Name: an improved assay and tools for measuring mechanical nociception in drosophila larvae
Uploaded: 2020-10-29T15:00:00
Duration: 7 min 17 s
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हम प्रोटोटाइप वॉन Frey तंतुओं के विकास के लिए थॉमस वांग का शुक्रिया अदा करते हैं, पैट्रिक जे हुआंग यांत्रिक जांच परख में सुधार के लिए, ब्लूमिंगटन ड्रोसोफिला स्टॉक सेंटर फॉर द कंट्रोल(डब्ल्यू1118)और पीपीके-Gal4>UAS-mCD8-GFP फ्लाई स्टॉक्स, और गैल्को लैब के सदस्यों को पांडुलिपि को गंभीर रूप से पढ़ने के लिए। इस काम को आर21एनएस087360 और आर35जीएम126929 से एमजेजी को सपोर्ट मिला।

<ol>
	<li>Tracey, W. D., Wilson, R. I., Laurent, G., Benzer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Painless,+a+Drosophila+gene+essential+for+nociception.">Painless, a Drosophila gene essential for nociception.</a> Cell. 113 (2), 261-273 (2003).</li><li>Zhong, L., Hwang, R. Y., Tracey, W. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pickpocket+is+a+DEG/ENaC+protein+required+for+mechanical+nociception+in+Drosophila+larvae.">Pickpocket is a DEG/ENaC protein required for mechanical nociception in Drosophila larvae.</a> Current Biology. 20 (5), 429-434 (2010).</li><li>Lopez-Bellido, R., Himmel, N. J., Gutstein, H. B., Cox, D. N., Galko, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+assay+for+chemical+nociception+in+Drosophila+larvae.">An assay for chemical nociception in Drosophila larvae.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society of London. Series B: Biological Sciences. 374 (1785), 20190282 (2019).</li><li>Lopez-Bellido, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Growth+factor+signaling+regulates+mechanical+nociception+in+flies+and+vertebrates.">Growth factor signaling regulates mechanical nociception in flies and vertebrates.</a> Journal of Neuroscience. 39 (30), 6012-6030 (2019).</li><li>Hu, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+integration+and+neuromodulatory+feedback+facilitate+Drosophila+mechanonociceptive+behavior.">Sensory integration and neuromodulatory feedback facilitate Drosophila mechanonociceptive behavior.</a> Nature Neuroscience. 20 (8), 1085-1095 (2017).</li><li>Kim, S. E., Coste, B., Chadha, A., Cook, B., Patapoutian, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+Drosophila+Piezo+in+mechanical+nociception.">The role of Drosophila Piezo in mechanical nociception.</a> Nature. 483 (7388), 209-212 (2012).</li><li>Babcock, D. T., Landry, C., Galko, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytokine+signaling+mediates+UV-induced+nociceptive+sensitization+in+Drosophila+larvae.">Cytokine signaling mediates UV-induced nociceptive sensitization in Drosophila larvae.</a> Current Biology. 19 (10), 799-806 (2009).</li><li>Babcock, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hedgehog+signaling+regulates+nociceptive+sensitization.">Hedgehog signaling regulates nociceptive sensitization.</a> Current Biology. 21 (18), 1525-1533 (2011).