+of+human+induced+pluripotent+stem+cells.">Hurdles to clinical translation of human induced pluripotent stem cells.</a> Journal of Clinical Investigation. 125 (7), 2551-2557 (2015).</li><li>Lancaster, M. A., Knoblich, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organogenesis+in+a+dish:+Modeling+development+and+disease+using+organoid+technologies.">Organogenesis in a dish: Modeling development and disease using organoid technologies.</a> Science. 345 (6194), 1247125 (2014).</li><li>Liu, C., Oikonomopoulos, A., Sayed, N., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+human+diseases+with+induced+pluripotent+stem+cells:+from+2D+to+3D+and+beyond.">Modeling human diseases with induced pluripotent stem cells: from 2D to 3D and beyond.</a> Development. 145 (5), 156166 (2018).</li><li>Yin, X., Mead, B. E., Safaee, H., Langer, R., Karp, J. M., Levy, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+stem+cell+organoids.">Engineering stem cell organoids.</a> Cell Stem Cell. 18 (1), 25-38 (2016).</li><li>Giacomelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+cardiac+microtissues+composed+of+cardiomyocytes+and+endothelial+cells+co-differentiated+from+human+pluripotent+stem+cells.">Three-dimensional cardiac microtissues composed of cardiomyocytes and endothelial cells co-differentiated from human pluripotent stem cells.</a> Development. 144 (6), 1008-1017 (2017).</li><li>Kurokawa, Y. K., George, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+engineering+the+cardiac+microenvironment:+Multicellular+microphysiological+systems+for+drug+screening.">Tissue engineering the cardiac microenvironment: Multicellular microphysiological systems for drug screening.</a> Advances in Drug Delivery Reviews. 96, 225-233 (2016).</li><li>Cartledge, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+crosstalk+between+cardiac+fibroblasts+and+adult+cardiomyocytes+by+soluble+mediators.">Functional crosstalk between cardiac fibroblasts and adult cardiomyocytes by soluble mediators.</a> Cardiovascular Research. 105 (3), 260-270 (2015).</li><li>Ravenscroft, S. M., Pointon, A., Williams, A. W., Cross, M. J., Sidaway, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+non-myocyte+cells+show+enhanced+pharmacological+function+suggestive+of+contractile+maturity+in+stem+cell+derived+cardiomyocyte+microtissues.">Cardiac non-myocyte cells show enhanced pharmacological function suggestive of contractile maturity in stem cell derived cardiomyocyte microtissues.</a> Toxicology Science. 152 (1), 99-112 (2016).</li><li>Ieda, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+fibroblasts+regulate+myocardial+proliferation+through+beta1+integrin+signaling.">Cardiac fibroblasts regulate myocardial proliferation through beta1 integrin signaling.</a> Developmental Cell. 16 (2), 233-244 (2009).</li><li>Brutsaert, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+endothelial-myocardial+signaling:+its+role+in+cardiac+growth,+contractile+performance,+and+rhythmicity.">Cardiac endothelial-myocardial signaling: its role in cardiac growth, contractile performance, and rhythmicity.</a> Physiological Reviews. 83 (1), 59-115 (2003).</li><li>Huebsch, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+video-based+analysis+of+contractility+and+calcium+flux+in+human-induced+pluripotent+stem+cell-derived+cardiomyocytes+cultured+over+different+spatial+scales.">Automated video-based analysis of contractility and calcium flux in human-induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes cultured over different spatial scales.</a> Tissue Engineering Part C Methods. 21 (5), 467-479 (2015).</li><li>Burridge, P. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemically+defined+generation+of+human+cardiomyocytes.">Chemically defined generation of human cardiomyocytes.</a> Nature Methods. 11 (8), 855-860 (2014).</li><li>Gu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pravastatin+reverses+obesity-induced+dysfunction+of+induced+pluripotent+stem+cell-derived+endothelial+cells+via+a+nitric+oxide-dependent+mechanism.">Pravastatin reverses obesity-induced dysfunction of induced pluripotent stem cell-derived endothelial cells via a nitric oxide-dependent mechanism.</a> European Heart Journal. 36 (13), 806-816 (2015).</li><li>Williams, I. M., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+endothelial+cells+from+human+pluripotent+stem+cells.">Generation of endothelial cells from human pluripotent stem cells.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology. 39 (7), 1317-1329 (2019).</li><li>Zhang, H., Shen, M., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+quiescent+cardiac+fibroblasts+derived+from+human+induced+pluripotent+stem+cells.">Generation of quiescent cardiac fibroblasts derived from human induced pluripotent stem cells.</a> Methods in Molecular Biology. , 1-7 (2020).</li><li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+quiescent+cardiac+fibroblasts+from+human+induced+pluripotent+stem+cells+for+in+vitro+modeling+of+cardiac+fibrosis.">Generation of quiescent cardiac fibroblasts from human induced pluripotent stem cells for in vitro modeling of cardiac fibrosis.</a> Circulation Research. 125 (5), 552-566 (2019).</li><li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+cardiac+fibroblasts+derived+from+human+pluripotent+stem+cells+via+second+heart+field+progenitors.">Functional cardiac fibroblasts derived from human pluripotent stem cells via second heart field progenitors.</a> Nature Communications. 10 (1), 2238-2315 (2019).</li><li>Giacomelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human-iPSC-derived+cardiac+stromal+cells+enhance+maturation+in+3d+cardiac+microtissues+and+reveal+non-cardiomyocyte+contributions+to+heart+disease.">Human-iPSC-derived cardiac stromal cells enhance maturation in 3d cardiac microtissues and reveal non-cardiomyocyte contributions to heart disease.</a> Cell Stem Cell. 26 (6), 862-879 (2020).</li><li>Burridge, P. W., Holmstr&#246;m, A., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemically+defined+culture+and+cardiomyocyte+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells.">Chemically defined culture and cardiomyocyte differentiation of human pluripotent stem cells.</a> Current Protocols in Human Genetics. 87 (1), 1-15 (2015).</li><li>Lian, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+cardiomyocyte+differentiation+from+human+pluripotent+stem+cells+by+modulating+Wnt/&#946;-catenin+signaling+under+fully+defined+conditions.">Directed cardiomyocyte differentiation from human pluripotent stem cells by modulating Wnt/&#946;-catenin signaling under fully defined conditions.