Name: microdissection of mouse brain into functionally and anatomically different regions
Uploaded: 2021-02-15T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microdissection of Mouse Brain into Functionally and Anatomically Different Regions at JoVE.com

セシュマリニ・スリニヴァサン氏、スティーブン・バトラー氏、パメラ・スペルマン氏には実験的な支援をいただき、ダナ・ユセフ氏は原稿の編集に感謝いたします。USAMRDCからの資金援助は感謝の意をもって認められています。ジュネーブ財団はこの作業に貢献し、米国陸軍研究局を通じて軍事および運用医学研究地域局IIIからの資金によって支援されました。
免責事項：
資料はウォルター・リード陸軍研究所によってレビューされています。そのプレゼンテーションおよび/または出版に異議はありません。ここに含まれる意見または主張は、著者の私的見解であり、公式として、または陸軍省または国防総省の真の見解を反映していると解釈されるべきではありません。研究は、動物福祉法および動物を含む実験に関するその他の連邦法令および規制に準拠し、AAALAC認定施設で承認された動物使用プロトコルに基づいて実施され、 実験動物のケアおよび使用のためのガイド、NRCパブリケーション、2011年版に記載されている原則を遵守します。

動物の取り扱いおよび実験手順は、動物ケアに関するヨーロッパ、国家および機関のガイドラインに従って実施された。すべての動物実験は、米国陸軍環境衛生研究センター(現在のウォルターリード陸軍研究所(WRAIR)の施設動物ケアおよび使用委員会(IACUC)によって承認され、国際実験動物ケア評価認定協会(AAALAC)の認定を受けた施設で実施されました。 注:この手順は、子宮頸部脱臼によっ...

<ol>
	<li>Zeisel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+Architecture+of+the+Mouse+Nervous+System.">Molecular Architecture of the Mouse Nervous System.</a> Cell. 174 (4), 999-1014 (2018).</li><li>Ackerman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Major Structures and Functions of the Brain. 2, (1992).</li><li>P, T. L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> StatPearls. , (2019).</li><li>Paramvir, T. L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> StatPearls. , (2019).</li><li>Javed, K., Reddy, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Neuroanatomy, Cerebral Cortex. , (2020).</li><li>Rakic, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+the+neocortex:+a+perspective+from+developmental+biology.">Evolution of the neocortex: a perspective from developmental biology.</a> Nature Reviews Neuroscience. 10 (10), 724-735 (2009).</li><li>Fern&#225;ndez, V., Llinares-Benadero, C., Borrell, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+cortex+expansion+and+folding:+what+have+we+learned.">Cerebral cortex expansion and folding: what have we learned.</a> The EMBO Journal. 35 (10), 1021-1044 (2016).</li><li>Pessoa, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+brain+networks+and+brain+organization.">Understanding brain networks and brain organization.</a> Physics of Life Reviews. 11 (3), 400-435 (2014).</li><li>Mu, Q., Chen, Y., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deciphering+Brain+Complexity+Using+Single-cell+Sequencing.">Deciphering Brain Complexity Using Single-cell Sequencing.</a> Genomics, Proteomics &amp; Bioinformatics. 17 (4), 344-366 (2019).</li><li>Darmanis, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+survey+of+human+brain+transcriptome+diversity+at+the+single+cell+level.">A survey of human brain transcriptome diversity at the single cell level.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (23), 7285-7290 (2015).</li><li>Hodge, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conserved+cell+types+with+divergent+features+in+human+versus+mouse+cortex.">Conserved cell types with divergent features in human versus mouse cortex.</a> Nature. 573 (7772), 61-68 (2019).</li><li>Winrow, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Refined+anatomical+isolation+of+functional+sleep+circuits+exhibits+distinctive+regional+and+circadian+gene+transcriptional+profiles.">Refined anatomical isolation of functional sleep circuits exhibits distinctive regional and circadian gene transcriptional profiles.</a> Brain Research. 1271, 1-17 (2009).</li><li>Atkins, N., Miller, C. M., Owens, J. R., Turek, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-Laser+Capture+Microscopy+Approach+for+the+Microdissection+of+Discrete+Mouse+Brain+Regions+for+Total+RNA+Isolation+and+Downstream+Next-Generation+Sequencing+and+Gene+Expression+Profiling.">Non-Laser Capture Microscopy Approach for the Microdissection of Discrete Mouse Brain Regions for Total RNA Isolation and Downstream Next-Generation Sequencing and Gene Expression Profiling.</a> Journal of Visualized Experiments. (57), e3125 (2011).</li><li>Wager-Miller, J., Murphy Green, M., Shafique, H., Mackie, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collection+of+Frozen+Rodent+Brain+Regions+for+Downstream+Analyses.">Collection of Frozen Rodent Brain Regions for Downstream Analyses.</a> Journal of Visualized Experiments. (158), e60474 (2020).</li><li>Muhie, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+transcriptome+profiles+in+mouse+model+simulating+features+of+post-traumatic+stress+disorder.">Brain transcriptome profiles in mouse model simulating features of post-traumatic stress disorder.</a> Molecular Brain. 8, 14 (2015).</li><li>Hammamieh, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+model+of+repeated+exposures+to+conspecific+trained+aggressors+simulates+features+of+post-traumatic+stress+disorder.">Murine model of repeated exposures to conspecific trained aggressors simulates features of post-traumatic stress disorder.</a> Behavioural Brain Research. 235 (1), 55-66 (2012).</li><li>Paxinos, G., Franklin, K. B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The mouse brain in stereotaxic coordinates. Compact 3rd edn. , (2008).</li><li>Franklin, K., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Coronal Plates and Diagrams. , (2019).</li><li>Slotnick, B. M., Leonard, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereotaxic+atlas+of+the+albino+mouse+forebrain.+Rockville,+MD,+Alcohol,+Drug+Abuse+and+Mental+Health+Administration,+1975.">Stereotaxic atlas of the albino mouse forebrain. Rockville, MD, Alcohol, Drug Abuse and Mental Health Administration, 1975.</a> Annals of Neurology. 10 (4), 403-403 (1981).</li><li>Cajal, S. R., Swanson, N., Swanson, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Histologie Du Syst&#232;me Nerveux de L'homme Et Des Vert&#233;br&#233;s. Anglais. , (1995).</li><li>Spijker, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+Rodent+Brain+Regions.">Dissection of Rodent Brain Regions.</a> Neuromethods. 57, 13-26 (2011).</li><li>Wager-Miller, J., Murphy Green, M., Shafique, H., Mackie, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collection+of+Frozen+Rodent+Brain+Regions+for+Downstream+Analyses.">Collection of Frozen Rodent Brain Regions for Downstream Analyses.</a> Journal of Visualized Experiments. (158), e60474 (2020).</li><li>Sultan, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+Different+Areas+from+Mouse+Hippocampus.">Dissection of Different Areas from Mouse Hippocampus.</a> Bio Protocols. 3 (21), (2013).</li><li>Chakraborty, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+and+stress+history+interplay+in+emergence+of+PTSD-like+features.">Gene and stress history interplay in emergence of PTSD-like features.</a> Behavioural Brain Research. 292, 266-277 (2015).</li><li>Chiu, K., Lau, W. M., Lau, H. T., So, K. -. F., Chang, R. C. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micro-dissection+of+rat+brain+for+RNA+or+protein+extraction+from+specific+brain+region.">Micro-dissection of rat brain for RNA or protein extraction from specific brain region.</a> Journal of Visualized Experiments. (7), (2007).</li><li>Rajmohan, V., Mohandas, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+limbic+system.">The limbic system.</a> Indian Journal of Psychiatry. 49 (2), 132-139 (2007).</li></ol>