</li><li>Turner, H. N., Patel, A. A., Cox, D. N., Galko, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injury-induced+cold+sensitization+in+Drosophila+larvae+involves+behavioral+shifts+that+require+the+TRP+channel+Brv1.">Injury-induced cold sensitization in Drosophila larvae involves behavioral shifts that require the TRP channel Brv1.</a> PloS One. 13 (12), 0209577 (2018).</li><li>Im, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tachykinin+acts+upstream+of+autocrine+Hedgehog+signaling+during+nociceptive+sensitization+in+Drosophila.">Tachykinin acts upstream of autocrine Hedgehog signaling during nociceptive sensitization in Drosophila.</a> eLife. 4, 10735 (2015).</li><li>Cervero, F., Merskey, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+is+a+noxious+stimulus.">What is a noxious stimulus.</a> Pain Forum. 5 (3), 157-161 (1996).</li><li>Chattopadhyay, A., Gilstrap, A. V., Galko, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+and+global+methods+of+assessing+thermal+nociception+in+Drosophila+larvae.">Local and global methods of assessing thermal nociception in Drosophila larvae.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (63), e3837 (2012).</li><li>Follansbee, T. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+nociceptive+sensitization+requires+BMP+signaling+via+the+canonical+SMAD+pathway.">Drosophila nociceptive sensitization requires BMP signaling via the canonical SMAD pathway.</a> Journal of Neuroscience. 37 (35), 8524-8533 (2017).</li><li>Im, S. H., Patel, A. A., Cox, D. N., Galko, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+insulin+receptor+regulates+the+persistence+of+injury-induced+nociceptive+sensitization.">Drosophila insulin receptor regulates the persistence of injury-induced nociceptive sensitization.</a> Disease Models &amp; Mechanisms. 11 (5), (2018).</li><li>Jo, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+caspase+activity+is+required+independently+of+apoptosis+to+produce+active+TNF/Eiger+during+nociceptive+sensitization.">Drosophila caspase activity is required independently of apoptosis to produce active TNF/Eiger during nociceptive sensitization.</a> Cell Death &amp; Disease. 8 (5), 2786 (2017).</li><li>Hwang, R. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nociceptive+neurons+protect+Drosophila+larvae+from+parasitoid+wasps.">Nociceptive neurons protect Drosophila larvae from parasitoid wasps.</a> Current Biology. 17 (24), 2105-2116 (2007).</li><li>Guo, Y., Wang, Y., Wang, Q., Wang, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+PPK26+in+Drosophila+larval+mechanical+nociception.">The role of PPK26 in Drosophila larval mechanical nociception.</a> Cell Reports. 9 (4), 1183-1190 (2014).</li><li>Takagi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Divergent+connectivity+of+homologous+command-like+neurons+mediates+segment-specific+touch+responses+in+Drosophila.">Divergent connectivity of homologous command-like neurons mediates segment-specific touch responses in Drosophila.</a> Neuron. 96 (6), 1373-1387 (2017).</li></ol>

