Name: a culture method to maintain quiescent human hematopoietic stem cells
Uploaded: 2021-05-17T13:00:00
Duration: 7 min 14 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Culture Method to Maintain Quiescent Human Hematopoietic Stem Cells at JoVE.com

نشكر م. هاراجوتشي وس. تاماكي على الدعم التقني وإدارة المختبرات، وK. شيروشيتا لالتقاط الصور الفوتوغرافية. وقد تم دعم هونج كونج جزئيا من منحة KAKENHI من MEXT /JSPS (المنحة رقم 19K17847) والمركز الوطني للصحة والطب العالميين. تم دعم KT جزئيا من منح KAKENHI من MEXT / JSPS (رقم المنحة 18H02845 و 18K19570) والمركز الوطني للصحة العالمية والطب (رقم المنحة 26-001 و 19A2002) ، AMED (رقم المنحة. JP18ck0106444، JP18ae0201014، وJP20bm0704042)، مؤسسة أونو للبحوث الطبية، مؤسسة كانزوا للبحوث الطبية، ومؤسسة تاكيدا للعلوم.

<ol>
	<li>Scala, S., Aiuti, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+dynamics+of+human+hematopoietic+stem+cells:+novel+concepts+and+future+directions.">In vivo dynamics of human hematopoietic stem cells: novel concepts and future directions.</a> Blood Advances. 3 (12), 1916-1924 (2019).</li><li>Trumpp, A., Essers, M., Wilson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Awakening+dormant+haematopoietic+stem+cells.">Awakening dormant haematopoietic stem cells.</a> Nature Reviews Immunology. 10 (3), 201-209 (2010).</li><li>Laurenti, E., Gottgens, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+haematopoietic+stem+cells+to+complex+differentiation+landscapes.">From haematopoietic stem cells to complex differentiation landscapes.</a> Nature. 553 (7689), 418-426 (2018).</li><li>Sun, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+dynamics+of+native+haematopoiesis.">Clonal dynamics of native haematopoiesis.</a> Nature. 514 (7522), 322-327 (2014).</li><li>Busch, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fundamental+properties+of+unperturbed+haematopoiesis+from+stem+cells+in+vivo.">Fundamental properties of unperturbed haematopoiesis from stem cells in vivo.</a> Nature. 518 (7540), 542-546 (2015).</li><li>Lee-Six, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Population+dynamics+of+normal+human+blood+inferred+from+somatic+mutations.">Population dynamics of normal human blood inferred from somatic mutations.</a> Nature. 561 (7724), 473-478 (2018).</li><li>Osorio, F. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somatic+Mutations+Reveal+Lineage+Relationships+and+Age-Related+Mutagenesis+in+Human+Hematopoiesis.">Somatic Mutations Reveal Lineage Relationships and Age-Related Mutagenesis in Human Hematopoiesis.</a> Cell Reports. 25 (9), 2308-2316 (2018).</li><li>Rodriguez-Fraticelli, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+analysis+of+lineage+fate+in+native+haematopoiesis.">Clonal analysis of lineage fate in native haematopoiesis.</a> Nature. 553 (7687), 212-216 (2018).</li><li>Pineault, N., Abu-Khader, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+umbilical+cord+blood+stem+cell+expansion+and+clinical+translation.">Advances in umbilical cord blood stem cell expansion and clinical translation.</a> Experimental Hematology. 43 (7), 498-513 (2015).</li><li>Wilkinson, A. C., Igarashi, K. J., Nakauchi, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Haematopoietic+stem+cell+self-renewal+in+vivo+and+ex+vivo.">Haematopoietic stem cell self-renewal in vivo and ex vivo.</a> Nature Reviews Genetics. 21 (9), 541-554 (2020).</li><li>Wagner, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phase+I/II+Trial+of+StemRegenin-1+Expanded+Umbilical+Cord+Blood+Hematopoietic+Stem+Cells+Supports+Testing+as+a+Stand-Alone+Graft.">Phase I/II Trial of StemRegenin-1 Expanded Umbilical Cord Blood Hematopoietic Stem Cells Supports Testing as a Stand-Alone Graft.</a> Cell Stem Cell. 18 (1), 144-155 (2016).</li><li>Cohen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+stem+cell+transplantation+using+single+UM171-expanded+cord+blood:+a+single-arm,+phase+1-2+safety+and+feasibility+study.">Hematopoietic stem cell transplantation using single UM171-expanded cord blood: a single-arm, phase 1-2 safety and feasibility study.