</a> Nature Protocols. 8 (1), 162-175 (2013).</li><li>Buikema, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt+activation+and+reduced+cell-cell+contact+synergistically+induce+massive+expansion+of+functional+human+iPSC-derived+cardiomyocytes.">Wnt activation and reduced cell-cell contact synergistically induce massive expansion of functional human iPSC-derived cardiomyocytes.</a> Cell Stem Cell. 27 (1), 50-63 (2020).</li><li>Feyen, D. A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+maturation+media+improve+physiological+function+of+human+iPSC-derived+cardiomyocytes.">Metabolic maturation media improve physiological function of human iPSC-derived cardiomyocytes.</a> Cell Reports. 32 (3), 107925 (2020).</li><li>Karbassi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiomyocyte+maturation:+Advances+in+knowledge+and+implications+for+regenerative+medicine.">Cardiomyocyte maturation: Advances in knowledge and implications for regenerative medicine.</a> Nature Reviews Cardiology. 17 (6), 341-359 (2020).</li><li>Li, Z., Hu, S., Ghosh, Z., Han, Z., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+characterization+and+expression+profiling+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-+and+embryonic+stem+cell-derived+endothelial+cells.">Functional characterization and expression profiling of human induced pluripotent stem cell- and embryonic stem cell-derived endothelial cells.</a> Stem Cells Development. 20 (10), 1701-1710 (2011).</li><li>Lian, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+to+endothelial+progenitors+via+small-molecule+activation+of+WNT+signaling.">Efficient differentiation of human pluripotent stem cells to endothelial progenitors via small-molecule activation of WNT signaling.</a> Stem Cell Report. 3 (5), 804-816 (2014).</li><li>Gu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+to+endothelial+cells.">Efficient differentiation of human pluripotent stem cells to endothelial cells.</a> Current Protocols in Human Genetics. 98 (1), 64 (2018).</li><li>Acharya, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+bHLH+transcription+factor+Tcf21+is+required+for+lineage-specific+EMT+of+cardiac+fibroblast+progenitors.">The bHLH transcription factor Tcf21 is required for lineage-specific EMT of cardiac fibroblast progenitors.</a> Development. 139 (12), 2139-2149 (2012).</li><li>Wessels, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epicardially+derived+fibroblasts+preferentially+contribute+to+the+parietal+leaflets+of+the+atrioventricular+valves+in+the+murine+heart.">Epicardially derived fibroblasts preferentially contribute to the parietal leaflets of the atrioventricular valves in the murine heart.</a> Development Biology. 366 (2), 111-124 (2012).</li><li>Ali, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+heterogeneity+of+cardiac+fibroblasts+does+not+predict+pathological+proliferation+and+activation.">Developmental heterogeneity of cardiac fibroblasts does not predict pathological proliferation and activation.</a> Circulation Research. 115 (7), 625-635 (2014).</li><li>McMurtrey, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analytic+and+numerical+models+of+oxygen+and+nutrient+diffusion,+metabolism+dynamics,+and+architecture+optimization+in+three-dimensional+tissue+constructs+with+applications+and+insights+in+cerebral+organoids.">Analytic and numerical models of oxygen and nutrient diffusion, metabolism dynamics, and architecture optimization in three-dimensional tissue constructs with applications and insights in cerebral organoids.</a> Tissue Engineering Part C Methods. (3), 221-249 (2015).</li><li>Thomas, D., O'Brien, T., Pandit, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+customized+extracellular+niche+engineering:+progress+in+cell-entrapment+technologies.">Toward customized extracellular niche engineering: progress in cell-entrapment technologies.</a> Advanced Materials. 30 (1), 1703948 (2018).</li><li>Thomas, D., Shenoy, S., Sayed, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Building+Multi-dimensional+induced+pluripotent+stem+cells-based+model+platforms+to+assess+cardiotoxicity+in+cancer+therapies.">Building Multi-dimensional induced pluripotent stem cells-based model platforms to assess cardiotoxicity in cancer therapies.</a> Front Pharmacol. 12, 39 (2021).</li><li>Rhee, J. -. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+secondary+iron+overload+cardiomyopathy+with+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+cardiomyocytes.">Modeling secondary iron overload cardiomyopathy with human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes.</a> Cell Reports. 32 (2), 107886 (2020).</li><li>Paik, D. T., Cho, S., Tian, L., Chang, H. Y., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+RNA+sequencing+in+cardiovascular+development,+disease,+and+medicine.">Single-cell RNA sequencing in cardiovascular development, disease, and medicine.</a> Nature Reviews Cardiology. 17 (8), 457-473 (2020).</li><li>Nguyen, Q. H., Pervolarakis, N., Nee, K., Kessenbrock, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+considerations+for+single-cell+RNA+sequencing+approaches.">Experimental considerations for single-cell RNA sequencing approaches.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 6, 108 (2018).</li><li>Lau, E., Paik, D. T., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systems-wide+approaches+in+induced+pluripotent+stem+cell+models.">Systems-wide approaches in induced pluripotent stem cell models.</a> Annual Reviews in Pathology. 14 (1), 395-419 (2019).</li><li>Maddah, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+non-invasive+platform+for+functional+characterization+of+stem-cell-derived+cardiomyocytes+with+applications+in+cardiotoxicity+testing.">A non-invasive platform for functional characterization of stem-cell-derived cardiomyocytes with applications in cardiotoxicity testing.</a> Stem Cell Report. 4 (4), 621-631 (2015).</li><li>Sala, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Musclemotion:+A+versatile+open+software+tool+to+quantify+cardiomyocyte+and+cardiac+muscle+contraction+in+vitro+and+in+vivo.">Musclemotion: A versatile open software tool to quantify cardiomyocyte and cardiac muscle contraction in vitro and in vivo.</a> Circulation Research. 122 (3), 5-16 (2018).</li></ol>