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

हमने नितिनोल फिलामेंट्स से निर्मित अनुकूलित यांत्रिक जांच का उपयोग करके एक स्थापित यांत्रिकपरख1,2,16 को संशोधित किया। यह धातु अलॉय हमें छोटे व्यास फिलामेंट्स का उपयोग करने की अनुमति देता है जो ड्रोसोफिला लार्वा के आकार के लिए उपयुक्त हैं। मछली पकड़ने की रेखा पर आधारित मोनोफिलमेंट्स ने आज तक 2 ,5, 6,16तक फ्लाई मैकेनिकल एनओसी के क्षेत्र में दबदबा कायम किया है। हमारे नितिनोल फिलामेंट्स लगभग ~ 3-5 महीनों (हमारे अनुभव में) के लिए अपने आकार और मापा दबाव बनाए रखते हैं। नितिनोल फिलामेंट्स की लंबाई और व्यास को अलग करके, उपयोगकर्ता उपधार से लगभग पूर्ण रोलिंग प्रतिक्रिया तक फैले दबावों की एक विस्तृत श्रृंखला उत्पन्न कर सकता है। विशेष रूप से, उपधारित जांच करना छोटे व्यास नितिनोल फिलामेंट्स के साथ सरल है। इन जांचों का उपयोग करते हुए, हमने पाया कि दबाव, बल के बजाय, अधिक सुसंगत नोकिसेंसिव व्यवहार प्रतिक्रियाएं4प्रकाश में लाना । हम यहां एक अच्छी तरह से स्थापित यूवी-प्रेरित निषेध संवेदीकरण मॉडल7,10,13का उपयोग करके प्रदर्शित करते हैं कि ये तंतुओं यांत्रिक अतिसंवेदनशीलता-एलोडिनिया और हाइपरलेजेसिया का अध्ययन करने के लिए एक उपयोगी उपकरण भी हैं।
मछली पकड़ने की रेखा से निर्मित यांत्रिक जांचों का उपयोग करने वाले पिछले अध्ययनों से व्यवहार जवाबदेही 2 , 6 ,16,17में एक निश्चित परिवर्तनशीलता हुई है । इसके लिए कई कारक हो सकते हैं। सबसे पहले, क्योंकि दबाव महत्वपूर्ण चर है, फिलामेंट टिप की बफिंग ताकि यह गोल हो और किसी भी तेज किनारों नहीं है महत्वपूर्ण है। दूसरा, केवल बल के बजाय दबाव मूल्यों की रिपोर्टिंग प्रयोगों की पुन: उत्पन्न क्षमता के लिए महत्वपूर्ण है, क्योंकि समान ताकतों को उत्पन्न करने वाली विभिन्न यांत्रिक जांच असमान दबाव4प्राप्त कर सकती हैं। तीसरा, हानिकारक जांच का उपयोग करके प्रति लार्वा केवल एक यांत्रिक उत्तेजना लागू करना महत्वपूर्ण है, क्योंकि इस तरह की जांच एपिडर्मल4 और संवेदी न्यूरोनल स्तर(चित्रा 2E)पर खुराक-निर्भर ऊतक क्षति का उत्पादन करती है। ऊतक क्षति को प्रेरित करने के बाद एक दूसरा या बाद में हानिकारक यांत्रिक उत्तेजना, प्रभावित परिधीय संवेदी न्यूरॉन्स के कार्य को क़यास कर सकती है और एक परिवर्तित व्यवहार प्रतिक्रिया प्राप्त कर सकती है। एक अन्य अध्ययन में, लार्वा ने दो बार हानिकारक यांत्रिक जांच के साथ उत्तेजित किया, ज्यादातर एक बढ़ी हुई व्यवहार प्रतिक्रिया5प्रदर्शित की, जो एक तीव्र यांत्रिक संवेदीकरण (हाइपरएल्जेसिया) के विकास का सुझाव देता है, जो पहले हानिकारक यांत्रिक उत्तेजना द्वारा उत्तेजित ऊतक क्षति से परिणाम हो सकता है। इसके विपरीत, अन्य लेखकों6 एक मिश्रित (वृद्धि हुई है या कमी) व्यवहार प्रतिक्रिया की सूचना दी, यह दर्शाता है कि बदल व्यवहार प्रतिक्रिया नुकसान के कारण हो सकता है/ प्रत्येक लार्वा को उत्तेजित करने से केवल एक बार व्यवहार प्रतिक्रियाओं में संभावित विचरण समाप्त हो जाता है जिसके परिणामस्वरूप संवेदीकरण या ऊतक क्षति होती है। चौथा, हमने यांत्रिक रूप से सेगमेंट A8 को उत्तेजित किया, जो पिछले अध्ययनों (पसंदीदा क्षेत्रों A3-A4)2,5,16की तुलना में अधिकपीछेहै। खंड A2 या A8 पर लागू ~ 3,900 केपीए और 5,300 