חקר אזורים מובחנים במוח הוא אבן דרך לקראת הבנת המורכבות המולקולרית והמבנית של המוח. פרוטוקול זה מתאר ניתוח שיטתי של מוח עכבר כדי לבודד אזורים מובחנים במוח. בפרספקטיבה של אנטומיה של המוח, זוהי גישה מלמעלה למטה שניתן לשחזר בקלות.
היתרונות של פרוטוקול זה הם כפולים. ראשית, גישה זו מספקת הזדמנות להבין את היסודות המולקולריים של אזורי מוח קטנים אך קריטיים. שנית, כל תהליך הדיסקציה הזה קצר מספיק כדי להבטיח שימור של שלמות מולקולרית, תנאי מוקדם קריטי של בדיקות גב ומולקולה.
הליך זה כרוך בתרגול ובטיפול עדין. העיתוי הוא קריטי מאוד כאן כדי לשמור על ציוני הדרך המבניים, וניתן להשיג אותו עם הכשרה ותרגול נכונים. מי שידגים את הליך הסרת מוח העכבר יהיה סייד מוהיה, כימאי חוקר וביואינפורמטיקאי מהמעבדה שלנו.
דוגמה נוספת להליך של כריתת מוח עכבר יהיה ג'יימס מאירהוף, חוקר מוח מהמעבדה שלנו. כדי להתחיל, לנקות ולהסיר את העור לאחיזה טובה. מהדקים את המקסילה של הראש הערוף עם המוסטאט ומשתמשים בגזה כדי לשקף את הקרקפת באופן רוסטרלי.
הכנס את המספריים המעוקלים העדינים לתוך מגנום הפורמן כדי להפריד בין קרומי המוח הנדבקים. לאחר מכן הכנס את המספריים בפתח בסיס הגולגולת שבו חוט השדרה עובר כאשר הלהב מצביע אנכית, אך מקביל ולוחץ על פני השטח הפנימיים של עצם הלוח הבסיסי, מסובב את הלהב 45 מעלות לצד שמאל ולאחר מכן לצד ימין. הסר את העצם העורפית בעצם intraparietal כדי לחשוף את המוח הקטן.
מקדמים את המספריים לאורך התפר הסגיטלי האמצעי עד לברגמה, וחותכים אותו על ידי הרמה כלפי מעלה כדי למנוע חתך של קליפת המוח. כאשר עצמות הקודקוד מורמות, לזהות ולחתוך את שאר אביזרי קרום המוח. בצע שני חתכים מקבילים במישור הסגיטלי והסר את שברי העצם הקדמית, תוך הימנעות מחתך פני השטח של המוח.
תוך כדי חיתוך חיבורי קרום המוח ועצבי הגולגולת, הפוך את הגולגולת כדי לאפשר לכוח הכבידה לסייע בהסרת המוח לכוס קטנה מלאה מראש בתמיסת מלח. שמור על בולה שמיעתית שלמה כדי שהאנטומיה של יותרת המוח תהיה ניתנת לזיהוי. לעשות חתך parasaggital קטן מאוד משני הצדדים ברכס של האוהל הממברנה כי הוא מחזיק יותרת המוח במקומו, ולהרים את האונה האחורית של יותרת המוח עם מלקחיים עדינים במיוחד.
בצע חתך sagittal בין השוליים הצדדיים של האונה הקדמית של יותרת המוח בעצב הטריגמינלי הקרוב ביותר, ולאחר מכן להרים את האונה הקדמית של יותרת המוח. כוון את מקור האור הלבן מעל הרקמה. הניחו את המוח על גוש נירוסטה מקורר מראש ושמרו על הבלוק קר על ידי הקפתו בקרח בתמיסת מלח קרה כקרח.
מעת לעת להרטיב את הרקמה עם תמיסת מלח קר כקרח כדי לשמר את המבנים. מקם את המוח כך שקליפת המוח פונה כלפי מעלה. באמצעות מלקחיים מעוקלים קטנים, להסיר את המוח הקטן.
באמצעות הגישה הגבית, החליקו את הלהבים הסגורים של מלקחיים מעוקלים קטנים מתחת לקורפוס קלוסום, ופזרו אותו בעדינות כדי לסגת מהניאוקורטקס באופן דו-צדדי כדי לשמר את ציוני הדרך הבולטים ביותר בקו האמצע. בסופו של דבר, מבנים כגון כיאזמה אופטית, היפותלמוס, נורות חוש הריח, medulla oblongata, מלאי יותרת המוח, וגשר פונטין יהיו גלויים. נסה להפריד בין ההמיספרות.
