Name: direct drug delivery to kidney via the renal artery
Uploaded: 2021-04-17T15:00:00
Duration: 11 min 18 s
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RRSSC의 르네 레미(René Remie)에게 특별한 디자인의 카테터를 제작하는 데 있어 기술을 정교하게 조정하고 Instech 연구소를 개발해 주었습니다. 또한 AstraZeneca R&D의 모든 동료들에게 팁과 트릭뿐만 아니라 사운드로 비디오를 완료하기위한 Xerox와 생산적인 토론을한 것에 대해 큰 감사를 드립니다.

실험 절차는 스웨덴 예테보리의 지역 실험실 동물 윤리 위원회에 의해 승인되었습니다.
1. 수술 전 치료
<ol><li>감염을 피하기 위해 멸균 기술을 사용합니다.<ol>
<li>마취(예: 이소플루란)에서 가능한 가장 무균적인 방식으로 작업하여 수술 부위를 면도하고 제모 크림으로 털을 제거합니다. 크림을 약 1분(피부 화상을 피하기 위해 최대 2분)을 둡니다. 물로 조심스럽게 씻으시다. 이 첫 번째 단계는 바람직하게는 수술 직전에 동물의 추가 냉각을 피하기 위해 수술 1-2 일 전에 수행 할 수 있습니다.</li>
		<li>건조를 방지하기 위해 눈에 안과 윤활유를 바르십시오.</li>
		<li>감염을 피하기 위해 수술 부위를 방부제 피부 클렌저로 씻고 수술 직전에 소독제 (클로르헤시딘)로 부위를 닦아냅니다.</li>
	</ol>
</li>
	<li>무 통<ol>
<li>말단 절차가 아닌 경우 진통제로 동물을 사전 투여하십시오: Buprenorphine (예를 들어, 템게식) 0.05-0.1 mg/kg s.c.)</li>
	</ol>
</li>
	<li>항응고제<ol>
<li>혈전을 피하기 위해 항응고제를 사용하십시오: 수술 직전 꼬리 정맥을 통해 헤파린의 10 IU (최대 5 mL/kg).</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. 외과 적 절차
<ol><li>악기를 자동 복제하고 멸균 카테터를 사용합니다. 비누와 히비스크스크로 긴급하게 씻고 얼굴 마스크, 헤어넷, 멸균 수술 가운과 장갑을 착용하십시오. 두 번째 사람이 동물과 모든 "더러운"작업을 처리해야합니다.</li>
	<li>마취의 경우 이소플루란을 사용하십시오. 5% 이소플루란으로 마취 상자에 마우스를 배치하여 마취를 유도합니다. 유도 후 반사 신경과 호흡을 확인하여 마취의 깊이를 확인하십시오.<ol>
<li>수술 중, 마우스에 얼굴 마스크를 배치 2% 이소플루란의 유지 보수 복용량을 제공.</li>
	</ol></li>
	<li>수술 대에 넣기 전에 히비스크와 클로레식시딘으로 동물을 씻으시다.</li>
	<li>마취 후, 마우스를 가열 수술 패드에 놓아 수핀 위치에 놓고 저압 접착 테이프를 사용하여 상반신과 하반신을 패드에 고정시하십시오. 상부 사지가 폐 압축을 방지하기 위해 정상 위치에서 유지되도록 하십시오. 가능하면 전기가 아닌 열원을 사용하십시오. 참고: 우리는 흡입 마취 (예 : 이소플루란)를 사용하여 수술 중에 쉽게 조정할 수 있습니다.</li>
	<li>플라스틱 랩(예: Press'n Seal)으로 마우스를 드레이프하고 수술 현미경으로 작업을 수행합니다.</li>
	<li>수술 부위에 식염수를 지속적으로 추가하여 건조로부터 조직을 보호하십시오. 이것은 또한 조직을 탄성 유지하는 것을 돕고 수술을 수행하는 동안 손상의 위험을 최소화합니다. 식염수는 동물의 냉각을 피하기 위해 약 37 °C여야합니다.</li>
	<li>집게와 가위를 가진 중간선 절개로 복강을 여은 후에, 습한, 접힌, 수술 부위를 통해 좋은 전망을 얻기 위하여 옆으로 다른 모든 기관을 밀어 압축을 사용합니다.</li>
	<li>리트랙터를 사용하여 수술 영역 (5mm 무딘 후크)에 대한 좋은 개요를 갖습니다.</li>
	<li>대자와 왼쪽 신장을 국소화합니다.</li>
	<li>두 개의 미세 수술 집게를 사용하여, 부드럽게 대동맥을 청소, 둘 다 cranially (참조 2.10.1) 및 caudally (참조 2.10.2 참조) 신장에서, 주변 조직에서 그 아래에 합자를 배치 (6-0 실크). 구조물을 꼬집지 않도록 주의하십시오. 조직을 부드럽게 스트레칭하고 당겨 서 가능한 한 신장 동맥에 가까워지십시오. 혈관 주변에는 쉽게 발견되지 않는 여러 신경이 있습니다. 손상된 신경이 수술 후 마비 또는 기타 문제를 일으킬 수 있기 때문에 이 점을 염두에 두십시오.<ol>