केपीए के बीच जांच में कोई व्यवहार संबंधी अंतर नहीं दिखा4. इसके अलावा, A2-A4 की तुलना में A8, यांत्रिक जांच के साथ उत्तेजित करना आसान है जो कम दबाव (<300 kPa) उत्पन्न करता है क्योंकि लार्वा इस क्षेत्र में पतला है और इस प्रकार अधिक आसानी से संकुचित होता है। अन्य अध्ययनों से पता चला है कि लार्वा के पीछे के छोर की हानिकारक यांत्रिक उत्तेजना (एक कठोर कीट पिन द्वारा वितरित, संदंश के साथ आयोजित) ज्यादातर एक अपरिवर्तनीय या रोलिंग प्रतिक्रिया18के बजाय आगे लोकोमोशन पैदा करती है। यह अलग व्यवहार प्रतिक्रिया उपयोग की गई सामग्रियों (बेंडेबल नितिनोल फिलामेंट बनाम असंपीड़ित कीट पिन) या लार्वा को वितरित विभिन्न दबावों के कारण हो सकती है (कीट पिन के दबाव मूल्य की रिपोर्ट नहीं की गई थी)।
ड्रोसोफिला लार्वा के लिए यांत्रिक नोक - प्रदान की परख के विकास ने क्षेत्र को यह पता लगाने में सक्षम बनाया है कि विभिन्न यांत्रिक संवेदी आयन चैनल और तंत्रिका सर्किट यांत्रिक नोक-्योमी 5 ,6,16,17में मध्यस्थता करते हैं । हालांकि, यांत्रिक अतिसंवेदनशीलता (एलोडिनिया और हाइपरलेजेसिया) का अध्ययन अन्य संवेदी तौर-अन्यतरीकों- गर्मी7,8,10, 13, 14,ठंड9औररासायनिक3के संवेदीकरण की तुलना में पिछड़ गया है। यह अंतराल उपयुक्त यांत्रिक जांच के अभाव के कारण हो सकता है जो सुपरट्रेसहोल्ड दबावों के लिए उपथरेहोल्ड में फैले एक पूर्ण प्रतिक्रिया रेंज उत्पन्न कर सकता है। विशेष महत्व के, विशेष रूप से यांत्रिक एलोडिनिया का आकलन करने के लिए, उपधारित जांच है जो अघायल लार्वा से एक प्रतिकूल रोलिंग प्रतिक्रिया प्राप्त नहीं करते हैं। हमारे बेहतर यांत्रिक जांच का महत्व यह है कि उन्हें अहानिकर उत्तेजनाओं (उपथरेसहोल्ड ~ 174 केपीए-200 केपीए) या कम से उच्च हानिकारक रेंज (~ 225 केपीए से ~ 5,116 केपीए) तक फैलाया जा सकता है। यहां, हम नितिनोल वॉन फ्रे जैसे फिलामेंट्स का उपयोग करके प्रदर्शित करते हैं कि ड्रोसोफिला लार्वा यूवी विकिरण के बाद यांत्रिक एलोडिनिया और मैकेनिकल हाइपरएल्जेसिया दोनों विकसित करते हैं। थर्मल संवेदीकरण की तुलना में यांत्रिक संवेदीकरण कुछ अंतर दिखाता है। यांत्रिक संवेदीकरण की शुरुआत और शिखर दोनों पहले (~ 4 एच) थर्मल (गर्मी) संवेदीकरण (हाइपरएल्जेसिया के लिए ~ 8 एच और एलोडिनिया के लिए ~ 24 घंटे) की तुलना में7है। इसके अलावा, मैकेनिकल एलोडिनिया और हाइपरएल्जेसिया सहवर्ती (दोनों पीक ~ 4 एच पर) हैं। इसके अलावा, जबकि गर्मी संवेदीकरण (एलोडिनिया और हाइपरलजेसिया) बाद के समय बिंदुओं पर पूरी तरह से हल करता है7,यांत्रिक अतिसंवेदनशीलता ने एक लंबी पूंछ का प्रदर्शन किया जो बेसलाइन से थोड़ा ऊपर रहा। ड्रोसोफिला में ठंड संवेदीकरण में ठंड-पैदा किए गए व्यवहार में एक स्विचशामिल है और नए ठंडे-पैदा किए गए व्यवहारों का उद्भव होता है- एक ऐसी घटना जो यांत्रिक उत्तेजना के साथ नहीं देखी जाती है। शुरुआत, अवधि और देखे गए व्यवहारों में ये अंतर बताते हैं कि प्रत्येक संवेदी मोडलिटी को विभिन्न सिग्नलिंग रास्तों द्वारा नियंत्रित किया जा सकता है। ड्रोसोफिला में उपलब्ध शक्तिशाली आनुवंशिक उपकरणों के साथ यहां वर्णित संवेदीकरण परख के संयोजन से यांत्रिक अतिसंवेदनशीलता (एलोडिनिया और हाइपरलेजेसिया) के सटीक आनुवंशिक विच्छेदन की अनुमति मिलनी चाहिए।