पूर्व-विभेदित आईपीएससी-सीएम, आईपीएससी-ईसी, और आईपीएससी-सीएफ से कार्डियक माइक्रोटिसस उत्पन्न करने के लिए, कार्डियक माइक्रोटिस्यू के भीतर संपर्क-बाधित सेल संघनन के बाद सेल नंबरों के बेहतर नियंत्रण के ?...

कार्डियोवैस्कुलर अनुसंधान के क्षेत्र में दवा की खोज और रोग मॉडलिंग को नैदानिक रूप से प्रासंगिक नमूनों और अपर्याप्त ट्रांसलेशनल टूल्स 1 की कमी के कारण कई चुनौतियों का सामना करना पड़ता है। अत्यधिक जटिल पूर्व-नैदानिक मॉडल या विट्रो एकल-सेल मॉडल में अतिसरलीकृत एक पुनरुत्पादक तरीके से pathophysiological स्थितियों का प्रदर्शन नहीं करते हैं। इसलिए, कई लघुकृत ऊतक-इंजीनियर प्लेटफ़ॉर्म अंतर को पाटने में मदद करने के लिए विकसित हुए हैं, एक उच्च-थ्रूपुट तरीके से आवेदन में आसानी और ऊतक फ़ंक्शन 2,3 के वफादार पुनरावृत्ति के बीच संतुलन प्राप्त करने के लक्ष्य के साथ। प्रेरित प्लुरिपोटेंट स्टेम सेल (आईपीएससी) प्रौद्योगिकी के आगमन के साथ, ऊतक इंजीनियरिंग उपकरणों को अनुसंधान प्रश्नों का उत्तर देने के लिए अंतर्निहित हृदय रोग राज्य के साथ या बिना रोगी-विशिष्ट कोशिकाओं पर लागू किया जा सकता है4,5,6। हृदय के ऊतकों के समान सेलुलर संरचना के साथ इस तरह के ऊतक इंजीनियर मॉडल का उपयोग एक या कई सेल प्रकारों के व्यवहार में रोग संबंधी परिवर्तनों से प्रेरित कार्डियोटॉक्सिसिटी और शिथिलता के लिए परीक्षण करने के लिए दवा विकास प्रयासों में किया जा सकता है।
मानव आईपीएससी से व्युत्पन्न स्व-इकट्ठे माइक्रोटिस्यू या ऑर्गेनोइड्स तीन-आयामी (3 डी) संरचनाएं हैं जो लघु ऊतक जैसी असेंबली हैं जो उनके इन विवो समकक्षों के लिए कार्यात्मक समानताएं प्रदर्शित करती हैं। कई अलग-अलग दृष्टिकोण हैं जो आईपीएससी के निर्देशित भेदभाव के माध्यम से या भ्रूणीय निकायों के गठन के माध्यम से सीटू में ऑर्गेनोइड्स के गठन की अनुमति देते हैं। परिणामी ऑर्गेनोइड्स ऑर्गोजेनेटिक प्रक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए एक अपरिहार्य उपकरण है जो ऑर्गेनोजेनेसिस को चलाता है। हालांकि, विभिन्न प्रकार की कोशिका आबादी की उपस्थिति और स्व-संगठन में अंतर विभिन्न ऑर्गेनोइड्स 5 के बीच परिणामों में परिवर्तनशीलता का कारण बन सकता है। वैकल्पिक रूप से, पूर्व-विभेदित कोशिकाएं जो स्थानीय सेल-सेल इंटरैक्शन का अध्ययन करने के लिए ऊतक-विशिष्ट सेल प्रकारों के साथ माइक्रोटिस में स्वयं-इकट्ठी होती हैं, उत्कृष्ट मॉडल हैं, जहां स्व-इकट्ठे घटकों को अलग करना संभव है। विशेष रूप से मानव कार्डियक अनुसंधान में, बहुकोशिकीय घटकों के साथ 3 डी कार्डियक माइक्रोटिस्यूज़ का विकास चुनौतीपूर्ण साबित हुआ है जब कोशिकाएं विभिन्न रोगी लाइनों या वाणिज्यिक स्रोतों से प्राप्त होती हैं।
एक शारीरिक रूप से प्रासंगिक, व्यक्तिगत, इन विट्रो मॉडल में सेल व्यवहार की हमारी यांत्रिक समझ में सुधार करने के लिए, आदर्श रूप से सभी घटक सेल प्रकारों को एक ही रोगी लाइन से प्राप्त किया जाना चाहिए। मानव हृदय के संदर्भ में, वास्तव में एक प्रतिनिधि कार्डियक इन विट्रो मॉडल प्रमुख सेल प्रकारों के बीच क्रॉसस्टॉक पर कब्जा कर लेगा, अर्थात्, कार्डियोमायोसाइट्स (सीएम), एंडोथेलियल कोशिकाएं (ईसी), और कार्डियक फाइब्रोब्लास्ट्स (सीएफ) 6,7। मायोकार्डियम के वफादार पुनरावृत्ति के लिए न केवल बायोफिजिकल खिंचाव और इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल उत्तेजना की आवश्यकता होती है, बल्कि सेल-सेल सिग्नलिंग भी होती है जो ईसी और सीएफ 8 जैसे सेल प्रकारों का समर्थन करने से उत्पन्न होती है। CFs extracellular मैट्रिक्स के संश्लेषण और ऊतक संरचना को बनाए रखने में शामिल हैं; और एक पैथोलॉजिकल स्थिति में, CFs फाइब्रोसिस को प्रेरित कर सकते हैं और CMs9 में विद्युत चालन को बदल सकते हैं। इसी तरह, ईसी पैराक्राइन सिग्नलिंग के माध्यम से सीएम के संकुचनशील गुणों को विनियमित कर सकते हैं और महत्वपूर्ण चयापचय मांगों की आपूर्ति कर सकते हैं। इसलिए, शारीरिक रूप से प्रासंगिक उच्च-थ्रूपुट प्रयोगों को आयोजित करने की अनुमति देने के लिए सभी तीन प्रमुख सेल प्रकारों से बने मानव कार्डियक माइक्रोटिस्यूस की आवश्यकता है।
यहां, हम मानव आईपीएससी-व्युत्पन्न कार्डियोमायोसाइट्स (आईपीएससी-सीएम), आईपीएससी-व्युत्पन्न एंडोथेलियल कोशिकाओं (आईपीएससी-ईसी), और आईपीएससी-व्युत्पन्न कार्डियक फाइब्रोब्लास्ट्स (आईपीएससी-सीएफ) और समान कार्डियक माइक्रोटिश्यू सरणियों में उनकी 3 डी संस्कृति की व्युत्पत्ति द्वारा कार्डियक माइक्रोटिसस के निर्माण में एक बॉटम-अप दृष्टिकोण का वर्णन करते हैं। अनायास धड़कते हुए कार्डियक माइक्रोटिस्यूज़ उत्पन्न करने की इस सरल विधि का उपयोग रोग मॉडलिंग और हृदय शरीर विज्ञान की कार्यात्मक और यांत्रिक समझ के लिए दवाओं के तेजी से परीक्षण के लिए किया जा सकता है। इसके अलावा, इस तरह के बहुकोशिकीय कार्डियक माइक्रोटिश्यू प्लेटफार्मों को जीनोम संपादन तकनीकों के साथ शोषण किया जा सकता है ताकि पुरानी या तीव्र संस्कृति स्थितियों के तहत समय के साथ हृदय रोग की प्रगति का अनुकरण किया जा सके।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>12-well plates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-772-29</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3D micro-molds</td>
			<td>Microtissues</td>
			<td>12-81 format</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-772-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoMACS Rinsing Solution</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>NC9104697</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 Supplement minus Insulin</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A1895601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 Supplement plus Insulin</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17504-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Cytofix</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>554655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Matrigel, hESC-qualified matrix</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>354277</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cardiac Troponin T Antibody</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-120-403</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD144 (VE-Cadherin) MicroBeads</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-097-857</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD31 Antibody</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-110-670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD31 Microbeads</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-091-935</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHIR-99021</td>
			<td>Selleckchem</td>
			<td>S2924</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DDR2</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-81707</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dead Cell Apoptosis Kit with Annexin V FITC and PI</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>V13242</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase I</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>4942086001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, high glucose (4.5g/L) no glutamine medium</td>
			<td></td>
			<td>11960044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F-12 basal medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11320033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s phosphate buffered saline (DPBS), no calcium, no magnesium</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>14190-136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGM2 BulletKit</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-3124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>10437</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FibroLife Serum-Free Fibroblast LifeFactors Kit</td>
			<td>LifeLIne Cell Technology</td>
			<td>LS-1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose free RPMI medium</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11879-020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat serum</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>16210-064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human FGF-basic</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>13256029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human VEGF-165</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>100-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IWR-1-endo</td>
			<td>Selleckchem</td>
			<td>S7086</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liberase TL</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>5401020001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LS Sorting Columns</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-042-401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MACS BSA Stock solution</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-091-376</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MACS Rinsing Buffer</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-091-222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MidiMACS Separator</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-042-302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI medium</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11835055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SB431542</td>
			<td>Selleckchem</td>
			<td>S1067</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TO-PRO 3</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>R37170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>X100-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE Select 10X</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>red</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vimentin Alexa Fluor&#174; 488-conjugated Antibody</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>IC2105G</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fabrication of 3d cardiac microtissue arrays using human ipsc-derived cardiomyocytes, cardiac fibroblasts, and endothelial cells