<li>신장을 cranially (위) 신장, 주사를 수행하는 동안 순간적으로 혈류를 폐색대 대자를 들어 올리기 위해이 합자를 사용합니다. 이 위치에서, 신장 동맥, 반대 방향으로 대동맥 가지 (창자에, 그림 1참조). 이런 식으로 주입을 밀어 방지 하기 위해, 이 분기 아래 합자를 넣어. 주사 절차를 시작할 때까지 긴장없이 합자를 둡니다.</li>
		<li>Caudally (아래) 신장, 다른 잠재적인 분기를 피하기 위해 신장/신장 동맥에 대동맥 분기 가까이 절개를 배치. 신장에서 caudally 대어는 복부 정맥에 매우 가깝습니다. 정맥을 손상시키지 않도록 주의하십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>주사<ol>
<li>모든 합자가 제자리에 있을 때; 먼저 주입된 액을 신장으로 유도하기 위해 혈류를 가리키기 위해 상부 합자 하부 및 둘째를 스트레칭한다.</li>
		<li>침술 바늘(Ø 0.25 mm)을 사용하여, 카테터(32GA)의 (둥근) 끝을 대오르타로 안내하고 주사 중에 이동하거나 누출되지 않도록 합자에 단일 매듭으로 고정합니다. (그림1). 가위 대신 침술 바늘을 사용하면 용기에 최소한의 엔트리 구멍을 만들 수 있습니다.</li>
		<li>50 μL의 유체를 주입합니다. 신장은 창백하게 바뀌어야 하며, 이는 주사가 신장을 perfused하고 운명적인 장소에서 끝났음을 나타냅니다.</li>
		<li>이 시점에서 가능한 두 가지 시나리오가 있습니다.<ol>
<li>입구 구멍을 닫기 전에 상부 합자의 긴장을 조심스럽게 풀어 신장에 다시 혈액 순환을 주십시오. 이 방법으로 허혈은 개량하지만 주입 된 유체는 잠재적으로 신장 정맥을 통해 신속하게 지울 수 있으므로 충분한 거주 시간을 허용하지 않을 수 있음을 유의하십시오.</li>
			<li>또는 혈액 흐름을 다시 주지 않고 수술을 진행합니다.</li>
		</ol>
</li>
		<li>상부 합자를 다시 조인 한 후, 카테터를 철회하고 대자를 봉합하고 전체 순환을 돌려줍니다.<ol>
<li>카테터를 들고 있는 합자를 제거합니다.</li>
			<li>카테터를 철회하십시오.</li>
			<li>단일 스티치 (에틸론 11-0, 둥근 바늘)로 엔트리 홀을 봉합합니다.</li>
			<li>먼저 하부 합자를 느슨하게 한 다음 매우 천천히 상부를 느슨하게합니다. 누출이 있으면 합자를 다시 조여몇 초 동안 기다렸다가 다시 시도하십시오. 허혈성 손상을 피하기 위해 총 허혈 시간을 최대 5-10분까지 유지하십시오.</li>
			<li>지역을 밀어 내고 맥동을 찾아서 견고성을 테스트하고 신장이 "정상적인 착색"으로 돌아와 재순환이 확립된다는 것을 확신시키는 것을 확인하십시오.</li>
			<li>스레드를 잘라 대오르타 아래 합자를 제거합니다.</li>
			<li>압축을 제거하고 내장을 제자리에 다시 밀어 넣습니다. 복강에 식염수를 추가하고 복막 (Vicryl 6-0)을 봉합하여 금속 클립으로 피부를 닫습니다.</li>
			<li>깨어나기 전에 동물은 0.7-1 mL의 리하이드렉스가 피하된다. 참고: 전체 절차는 잘 훈련된 긴급한 경우 약 30-45분이 소요됩니다.</li>
		</ol>
</li>
	</ol></li>
</ol>3. 수술 후 치료
<ol><li>동물은 수술 후 2-3 일 동안 케이지의 일부 아래에 가열 패드 (약 38 °C)를 배치하여 따뜻한 환경에서 깨어 날 수 있도록합니다.</li>
	<li>항성게증(예를 들어, temgesic 0.05-0.1 mg/kg s.c.) 수술 후 3일 동안/일 2-3회 제공.</li>
	<li>10mL/kg의 Rehydrex s.c.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Porvasnik, S. L., Mah, C., Polyak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+Murine+Small+Bowel+and+Colon+Through+Selective+Superior+Mesenteric+Artery+Injection.">Targeting Murine Small Bowel and Colon Through Selective Superior Mesenteric Artery Injection.