ड्रोसोफिला लार्वा विभिन्न हानिकारक उत्तेजनाओं के संपर्क में आने पर एक विशिष्ट अपरिवर्तनीय रोलिंग व्यवहार प्रदर्शित करता है: थर्मल1,मैकेनिकल2और रासायनिक3। यह व्यवहार सामान्य लोकोमोशन से स्पष्ट रूप से अलग है। यहां हम एक बेहतर यांत्रिक परख का वर्णन करते हैं जिसका उपयोग यांत्रिक एनओसी और यांत्रिक संवेदीकरण का आकलन करने के लिए किया जा सकता है।
हाल ही में एक अध्ययन में, हमने नितिनोलतारोंका उपयोग करके वॉन फ्रे-जैसे फिलामेंट्स को गढ़ा। विभिन्न ताकतों और दबावों को लागू करने वाले जांच प्रत्येक जांच बनाने वाले नितिनोल तारों की लंबाई और व्यास को अलग-अलग करके किए गए थे। यांत्रिक जांच को कैलिब्रेट किया गया था और प्रत्येक जांच4के टिप क्षेत्र के आधार पर मापा गया बल मूल्यों (मिलिनेटन, एमएन में) को दबाव (किलोपास्कल, केपीए) में परिवर्तित कर दिया गया था। यांत्रिक जांच के कस्टम निर्माण ने हमें सुपरट्रेसहोल्ड (225 केपीए से 5318 केपीए) दबावों के लिए उपधार (≤200 केपीए) उत्पन्न करने की अनुमति दी, जो सैद्धांतिक रूप से यांत्रिक अतिसंवेदनशीलता का अध्ययन करने के लिए फायदेमंद हो सकता है। इन बेहतर यांत्रिक वॉन Frey की तरह तंतुओं का उपयोग करके, हमने दिखाया कि दबाव4,जैसा कि पहले से जांचे गए बल2,5,6 ड्रोसोफिला लार्वा में अपरिवर्तनीय व्यवहार जवाबदेही के साथ अधिक लगातार संबंधित है। यहां वर्णित बेहतर यांत्रिक परख ने एक संरक्षित संवहनी एंडोथेलियल ग्रोथ फैक्टर (VEGF) से संबंधित रिसेप्टर टायरोसिन किनेज की पहचान करने में भी मदद की जो मक्खियों और चूहों में यांत्रिक नोक-ियत कोनियंत्रितकरता है ।
थर्मल (गर्मी और ठंड) और रासायनिक संवेदी तौर-तरीकों3,7,8,9,10की तुलना में ड्रोसोफिला लार्वा में यांत्रिक एलोडिनिया और हाइपरलजेसिया, अतिसंवेदनशीलता के दो तौर-तरीकों का अपेक्षाकृत कम अध्ययन किया जाता है। यह संभवतः विशिष्ट यांत्रिक जांच की कमी के कारण है जो अहानिकर उत्तेजनाओं से लेकर उच्च हानिकारक रेंज2,5,6तक है । एक सामान्य रूप से अहानिकर उत्तेजना जो ड्रोसोफिला लार्वा के बाद विशिष्ट अपरिवर्तनीय रोलिंग व्यवहार को प्रकाश में आती है ऊतक क्षति का अनुभव3,7 को एलोडिनिया के रूप में जाना जाता है। आम तौर पर हानिकारक उत्तेजना के प्रति अतिरंजित रोलिंग प्रतिक्रिया को हाइपरएल्जेसिया 7 के रूप में जानाजाताहै । हानिकारक उत्तेजनाओं को उन लोगों के रूप में परिभाषित किया जाता है जो ऊतक क्षति को प्रकाश में लेते हैं और11को सक्रिय कर सकते हैं । ड्रोसोफिला लार्वा को वितरित हानिकारक उत्तेजनाएं या तो बैरियर एपिडर्मिस, परिधीय नोसिप्टिव संवेदी न्यूरॉन्स3,4,7,या दोनों को नुकसान पहुंचाती हैं।
इस लेख में, हम यह प्रदर्शित करते हैं कि कैसे ड्रोसोफिला लार्वा के लिए उपयुक्त वॉन फ्रे-जैसे यांत्रिक जांच को कस्टम और कैलिब्रेट करें। इसके अलावा, हम दिखाते हैं कि ड्रोसोफिला लार्वा में यांत्रिक नोसिमेटिव प्रतिक्रियाओं को परखने के लिए इन जांचों का उपयोग कैसे किया जाए। अंत में, हम ड्रोसोफिला लार्वा (प्रतिनिधि परिणामदेखें) में ऊतक क्षति के बाद, एलोडिनिया और हाइपरलेजेसिया दोनों यांत्रिक अतिसंवेदनशीलता की उपस्थिति को प्रदर्शित करने के लिए उनका उपयोग करके इन जांचों की उपयोगिता को प्रदर्शित करते हैं।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Beaker</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-540C</td>
			<td>Beaker of 10 ml of capacity. Any similar container will do.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Black (Arkansas) bench stone</td>
			<td>Dan&#8217;s Whetstone</td>
			<td>SKU: I200306B24b-HQ-BAB-622-C</td>
			<td>Used to smoothe any irregularities of the nitinol wire tips. https://www.danswhetstone.com/product/special-extra-wide-black-bench-stone-6-x-2-1-2-x-1-2/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>FV1000</td>
			<td>Any equivalent confocal microscope will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coplin Jar</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-816</td>
			<td>https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-glass-staining-dishes-10-slides-screw-cap/08816#?keyword=08-816</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Diethyl ether</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>E138-500</td>
