Name: fabrication of 3d cardiac microtissue arrays using human ipsc-derived cardiomyocytes, cardiac fibroblasts, and endothelial cells
Uploaded: 2021-03-14T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fabrication of 3D Cardiac Microtissue Arrays using Human iPSC-Derived Cardiomyocytes, Cardiac Fibroblasts, and Endothelial Cells at JoVE.com

Dr. Amanda Chase'e el yazması hakkındaki yararlı geri bildirimleri için teşekkür ederiz. Finansman desteği Kaliforniya Üniversitesi Tütünle İlgili Hastalık Araştırma Programı (TRDRP), T29FT0380 (D.T.) ve 27IR-0012 (J.C.W.) tarafından sağlanmıştır; Amerikan Kalp Derneği 20POST35210896 (H.K.) ve 17MERIT33610009 (J.C.W.); ve Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH) R01 HL126527, R01 HL123968, R01 HL150693, R01 HL141851 ve NIH UH3 TR002588 (J.C.W).

1. Orta, reaktif, kültür plakası hazırlama
<ol><li>Hücre kültürü için hücre yıkama çözümü: Kalsiyum veya magnezyum olmadan 1x fosfat tamponlu salin (PBS) veya Hanks dengeli tuz çözeltisi (HBSS) kullanın.</li>
	<li>Kardiyomiyosit farklılaşma ortamı<ol>
<li>500 mL kardiyomiyosit bazal ortama (RPMI 1640) 10 mL takviyesi (50x B27 artı insülin) ekleyerek farklılaşma Orta #1 hazırlayın.</li>
		<li>500 mL kardiyomiyosit bazal ortama (RPMI 1640) 10 mL takviyesi (50x B27 eksi insülin) ekleyerek farkl...