</a> Lancet Haematology. 7 (2), 134-145 (2020).</li><li>Laurenti, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CDK6+levels+regulate+quiescence+exit+in+human+hematopoietic+stem+cells.">CDK6 levels regulate quiescence exit in human hematopoietic stem cells.</a> Cell Stem Cell. 16 (3), 302-313 (2015).</li><li>Ito, K., Suda, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+requirements+for+the+maintenance+of+self-renewing+stem+cells.">Metabolic requirements for the maintenance of self-renewing stem cells.</a> Nature Reviews Molecular Cell Biology. 15 (4), 243-256 (2014).</li><li>Mendelson, A., Frenette, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hematopoietic+stem+cell+niche+maintenance+during+homeostasis+and+regeneration.">Hematopoietic stem cell niche maintenance during homeostasis and regeneration.</a> Nature Medicine. 20 (8), 833-846 (2014).</li><li>Majeti, R., Park, C. Y., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+hierarchy+of+multipotent+hematopoietic+progenitors+in+human+cord+blood.">Identification of a hierarchy of multipotent hematopoietic progenitors in human cord blood.</a> Cell Stem Cell. 1 (6), 635-645 (2007).</li><li>Xie, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+molecular+targets+on+the+surface+of+CD34+CD38-+bone+marrow+cells+in+myelodysplastic+syndromes.">Detection of molecular targets on the surface of CD34+CD38- bone marrow cells in myelodysplastic syndromes.</a> Cytometry A. 77 (9), 840-848 (2010).</li><li>Wilkinson, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+ex+vivo+haematopoietic-stem-cell+expansion+allows+nonconditioned+transplantation.">Long-term ex vivo haematopoietic-stem-cell expansion allows nonconditioned transplantation.</a> Nature. 571 (7763), 117-121 (2019).</li><li>Bai, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expansion+of+primitive+human+hematopoietic+stem+cells+by+culture+in+a+zwitterionic+hydrogel.">Expansion of primitive human hematopoietic stem cells by culture in a zwitterionic hydrogel.</a> Nature Medicine. 25 (10), 1566-1575 (2019).</li><li>Boitano, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aryl+hydrocarbon+receptor+antagonists+promote+the+expansion+of+human+hematopoietic+stem+cells.">Aryl hydrocarbon receptor antagonists promote the expansion of human hematopoietic stem cells.</a> Science. 329 (5997), 1345-1348 (2010).</li><li>Fares, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cord+blood+expansion.+Pyrimidoindole+derivatives+are+agonists+of+human+hematopoietic+stem+cell+self-renewal.">Cord blood expansion. Pyrimidoindole derivatives are agonists of human hematopoietic stem cell self-renewal.</a> Science. 345 (6203), 1509-1512 (2014).</li><li>Kobayashi, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Environmental+Optimization+Enables+Maintenance+of+Quiescent+Hematopoietic+Stem+Cells+Ex+Vivo.">Environmental Optimization Enables Maintenance of Quiescent Hematopoietic Stem Cells Ex Vivo.</a> Cell Reports. 28 (1), 145-158 (2019).</li><li>Danet, G. H., Pan, Y., Luongo, J. L., Bonnet, D. A., Simon, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expansion+of+human+SCID-repopulating+cells+under+hypoxic+conditions.">Expansion of human SCID-repopulating cells under hypoxic conditions.</a> Journal of Clinical Investigation. 112 (1), 126-135 (2003).</li><li>Kikushige, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Flt3+is+expressed+at+the+hematopoietic+stem+cell+and+the+granulocyte/macrophage+progenitor+stages+to+maintain+cell+survival.">Human Flt3 is expressed at the hematopoietic stem cell and the granulocyte/macrophage progenitor stages to maintain cell survival.</a> Journal of Immunology. 180 (11), 7358-7367 (2008).</li><li>Ieyasu, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+All-Recombinant+Protein-Based+Culture+System+Specifically+Identifies+Hematopoietic+Stem+Cell+Maintenance+Factors.">An All-Recombinant Protein-Based Culture System Specifically Identifies Hematopoietic Stem Cell Maintenance Factors.</a> Stem Cell Reports. 8 (3), 500-508 (2017).</li></ol>