הפוך את אתר הגחון במוח כלפי מעלה ובצע חתך סגיטלי אמצעי החל מהדורסום בין נורות חוש הריח בחצי הכדור המוחי. הסר medulla, ולאחר מכן בעדינות להפריד את שתי ההמיספרות. לאחר מכן, בצע חתך קורונל בשוליים הפנימיים של הבריכות כדי להשיג את המוח האחורי ולהפריד את המדולה בשוליים האחוריים של הבריכות.
הפוך את רקמת המוח להפרדה זהירה של שתי ההמיספרות המוחיות. הסר את נורת חוש הריח בשלב זה. בצע חתך קורונלי מילימטר אחד קדמי לגנו של קורפוס קלוסום, והסר את נורות חוש הריח האביזריות, ולאחר מכן הפרדת קליפת המוח הקדם-מצחית המדיאלית והלטרלית.
חתך חלקי אופקית או קורונלית דרך החלק הרוחבי של הקומיסורה הקדמית מקו האמצע מתחת לקרן הקדמית של החדר הצדדי כדי לשחרר את גרעין המחיצה באופן דורסלי ואת הסטריאטום הגחוני בגחון. הסר את הכמות הקטנה של קליפת המוח מפני השטח הצדדיים כדי להסיר את גרעין הכניעה ואת פקעת חוש הריח. הפרד את החלק הרוסטרלי של הסטריאטום של הקורפוס מקליפת המוח העליונה באמצעות אזמל מעוקל שנחתך ממש מחוץ לקפסולה החיצונית.
זהה את גרעיני המחיצות או המחיצות ובודד אותם מקטע זה. בצע חתך מעוקל כדי להפריד את ההיפותלמוס בשלב זה. זה ייעשה באמצעות חתך קורונלי חלקי אחורי לגופי החלב המשתרע רק לרוחב כמו סולקוס ההיפותלמי.
לאחר מכן שחררו את חתך ההיפותלמוס עם חתך פרזגיטלי לאורך הסולקוס ההיפותלמי. אוורט את החדר הלטרלי כדי לחשוף קשרים תוך-לימביים נוספים במרכיבי המערכת הלימבית הנותרים. בחלק הפנימי של קליפת המוח הפנימית, מבנה דמוי מניפה נצפה לאחר פתיחת החדר.
השתמש במבנה דמוי המניפה בקליפת המוח האנטורינלית כדי להגדיר את השוליים לצורך דיסקציה, ולאחר מכן זהה והסר את האמיגדלה, קליפת המוח האנטורינלית, פיתול החגורה האחורי וההיפוקמפוס. אשר את זיהוי התלמוס על ידי הדמיה של הסטריה מדולאריס על פני השטח הגביים שלה המשתרעים במישור קליפת המוח הרוסטרלית של קו האמצע. להפריד את התלמוס לחלוטין מאמצע המוח על ידי חתך קורונל.
פרוטוקול זה יכול לשמש להסרה מיידית של המוח מן הגולגולת, ואחריו דיסקציה. ניתן לשמר ולעבד את הרקמות המנותחות מאוחר יותר בהתאם לדרישות המחקר. רנ"א מופק ממספר רקמות מנותחות ניתן לבדיקה לביטוי גנים.
התוצאות המייצגות התקבלו באמצעות מוחות שנקטפו ואוחסנו בטמפרטורה של מינוס 80 מעלות צלזיוס במשך מספר חודשים לפני מיצוי הרנ"א. אזורים מובחנים במוח יחד עם נתוני משקל נאספו תחת מודל הלחץ החברתי החשוף של PTSD. ריכוזי RNA וקריאות ספקטרופוטומטריות מוצגים כאן.
כאשר עוקבים אחר פרוטוקול זה, ודא כי הרקמות מצוננות בכל עת על ידי שמירה על המוח על בלוק פלדה קר, מעת לעת dousing את הרקמה עם מלח קר. לאחר שהרקמות נאספות ומוקפאות מיד, ניתן להשתמש בהן למבחנים כמו תעתיק, מטבוליזם ופרוטאומיקה במועד מאוחר יותר.