<ol>
	<li>Neofytou, E., O'Brien, C. G., Couture, L. A., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hurdles+to+clinical+translation+of+human+induced+pluripotent+stem+cells.">Hurdles to clinical translation of human induced pluripotent stem cells.</a> Journal of Clinical Investigation. 125 (7), 2551-2557 (2015).</li><li>Lancaster, M. A., Knoblich, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organogenesis+in+a+dish:+Modeling+development+and+disease+using+organoid+technologies.">Organogenesis in a dish: Modeling development and disease using organoid technologies.</a> Science. 345 (6194), 1247125 (2014).</li><li>Liu, C., Oikonomopoulos, A., Sayed, N., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+human+diseases+with+induced+pluripotent+stem+cells:+from+2D+to+3D+and+beyond.">Modeling human diseases with induced pluripotent stem cells: from 2D to 3D and beyond.</a> Development. 145 (5), 156166 (2018).</li><li>Yin, X., Mead, B. E., Safaee, H., Langer, R., Karp, J. M., Levy, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+stem+cell+organoids.">Engineering stem cell organoids.</a> Cell Stem Cell. 18 (1), 25-38 (2016).</li><li>Giacomelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+cardiac+microtissues+composed+of+cardiomyocytes+and+endothelial+cells+co-differentiated+from+human+pluripotent+stem+cells.">Three-dimensional cardiac microtissues composed of cardiomyocytes and endothelial cells co-differentiated from human pluripotent stem cells.</a> Development. 144 (6), 1008-1017 (2017).</li><li>Kurokawa, Y. K., George, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+engineering+the+cardiac+microenvironment:+Multicellular+microphysiological+systems+for+drug+screening.">Tissue engineering the cardiac microenvironment: Multicellular microphysiological systems for drug screening.</a> Advances in Drug Delivery Reviews. 96, 225-233 (2016).</li><li>Cartledge, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+crosstalk+between+cardiac+fibroblasts+and+adult+cardiomyocytes+by+soluble+mediators.">Functional crosstalk between cardiac fibroblasts and adult cardiomyocytes by soluble mediators.</a> Cardiovascular Research. 105 (3), 260-270 (2015).</li><li>Ravenscroft, S. M., Pointon, A., Williams, A. W., Cross, M. J., Sidaway, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+non-myocyte+cells+show+enhanced+pharmacological+function+suggestive+of+contractile+maturity+in+stem+cell+derived+cardiomyocyte+microtissues.">Cardiac non-myocyte cells show enhanced pharmacological function suggestive of contractile maturity in stem cell derived cardiomyocyte microtissues.</a> Toxicology Science. 152 (1), 99-112 (2016).</li><li>Ieda, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+fibroblasts+regulate+myocardial+proliferation+through+beta1+integrin+signaling.">Cardiac fibroblasts regulate myocardial proliferation through beta1 integrin signaling.</a> Developmental Cell. 16 (2), 233-244 (2009).</li><li>Brutsaert, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+endothelial-myocardial+signaling:+its+role+in+cardiac+growth,+contractile+performance,+and+rhythmicity.">Cardiac endothelial-myocardial signaling: its role in cardiac growth, contractile performance, and rhythmicity.</a> Physiological Reviews. 83 (1), 59-115 (2003).</li><li>Huebsch, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+video-based+analysis+of+contractility+and+calcium+flux+in+human-induced+pluripotent+stem+cell-derived+cardiomyocytes+cultured+over+different+spatial+scales.">Automated video-based analysis of contractility and calcium flux in human-induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes cultured over different spatial scales.</a> Tissue Engineering Part C Methods. 21 (5), 467-479 (2015).</li><li>Burridge, P. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemically+defined+generation+of+human+cardiomyocytes.">Chemically defined generation of human cardiomyocytes.</a> Nature Methods. 11 (8), 855-860 (2014).</li><li>Gu, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pravastatin+reverses+obesity-induced+dysfunction+of+induced+pluripotent+stem+cell-derived+endothelial+cells+via+a+nitric+oxide-dependent+mechanism.">Pravastatin reverses obesity-induced dysfunction of induced pluripotent stem cell-derived endothelial cells via a nitric oxide-dependent mechanism.</a> European Heart Journal. 36 (13), 806-816 (2015).</li><li>Williams, I. M., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+endothelial+cells+from+human+pluripotent+stem+cells.">Generation of endothelial cells from human pluripotent stem cells.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology. 39 (7), 1317-1329 (2019).</li><li>Zhang, H., Shen, M., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+quiescent+cardiac+fibroblasts+derived+from+human+induced+pluripotent+stem+cells.">Generation of quiescent cardiac fibroblasts derived from human induced pluripotent stem cells.</a> Methods in Molecular Biology. , 1-7 (2020).</li><li>Zhang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+quiescent+cardiac+fibroblasts+from+human+induced+pluripotent+stem+cells+for+in+vitro+modeling+of+cardiac+fibrosis.">Generation of quiescent cardiac fibroblasts from human induced pluripotent stem cells for in vitro modeling of cardiac fibrosis.</a> Circulation Research. 125 (5), 552-566 (2019).</li><li>Zhang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+cardiac+fibroblasts+derived+from+human+pluripotent+stem+cells+via+second+heart+field+progenitors.">Functional cardiac fibroblasts derived from human pluripotent stem cells via second heart field progenitors.</a> Nature Communications. 10 (1), 2238-2315 (2019).</li><li>Giacomelli, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human-iPSC-derived+cardiac+stromal+cells+enhance+maturation+in+3d+cardiac+microtissues+and+reveal+non-cardiomyocyte+contributions+to+heart+disease.">Human-iPSC-derived cardiac stromal cells enhance maturation in 3d cardiac microtissues and reveal non-cardiomyocyte contributions to heart disease.</a> Cell Stem Cell. 26 (6), 862-879 (2020).</li><li>Burridge, P. W., Holmstr&#246;m, A., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemically+defined+culture+and+cardiomyocyte+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells.">Chemically defined culture and cardiomyocyte differentiation of human pluripotent stem cells.</a> Current Protocols in Human Genetics. 87 (1), 1-15 (2015).