			<td>For anesthetizing larvae.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Etherization chamber</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>This is a homemade customized chamber. Please see details of its construction in our previous published paper12. The purpose of the etherization chamber is allow entry of diethyl ether fumes but prevent larval escape.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fiber Optic Light Guide</td>
			<td>Schott AG</td>
			<td>A08575</td>
			<td>Schott Dual Gooseneck 23 inch</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Fine Science Tool</td>
			<td>FS-1670</td>
			<td>For transferring larvae</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glue</td>
			<td>Aleene&#39;s</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Aleene&#39;s&#174; Wood Glue, formerly called (Aleene&#39;s All-Purpose Wood Glue) 
			https://www.aleenes.com/aleenes-wood-glue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graspable holder</td>
			<td>Loew Cornell</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Loew-Cornell Simply Art Wood Colored Craft Sticks, 500 pieces.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Halocarbon oil 700</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H8898-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hypodermic needle 30G 1/2&#34;L</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>NC1471286</td>
			<td>BD Precisionglide&#174; syringe needles, gauge 30, L 1/2 inches. Used to make a hole into the wooden holder for the nitinol wires</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Large Petridish</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>351007</td>
			<td>60 mm x 10 mm Polystyrene Petridish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope (Zeiss) Stemi 2000</td>
			<td>Carl Zeiss, Inc.</td>
			<td>NT55-605</td>
			<td>Any equivalent microscope will do</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Cover Glass 22x22</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>12-545-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Cover Glass 22x40</td>
			<td>Corning</td>
			<td>2980-224</td>
			<td>Tickness 1 1/2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Slides</td>
			<td>Globe Scientific Inc.</td>
			<td>1358Y</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini Diagonal Cutter</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S43981</td>
			<td>For cutting nitinol filaments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitinol filaments, Diameters: 0.004&#8221;, 0.006&#8221;, 0.008&#8221;</td>
			<td>Mailin Co</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Fifteen pieces of each diameter of 12&#8221; length were ordered. 
			https://malinco.com/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Piece of black vinyl</td>
			<td>Office Depot</td>
			<td>N/A</td>
			<td>We use a small piece of vinyl cut from a binder. Dark color provides contrast. A small piece allows orientation of the larva</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Petridish</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>351008</td>
			<td>35 mm x 10 mm Polystyrene Petridish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spatula</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>21-401-10</td>
			<td>Double-Ended Micro-Tapered Stainless Steel Spatula. Used to place the food in the petri dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wipes</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>06-666A</td>
			<td>Kimpes KMTECH, Science Brand. Used to dry larvae of excess moisture.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>W1118</td>
			<td>Bloomington Drosophila Stock Center</td>
			<td>3605</td>
			<td>Control strain for behavioral assays</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ppk-Gal4&#62;UAS-mCD8-GFP</td>
			<td>Bloomington Drosophila Stock Center</td>
			<td>8749</td>
			<td>Strain for fluorescent labeling of class IV md neurons</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an improved assay and tools for measuring mechanical nociception in drosophila larvae