प्रेरित प्लुरिपोटेंट स्टेम कोशिकाओं (आईपीएससी) से मानव कार्डियोमायोसाइट्स (सीएम), कार्डियक फाइब्रोब्लास्ट्स (सीएफ), और एंडोथेलियल कोशिकाओं (ईसी) की पीढ़ी ने विभिन्न कार्डियोवैस्कुलर सेल प्रकारों के बीच जटिल इंटरप्ले का अध्ययन करने का एक अनूठा अवसर प्रदान किया है जो ऊतक विकास और बीमारी को चलाता है। कार्डियक ऊतक मॉडल के क्षेत्र में, कई परिष्कृत तीन आयामी (3 डी) दृष्टिकोण प्रेरित प्लुरिपोटेंट स्टेम सेल-व्युत्पन्न कार्डियोमायोसाइट्स (आईपीएससी-सीएम) का उपयोग करते हैं ताकि शारीरिक प्रासंगिकता और देशी ऊतक वातावरण की नकल की जा सके, जो बाहरी मैट्रिक्स और क्रॉसलिंकर्स के संयोजन के साथ होता है। हालांकि, ये प्रणालियां माइक्रोफैब्रिकेशन विशेषज्ञता के बिना बनाने के लिए जटिल हैं और आत्म-इकट्ठा करने के लिए कई हफ्तों की आवश्यकता होती है। सबसे महत्वपूर्ण बात, इनमें से कई प्रणालियों में संवहनी कोशिकाओं और कार्डियक फाइब्रोब्लास्ट्स की कमी होती है जो मानव हृदय में 60% से अधिक गैर-मायोसाइट्स बनाते हैं। यहां हम आईपीएससी से कार्डियक माइक्रोटिस्यू बनाने के लिए सभी तीन कार्डियक सेल प्रकारों की व्युत्पत्ति का वर्णन करते हैं। यह सरल प्रतिकृति मोल्डिंग तकनीक कई हफ्तों के लिए मानक बहु-अच्छी तरह से सेल संस्कृति प्लेटों में कार्डियक माइक्रोटिश्यू संस्कृति की अनुमति देती है। प्लेटफ़ॉर्म प्रारंभिक सीडिंग घनत्व के आधार पर माइक्रोटिश्यू आकारों पर उपयोगकर्ता-परिभाषित नियंत्रण की अनुमति देता है और अवलोकन योग्य कार्डियक माइक्रोटिश्यू संकुचन प्राप्त करने के लिए आत्म-असेंबली के लिए 3 दिनों से भी कम समय की आवश्यकता होती है। इसके अलावा, प्रवाह साइटोमेट्री और एकल-सेल आरएनए अनुक्रमण (एससीआरएनए-सेक) के उपयोग के साथ एकल-सेल पूछताछ के लिए उच्च सेल व्यवहार्यता को बनाए रखते हुए कार्डियक माइक्रोटिस्यू को आसानी से पचाया जा सकता है। हम कल्पना करते हैं कि कार्डियक माइक्रोटिश्यूज़ का यह इन विट्रो मॉडल दवा की खोज और रोग मॉडलिंग में सत्यापन अध्ययन में तेजी लाने में मदद करेगा।