</a> Microsurgery. 30 (6), 487-493 (2010).</li><li>Rocca, C. J., Ur, S. N., Harrison, F., Cherqui, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=rAAV9+combined+with+renal+vein+injection+is+optimal+for+kidney-targeted+gene+delivery:+conclusion+of+a+comparative+study.">rAAV9 combined with renal vein injection is optimal for kidney-targeted gene delivery: conclusion of a comparative study.</a> Gene Therapy. 21 (6), 618-628 (2014).</li><li>Cai, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maximum+efficacy+of+mesenchymal+stem+cells+in+rat+model+of+renal+ischemia-reperfusion+injury:+renal+artery+administration+with+optimal+numbers.">Maximum efficacy of mesenchymal stem cells in rat model of renal ischemia-reperfusion injury: renal artery administration with optimal numbers.</a> PLoS One. 9 (3), 92347 (2014).</li><li>Leda, A. R., Dygert, L., Bertrand, L., Toborek, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Microsurgery+Infusion+Technique+for+Targeted+Substance+Delivery+into+the+CNS+via+the+Internal+Carotid+Artery.">Mouse Microsurgery Infusion Technique for Targeted Substance Delivery into the CNS via the Internal Carotid Artery.</a> Journal of Visualized Experiments. (119), e54804 (2017).</li><li>Monteiro Carvalho Mori da Cunha, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Surgical+Technique+for+Homogenous+Renal+Distribution+of+Substances+in+Rats.">A Surgical Technique for Homogenous Renal Distribution of Substances in Rats.</a> European Surgical Research. 51, 58-65 (2013).</li><li>De Jong, W. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Particle+size-dependent+organ+distribution+of+gold+nanoparticles+after+intravenous+administration.">Particle size-dependent organ distribution of gold nanoparticles after intravenous administration.</a> Biomaterials. 29 (12), 1912-1919 (2008).</li><li>Ullah, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Approach+to+Deliver+Therapeutic+Extracellular+Vesicles+Directly+into+the+Mouse+Kidney+via+Its+Arterial+Blood+Supply.">A Novel Approach to Deliver Therapeutic Extracellular Vesicles Directly into the Mouse Kidney via Its Arterial Blood Supply.</a> Cells. 9 (4), 937 (2020).</li></ol>