يعلن المؤلفون عدم وجود تضارب في المصالح المرتبطة بهذه الدراسة.

في الآونة الأخيرة ، تم الإبلاغ عن عدة طرق لتوسيع HSCs مع الحد الأدنى من التمايز18،19،20،21. على الرغم من أن هذه الأساليب ممتازة، يضطر HSCs لتنشيط دورات الخلايا في وجود مستويات عالية من السيتوكينات، والذي يختلف عن الوضع في الجسم الحي الذي تظهر HSCs الحد الأدنى من ركوب الدراجات. هذا البروتوكول مفيد للحفاظ على HSCs كما هادئة، كما لوحظ في الجسم الحي، عن طريق تلخيص البيئة الدقيقة نخاع العظم.
من خلال زراعة HSCs الإنسان تحت السيتوكين منخفضة، والدهون الغنية، وظروف نقص الأكدمة، وأظهرت HSCs الحد الأدنى من ركوب الدراجات مع الحفاظ على الأنماط الظاهرية علامة بهم. الخطوة الحاسمة في هذا البروتوكول هو إعداد المتوسطة التي تحتوي على تركيز عال من الأحماض الدهنية والكوليسترول وانخفاض تركيزات السيتوكين والثقافة تحت نقص الأكسيجة (الخطوة 1، الخطوة 2، والخطوة 4). دون الكولسترول و / أو الأحماض الدهنية، ومعدل صيانة HSCs تحت تركيزات السيتوكين منخفضة يقلل22. زراعة الخلايا تحت ظروف نقص الأكز مهم أيضا، كما ذكرت سابقا23.
كانت ظروف الثقافة مماثلة لتلك المستخدمة في مركبات الكربون الهيدروفلورية المورينية، باستثناء تركيزات السيتوكين. مورين HSCs البقاء على قيد الحياة دون TPO، في حين أن HSCs الإنسان تتطلب ما لا يقل عن 2 نانوغرام / مل من TPO مع 3 نانوغرام / مل من SCF22. وبما أن تركيز TPO أعلى بكثير من التركيز في المصل البشري (~ 100 pg/mL)، فإن الظروف المستخدمة في هذا البروتوكول قد تكون مفقودةعوامل محددة لدعم بقاء HSCs البشرية. إضافة ليغاند FLT3LG يقلل قليلا من متطلبات TPO للحفاظ على HSCs22.
HSCs الإنسان تتطلب تركيزات أعلى من الكوليسترول بالمقارنة مع HSCs مورين, يفترض بسبب عدم القدرة على الحث على التعبير عن الإنزيمات توليف الكوليسترول والتعرض للسمية الدهنية تحت تركيزات عالية (>400 ميكروغرام / مل) من الأحماض الدهنية22. على الرغم من أنه تم اختبار فقط مزيج من الأحماض البالميتية والأوليك واللينوليك والستيريك ، والتي توجد بوفرة في المصل البشري ، يجب تقييم مجموعات أخرى من الدهون للحد من السمية الدهنية وتحسين معدل الحفاظ على HSCs الوظيفية.
على الرغم من أن نشاط إعادة إسكان HSCs البشرية المستزرعة في الفئران المناعة بعد أسبوعين من الثقافة قد تم تأكيده22، إلا أن هذا النظام الثقافي لا يلخص بشكل كامل الوظائف المتخصصة ل HSCs في الجسم الحي. وقد أفيد أن التعبير عن CD45RA لزيادة وقدرة إعادة السكان هو أدنى من ذلك من HSCs فرزها حديثا22. ومع ذلك ، يمكن تحسين تركيزات العناصر الغذائية ، مثل الجلوكوز والأحماض الأمينية والبيروفاتي والأنسولين ، والتي تضاف إلى الوسط عند مستويات فوقفيزيولوجية. الملوثات في BSA قد تعرض للخطر أيضا صيانة HSCs18،25. وبالإضافة إلى ذلك، تخضع بعض الخلايا المستزرعة لوفيات الخلايا، بينما تخضع خلايا أخرى لتقسيم الخلايا؛ وبالتالي، قد لا يشير الحفاظ على إجمالي عدد الخلايا إلى حالة هادئة لكل خلية.
وعلى الرغم من هذه القيود، فإن الظروف الثقافية الموصوفة في البروتوكول الذي تم تطويره في هذه الدراسة ستساعد على النهوض بالبحوث والهندسة في مركبات الكربون الهيدروفلورية، ولا سيما في ظل ظروف شبه فسيولوجية. وستكون الظروف الثقافية التي تحافظ على مركبات الكربون الهيدروفلورية بأقل قدر من التمايز ونشاط ركوب الدراجات مناسبة لاختبار المركبات البيولوجية والكيميائية التي تعمل على وجه التحديد على مركبات الكربون الهيدروفلورية، والتلاعب بمركبات الكربون الهيدروفلورية عن طريق نقل الفيروسات العدسية أو تحرير الجينوم دون فقدان الجذعية، وتوضيح الخطوة الأولية للتحول الناجمة عن الجينات المرتبطة بسرطان الدم.