IPSC-व्युत्पन्न सीएम, ईसी और सीएफ के इम्यूनोस्टेनिंग और फ्लो साइटोमेट्री लक्षण वर्णन IPSC-CMs, iPSC-ECs, और iPSC-CFs से बने कार्डियक माइक्रोटिस्यू उत्पन्न करने के लिए, सभी तीन सेल प्रकारों को अलग-अलग किया जाता है ?...

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Fabrication of 3D Cardiac Microtissue Arrays using Human iPSC-Derived Cardiomyocytes, Cardiac Fibroblasts, and Endothelial Cells

यहां, हम 3 डी स्व-इकट्ठे कार्डियक माइक्रोटिश्यू सरणियों को उत्पन्न करने के लिए एक आसान-से-उपयोग पद्धति का वर्णन करते हैं जो पूर्व-विभेदित मानव-प्रेरित प्लुरिपोटेंट स्टेम सेल-व्युत्पन्न कार्डियोमायोसाइट्स, कार्डियक फाइब्रोब्लास्ट्स और एंडोथेलियल कोशिकाओं से बना है। कार्डियक माइक्रोटिस्यूज उत्पन्न करने के लिए तकनीक की आवश्यकता वाले इस उपयोगकर्ता के अनुकूल और कम सेल को रोग मॉडलिंग और दवा के विकास के शुरुआती चरणों के लिए लागू किया जा सकता है।

मानव iPSC-व्युत्पन्न कार्डियोमायोसाइट्स, कार्डियक फाइब्रोब्लास्ट्स और एंडोथेलियल कोशिकाओं का उपयोग करके 3 डी कार्डियक माइक्रोटिश्यू सरणियों का निर्माण

Generation of human cardiomyocytes (CMs), cardiac fibroblasts (CFs), and endothelial cells (ECs) from induced pluripotent stem cells (iPSCs) has provided ...