</li><li>Lian, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+cardiomyocyte+differentiation+from+human+pluripotent+stem+cells+by+modulating+Wnt/&#946;-catenin+signaling+under+fully+defined+conditions.">Directed cardiomyocyte differentiation from human pluripotent stem cells by modulating Wnt/&#946;-catenin signaling under fully defined conditions.</a> Nature Protocols. 8 (1), 162-175 (2013).</li><li>Buikema, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt+activation+and+reduced+cell-cell+contact+synergistically+induce+massive+expansion+of+functional+human+iPSC-derived+cardiomyocytes.">Wnt activation and reduced cell-cell contact synergistically induce massive expansion of functional human iPSC-derived cardiomyocytes.</a> Cell Stem Cell. 27 (1), 50-63 (2020).</li><li>Feyen, D. A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+maturation+media+improve+physiological+function+of+human+iPSC-derived+cardiomyocytes.">Metabolic maturation media improve physiological function of human iPSC-derived cardiomyocytes.</a> Cell Reports. 32 (3), 107925 (2020).</li><li>Karbassi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiomyocyte+maturation:+Advances+in+knowledge+and+implications+for+regenerative+medicine.">Cardiomyocyte maturation: Advances in knowledge and implications for regenerative medicine.</a> Nature Reviews Cardiology. 17 (6), 341-359 (2020).</li><li>Li, Z., Hu, S., Ghosh, Z., Han, Z., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+characterization+and+expression+profiling+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-+and+embryonic+stem+cell-derived+endothelial+cells.">Functional characterization and expression profiling of human induced pluripotent stem cell- and embryonic stem cell-derived endothelial cells.</a> Stem Cells Development. 20 (10), 1701-1710 (2011).</li><li>Lian, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+to+endothelial+progenitors+via+small-molecule+activation+of+WNT+signaling.">Efficient differentiation of human pluripotent stem cells to endothelial progenitors via small-molecule activation of WNT signaling.</a> Stem Cell Report. 3 (5), 804-816 (2014).</li><li>Gu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+to+endothelial+cells.">Efficient differentiation of human pluripotent stem cells to endothelial cells.</a> Current Protocols in Human Genetics. 98 (1), 64 (2018).</li><li>Acharya, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+bHLH+transcription+factor+Tcf21+is+required+for+lineage-specific+EMT+of+cardiac+fibroblast+progenitors.">The bHLH transcription factor Tcf21 is required for lineage-specific EMT of cardiac fibroblast progenitors.</a> Development. 139 (12), 2139-2149 (2012).</li><li>Wessels, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epicardially+derived+fibroblasts+preferentially+contribute+to+the+parietal+leaflets+of+the+atrioventricular+valves+in+the+murine+heart.">Epicardially derived fibroblasts preferentially contribute to the parietal leaflets of the atrioventricular valves in the murine heart.</a> Development Biology. 366 (2), 111-124 (2012).</li><li>Ali, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+heterogeneity+of+cardiac+fibroblasts+does+not+predict+pathological+proliferation+and+activation.">Developmental heterogeneity of cardiac fibroblasts does not predict pathological proliferation and activation.</a> Circulation Research. 115 (7), 625-635 (2014).</li><li>McMurtrey, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analytic+and+numerical+models+of+oxygen+and+nutrient+diffusion,+metabolism+dynamics,+and+architecture+optimization+in+three-dimensional+tissue+constructs+with+applications+and+insights+in+cerebral+organoids.">Analytic and numerical models of oxygen and nutrient diffusion, metabolism dynamics, and architecture optimization in three-dimensional tissue constructs with applications and insights in cerebral organoids.</a> Tissue Engineering Part C Methods. (3), 221-249 (2015).</li><li>Thomas, D., O'Brien, T., Pandit, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+customized+extracellular+niche+engineering:+progress+in+cell-entrapment+technologies.">Toward customized extracellular niche engineering: progress in cell-entrapment technologies.</a> Advanced Materials. 30 (1), 1703948 (2018).</li><li>Thomas, D., Shenoy, S., Sayed, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Building+Multi-dimensional+induced+pluripotent+stem+cells-based+model+platforms+to+assess+cardiotoxicity+in+cancer+therapies.">Building Multi-dimensional induced pluripotent stem cells-based model platforms to assess cardiotoxicity in cancer therapies.</a> Front Pharmacol. 12, 39 (2021).</li><li>Rhee, J. -. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+secondary+iron+overload+cardiomyopathy+with+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+cardiomyocytes.">Modeling secondary iron overload cardiomyopathy with human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes.</a> Cell Reports. 32 (2), 107886 (2020).</li><li>Paik, D. T., Cho, S., Tian, L., Chang, H. Y., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+RNA+sequencing+in+cardiovascular+development,+disease,+and+medicine.">Single-cell RNA sequencing in cardiovascular development, disease, and medicine.</a> Nature Reviews Cardiology. 17 (8), 457-473 (2020).</li><li>Nguyen, Q. H., Pervolarakis, N., Nee, K., Kessenbrock, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+considerations+for+single-cell+RNA+sequencing+approaches.">Experimental considerations for single-cell RNA sequencing approaches.</a> Frontiers in Cell and Developmental Biology. 6, 108 (2018).</li><li>Lau, E., Paik, D. T., Wu, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systems-wide+approaches+in+induced+pluripotent+stem+cell+models.">Systems-wide approaches in induced pluripotent stem cell models.</a> Annual Reviews in Pathology. 14 (1), 395-419 (2019).</li><li>Maddah, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+non-invasive+platform+for+functional+characterization+of+stem-cell-derived+cardiomyocytes+with+applications+in+cardiotoxicity+testing.">A non-invasive platform for functional characterization of stem-cell-derived cardiomyocytes with applications in cardiotoxicity testing.</a> Stem Cell Report. 4 (4), 621-631 (2015).</li><li>Sala, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Musclemotion:+A+versatile+open+software+tool+to+quantify+cardiomyocyte+and+cardiac+muscle+contraction+in+vitro+and+in+vivo.">Musclemotion: A versatile open software tool to quantify cardiomyocyte and cardiac muscle contraction in vitro and in vivo.</a> Circulation Research. 122 (3), 5-16 (2018).</li></ol>