تشكل الخلايا الجذعية الدموية (HSCs) وخلايا السلف متعددة القدرات (MPPs) بشكل تنسيقي خزانا للتجديد المستمر للخلايا المتمايزة للحفاظ على وجود الدم طوال الحياة في البشر1. خلية دورة quiescence هو سمة بارزة من HSCs، التفريق بينها وبين MPPs2. تقليديا، ويعتقد أن HSCs يقيمون في قمة التسلسل الهرمي للنظام الدموي، وإنتاج جميع خلايا الدم المتباينة. تم استنتاج هذا النموذج الهرمي في الغالب من تجارب زرع3. ومع ذلك، أشارت الدراسات الحديثة إلى أن ديناميات مركبات الكربون الهيدروفلورية تختلف في الجسم الحي مقارنة بتلك الموجودة في تجارب الزرع4و5و6و7. كشفت تجارب تتبع النسب باستخدام العديد من أنظمة الباركودينج أن مركبات المورين الظاهرية ليست من نوع الخلايا الفريدة التي تساهم في وجود دم ثابت الحالة ، وMPPs ، التي تعرض نشاطا محدودا للتجديد الذاتي عند إعدادات الزرع ، تزود باستمرار خلايا الدم الناضجة4و5و8. في المقابل ، يتم تعزيز مساهمة HSCs في الخلايا الناضجة بعد إصابة نخاع العظم4. ويمكن أن يعزى ذلك إلى التغيرات الجذرية في البيئة الدقيقة بعد استئصال نخاع العظم، بما في ذلك زرع نخاع العظم. على الرغم من أن تطبيق تتبع النسب من خلايا مورين على الخلايا البشرية أمر صعب، كشف التحليل النباتي الذي يجمع بين عزل المستعمرة المشتقة من خلية واحدة وتسلسل الجينوم كله عن خاصية مماثلة للنظام الدموي، حيث تكون كل من HSCs و MPPs مسؤولة عن الإنتاج اليومي للخلايا الناضجة7. وهكذا ، على الرغم من أن زرع أمر ضروري لفحص مورين أو نشاط HSC الإنسان ، وهناك حاجة إلى نماذج تجريبية أخرى لفهم سلوكيات HSCs في ظل الظروف الفسيولوجية.
وقد درست أساليب زراعة HSCs بالتفصيل لفهم تطبيقاتها السريرية وخصائصها. يمكن توسيع HSCs الإنسان في المختبر باستخدام مزيج من السيتوكينات، وإعادة تشكيل المصفوفات خارج الخلية، وإزالة الخصوم التجديد الذاتي، والثقافة المشتركة مع الخلايا المتوسطة أو البطانية، إضافة الألبومين أو استبداله، ونقل عوامل النسخ التجديد الذاتي، وإضافة مركبات جزيء صغير9،10. بعض هذه الطرق، بما في ذلك إضافة مركبات صغيرة SR111 و UM17112،وقد تم اختبارها في التجارب السريرية مع نتائج واعدة9. وبالنظر إلى الطبيعة الكوئسة لمركبات الكربون الهيدروفلورية في الجسم الحي، فإن الحفاظ على مركبات الكربون الهيدروفلورية بأقل قدر ممكن من ركوب الخلايا أمر بالغ الأهمية لتلخيص سلوك HSC في المختبر. Quiescent وHSCs المنتشرة معرض دخول دورة الخلية التفاضلية13, حالة التمثيل الغذائي14, والتسامح ضد الضغوط متعددة15 . والأساليب المستخدمة للحفاظ على هدوء مركبات الكربون الهيدروفلورية البشرية في المختبر محدودة.
من خلال محاكاة البيئة الدقيقة لنخاع العظام (نقص الأكسيد وغنية بالدهون) وتحسين تركيز السيتوكينات ، يمكن الحفاظ على HSCs الإنسان غير متمايزة وغير هادئة تحت الثقافة. ومن شأن تلخيص الطبيعة الكوزة لمركبات الكربون الهيدروفلورية في المختبر أن يحسن فهم خصائص الحالة الثابتة لمركبات الكربون الهيدروفلورية وأن يمكن من التلاعب التجريبي بمركبات الكربون الهيدروفلورية.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Human bone marrow CD34+ progenitor cells</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>2M-101C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOD/Shi-scid,IL-2R&#947;KO Jic</td>
			<td>In-Vivo Science Inc.</td>
			<td>https://www.invivoscience.com/en/nog_mouse.html</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human CD34-FITC (clone: 581)</td>
			<td>BD biosciences</td>
			<td>Cat# 560942; RRID: AB_10562559</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human CD38-PerCP-Cy5.5&#160;</td>
			<td>BD biosciences</td>
			<td>Cat# 551400; RRID: AB_394184</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human CD45RA-PE</td>
			<td>BD biosciences</td>
			<td>Cat# 555489; RRID: AB_395880</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human CD90-PE-Cy7 (clone: 5E10)</td>
			<td>BD biosciences</td>
			<td>Cat# 561558; RRID: AB_10714644</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human CD13-PE (clone: WM15)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>Cat# 301703; RRID: AB_314179</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human CD33-PE (clone: WM53)</td>
			<td>BD biosciences</td>
			<td>Cat# 561816; RRID: AB_10896480</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human CD19-APC (clone: SJ259)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>Cat# 363005; RRID: AB_2564127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human CD3-APC-Cy7 (clone: SK7)</td>
			<td>BD biosciences</td>
			<td>Cat# 561800; RRID: AB_10895381</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-human CD45-BV421 (clone: HI30)</td>
			<td>BD biosciences</td>