प्रोटोकॉल प्रेरित प्लुरिपोटेंट स्टेम कोशिकाओं का उपयोग करके मानव कार्डियोवैस्कुलर सेल प्रकारों को उत्पन्न करने की शक्ति को जोड़ता है और 72 घंटे से भी कम समय में कार्डियक गोलाकार उत्पन्न करने के लिए एक बहुमुखी तकनीक है। इन कार्डियक गोलाकार का उपयोग रोग मॉडलिंग और दवा परीक्षण के लिए किया जा सकता है। इस सरल तकनीक के मुख्य लाभों में से एक यह है कि कोई भी मानक 12-अच्छी तरह से प्लेट में लगभग 1000 धड़कन कार्डियक गोलाकार उत्पन्न कर सकता है।और सबसे महत्वपूर्ण बात, प्रत्येक और हर कार्डियक गोलाकार इमेजिंग आधारित तकनीक का उपयोग करके अपने संकुचनशील कार्य के लिए परख किया जा सकता है। माइक्रोवेव में एगारोज़ पिघलने के बाद, इसे जैव सुरक्षा कैबिनेट में रखें और इसे तीन मिनट के लिए ठंडा होने दें। पिघला हुआ agarose के पिपेट 700 माइक्रोलीटर और इसे नौ से नौ सरणी के सिलिकॉन माइक्रोमोल्ड में जोड़ें, बुलबुले उत्पन्न करने से बचने के लिए ध्यान रखें।ध्यान से पूर्व ठंडा बर्फ ब्लॉक पर मोल्ड जगह agarose अवधि में तेजी लाने के लिए. एक बार agarose पारभासी हो जाता है, ध्यान से micromold के किनारों को मोड़ने के लिए agarose प्रतिकृति खोने के लिए और धीरे से सिलिकॉन micromold से इसे अलग करने के लिए सभी पक्षों से प्रतिकृति छील. एक बाँझ 12-अच्छी तरह से प्लेट में 81 परिपत्र recesses युक्त agarose microtissue ट्रे हस्तांतरण, तो agarose microtissue ट्रे के लिए PBS के दो milliliters जोड़ें, और किसी भी फंसे बुलबुले या अनियमित रूप से आकार के कुओं के लिए माइक्रोस्कोप के तहत यह निरीक्षण।70% इथेनॉल के दो मिलीलीटर में एगारोज़ ट्रे को रात भर में डुबोएं, इसके बाद एक घंटे के लिए बायोसेफ्टी कैबिनेट में यूवी उपचार किया गया। 70% इथेनॉल को हटा दें और आसुत पानी से दो बार धोएं, और एक बार पीबीएस के दो मिलीलीटर के साथ। एक बार प्रेरित प्लुरिपोटेंट स्टेम सेल व्युत्पन्न कार्डियोमायोसाइट्स, कार्डियक फाइब्रोब्लास्ट्स और एंडोथेलियल कोशिकाओं को ट्रिप्सिनाइजेशन और न्यूट्रलाइजेशन के बाद गिना जाता है, तो सेल निलंबन को बर्फ पर रखें।एक नई ट्यूब में, प्रेरित प्लुरिपोटेंट स्टेम सेल व्युत्पन्न कार्डियोमायोसाइट्स, कार्डियक फाइब्रोब्लास्ट्स और एंडोथेलियल कोशिकाओं को मिलाएं। फिर, अच्छी तरह से पीबीएस को हटा दें और रिसेस को छूने के बिना सेल सीडिंग चैंबर को हटा दें, और सेल निलंबन ड्रॉपवाइज के 200 माइक्रोलीटर जोड़ें। कोशिकाओं को दो घंटे के लिए कार्बन डाइऑक्साइड इनक्यूबेटर में 37 डिग्री सेल्सियस पर बसने की अनुमति दें।आंतरिक कक्ष की सतह को कवर करने के लिए agarose मोल्ड के आसपास सूक्ष्म ऊतक निर्माण माध्यम जोड़ें। 24 घंटों के बाद, परिपत्र recesses में स्व-इकट्ठे और कॉम्पैक्ट गोलाकार के लिए निरीक्षण करें। गोलाकार को बनाए रखने के लिए हर दो दिनों में माध्यम बदलें।आमतौर पर, 48 घंटों के बाद, गोलाकार की सहज पिटाई देखी जा सकती है। तहखाने झिल्ली मैट्रिक्स माध्यम, या जिलेटिन लेपित कक्ष स्लाइड पर अलग-अलग सेल प्रकारों को अलग-अलग संस्कृति करें। धीरे से परिपत्र recesses से बाहर कार्डियक microtissues फ्लश, और उन्हें एक 15 मिलीलीटर क्रॉनिकल ट्यूब में इकट्ठा.माध्यम aspirate और कोशिकाओं या microtissues कुल्ला, पीबीएस के एक मिलीलीटर के साथ. फिर, 4.2% पीएफए युक्त फिक्सेशन बफर के साथ कोशिकाओं या माइक्रोटिस्यू को ठीक करें और कमरे के तापमान पर इनक्यूबेट करें। पीएफए aspirate और कोशिकाओं या microtissues permeabilizing समाधान के एक मिलीलीटर के साथ incubate.फिर, समाधान aspirate और पीबीएस के दो से तीन milliliters के साथ कुल्ला। कोशिकाओं के लिए समाधान को अवरुद्ध करने के 500 से 1000 माइक्रोलीटर जोड़ें और कक्ष स्लाइड के लिए कम से कम एक घंटे के लिए इनक्यूबेट करें, और माइक्रोटिस्यूज़ के लिए तीन से चार घंटे के लिए। कक्ष स्लाइड के लिए एक घंटे के लिए अवरुद्ध समाधान में संयुग्मित एंटीबॉडी के साथ नमूनों को इनक्यूबेट करें, और कार्डियक माइक्रोटिस्यू के लिए चार डिग्री सेल्सियस पर रात भर।प्रत्येक धोने के बीच पांच मिनट की अवधि के साथ 0.1% Tween 20 के 500 माइक्रोलीटर के साथ चैंबर स्लाइड को तीन बार धोएं, फिर पीबीएस के साथ अंतिम धोने का प्रदर्शन करें। कार्डियक माइक्रो ऊतकों को 0.1% Tween 20 के दो मिलीलीटर के साथ पांच बार धोएं, प्रत्येक धोने के बीच 20 मिनट की अवधि के साथ। फिर, अतिरिक्त 20 मिनट के लिए एक अंतिम धोने का प्रदर्शन करें।