저자는 공개 할 것이 없습니다.

이 방법은 신장 손상을 일으키지 않고 신장에 제형을 전달하는 데 성공했습니다. 그것은 모든 종류의 제형 (예를 들어, 작은 분자, 줄기 /전구 세포, 또는 마이크로베실)의 전달을 위해 사용될 수 있다. 이 방법은 건강한 동물이나 신장 질환 모델에 적용될 수 있다.
도 2 및 도 3에서,히스토로지가 제시된다. 도 2는 관류 후 180분, 도 3은 주입 후 7일 의 역사를 나타낸다. 그 이유는 신장 동맥실험이 180분밖에 걸리지 않았다는 것입니다. 이 새로운 방법으로 만성 손상이 없었음을 확인하기 위해, 우리는 의도적으로 7 일을 기다렸다. n-번호는 작지만 이것은 단지 예일 뿐입니다.
신장을 표적으로 하는 대르타 투여의 이 새로 개발된 방법은 상대적으로 낮은 처리량을 가진 침습적인 방법이며 단 하나 투약 전략에만 적합합니다. 이 방법으로반복 된 도징은 불가능합니다.
합자 배치의 사소한 조정으로이 방법은 아마도 두 신장을 동시적으로 주입하는 데 사용할 수있습니다 5,7. 대동맥 분지를 통해 유출위험이 증가함에 따라 우리는 폐색 합자를 가능한 한 신장에 가깝게 유지하여 왼쪽 신장에만 주사를 맡기기로 결정했습니다. 또한 유닌절제술이나 심지어 동시 신장 허혈 재관류 손상(IRI)과 같은 다른 모델이나 기술 이외에 사용할 수 있습니다. 우리의 의견으로는, IRI3 수술 후 24 시간 만 주사를하는 것은 너무 가혹하고 동물의 회복에 실질적으로 영향을 미칠 것입니다.
마우스의 새로운 긴장을 사용하는 경우, 방법은 어떤 식으로든 조정할 필요가 없도록 항상 그 변형에서 일부 동물에 파일럿 실험을 수행해야합니다. 예를 들어, 일부 균주에서 대어타로부터의 선박 분진은 약간 다른 위치에 배치될 수 있다. 합자의 위치는 제형이 올바른 위치에서 끝나도록 다소 변경될 수 있다.
탈수 복강을 여는 것은 탈수에 대한 큰 위험을 제기. 따라서 수술 후 회복에 좋은 기초를 보장하기 위해 수술 중 및 수술 후 유체 (약 37 °C)를 추가하는 것이 필수적입니다. 우리는 일반적으로 1 mL / 마우스 s.c. 수술 후.
허 혈 장기간 수술 시간 또는 전체 재순환에 도달하지 못하면 허혈이 발생할 수 있습니다. 실제 허혈 시간을 기록하고 신장 (및 허리 다리)에 혈액 순환이 복원되었는지 확인하는 것이 중요합니다. 끊임없는 훈련과 기술의 상쾌한 것은 언제나 처럼 중요합니다. 절차를 더 빨리 수행하면 신장이 허혈에 노출되는 시간을 줄일 수 있습니다. 허혈 시간(대어타의 결찰)을 약 5분(최대 10분)으로 유지하는 것은 신장에 해를 끼치지 않는 것으로 나타났다.
유출 주입된 제형이 신장 정맥을 통해 순환을 재입력할 때 다른 장기로 의 유출의 위험을 고려할 때, 주입된 부피는 최소한으로 유지되어야 한다. 우리는 50 μL의 최대 볼륨을 권장합니다. 투여량은 또한 다른 사람에 의해, 효율성 에 대한 중요한 요인이 될 발견되었습니다3.
부작용 (혈전증 및 마비) 처음에 모델을 설정할 때 우리는 뒷다리의 마비에 대한 일관되지 않은 문제를 경험했습니다. 항응고제(10IU 의 꼬리 정맥)의 관련 투여 후 수술 전, 이러한 부작용은 현저히 감소하였다. 현장에서 전문가와 상의한 후, 우리는 또한 어떤 조직에꼬집어들고 가능한 한 작은 부위를 만지지 않는다는 것을 의미하는 외상 수술로 일하는 데 더욱 신중하기 시작했습니다. 함께 취한 이 행동은 마비의 주파수를 약 50%에서 사실상 없음으로 감소했습니다.
처음에 방법 개발 중, 우리는 절개 구멍을 닫기 위해 신장 동맥에 항응고조직을 적용했습니다. 이것은 대어타에 주사를 할 때 압력이 대어타에서 훨씬 더 높기 때문에 가능하지 않았습니다. 항응고제는 또한 혈관 루멘에 들어가면 혈전증의 위험을 증가시킵니다.
모험이 매우 혈전성이기 때문에 봉합 할 때 대자의 루멘에 노출 된 모험이없는지 확인하십시오. 또한 허벅지에 봉합하여 반전 상처 모서리또는 대어타를 좁히는 것을 피하십시오.
우리는 지금 신장에 직접 제형을 전달하기 위한 확립된 방법이 있습니다.