			<td>Cat# 563880; RRID:AB_2744402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse CD45-PE-Cy7 (clone: 30-F11)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>Cat# 103114; RRID: AB_312979</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse Ter-119-PE-Cy7 (clone: TER-119)</td>
			<td>BD biosciences</td>
			<td>Cat# 557853; RRID: AB_396898</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fc-block (anti-mouse CD16/32) (clone: 2.4-G2)</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>Cat# 553142; RRID: AB_394657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Nacalai Tesque</td>
			<td>Cat# 14249-24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Cat# 26140079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F-12 medium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Cat# 11320-033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ITS-X</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>Cat# 51500056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin</td>
			<td>Meiji Seika</td>
			<td>PGLD755</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Streptomycin sulfate</td>
			<td>Meiji Seika</td>
			<td>SSDN1013</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Cat# A4503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium palmitate</td>
			<td>Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.</td>
			<td>Cat# P0007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium oleate</td>
			<td>Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.</td>
			<td>Cat# O0057</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cholesterol</td>
			<td>Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.</td>
			<td>Cat# C0318</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium Chloride</td>
			<td>Fujifilm</td>
			<td>Cat# 017-2995</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydrogen Carbonate</td>
			<td>Fujifilm</td>
			<td>Cat# 191-01305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA&#65381;2Na</td>
			<td>Fujifilm</td>
			<td>Cat# 345-01865</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparine Na</td>
			<td>MOCHIDA PHARMACEUTICAL CO.,&#160;LTD.</td>
			<td>Cat# 224122557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sevoflurane</td>
			<td>Fujifilm</td>
			<td>Cat# 193-17791</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran</td>
			<td>Nacalai Tesque</td>
			<td>Cat#&#160; 10927-54</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human SCF</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>Cat# 300-07</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Human TPO</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>Cat# 300-18</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant human Flt3 ligand</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>Cat# 300-19</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propidium iodide</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>Cat# P3566</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flow-Check Fluorospheres</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>Cat# 7547053</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowJo version 10</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>https://www.flowjo.com/solutions/flowjo</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AutoMACS Pro</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS Aria3u</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VELVO-CLEAR VS-25 (sonicator)</td>
			<td>VELVO-CLEAR</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nitrogen gas cylinder</td>
			<td>KOIKE SANSHO CO., LTD</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas regulator</td>
			<td>Astec</td>
			<td>Cat# IM-055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multigas incubator</td>
			<td>Astec</td>
			<td>Cat# SMA-30DR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass tube, 16 mL</td>
			<td>Maruemu corporation</td>
			<td>N-16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass tube, 50 mL</td>
			<td>Maruemu corporation</td>
			<td>NX-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millex-GP Syringe Filter Unit, 0.22&#160;&#181;m, polyethersulfone, 33&#160;mm, gamma sterilized</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>SLGPR33RS</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a culture method to maintain quiescent human hematopoietic stem cells