Önceden ayırt edilmiş iPSC-CM'lerden, iPSC-EC'lerden ve iPSC-CF'lerden kardiyak mikrotissues üretmek için, kardiyak mikrotizeler içinde temasla inhibe edilen hücre sıkışmasından sonra hücre numaralarının daha iyi kontrol altına alınması için son derece saf bir kültür elde etmek önemlidir. Son zamanlarda, Giacomelli ve. al.18 , iPSC-CM'ler, iPSC-EC'ler ve iPSC-CF'ler kullanılarak kardiyak mikrotissuların imalatını göstermiştir. Açıklanan yöntem kullanılarak oluşturul...

Kardiyovasküler araştırma alanında ilaç keşfi ve hastalık modellemesi, klinik olarak ilgili örneklerin eksikliği ve yetersiz çeviri araçları nedeniyle çeşitli zorluklarla karşı karşıyadır1. Son derece karmaşık klinik öncesi modeller veya aşırı basitleştirilmiş in vitro tek hücreli modeller tekrarlanabilir bir şekilde patofizyolojik koşullar sergilemez. Bu nedenle, birkaç minyatürleştirilmiş doku mühendisliği platformu, yüksek verimli bir şekilde uygulama kolaylığı ile doku fonksiyonunun sadık bir şekilde yeniden kesilmesi arasında bir denge sağlamak amacıyla boşluğu kapatmaya yardımcı olmak için evrimleşmiştir2,3. İndüklenmiş pluripotent kök hücre (iPSC) teknolojisinin ortaya çıkmasıyla, doku mühendisliği araçları araştırma sorularını yanıtlamak için altta yatan kardiyovasküler hastalık durumu olan veya olmayan hastaya özgü hücrelere uygulanabilir4,5,6. Kalp dokusuna benzer hücresel bileşime sahip bu tür doku mühendisliği modelleri, bir veya birden fazla hücre tipinin davranışındaki patolojik değişikliklerin neden olduğu kardiyotoksikliği ve disfonksiyonu test etmek için ilaç geliştirme çabalarında kullanılabilir.
İnsan iPSC'lerinden elde edilen kendi kendine monte edilen mikrotissues veya organoidler, in vivo meslektaşlarıyla fonksiyonel benzerlikler gösteren minyatür doku benzeri derlemeler olan üç boyutlu (3D) yapılardır. IPSC'lerin yönlendirilmiş farklılaşması veya embriyoid cisimlerin oluşumu yoluyla in situ organoidlerin oluşumuna izin veren birkaç farklı yaklaşım vardır4. Elde eden organoidler, organogenezini yönlendiren morfogenetik süreçleri incelemek için vazgeçilmez bir araçtır. Bununla birlikte, çeşitli hücre popülasyonlarının varlığı ve öz örgütlenmedeki farklılıklar, farklı organoidler arasındaki sonuçlarda değişkenliğe yol açabilir5. Alternatif olarak, yerel hücre-hücre etkileşimlerini incelemek için dokuya özgü hücre tiplerine sahip mikrotizelere kendi kendine monte edilen önceden ayırt edilmiş hücreler, kendi kendine monte edilen bileşenleri izole etmenin mümkün olduğu mükemmel modellerdir. Özellikle insan kardiyak araştırmalarında, hücreler farklı hasta hatlarından veya ticari kaynaklardan türetildiğinde, çok hücreli bileşenlere sahip 3D kardiyak mikrotizelerin geliştirilmesinin zor olduğu kanıtlanmıştır.
Fizyolojik olarak ilgili, kişiselleştirilmiş, in vitro modelde hücre davranışlarına ilişkin mekanistik anlayışımızı geliştirmek için ideal olarak tüm bileşen hücre tipleri aynı hasta hattından türetilmelidir. bir insan kalbi bağlamında, gerçekten temsili bir kardiyak in vitro modeli baskın hücre tipleri arasında çapraz sapı yakalar, yani kardiyomiyositler (CD), endotel hücreleri (VC'ler) ve kardiyak fibroblastlar (KF'ler)6,7. Bir miyokardın sadık rekapitülasyonu sadece biyofiziksel streç ve elektrofizyolojik stimülasyon değil, aynı zamanda VC'ler ve CCS8 gibi hücre tiplerinin desteklenmesinden kaynaklanan hücre-hücre sinyali gerektirir. CF'ler hücre dışı matris sentezinde ve doku yapısının korunmasında rol oynar; ve patolojik bir durumda, CF'ler FIBROZIs'a neden olabilir ve CMs9'daki elektrik iletimini değiştirebilir. Benzer şekilde, VC'ler parakrin sinyalizasyon ve hayati metabolik talepler sağlayarak CD'lerin kontrtil özelliklerini düzenleyebilir10. Bu nedenle, fizyolojik olarak ilgili yüksek verimli deneylerin yapılmasına izin vermek için üç ana hücre tipinden oluşan insan kardiyak mikrotizelerine ihtiyaç vardır.
Burada, insan iPSC türevi kardiyomiyositler (iPSC-CM'ler), iPSC türevi endotel hücreleri (iPSC-ECs) ve iPSC türevi kardiyak fibroblastlar (iPSC-CF'ler) ve 3D kültürlerinin tekdüze kardiyak mikrotissue dizilerinde türetilerek kardiyak mikrotissuların imalatında aşağıdan yukarıya bir yaklaşım açıklıyoruz. Kendiliğinden atan kardiyak mikrotizeler üretmenin bu facile yöntemi, kalp fizyolojisinin fonksiyonel ve mekanistik anlaşılması için hastalıkların modellemesi ve ilaçların hızlı testi için kullanılabilir. Ayrıca, bu tür çok hücreli kardiyak mikrotissue platformları, kronik veya akut kültür koşullarında kardiyak hastalığın zaman içinde ilerlemesini taklit etmek için genom düzenleme teknikleri ile kullanılabilir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>12-well plates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-772-29</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3D micro-molds</td>
			<td>Microtissues</td>
			<td>12-81 format</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well plates</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-772-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoMACS Rinsing Solution</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>NC9104697</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 Supplement minus Insulin</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A1895601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27 Supplement plus Insulin</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>17504-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Cytofix</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>554655</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Matrigel, hESC-qualified matrix</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>354277</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cardiac Troponin T Antibody</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-120-403</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD144 (VE-Cadherin) MicroBeads</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-097-857</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD31 Antibody</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-110-670</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD31 Microbeads</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-091-935</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHIR-99021</td>
			<td>Selleckchem</td>
			<td>S2924</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DDR2</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-81707</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dead Cell Apoptosis Kit with Annexin V FITC and PI</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>V13242</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase I</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>4942086001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, high glucose (4.5g/L) no glutamine medium</td>
			<td></td>
			<td>11960044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F-12 basal medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11320033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s phosphate buffered saline (DPBS), no calcium, no magnesium</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>14190-136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGM2 BulletKit</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-3124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>10437</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FibroLife Serum-Free Fibroblast LifeFactors Kit</td>
			<td>LifeLIne Cell Technology</td>
			<td>LS-1010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose free RPMI medium</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11879-020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat serum</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>16210-064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human FGF-basic</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>13256029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human VEGF-165</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>100-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IWR-1-endo</td>
			<td>Selleckchem</td>
			<td>S7086</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liberase TL</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>5401020001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LS Sorting Columns</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-042-401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MACS BSA Stock solution</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-091-376</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MACS Rinsing Buffer</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-091-222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MidiMACS Separator</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-042-302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI medium</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11835055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SB431542</td>
			<td>Selleckchem</td>
			<td>S1067</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TO-PRO 3</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>R37170</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Millipore Sigma</td>
			<td>X100-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE Select 10X</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>red</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vimentin Alexa Fluor&#174; 488-conjugated Antibody</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>IC2105G</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fabrication of 3d cardiac microtissue arrays using human ipsc-derived cardiomyocytes, cardiac fibroblasts, and endothelial cells