제약 산업 내의 전임상 연구 분야에서 모델 및 방법 개발은 일상 업무의 일부입니다. 특정 장기에 약물을 직접 하는 능력에 대 한 증가 관심이 있다, 또는 장기의 심지어 별도 구획, 주요 유출/함정 없이, 혈 류를 통해, 다른 조직으로. 이는 다른 질병 부위의 모델에서 약물 표적의 효율적인 평가를 위한 증가 및 특이적 노출을 가능하게 하기 위해 1,2,3,4.
물질을 전달하는 일반적인 방법은 이 원고에 기술된 방법보다 덜 침습적이기 때문에 전신 경로(예를 들어, 꼬리 정맥을 통해)에 의한 것입니다. 그러나, 전신 투여는 폐, 간 및 비장 2,3,5와같은 여과 기관을 통과할 때 의도된 표적 기관보다 다른 조직에서 화합물의 신진 대사 또는 축적위험이 증가한다. 운명적인 조직에 도달하지 않는 것 외에도, 이것은 잠재적으로 주입의 특성에 따라 불리한 및 /또는 원치 않는 효과를 초래할 수 있습니다. 아주 작은 분자만이 여과 기관의 모세혈관을 통과하고 그러므로 표적으로 한 납품은 더 큰 분자 6와함께 일하는 경우에 특히 중요합니다.
주입된 제제의 유출 및/또는 축적을 최소화하기 위해, 본 명세서에서, 본명 술의 방법은 복동맥에 삽입된 카테터를 통해 신장 동맥 혈류로 제형을 지시하여 신장 동맥으로 분기하여 신장동맥에 처음 도달한 신장을 초래한다. 이 유도 투여의 또 다른 장점은 전신 투여 3을통해 달성된 것과 동일한 노출 수준에 도달하기 위해 더 낮은 용량/부피를 사용할 수 있다는 것이다.
투여의 다른 경로는 탐구되었습니다, 예를 들어, 신장 동맥으로 직접 카테터를 통해 주사. 우리의 손에, 이것은 신장에 순환을 복원 하는 실패의 높은 위험을 제시 하기 위해 발견 되었다. 신장 동맥의 매우 작은 직경 (직경약 0.35-0.55 mm)은 절개를 상대적으로 크게 만들고 입구 구멍을 닫을 때 방해 및 / 또는 색전증의 위험을 제기합니다. 신장에 대한 허혈성 관련 손상에 따라 종종 이 방법을 사용할 때 발생하였고, 따라서 신장을 표적으로 하기 위해 더 큰 대어타의 절개를 통해 물질을 주입하여 신장을 성공적으로 표적으로 하는 새로운 방법을 개발했습니다.
또한 신장 동맥에 직접 주사로 작동하는 협착 /혈전증의 도전 그리고 리스크를 명시하는 쥐에서 개발되고 있는 유사한 기술이 있습니다 5. 이것은 마우스에 있는 혈관이 더 작기 때문에 우리의 사실 인정을 지원합니다.
이 원고와 비디오는, 구체적으로, 주사가 부관 대동맥에 삽입 된 카테터를 통해 마우스의 신장 동맥으로 지시 될 수있는 방법을 설명하고, 절차의 일반적인 어려움을 극복하는 방법에 대한 지침뿐만 아니라, 가능한 가장 안전한 방법으로 작동하고 따라서 재현성을 증가.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Blunt hook 5mm 8/pack</td>
			<td>Cooper surgical</td>
			<td>3316-8G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ETHILON Nylon Suture 11/0</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>W2881</td>
			<td>For vessel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgery forceps curved</td>
			<td>Karo Pharma</td>
			<td>FRC-15 RM-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microsurgery forceps straight</td>
			<td>Karo Pharma</td>
			<td>FRS-15 RM-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse renal artery cannula, 3mm 32ga stainless steel, 10cm 2Fr PU, fits 25ga</td>
			<td>Instech</td>
			<td>C07SS-MRA1813</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vicryl, 6-0, BV-1 needle</td>
			<td>Angthos</td>
			<td>W9575</td>
			<td>For abdominal cavity</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

direct drug delivery to kidney via the renal artery

신장 연구 분야에서 약물 표적의 효율적인 평가를 위해 증가 되고 특정 신장 노출을 가능하게 하기 위하여 지시된 주사를 위한 필요가 있습니다. 특정 장기에 약물의 축적 불리 하 고 원치 않는 효과 발생할 수 있습니다., 주사의 특성에 따라. 본 명세서의 유출 및/또는 축적을 최소화하기 위해, 본 명세서의 방법은 신장 동맥에 카테터를 삽입하여 신장 동맥 혈류로 제형을 지시하고, 신장 동맥으로 분기하는 바로 아래, 신장 동맥 전체에 걸쳐 제제를 배포하는 것으로.
이 원고는 방법에 대한 자세한 설명뿐만 아니라 도전과 어려움을 제공합니다. 그것은 멸균 조건 하에서 정확도를 요구하는 미세 수술의 이 모형으로 숙련되기 위하여 실험자가 지도합니다. 속도는 허혈을 최소화 하 고 절차를 연습 불리 한 효과 없이 성공적인 주사의 기회를 증가 시킬 것 이다 에 대 한 중요 한. 주입및 재퍼퓨전 과 주입된 부피 사이의 시간을 조절함으로써 다른 장기로유출될 위험이 완화됩니다. 
이 기술은 단일 투자 전략에 적합합니다.