ड्रोसोफिला में यांत्रिक एनओसी के लिए प्रकाशित परख ने व्यवहार के चर आकलन का नेतृत्व किया है। यहां, हमने ड्रोसोफिला लार्वा, अनुकूलित धातु निकल-टाइटेनियम मिश्र धातु (नितिनोल) फिलामेंट्स के साथ उपयोग के लिए गढ़े। ये यांत्रिक जांच यांत्रिक एनओसी को मापने के लिए कशेरुकी में उपयोग किए जाने वाले वॉन फ्रे फिलामेंट्स के समान हैं। यहां, हम प्रदर्शित करते हैं कि इन यांत्रिक जांचों को कैसे बनाया जाए और कैसे उपथरेसहोल्ड (अहानिकर या गैर-हानिकारक सीमा) से सुपरथ्रेसहोल्ड (कम से उच्च हानिकारक रेंज) उत्तेजनाओं तक पूर्ण व्यवहार खुराक-प्रतिक्रिया उत्पन्न की जाए। जांच की उपयोगिता प्रदर्शित करने के लिए, हमने ड्रोसोफिला लार्वा में ऊतक क्षति-प्रेरित अतिसंवेदनशीलता की जांच की। ड्रोसोफिला लार्वा में यांत्रिक एलोडि़यानिया (सामान्य रूप से अहानिकर यांत्रिक उत्तेजना के प्रति अतिसंवेदनशीलता) और हाइपरएल्जेसिया (एक हानिकारक यांत्रिक उत्तेजना के लिए अतिरंजित जवाबदेही) अभी तक स्थापित नहीं किया गया है। यांत्रिक जांच का उपयोग करना जो आम तौर पर अहानिकर या जांच करते हैं जो आमतौर पर एक अपरिवर्तनीय व्यवहार को प्रकाश में लेते हैं, हमने पाया कि ड्रोसोफिला लार्वा ऊतक क्षति के बाद यांत्रिक हाइपरसेंसिटाइजेशन (दोनों एलोडिनिया और हाइपरएल्जेसिया) विकसित करता है। इस प्रकार, यांत्रिक जांच और परख है कि हम यहां वर्णन की संभावना महत्वपूर्ण उपकरण के लिए मौलिक आणविक/यांत्रिक अतिसंवेदनशीलता के आनुवंशिक तंत्र विच्छेदन होगा ।