İndüklenmiş pluripotent kök hücrelerden (IPSC) insan kardiyomiyositleri (CD), kardiyak fibroblastlar (KF'ler) ve endotel hücrelerinin (VC) üretilmesi, doku gelişimini ve hastalığı yönlendiren farklı kardiyovasküler hücre tipleri arasındaki karmaşık etkileşimi incelemek için eşsiz bir fırsat sağlamıştır. Kardiyak doku modelleri alanında, çeşitli sofistike üç boyutlu (3D) yaklaşımlar, hücre dışı matrisler ve çapraz bağlantıların bir kombinasyonu ile fizyolojik alaka düzeyini ve doğal doku ortamını taklit etmek için indüklenmiş pluripotent kök hücre türevi kardiyomiyositler (iPSC-CMs) kullanır. Bununla birlikte, bu sistemler mikrofabrikasyon uzmanlığı olmadan üretilmek için karmaşıktır ve kendi kendine monte etmek için birkaç hafta gerektirir. En önemlisi, bu sistemlerin çoğu, insan kalbindeki nonmyositlerin% 60'ından fazlasını oluşturan vasküler hücrelerden ve kardiyak fibroblastlardan yoksundur. Burada, her üç kardiyak hücre tipinin de iPSC'lerden kardiyak mikrotizeler uzaması için türetmelerini açıklıyoruz. Bu facile replika kalıplama tekniği, standart çok kuyulu hücre kültürü plakalarında birkaç hafta boyunca kardiyak mikrotissue kültürüne izin verir. Platform, ilk tohumlama yoğunluğuna göre mikrotissue boyutları üzerinde kullanıcı tanımlı kontrol sağlar ve gözlemlenebilir kardiyak mikrotissue kasılmalarının elde etmek için kendi kendine montajı için 3 günden az bir süre gerekir. Ayrıca, kardiyak mikrotissular akış sitometrisi ve tek hücreli RNA dizilimi (scRNA-seq) kullanılarak tek hücreli sorgulama için yüksek hücre canlılığını korurken kolayca sindirilebilir. Kardiyak mikrotissuların bu in vitro modelinin ilaç keşfi ve hastalık modellemesinde doğrulama çalışmalarını hızlandırmaya yardımcı olacağını öngörüyoruz.

iPSC türevli CD' lerin, EC'lerin ve CD'lerin immünostaining ve akış sitometrisi karakterizasyonu iPSC-CM'ler, iPSC-EC'ler ve iPSC-CF'lerden oluşan kardiyak mikrotissular üretmek için, her üç hücre tipi de ayrı ayrı ayırt edilir ve karakterize edilir. iPSC'lerin iPSC-CM'lere in vitro farklılaşması son birkaç yılda gelişmiştir. Bununla birlikte, iPSC-CM'lerin verimi ve saflığı çizgiden satıra farklılık gösterir. Mevcut protokol, 9. gün boyunca kendiliğinden atmaya ...