이 영화는 최고의 비디오 품질로 사람을 제시하는 다른 수술에서 비디오의 혼합이다. 일부 시퀀스는 마우스가 깨어나지 않아야하는 연습 세션에서 촬영되었습니다. 따라서 마우스가 항상 제대로 드레이프되는 것은 아닙니다. 동물이 깨어나야 할 때, 우리는 항상 무균 방식으로 일합니다.
조직학적 분석은 신장 동맥에 직접 주사를 수행하면 신장 손상을 초래한 것으로 나타났습니다, 그 결과로 돌이킬 수없는 허혈과 혈액 흐름의 불충분 한 재순환으로 인해 가능성이(그림 2). 반면 복부 대어를 통한 주사는 허혈성 상해를 일으키지않았다(도 3).
에반스 블루 염료는 대마를 통해 관류가 신장이 첫 번째 도달 기관(도 4)인귀착될 것이라는 점을 시각화하는 데 사용되었다. 다른 장기는 신장 정맥을 통해 통과 될 때까지 파란색으로 설정되지 않았습니다.
우리는 또한 이 방법을 사용하여 중간엽 줄기 세포를 사용하여 인폰드 신장에 주입된 제형의 이식을 증가시킬 수 있음을보여주었다(도 5).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61932/61932fig01.jpg"> 그림 1: 봉합사 및 카테터의 배치. 이 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61932/61932fig01large.jpg" target="_blank">그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
상단 사진: 왼쪽 신장의 두개골, 첫 번째 합자를 배치 할 위치를 설명. 중간 그림: 카테터 배치 직전 수술 영역에 대한 개요(프로토콜 2.11). 하단 사진: 주사 직전 수술 영역에 대한 개요(프로토콜 2.10)
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61932/61932fig02.jpg"> 그림 2: 신장 동맥에 직접 주사. 신장 동맥에 직접 NaCl을 주입하는 연구에서 IHC의 설계 및 IHC의 결과에서 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61932/61932fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61932/61932fig03.jpg"> 그림 3: 대마 투여 후 7일째IHC 결과. IHC는 복부 대동맥을 통해 신장 동맥에 NaCl을 주입한 연구에서 결과, 주사 후 7일 후에 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61932/61932fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61932/61932fig04.jpg"> 그림 4: 에반스 블루 염료의 주입. 에반스 블루 염료의 대어를 통해 주입의 직렬 보기를 보여주는 상단 사진. 에반스 블루 염료의 대동맥을 통해 주사 후 신장의 단면을 보여주는 하단 사진. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61932/61932fig04large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61932/61932fig05.jpg"> 그림 5: 복부 동맥 주입은 오른쪽 신장에 비해 왼쪽 신장에 있는 중간엽 줄기 세포의 이식을 현저하게 증가시다. 인간 골수 유래 중간엽 줄기 세포는 현탁액에서 CM-딜(적색 형광)으로 표지되었다. 100만 개의 레이블이 붙은 MSC가 3마리의 마우스에 있는 복부 동맥을 통해 주입되었습니다. MSD 주입 후 3시간 후, 마우스는 종료되었다. 왼쪽과 오른쪽 신장은 수확하고 냉동 절전을 위해 OCT에 내장되었다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61932/61932fig05large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

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Direct Drug Delivery to Kidney via the Renal Artery

이 원고는 마우스의 frarearenal 복부 대어타에 배치 된 카테터를 통해 단일 신장에 표적 전달방법을 설명합니다.

신장 동맥을 통해 신장에 직접 약물 전달

There is a need for directed injections to enable increased and specific renal exposure for efficient evaluation of drug targets in the renal research ...