تحافظ الخلايا الجذعية الدموية البشرية (HSCs)، مثل غيرها من الثدييات HSCs، على الهيماتوبويز مدى الحياة في نخاع العظام. تبقى مركبات الكربون الهيدروفلورية هادئة في الجسم الحي، على عكس السلف الأكثر تمايزا، وتدخل دورة الخلية بسرعة بعد العلاج الكيميائي أو التشعيع لعلاج إصابة نخاع العظم أو في زراعة المختبر. من خلال محاكاة البيئة الدقيقة لنخاع العظم في وجود الأحماض الدهنية الوفيرة ، والكوليسترول ، وانخفاض تركيز السيتوكينات ، ونقص الأكسيد ، تحافظ HSCs البشرية على الهدوء في المختبر. هنا، يتم وصف بروتوكول مفصل للحفاظ على HSCs وظيفية في حالة هادئة في المختبر. هذه الطريقة ستمكن من إجراء دراسات لسلوك HSCs الإنسان في ظل الظروف الفسيولوجية.

بعد 7 أيام من زراعة HSCs المنقى، ما يصل إلى 80٪ من الخلايا عرض الأنماط الظاهرية علامة من CD34+CD38- (الشكل 4A). يعتمد إجمالي عدد الخلايا على تركيز السيتوكين(الشكل 4B). تركيزات أعلى من SCF و TPO المستحثة الدخول في دورة الخلية، والانتشار، والتمايز(الشكل 4B). عدد مركبات الكربون الهيدروكلورية فلورية phenotypic HSCs التي تتميز بالأنماط الظاهرية للCD34+CD38-CD90+CD45RA- زاد بما يتناسب مع تركيزات SCF أو TPO (الشكل 4B)، في حين انخفض التردد بين الخلايا الإجمالية(الشكل 4C). وكانت الأعداد الإجمالية للخلايا متساوية في تركيبتي SCF 1.5 نانوغرام/مل و4 نانوغرام/مل TPO و3 نانوغرام/مل SCF 3 و2 نانوغرام/مل من TPO، مما يشير إلى أن مركبات الكربون الهيدروكلورية فلورية هادئة أثناء الحد الأدنى من تنشيط دورة الخلية. نظرا للاختلافات الفردية ، يوصى بتكسيت السيتوكين لكل متبرع بنخاع العظم.
بعد 3 أشهر من زرع نخاع العظام البالغ المستزرع HSCs ، يمكن تقييم إعادة التشكيل كتردد في الدم المحيطي لخلايا CD45 + murine CD45- Ter119- البشرية. ثلاثة أنساب بما في ذلك خلايا CD19 + B ، CD13/CD33 + خلايا النخاع ، وخلايا CD3 + T أعيد تشكيلها في فئران NOG المزروعة إما ب HSCs المذابة حديثا أو HSCs المستزرعة(الشكل 5).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61938/61938fig01.jpg"> الشكل 1. نظرة عامة على الإجراء. تضمن الملخص الرسومي للإجراء فرز الخلايا الجذعية الدموية البشرية وزراعةها وتحليلها. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61938/61938fig01large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61938/61938fig02.jpg"> الشكل 2. إجراء لتبخر الميثانول من محلول الدهون. أ) اسطوانة غاز النيتروجين مع منظم الغاز. ب) إجراء لتمرير غاز النيتروجين من خلال محلول الدهون المذاب في الميثانول. ج) الدهون التمسك الجزء السفلي من الأنبوب الزجاجي. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61938/61938fig02large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61938/61938fig03.jpg"> الشكل 3. Gating استراتيجية لفرز HSCs. تظهر المؤامرات CD34مسور +CD38-CD90+CD45RA- الخلايا. ما يقرب من 10٪ من خلايا CD34+ كانت HSCs الظاهري. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61938/61938fig03large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61938/61938fig04.jpg"> الشكل 4. أرقام الخلايا التمثيلية بعد 7 أيام من الاستزراع. أ) ممثل مضان تنشيط مؤامرة فرز الخلية بعد زراعة HSCs في SCF (3 نانوغرام / مل) و TPO (2 نانوغرام / مل). تم إثراء الكسر 1 للخلايا الحية، وتم إثراء الكسر 2 للخلايا الميتة، وتم إثراء الكسر 3 للحطام. تشير الأرقام الملونة باللون الوردي إلى التردد (٪) من الكسر المسور. ب) عدد جميع HSCs، CD34+CD38- الخلايا، وCD34+CD38-CD90+CD45RA- الخلايا بعد زراعة 600 HSCs تحت ظروف السيتوكين المشار إليها. خطوط متقطعة حمراء تشير إلى العدد الأولي من خلايا الإدخال. S: SCF، T: TPO. متوسط الانحراف المعياري ±، n = 4. تشير الأرقام التالية S و T إلى تركيز (نانوغرام/مل) لكل سيتوكين. ج) تردد CD34+CD38- وCD34+CD38-CD90+CD45RA- الخلايا تحت ظروف السيتوكين المشار إليها. S: SCF، T: TPO. متوسط الانحراف المعياري ±، n = 4. تم حذف أشرطة الخطأ للخلايا المستزرعة في SCF (1 نانوغرام/مل) و TPO (0 نانوغرام/مل) بسبب قيمهما العالية (37.7 و 47.9 على التوالي). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61938/61938fig04large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61938/61938fig05.jpg"> الشكل 5. قطع الأراضي ممثل FACS من الفئران المانحة بعد 3 أشهر من زرع. تم زرع ما مجموعه 5000 من الألواح العليا المذابة حديثا ومركبات HSCs المستزرعة لمدة أسبوعين (3 نانوغرام / مل SCF و 3 نانوغرام / مل TPO ؛ لوحات أقل) في فئران NOG. hCD19 علامات الخلايا B البشرية، hCD13 و hCD33 علامة الخلايا النخاعية البشرية، وhCD3 علامات الخلايا التائية البشرية. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61938/61938fig05large.jpg" style="font-size: 14px;" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>

Watch this Scientific Journal Video about A Culture Method to Maintain Quiescent Human Hematopoietic Stem Cells at JoVE.com

A Culture Method to Maintain Quiescent Human Hematopoietic Stem Cells

هذا البروتوكول يتيح الحفاظ على الخلايا الجذعية الدموية البشرية هادئة في المختبر عن طريق محاكاة البيئة الدقيقة نخاع العظام باستخدام الأحماض الدهنية وفيرة, الكوليسترول, انخفاض تركيزات السيتوكينات, ونقص الأكسيجة.

طريقة ثقافية للحفاظ على الخلايا الجذعية الدموية البشرية الكويسنت

Human hematopoietic stem cells (HSCs), like other mammalian HSCs, maintain lifelong hematopoiesis in the bone marrow. HSCs remain quiescent in vivo, ...