Watch this Scientific Journal Video about Fabrication of 3D Cardiac Microtissue Arrays using Human iPSC-Derived Cardiomyocytes, Cardiac Fibroblasts, and Endothelial Cells at JoVE.com

Fabrication of 3D Cardiac Microtissue Arrays using Human iPSC-Derived Cardiomyocytes, Cardiac Fibroblasts, and Endothelial Cells

Burada, önceden ayırt edilmiş insan kaynaklı pluripotent kök hücre türevli kardiyomiyositler, kardiyak fibroblastlar ve endotel hücrelerinden oluşan 3D kendi kendine monte edilmiş kardiyak mikrotissue dizileri oluşturmak için kullanımı kolay bir metodolojiyi açıklıyoruz. Kardiyak mikrotissues üretmek için teknik gerektiren bu kullanıcı dostu ve düşük hücre, hastalık modellemesi ve ilaç gelişiminin erken aşamaları için uygulanabilir.

İnsan iPSC Türevli Kardiyomiyositler, Kardiyak Fibroblastlar ve Endotel Hücreleri Kullanılarak 3D Kardiyak Mikrotissue Dizilerinin İmalatı

Generation of human cardiomyocytes (CMs), cardiac fibroblasts (CFs), and endothelial cells (ECs) from induced pluripotent stem cells (iPSCs) has provided ...