신장동맥을 통해 신장에 직접 약물 전달. 신장 연구 분야에서는 약물 표적의 효율적인 평가를 위해 증가되고 구체적인 신장 노출을 가능하게 하기 위해 지시된 주사에 대한 필요성이 있습니다. 내 이름은 에리카 달퀴스트이며이 비디오로 내 목표는 신장 동맥에 직접 주사를 수행하는 방법에, 내 경험을 공유하는 것입니다.나는 지금 당신에게 제시 할 것이다, 주사를 수행하는 방법, 대마를 통해 신장에 직접. 우선, 나는 항상 마우스를 주고 말할 수 있습니다,물론, 수술 전. 복강을 열후, 나는 습한 접힌 압축에 넣어, 옆으로 다른 모든 장기를 밀어, 그래서 나는 수술 영역을 통해 좋은 전망을 얻을 수 있도록.지속적으로 조직을 촉촉하게 유지하려고, 수술 상처에 식염수추가하여, 건조에서 조직을 보호하기 위해. 이것은 또한 조직을 탄성 유지하는 데 도움이, 손상을 최소화, 수술을 수행하는 동안. 리트랙터를 사용하여 수술 부위에 대한 좋은 개요를 갖습니다.이 두 사진은 동일합니다. 오른쪽 그림에서, 나는 구조를 그리려고 노력했다. 분홍색 영역은 대오르타입니다.먼저 왼쪽 신장에서 합자 두개골을 넣을 것입니다. 이것으로, 나는 나중에 일시적으로 대어타를 들어 올릴 것입니다, 주사를하는 동안 혈류를 폐색. 보시다시피 대르타에서 나온 가지가 그림의 리프트로 이동합니다.이런 식으로 우리의 주사를 밀어 피하기 위해, 나는 그 아래에 합자를 넣어해야합니다. 이것은 작업할 수 있는 매우 좁은 영역을 남깁니다. 두 개의 집게로 주변 조직에서 대어타를 청소하기 시작합니다.어떤 구조물도 꼬집어서 조직을 부드럽게 스트레칭하고 풀링하여 작업하십시오. 혈관 주변에는 발견하기 쉽지 않은 신경이 많이 있습니다. 그냥 마음에 이것을 유지, 신경을 다치게 마비 또는 다른 문제를 일으킬 수 있기 때문에, 수술 후.앞에서 언급했듯이, 나는 지속적으로 식염수, 건조에서 조직을 보호하기 위해 노력했다. 이제 대오르타 아래에 첫 번째 합자를 배치합니다. 합자 자리가 있을 때, 나는 다음 단계로 계속하면서 거기에 맡길 것이다.그리고 물론, 조직에 촉촉한 계속. 나는 지금 카메라를 움직였고, 당신이 보는 것은 신장에서 코델입니다. 유체를 추가 한 후, 나는 이전과 같은 방식으로 대어타를 청소하기 위해 내 길을 해부하기 시작합니다.대자는 복부 정맥에 매우 가깝습니다. 그리고 당신은 정맥을 깰하지 않도록 매우 조심해야합니다. 신장에 가까운 작업하려고, 신장 동맥에 가능한 한 짧은 거리를 가지고.이 지역에 더 많은 공간을 만들려면 봉합사를 제자리에 놓고 약간 위아래로 부드럽게 이동할 수 있습니다. 이번에는 대오르타 주위에 또 다른 합자를 넣고 느슨한 매듭을 만들 것입니다. 이것은 내가 보호하고 대문을 닫는 데 사용할 것입니다, 카테터 주위에, 주입하기 전에.모든 합자가 제자리에있을 때, 그것은 실제 주입을위한 시간이다. 하부 합자 다음 상부 합자를 스트레칭하여 혈류를 막고 주입된 액을 신장에만 지시합니다. 침술 바늘의 도움으로 카테터의 둥근 끝을 대마로 안내하고 합자에 하나의 매듭으로 고정합니다.이렇게 하면 주입 중에 이동하거나 누출됩니다. 나는 지금 액체의 50 마이크로 리터를 주입하고, 당신은 신장이 창백하게 변하는 방법을 명확하게 볼 수 있습니다. 주입 후, 당신은 신장에 다시 일부 순환을 줄 선택할 수 있습니다., 곧, 상부 합자에서 긴장을 느슨하게.나는이 설정에서처럼. 또는 혈액 흐름을 다시 주지 않고 수술을 계속할 수 있습니다. 혈액 흐름을 다시 제공 하면, 당신은 조금 허혈을 개량.동시에, 당신이 주입 무엇이든, 신장 정맥을 통해 일찍 헹구것입니다. 그리고 여기서 는 합자를 풀때 혈액이 신장으로 다시 들어오는 것을 봅습니다. 상부 합자를 다시 조인 한 후, 카테터를 철회하고 대어타를 봉합하고 다시 순환을 풀수 있게 할 때입니다.나는 봉합사를 제거하고 카테터를 들고 시작합니다. 그리고 나는 카테터를 철회. 하나의 스티치로 엔트리 홀을 봉합합니다.구멍을 봉합 한 후 먼저 하부 합자를 느슨하게 한 다음 매우 천천히 상부 를 느슨하게합니다. 누출이 있는 경우 합자를 다시 조이고 몇 초 동안 기다렸다가 다시 시도할 수 있습니다. 봉합사가 제자리에 있으면 일반적으로 중지됩니다.신앙도 마찬가지입니다. 나는 항상 강도를 테스트하려고, 지역을 밀어하여, 맥동을 찾아, 혈류가 정상으로 돌아갈 것을 확보하기 위해. 모든 것이 좋을 때 스레드를 잘라 내고 합자를 빼앗을 수 있습니다.압축을 제거하고 창자를 제자리에 부드럽게 밀어 넣습니다. 금속 클립으로 피부를 닫기 전에 약간의 체액을 돌려주고 복강을 꿰매습니다. 이 연구에서 표시 된 MSCs왼쪽 신장 동맥에 주입 되었다.그것은 명확하게 오른쪽 신장에 비해 왼쪽 신장에서 세포의 현저하게 증가한 이식을 보여줍니다. 요컨대, 신장 손상 없이 신장에 직접 제형을 전달하는 확립된 방법이 있다고 결론을 내릴 수 있습니다. 이 방법은 임의의 종류의 제형에 사용할 수 있으며, 전신 투여에 비해 신장 노출수준이 동일한 수준에 도달하기 위해 소량 또는 투여량을 요구하는 장점이 있다.