Confocal माइक्रोस्कोपी से पहले DAPI के साथ कोशिकाओं या microtissues incubate, फिर सावधानी से कार्डियक microtissues एक 35 मिलीमीटर ग्लास नीचे पकवान के लिए स्थानांतरित, और microtissue जलमग्न करने के लिए PBS जोड़ें। एक 15 मिलीलीटर क्रोनिकल ट्यूब में एक विस्तृत या एक मिलीलीटर पिपेट टिप का उपयोग करके मध्यम के साथ परिपत्र recesses से बाहर microtissues फ्लश, और उन्हें बसने के लिए अनुमति देते हैं। फिर, माध्यम aspirate और एक मिलीलीटर PBS के साथ कुल्ला।एंजाइम पाचन बफर के 200 से 300 माइक्रोलीटर जोड़ें और 37 डिग्री सेल्सियस पर 10 मिनट के लिए इनक्यूबेट करें। फिर माइक्रोटिसस को एक मिनट के लिए धीरे से मिलाएं, और इनक्यूबेशन को दोहराएं। इनक्यूबेशन के बाद, माइक्रोटिसस को एक नियमित रूप से एक मिलीलीटर पिपेट टिप के साथ जोर से मिलाएं ताकि इसे एकल कोशिकाओं में पचाया जा सके।एक टर्बिड सेल निलंबन प्राप्त करें, और तुरंत 5% FBS युक्त माध्यम के पांच मिलीलीटर के साथ सेल निलंबन को बेअसर करें। 40 माइक्रोमीटर सेल छलनी के माध्यम से सेल निलंबन को तनाव दें, और कोशिकाओं की कुल संख्या की गणना करें। चार डिग्री सेल्सियस पर पांच मिनट के लिए 300 बार जी पर एकल सेल निलंबन को सेंट्रीफ्यूज करें।Supernatant aspirate और FITC Annexin V और propidium आयोडाइड, या TO-PRO-3 मृत सेल बहिष्करण डाई के साथ एनेक्सिन बाइंडिंग बफर में कोशिकाओं को फिर से निलंबित करें, और बर्फ पर 10 मिनट के लिए इनक्यूबेट करें। इनक्यूबेशन के बाद, सेल निलंबन के लिए एनेक्सिन बाइंडिंग बफर के 300 माइक्रोलीटर जोड़ें और इसे प्रवाह साइटोमेट्री विश्लेषण के लिए एक गोल नीचे एफएसीएस ट्यूब में स्थानांतरित करें। शुद्ध प्रेरित प्लुरिपोटेंट स्टेम सेल-व्युत्पन्न कार्डियोमायोसाइट्स, एंडोथेलियल कोशिकाओं और कार्डियक फाइब्रोब्लास्ट्स को चरण-विपरीत माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके कल्पना की गई थी।विभिन्न सेल प्रकारों की शुद्धता को इम्यूनो स्टेनिंग और फ्लो साइटोमेट्री का उपयोग करके निर्धारित किया गया था। ट्रोपोनिन टी का उपयोग कार्डियोमायोसाइट्स के लिए एक मार्कर के रूप में किया गया था, और 90% से अधिक शुद्धता प्राप्त की गई थी। प्लेटलेट एंडोथेलियल सेल आसंजन अणु सीडी 31 और विमेंटिन का उपयोग एंडोथेलियल कोशिकाओं और कार्डियक फाइब्रोब्लास्ट्स के लिए मार्करों के रूप में किया गया था, और क्रमशः 98 और 96% से अधिक शुद्धता का संकेत दिया गया था।Immunofluorescence धुंधला पता चला है कि कार्डियोमायोसाइट्स सबसे भारी थे और microtissues के केंद्र पर कब्जा कर लिया, जबकि एंडोथेलियल कोशिकाओं microtissues भर में interspersed थे, और कार्डियक fibroblasts मुख्य रूप से परिधि पर कब्जा कर लिया। इस गति एक और Liberase टीएल का उपयोग कर microtissues के पाचन संस्कृति में दो सप्ताह के बाद कम एपोप्टोटिक कोशिकाओं के साथ अत्यधिक व्यवहार्य सेल अनुपात में परिणामस्वरूप। कार्डियक माइक्रोटिस के एक घंटे के संपर्क में डोक्सोरुबिसिन प्रेरित खुराक निर्भर कार्डियोटॉक्सिसिटी की एक उच्च सांद्रता के लिए।सूक्ष्म ऊतक संकुचन, और वैक्टर आंदोलन ने एक छद्म गर्मी मानचित्र उत्पन्न किया जो माइक्रोटिश्यू में औसत संकुचन प्रोफ़ाइल को चित्रित करता है। कार्डियक माइक्रोटिस्यूज़ की संकुचनशील गति ने सकारात्मक चोटियों को उत्पन्न किया, जिन्हें संकुचन वेग, विश्राम वेग और बीट दर के रूप में मापा गया था, जिसे दो संकुचन चक्रों के बीच समय के रूप में गणना की गई थी। कार्डियक माइक्रोटिस्यूज़ की संकुचनशीलता संस्कृति में चार सप्ताह से अधिक समय तक सुसंगत थी।कोशिकाओं को हीटिंग इस विशेष प्रोटोकॉल में सबसे महत्वपूर्ण चरणों में से एक है, जहां किसी को माइक्रोवेल के भीतर भी वितरण के लिए एगारोज़ सरणी में सेल निलंबन ड्रॉपवाइज को सावधानीपूर्वक वितरित करने और अतिप्रवाह को रोकने के लिए ध्यान रखना चाहिए। इन microtissues के अनुकूलित विकिरण प्रोटोकॉल का उपयोग करते हुए, कोई भी इन्हें उच्च थ्रूपुट अनुक्रमण प्रौद्योगिकियों के अधीन कर सकता है, जैसे कि एकल सेल आरएनए-सेक या एकल सेल ATAC-seq सेल विशिष्ट जीन अभिव्यक्ति पैटर्न को समझने के लिए जिसके परिणामस्वरूप विभिन्न उपचार स्थितियों के कारण होता है।