Protokol, indüklenmiş pluripotent kök hücreler ve 72 saatten daha kısa bir sürede dövülen kardiyak sferoidler üretmek için çok yönlü bir teknik kullanarak insan kardiyovasküler hücre tipleri üretme gücünü birleştirir. Bu kardiyak sferoidler hastalık modelleme ve ilaç testi için kullanılabilir. Bu facile tekniğinin ana avantajlarından biri, standart bir 12 kuyu plakasında yaklaşık 1000 atan kardiyak sferoid üretebilmemizdir.Ve en önemlisi, her kardiyak sferoid görüntüleme tabanlı teknik kullanılarak kontrtil fonksiyonu için test edilebilir. Mikrodalgada agarose eritdikten sonra biyogüvenlik kabinine yerleştirin ve üç dakika soğumasını bekleyin. Pipet 700 mikrolitre erimiş agarose ve kabarcıklar üretmekten kaçınmaya özen, dokuza dokuz dizi silikon mikromold ekleyin.Agarose süresini hızlandırmak için kalıbı soğuk öncesi buz bloğuna dikkatlice yerleştirin. Agarose yarı saydam hale geldiğinde, agarose replikasını kaybetmek için mikromold kenarlarını dikkatlice bükün ve silikon mikromolddan ayırmak için replikayı her taraftan nazikçe soyun. 81 dairesel girinti içeren agarose mikrotissue tepsisini steril 12 kuyulu bir tabağa aktarın, ardından agarose mikrotissue tepsisine iki mililitre PBS ekleyin ve mikroskop altında sıkışmış kabarcıklar veya düzensiz şekilli kuyular için inceleyin.Agarose tepsisini bir gecede iki mililitre% 70 etanol içine batırın, ardından biyogüvenlik kabininde bir saat boyunca UV tedavisi. % 70 etanolünü çıkarın ve damıtılmış suyla iki kez ve bir kez iki mililitre PBS ile yıkayın. İndüklenen pluripotent kök hücre türetilmiş kardiyomiyositler, kardiyak fibroblastlar ve endotel hücreleri trypsinasyon ve nötralizasyondan sonra sayıldıktan sonra, hücre süspansiyonlarını buza yerleştirin.Yeni bir tüpte, indüklenmiş pluripotent kök hücre türetilmiş kardiyomiyositleri, kardiyak fibroblastları ve endotel hücrelerini karıştırın. Ardından, PBS'yi girintilere dokunmadan kuyudan ve hücre tohumlama odasından çıkarın ve hücre süspansiyonunun damla yönünde 200 mikrolitresini ekleyin. Hücrelerin iki saat boyunca bir karbondioksit inkübatörüne 37 santigrat derecede yerleşmesine izin verin.İç odanın yüzeyini kaplamak için agarose kalıbını çevreleyen mikro doku imalat ortamını ekleyin. 24 saat sonra, dairesel girintilerde kendi kendine monte edilmiş ve kompakt küreseller için gözlemleyin. Küreselleri korumak için ortamı her iki günde bir değiştirin.Tipik olarak, 48 saat sonra, sferoidlerin kendiliğinden darp edilmesi gözlenebilir. Bodrum membran matris ortamında veya jelatin kaplı oda slaytlarında tek tek hücre tiplerini ayrı ayrı kültürleyin. Kardiyak mikrotissues'i dairesel girintilerden hafifçe boşaltın ve 15 mililitrelik bir kronik tüpte toplayın.Ortamı emiş edin ve hücreleri veya mikrotizeleri bir mililitre PBS ile durulayın. Ardından, hücreleri veya mikrotissuları% 4.2 PFA içeren sabitleme tamponu ile sabitlayın ve oda sıcaklığında kuluçkaya yatırın. PFA'yı epire edin ve hücreleri veya mikrotize edicileri bir mililitre permeabilizasyon çözeltisi ile kuluçkaya yatırın.Ardından, çözeltiyi epire edin ve iki ila üç mililitre PBS ile durulayın. Hücrelere 500 ila 1000 mikrolitre blokaj çözeltisi ekleyin ve oda slaytları için en az bir saat ve mikrotissues için üç ila dört saat kuluçkaya yatırın. Numuneleri, oda slaytları için bir saat boyunca ve kardiyak mikrotissular için dört santigrat derecede bir gecede blokaj çözeltisinde konjuge antikorlarla kuluçkaya yatırın.Oda slaytlarını her yıkama arasında beş dakikalık sürelerle 0,1% 20'lik 500 mikrolitre ile üç kez yıkayın, ardından PBS ile son bir yıkama gerçekleştirin. Kardiyak mikro dokuları beş kez iki mililitre ile yıkayın 0.1% Ara 20, her yıkama arasında 20 dakikalık bir süre ile. Ardından, 20 dakika daha son bir yıkama yapın.Konfokal mikroskopiden önce hücreleri veya mikrotizeleri DAPI ile kuluçkaya yatırın, ardından kardiyak mikrotizeleri dikkatlice 35 milimetrelik bir cam alt tabağa aktarın ve mikrotissueyi batırmak için PBS ekleyin. Mikrotissues geniş veya bir mililitre pipet ucu kullanarak orta ile dairesel girintiler dışarı 15 mililitre kronik tüp içine yıkayın ve yerleşmek için izin verin. Ardından, ortamı epire edin ve bir mililitre PBS ile durulayın.Enzim sindirim tamponunun 200 ila 300 mikrolitresini ekleyin ve 37 santigrat derecede 10 dakika kuluçkaya yatırın. Daha sonra mikrotissues bir dakika boyunca hafifçe karıştırın ve inkübasyonu tekrarlayın. Kuluçkadan sonra, mikrotissues'i tek bir hücreye sindirmek için normal bir mililitre pipet ucuyla kuvvetlice karıştırın.Bulanık bir hücre süspansiyonu elde edin ve hücre süspansiyonu derhal%5 FBS içeren beş mililitre orta ile nötralize edin. Hücre süspansiyonunu 40 mikrometre hücre süzgecinden geçirin ve toplam hücre sayısını sayın. Tek hücreli süspansiyonu 300 kez G'de 4 santigrat derecede beş dakika santrifüjleyin.Süpernatantı epire edin ve EKNİk Bağlama tamponundaki hücreleri FITC Annexin V ve propidium iyodür veya TO-PRO-3 ölü hücre dışlama boyası ile yeniden biriktirin ve buzda 10 dakika kuluçkaya yatırın. Kuluçkadan sonra, hücre süspansiyonu için eksel bağlama tamponunun 300 mikrolitresini ekleyin ve akış sitometri analizi için yuvarlak bir alt FACS tüpüne aktarın. Saflaştırılmış indüklenmiş pluripotent kök hücre türevli kardiyomiyositler, endotel hücreleri ve kardiyak fibroblastlar faz kontrastlı mikroskopi kullanılarak görselleştirildi.İmmün boyama ve akış sitometrisi kullanılarak farklı hücre tiplerinin saflığı belirlendi. Troponin T kardiyomiyositler için bir belirteç olarak kullanıldı ve% 90'ın üzerinde saflık elde edildi. Trombosit endotel hücre yapışma molekülü CD31 ve vimentin endotel hücreleri ve kardiyak fibroblastlar için belirteç olarak kullanıldı ve sırasıyla% 98 ve 96 üzerinde saflık gösterdi.İmmünofluoresans lekeleme, kardiyomiyositlerin en ağır olduğunu ve mikrotissuların merkezini işgal ettiğini, endotel hücrelerinin ise mikrotizeler boyunca serpiştirildiğini ve kardiyak fibroblastların ağırlıklı olarak çevreyi işgal ettiğini ortaya koydu. Bu tempo bir ve Liberase TL kullanan mikrotissuların sindirimi, kültürde iki hafta sonra daha az apoptotik hücre ile yüksek oranda canlı hücre oranlarına neden oldu. Kardiyak mikrotissuların bir saatlik maruziyeti, doksrubisin indüklenen doz bağımlı kardiyotoksisinin yüksek konsantrasyonuna maruz kalmasıdır.Mikro dokuların kontraktisitesi ve vektör hareketi, mikrotissue genelinde ortalama kasılma profilini gösteren sahte bir ısı haritası oluşturdu. Kardiyak mikrotizelerin kontrtil hareketi, iki kasılma döngüsü arasındaki zaman olarak hesaplanan kasılma hızı, gevşeme hızı ve beat hızı olarak ölçülen pozitif zirveler üretti. Kardiyak mikrotissuların kontrtinaklığı kültürde dört hafta boyunca tutarlıydı.Hücrelerin ısıtılması, mikrowells içinde eşit dağıtım için hücre süspansiyonunun agarose dizisine damla yönünde dikkatlice dağıtılmasına ve taşmasını önlemeye dikkat etmek gereken bu özel protokoldeki en önemli adımlardan biridir. Bu mikrotizelerin optimize edilmiş radyasyon protokolünü kullanarak, farklı tedavi koşulları nedeniyle ortaya çıkan hücreye özgü gen ekspresyon kalıplarını anlamak için bunları tek hücreli RNA-seq veya tek hücreli ATAC-seq gibi yüksek verimli sıralama teknolojilerine tabi tutulabilir.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Encapsulation of Cardiomyocytes in a Fibrin Hydrogel for Cardiac Tissue Engineering