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An Improved Assay and Tools for Measuring Mechanical Nociception in Drosophila Larvae

इस प्रोटोकॉल का लक्ष्य यह दिखाना है कि ड्रोसोफिला लार्वा में यांत्रिक एनओसी के लिए बेहतर परख कैसे करें। हम यहां परख का उपयोग यह प्रदर्शित करने के लिए करते हैं कि ड्रोसोफिला लार्वा में यांत्रिक अतिसंवेदनशीलता (एलोडिनिया और हाइपरएल्जेसिया) मौजूद है।

ड्रोसोफिला लार्वा में यांत्रिक एनओसी को मापने के लिए एक बेहतर परख और उपकरण

Published assays for mechanical nociception in Drosophila have led to variable assessments of behavior. Here, we fabricated, for use with Drosophila ...

Research

JoVE Journal

Behavior

An Improved Assay and Tools for Measuring Mechanical Nociception in Drosophila Larvae

An Innovative Running Wheel-based Mechanism for Improved Rat Training Performance

बेहतर चूहा प्रशिक्षण प्रदर्शन के लिए एक अभिनव चल पहिया-आधारित तंत्र

This study presents an animal mobility system, equipped with a positioning running wheel (PRW), as a way to quantify the efficacy of an exercise activity ...

An Automated Rapid Iterative Negative Geotaxis Assay for Analyzing Adult Climbing Behavior in a Drosophila Model of Neurodegeneration

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एक स्वचालित रैपिड चलने नकारात्मक Geotaxis परख Neurodegeneration के एक Drosophila मॉडल में वयस्क चढ़ाई व्यवहार का विश्लेषण के लिए

Neurodegenerative diseases are frequently associated with a progressive loss of movement ability, reduced life span, and age-dependent neurodegeneration. ...

A Simple and Low-cost Assay for Measuring Ambulation in Mouse Models of Muscular Dystrophy

एक सरल और कम मांसपेशियों Dystrophy के माउस मॉडल में Ambulation को मापने के लिए लागत परख

Measuring functional outcomes in the treatment of muscular dystrophy is an essential aspect of preclinical testing. The assessment of voluntary ambulation ...

A Burrowing/Tunneling Assay for Detection of Hypoxia in Drosophila melanogaster Larvae

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Drosophila melanogaster लार्वा में हाइपोक्सिया का पता लगाने के लिए एक Burrowing/सुरंग परख

Oxygen deprivation in animals can result from exposure to low atmospheric oxygen levels or from internal tissue damage that interferes with oxygen ...

Measuring Active and Passive Tameness Separately in Mice

चूहों में सक्रिय और निष्क्रिय वश अलग से मापने

Domesticated animals such as dogs and laboratory mice show a high level of tameness, which is important for humans to handle them easily. Tameness has two ...

An Automated Method to Determine the Performance of Drosophila in Response to Temperature Changes in Space and Time

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अंतरिक्ष और समय में तापमान में परिवर्तन के जवाब में Drosophila के प्रदर्शन को निर्धारित करने के लिए एक स्वचालित विधि

Temperature is a ubiquitous environmental factor that affects how species distribute and behave. Different species of Drosophila fruit flies have specific ...

Continuous Noninvasive Measuring of Crayfish Cardiac and Behavioral Activities

बिठाते कार्डियक और व्यवहार गतिविधियों के सतत इनवेसिव मापने

A crayfish is a pivotal aquatic organism that serves both as a practical biological model for behavioral and physiological studies of invertebrates and as ...

Measuring the Functional Abilities of Children Aged 3-6 Years Old with Observational Methods and Computer Tools

अवलोकन विधियों और कंप्यूटर उपकरणों के साथ 3-6 वर्ष की आयु के बच्चों की कार्यात्मक क्षमताओं को मापना

The analysis of functional abilities and their development in early childhood (0-6 years old) are fundamental aspects among young children with certain ...

An Experimental Paradigm for Measuring the Effects of Ageing on Sentence Processing

वाक्य प्रसंस्करण पर उम्र बढ़ने के प्रभाव को मापने के लिए एक प्रायोगिक पैराडिग्म

Previous studies have found that older adults have greater difficulties in processing syntactically complex sentences than younger adults. However, the ...

High-Throughput Method for Measuring Alcohol Sedation Time of Individual Drosophila melanogaster

High-Throughput Method for Measuring Alcohol Sedation Time of Individual Drosophila melanogaster

व्यक्तिगत ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर के अल्कोहल सेडक्शन समय को मापने के लिए उच्च-थ्रूपुट विधि

Drosophila melanogaster provides an excellent model to study the genetic underpinnings of alcohol sensitivity. In contrast to studies in human ...