خلية دورة quiescence هو سمة رئيسية من سمات الخلايا الجذعية الدموية. يساعد هذا البروتوكول على فهم سلوك HSCs البشرية هادئة في المختبر في ظل ظروف فسيولوجية قريبة. باستخدام هذا البروتوكول، يمكن للباحثين اختبار تأثير مختلف المركبات أو المواد الغذائية أو البروتينات التي تنظم حالة دورة الخلية وكذلك التمييز بين مركبات الكربون الهيدروفلورية بطريقة قابلة للتطوير دون استخدام نماذج حيوانية.الأدوية المضادة للسرطان لها آثار متفاوتة على بقاء HSCs هادئة وسلف ركوب الدراجات. هذا البروتوكول يجعل من الممكن العثور على العوامل التي تدخر HSCs هادئة أو العوامل التي تضر بشكل انتقائي الخلايا الجذعية اللوكيميا هادئة. وسيبرهن على الإجراء هيروشي كوباياشي، وهو زميل باحث أقدم من مختبر تاكوبو.للبدء، حل 16 ملليغرام لكل ملليلتر الصوديوم بالميتات، 30 ملليغرام لكل ملليلتر أوليات الصوديوم، وأربعة ملليغرام لكل ملليلتر الكوليسترول في الميثانول في أنابيب زجاجية. تخزين المحاليل الدهون في 30 درجة مئوية السلبية وذوبان لهم قبل الاستخدام. في أنبوب زجاجي طازج، اخلط المحاليل الدهنية للحصول على التركيز النهائي البالغ 100 ميكروغرام لكل ملليلتر بالميتات، و100 ميكروغرام لكل أوليات ملليلتر، و20 ميكروغرام لكل كوليسترول ملليلتر.تبخر الميثانول عن طريق تمرير غاز النيتروجين من خلال محلول الدهون. تتبخر تماما الميثانول المتبقية عن طريق تسخين أنبوب زجاجي في حمام مائي في 37 درجة مئوية. إعداد DMEM / F - 12 المتوسطة مع HEPES والغلوتامين.أضف البنسلين وكبريتات الستربتومايسين لتركيز نهائي من 50 وحدة و 50 ميكروغرام لكل ملليلتر على التوالي. يمكن تخزين الوسيطة عند أربع درجات مئوية لمدة شهرين على الأقل. أضف 4٪ من BSA إلى متوسط DMEM/F-12 مع HEPES والغلوتامين، ثم اضبط درجة الحموضة للوسط إلى 7.6 باستخدام محلول هيدروكسيد الصوديوم.إضافة المتوسطة إلى أنبوب زجاجي مع الدهون. حل تماما الدهون عن طريق سونيكيشن. إذا كان الوسط معتما بعد سونيكيشن، قم بتمديد وقت الصوتنة.عندما يذوب BSA والدهون، يجب تخزين العينات في درجة حرارة سالبة 80 درجة مئوية واستخدامها في غضون شهرين. إضافة 0.001X من الأنسولين، نقل، سيلينيت الصوديوم، وخليط أمين الإيثانول إلى DMEM/F-12 ومن ثم تصفية المتوسطة المختلطة باستخدام مرشح 0.22 ميكرومتر. قبل الاستخدام، أضف عامل الخلايا الجذعية البشرية أو SCF والجلطات البشرية أو TPO إلى وسائط الثقافة بتركيز نهائي قدره ثلاثة نانوجرامات لكل ملليلتر لكل منهما.نقل 200 ميكرولتر من وسائل الإعلام الثقافة المعدة سابقا مع السيتوكينات إلى لوحات مسطحة أسفل 96 بئرا. لتجنب تبخر الوسط، قم بملء جميع الآبار غير المستخدمة بما بين 100 إلى 200 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني. إعادة إنفاق الخلايا الجذعية الدموية أو HSCs فرزها في وسائل الإعلام الثقافية دون cytokines في 60 خلية لكل ميكرولتر.Aliquot 600 الخلايا في كل بئر. أقل من 300 خلية سوف تؤدي إلى اختلاف تقني أكبر وزراعة أكثر من 1000 خلية في بئر واحد يجب تجنبها بسبب الحرمان من المغذيات أو تراكم السيتوكينات غير المواتية أو chemokines. زراعة الخلايا في حاضنة متعددة الغازات الرطبة عند 37 درجة مئوية في ثاني أكسيد الكربون بنسبة 5٪ و1٪ من الغلاف الجوي للأوكسجين.بعد سبعة أيام من زراعة HSCs المنقى، ما يصل إلى 80٪ من الخلايا عرض علامة CD34 إيجابية وCD38 الأنماط الظاهرية السلبية. يعتمد إجمالي عدد الخلايا على تركيز السيتوكين. تركيزات أعلى من SCF و TPO المستحثة الدخول في دورة الخلية, الانتشار والتمايز.وزاد عدد مركبات الكربون الهيدروكلورية فلورية الظاهرية التي تتميز بعلامة CD34 الإيجابية، وCD38 السلبية، وCD90 الإيجابية، والأنماط الظاهرية السلبية CD45 RA بما يتناسب مع تركيزات SCF أو TPO في حين انخفض التردد بين الخلايا الإجمالية. بعد ثلاثة أشهر من زرع نخاع العظام البالغ المستزرع HSCs ، يمكن تقييم إعادة التشكيل كدالة على ترددها في الدم المحيطي للجين الإيجابي CD45 البشري ، الخلايا السلبية CD45 Ter119 السلبية. أعيد تشكيل ثلاثة أنساب بما في ذلك خلايا CD19 B الإيجابية ، وCD13 السلبية ، وخلايا النخاع الإيجابي CD33 ، والخلايا التائية الإيجابية CD3 في فئران NOG المزروعة إما بمركبات HSCs المذابة حديثا أو المستزرعة.بعد الثقافة، يمكن أن تخضع HSCs لتسلسل التعبير الجيني مثل PCR في الوقت الحقيقي وتسلسل الحمض النووي الريبي. كما يمكن إجراء التحقق الوظيفي باستخدام زرع الفئران التي تعاني من نقص المناعة. يمكن للباحثين مقارنة مباشرة ركوب الدراجات وHSCs هادئة في ظل ظروف محددة عن طريق ضبط تركيزات السيتوكين.وهذا سوف يساعد على فهم برامج التجديد الذاتي الخاصة HSC هادئة، وآليات مقاومة الإجهاد، والخصائص الأيضية، والتي يصعب اختبارها في إعدادات الجسم الحي.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Use of Human Perivascular Stem Cells for Bone Regeneration

استخدام الخلايا الجذعية البشرية ارتشاح لتجديد العظام

Human perivascular stem cells (PSCs) can be isolated in sufficient numbers from multiple tissues for purposes of skeletal tissue engineering1-3. PSCs are ...