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Encapsulation of Cardiomyocytes in a Fibrin Hydrogel for Cardiac Tissue Engineering

Cardiomyocytes की कार्डिएक ऊतक इंजीनियरिंग के लिए एक आतंच Hydrogel में इनकैप्सुलेशन

Culturing cells in a three dimensional hydrogel environment is an important technique for developing constructs for tissue engineering as well as studying ...

Anatomical Reconstructions of the Human Cardiac Venous System using Contrast-computed Tomography of Perfusion-fixed Specimens

इसके विपरीत गणना छिड़काव तय नमूने के टोमोग्राफी का उपयोग करते हुए मानव कार्डिएक शिरापरक प्रणाली के संरचनात्मक पुनर्निर्माण

A detailed  understanding of the complexity and relative variability within the human  cardiac venous system is crucial for the development of cardiac ...

Construction of Defined Human Engineered Cardiac Tissues to Study Mechanisms of Cardiac Cell Therapy

निर्धारित मानव इंजीनियर कार्डिएक ऊतकों के निर्माण हृदय सेल थेरेपी के तंत्र का अध्ययन करने के लिए

Human cardiac tissue engineering can fundamentally impact therapeutic discovery through the development of new species-specific screening systems that ...

Creation of Cardiac Tissue Exhibiting Mechanical Integration of Spheroids Using 3D Bioprinting

3 डी बायोप्रिंटिंग का उपयोग करने वाले स्पैरोइड्स के मेडीकल इंटीग्रेशन का कार्डिएक टिश्यू का निर्माण

This protocol describes 3D bioprinting of cardiac tissue without the use of biomaterials, using only cells. Cardiomyocytes, endothelial cells and ...

Using Extraordinary Optical Transmission to Quantify Cardiac Biomarkers in Human Serum

मानव सीरम में हृदय के निशान यों तो असाधारण ऑप्टिकल संचरण का प्रयोग

For a biosensing platform to have clinical relevance in point-of-care (POC) settings, assay sensitivity, reproducibility, and ability to reliably monitor ...

Protocol for MicroRNA Transfer into Adult Bone Marrow-derived Hematopoietic Stem Cells to Enable Cell Engineering Combined with Magnetic Targeting

वयस्क अस्थि मज्जा में MicroRNA हस्तांतरण के लिए प्रोटोकॉल-व्युत्पंन टेम स्टेम कोशिकाओं सेल इंजीनियरिंग चुंबकीय लक्ष्यीकरण के साथ संयुक्त सक्षम करने के लिए

While CD133+ hematopoietic stem cells (SCs) have been proven to provide high potential in the field of regenerative medicine, their low retention rates ...

A Net Mold-based Method of Scaffold-free Three-Dimensional Cardiac Tissue Creation

एक शुद्ध मोल्ड-पाड़ मुक्त तीन आयामी कार्डियक ऊतक निर्माण की विधि आधारित

This protocol describes a novel and easy net mold-based method to create three-dimensional (3-D) cardiac tissues without additional scaffold material. ...

Standardized and Scalable Assay to Study Perfused 3D Angiogenic Sprouting of iPSC-derived Endothelial Cells In Vitro

मानकीकृत और स्केलेबल परख का अध्ययन करने के लिए 3 डी एंजियोजेनिक अंकुरण iPSC-व्युत्पन्न एंडोथेलियल कोशिकाओं के विट्रो में

Pre-clinical drug research of vascular diseases requires in vitro models of vasculature that are amendable to high-throughput screening. However, current ...

Human iPSC-Derived Cardiomyocyte Networks on Multiwell Micro-electrode Arrays for Recurrent Action Potential Recordings

बार-बार कार्रवाई की क्षमता वाली रिकॉर्डिंग के लिए मल्टीवेल माइक्रो-इलेक्ट्रोड ऐरे पर मानव iPSC-Derived Cardiomycye नेटवर्क

Cardiac safety screening is of paramount importance for drug discovery and therapeutics. Therefore, the development of novel high-throughput ...

Preclinical Cardiac Electrophysiology Assessment by Dual Voltage and Calcium Optical Mapping of Human Organotypic Cardiac Slices

मानव ऑर्गेनोटिपिक कार्डियक स्लाइस के ड्यूल वोल्टेज और कैल्शियम ऑप्टिकल मैपिंग द्वारा प्रीक्लिनिकल कार्डियक इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी मूल्यांकन

Human cardiac slice preparations have recently been developed as a platform for human physiology studies and therapy testing to bridge the gap between ...