Research

JoVE Journal

Medicine

Heterotopic Mucosal Engrafting Procedure for Direct Drug Delivery to the Brain in Mice

쥐의 뇌에 직접 약물 전달 이소성 점막 Engrafting 절차

Delivery of therapeutics into the brain is impeded by the presence of the blood-brain barrier (BBB) which restricts the passage of polar and high ...

연구

의학

Murine Model of Femoral Artery Wire Injury with Implantation of a Perivascular Drug Delivery Patch

혈관 주위 약물 전달 패치의 주입과 대퇴 동맥 와이어 부상의 쥐 모델

Percutaneous interventions including balloon angioplasty and stenting have been used to restore blood flow in vessels with occlusive vascular disease. ...

Murine Kidney Transplant Technique

쥐 신장 이식 기술

The first mouse kidney transplant technique was published in 19731 by the Russell laboratory. Although it took some years for other labs to become ...

Intraluminal Drug Delivery to the Mouse Arteriovenous Fistula Endothelium

마우스 동정맥루 내피에 관내 약물 전달

Delivery of therapeutic agents to enhance arteriovenous fistula (AVF) maturation can be administered either via intraluminal or external routes. The ...

Intravascular Delivery of Biologics to the Rat Kidney

쥐의 신장에 생물의 혈관 배달

The renal microvascular compartment plays an important role in the progression of kidney disease and hypertension, leading to the development of End Stage ...

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery (ALCAPA)

Direct Re-implantation of Left Coronary Artery into the Aorta in Adults with Anomalous Origin of Left Coronary Artery from the Pulmonary Artery ALCAPA

폐 동맥에서 좌측 관상 동맥의 변칙 기원과 성인에서 대동맥으로 왼쪽 관상 동맥의 직접 재 주입 (좌 관상 동맥 폐동맥 이상 연결 증)

Anomalous origin of the left coronary artery from the pulmonary artery (ALCAPA) is a rare congenital anomaly which is one of leading causes of myocardial ...

Optimized LC-MS/MS Method for the High-throughput Analysis of Clinical Samples of Ivacaftor, Its Major Metabolites, and Lumacaftor in Biological Fluids of Cystic Fibrosis Patients

Ivacaftor, 그것의 주요 대사 산물, 및 생물 학적 체액의 낭 성 섬유 증 환자에서 Lumacaftor의 임상 샘플의 높은 처리량 분석에 대 한 최적화 된 LC-MS/MS 방법

Defects in the cystic fibrosis trans-membrane conductance regulator (CFTR) are the cause of cystic fibrosis (CF), a disease with life-threatening ...

Assessment of Kidney Function in Mouse Models of Glomerular Disease

신장 기능 사 질병 마우스 모델에서의 평가

The use of murine models to mimic human kidney disease is becoming increasingly common. Our research is focused on the assessment of glomerular function ...

An Efficient Sieving Method to Isolate Intact Glomeruli from Adult Rat Kidney

그대로 Glomeruli 성인 쥐 신장에서 분리 하는 효율적인 체질 하 방법

Preservation of glomerular structure and function is pivotal in the prevention of glomerulonephritis, a category of kidney disease characterized by ...

A Rat Carotid Artery Pressure-Controlled Segmental Balloon Injury with Periadventitial Therapeutic Application

쥐 경동맥 압력 제어 세그먼트 풍선 부상 과식 치료 응용 프로그램

Cardiovascular disease remains the leading cause of death and disability worldwide, in part due to atherosclerosis. Atherosclerotic plaque narrows the ...