Rotating Cell Culture Systems for Human Cell Culture: Human Trophoblast Cells as a Model

نظم الدورية الثقافة خلية خلية للثقافة الإنسان : خلايا الأرومة الغاذية الإنسان نموذجا

The field of human trophoblast research aids in  understanding the complex environment established during placentation. Due to the  nature of these ...

Alginate Microcapsule as a 3D Platform for Propagation and Differentiation of Human Embryonic Stem Cells (hESC) to Different Lineages

Alginate Microcapsule as a 3D Platform for Propagation and Differentiation of Human Embryonic Stem Cells hESC to Different Lineages

Microcapsule الجينات كمنصة 3D لإكثار وتمايز الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESC) إلى أنساب مختلفة

Human embryonic stem cells (hESC) are emerging as an attractive alternative source for cell replacement therapy since they can be expanded in culture ...

Development, Expansion, and In vivo Monitoring of Human NK Cells from Human Embryonic Stem Cells (hESCs) and Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs)

Development, Expansion, and In vivo Monitoring of Human NK Cells from Human Embryonic Stem Cells hESCs and Induced Pluripotent Stem Cells iPSCs

التنمية، والتوسع، و<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; رصد خلايا NK الإنسان من الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESCs) وافرة القوة والتي يسببها الخلايا الجذعية (iPSCs)

We present a method for deriving natural killer (NK) cells from undifferentiated hESCs and iPSCs using a feeder-free approach. This method gives rise to ...

Transplantation of Induced Pluripotent Stem Cell-derived Mesoangioblast-like Myogenic Progenitors in Mouse Models of Muscle Regeneration

زرع المستحثة متعددة القدرات الخلايا الجذعية المشتقة من Mesoangioblast مثل السلف الميوجينيك في نماذج الماوس من تجديد العضلات

Patient-derived iPSCs could be an invaluable source of cells for future autologous cell therapy protocols. iPSC-derived myogenic stem/progenitor cells ...

Ordering Single Cells and Single Embryos in 3D Confinement: A New Device for High Content Screening

طلب خلايا واحدة والأجنة واحدة في 3D الحبس: جهاز جديد لفحص المحتوى العالي

Biological cells are usually observed on flat (2D) surfaces. This condition is not physiological, and phenotypes and shapes are highly variable. Screening ...

Optimizing Attachment of Human Mesenchymal Stem Cells on Poly(&#949;-caprolactone) Electrospun Yarns

Optimizing Attachment of Human Mesenchymal Stem Cells on PolyÃƒÅ½Ã‚Âµ-caprolactone Electrospun Yarns

تحسين مرفق من الوسيطة الإنسان الخلايا الجذعية على بولي (ε-caprolactone) خيوط Electrospun

Research into biomaterials and tissue engineering often includes cell-based in vitro investigations, which require initial knowledge of the starting cell ...

Human Pluripotent Stem Cell Culture on Polyvinyl Alcohol-Co-Itaconic Acid Hydrogels with Varying Stiffness Under Xeno-Free Conditions

ثقافة الخلايا الجذعية Pluripotent البشرية على حمض البولي فينيل الكحول-Co-إيتاكونيك الهلاميات المائية مع صلابة متفاوتة تحت ظروف خالية من كرة

The effect of physical cues, such as the stiffness of biomaterials on the proliferation and differentiation of stem cells, has been investigated by ...

Protocol for MicroRNA Transfer into Adult Bone Marrow-derived Hematopoietic Stem Cells to Enable Cell Engineering Combined with Magnetic Targeting

بروتوكول لنقل ميكرورنا إلى المشتقة من نخاع العظام المكونة للدم الخلايا الجذعية البالغة لتمكينها هندسة الخلايا جنبا إلى جنب مع استهداف المغناطيسي

While CD133+ hematopoietic stem cells (SCs) have been proven to provide high potential in the field of regenerative medicine, their low retention rates ...

Isolation of Adult Human Dermal Fibroblasts from Abdominal Skin and Generation of Induced Pluripotent Stem Cells Using a Non-Integrating Method

عزل الخلايا الليفية الجلدية البشرية البالغين من جلد البطن وتوليد مستحث المستحثة باستخدام أسلوب غير دمج

Induced pluripotent stem cells (iPSCs) could be considered, to date, a promising source of pluripotent cells for the management of currently untreatable ...