Kalp Doku Mühendisliği Fibrin Hidrojel kardiyomiyositlerinin Kapsülleme

Culturing cells in a three dimensional hydrogel environment is an important technique for developing constructs for tissue engineering as well as studying ...

Anatomical Reconstructions of the Human Cardiac Venous System using Contrast-computed Tomography of Perfusion-fixed Specimens

Kontrast-bilgisayarlı Perfüzyon-sabit Örneklerinin Tomografi kullanarak İnsan Kardiyak Venöz Sistemi anatomik yeniden düzenlemesi

A detailed  understanding of the complexity and relative variability within the human  cardiac venous system is crucial for the development of cardiac ...

Construction of Defined Human Engineered Cardiac Tissues to Study Mechanisms of Cardiac Cell Therapy

Tanımlı İnsan Engineered Kalp Dokuların inşaatı Kardiyak Hücre Tedavisinin Mekanizmaları Eğitim için

Human cardiac tissue engineering can fundamentally impact therapeutic discovery through the development of new species-specific screening systems that ...

Creation of Cardiac Tissue Exhibiting Mechanical Integration of Spheroids Using 3D Bioprinting

3D Bioprinting&#39;i Kullanan Sferoidlerin Mekanik Entegrasyonu Sergileyen Kalp Doku Oluşturma

This protocol describes 3D bioprinting of cardiac tissue without the use of biomaterials, using only cells. Cardiomyocytes, endothelial cells and ...

Using Extraordinary Optical Transmission to Quantify Cardiac Biomarkers in Human Serum

İnsan Serumda kardiyak biyolojik ölçmek için olağanüstü optik iletim kullanma

For a biosensing platform to have clinical relevance in point-of-care (POC) settings, assay sensitivity, reproducibility, and ability to reliably monitor ...

Protocol for MicroRNA Transfer into Adult Bone Marrow-derived Hematopoietic Stem Cells to Enable Cell Engineering Combined with Magnetic Targeting

Yetişkin kemik iliği türevi hematopoetik kök hücre mühendislik manyetik hedefleme ile kombine etkinleştirmek için hücre içine mikroRNA Transfer için iletişim kuralı

While CD133+ hematopoietic stem cells (SCs) have been proven to provide high potential in the field of regenerative medicine, their low retention rates ...

A Net Mold-based Method of Scaffold-free Three-Dimensional Cardiac Tissue Creation

Net kalıp tabanlı yöntemi iskele ücretsiz üç boyutlu kalp doku oluşturma

This protocol describes a novel and easy net mold-based method to create three-dimensional (3-D) cardiac tissues without additional scaffold material. ...

Standardized and Scalable Assay to Study Perfused 3D Angiogenic Sprouting of iPSC-derived Endothelial Cells In Vitro

IPSC türetilmiş Endotel Hücrelerinin Perfüzyonlu 3D Anjiyojenik Filizlenmesini İn Vitro Olarak İncelemek Için Standart ve Ölçeklenebilir Tsay

Pre-clinical drug research of vascular diseases requires in vitro models of vasculature that are amendable to high-throughput screening. However, current ...

Human iPSC-Derived Cardiomyocyte Networks on Multiwell Micro-electrode Arrays for Recurrent Action Potential Recordings

Tekrarlayan eylem potansiyel kayıtlar için Multiwell mikro elektrot diziler üzerinde insan iPSC-türetilen Kardiyomiyoksit ağları

Cardiac safety screening is of paramount importance for drug discovery and therapeutics. Therefore, the development of novel high-throughput ...

Preclinical Cardiac Electrophysiology Assessment by Dual Voltage and Calcium Optical Mapping of Human Organotypic Cardiac Slices

İnsan Organotipik Kardiyak Dilimlerinin Çift Voltaj ve Kalsiyum Optik Haritalaması ile Preklinik Kardiyak Elektrofizyoloji Değerlendirmesi

Human cardiac slice preparations have recently been developed as a platform for human physiology studies and therapy testing to bridge the gap between ...