哺乳類の脳は、多様な分子シグネチャを持つ形態学的に明確で機能的にユニークな細胞の配列と、特殊で離散的な機能を実行する複数の領域で構成される複雑な器官です。ここで報告する解剖手順は、ラボの要件に応じて複数の目標を持つことができます。私たちの研究室では、ストレスのようなPTSDに曝露されたマウスから採取した複数の脳領域における転写を評価した16 ...

脳は、脊髄および網膜とともに、全身にわたって特殊化され、正確に位置決めされ、相互作用する細胞型によって制御される複雑な行動を実行する中枢神経系を構成する1。脳は、何十億もの相互接続されたニューロンとグリアを持つ複雑な器官であり、多数の機能を果たす正確な回路を備えています。これは、2つの異なる葉と多様な細胞成分2を有する両側構造である。脊髄は脳を外界に接続し、骨、髄膜、脳脊髄液によって保護され、脳との間でメッセージをルーティングします2,3,4。脳の表面である大脳皮質は不均一で、ジャイリと呼ばれる明確なひだと、脳を機能中枢に分離するスルシと呼ばれる溝を持っています5。皮質は小さな脳を持つ哺乳類では滑らかです 6,7.異なる脳領域に関連する障害とその機能回路を理解するために、人間の脳の構造を特徴付け、研究することが重要です。近年、神経科学の研究が拡大し、脳の構造や機能を研究するために様々な実験方法が用いられています。分子・システム生物学の分野における発展は、脳構造と分子の機能との複雑な関係を探る新時代の到来を告げました。さらに、分子生物学、遺伝学、エピジェネティクスは急速に拡大しており、システムの機能に関わる根底にあるメカニズムに関する知識を深めることができます。これらの分析は、より効果的な治療法の調査と開発をターゲットとするのに役立つ、はるかに局所的な基準で実施することができます。
哺乳類の脳は、構造的に明確に識別可能な離散領域に定義されています。しかし、これらの離散構造の機能的および分子的複雑さはまだ明確に理解されていない。脳組織の多次元的で多層的な性質は、この風景を機能レベルで研究することを困難にしています。加えて、複数の機能が同じ構造によって実行されるという事実、およびその逆もまた同様であるという事実は、脳8の理解をさらに複雑にする。脳領域の構造的および機能的特徴付けのために実行される実験的アプローチは、神経解剖学的アーキテクチャと機能を相関させるためのサンプリングの一貫性を達成するために、正確な研究方法論を使用することが極めて重要である。脳の複雑さは、最近、75の異なる細胞型11から構成されるヒト脳の側頭回のような単一細胞シーケンシング9,10を用いて説明されている。このデータをマウス脳の類似領域からのデータと比較することにより、この研究はそれらの構造と細胞型の類似性を明らかにするだけでなく、違いも提示する。したがって、複雑なメカニズムを解明するためには、脳の多様な領域を完全な精度で研究することが重要です。ヒトとマウスの脳間の保存された構造と機能は、人間の脳機能と行動結果を解明するための予備的な代理としてマウスを使用することを可能にします。
システム生物学のアプローチの進歩に伴い、げっ歯類の離散的な脳領域から情報を得ることは、神経科学研究における重要な手順となっている。レーザー捕捉微小解剖12 などのいくつかのプロトコルは高価であり得るが、機械的プロトコルは安価であり、一般的に入手可能なツール13、14を用いて実行される。我々は、トランスクリプトームアッセイ15 に複数の脳領域を使用し、関心のあるマウス脳領域を短時間で段階的に解剖する実践的かつ迅速な手順を開発しました。解剖されると、これらのサンプルを直ちに低温条件下で保存して、これらの組織の核酸およびタンパク質を保存することができます。当社のアプローチはより迅速に実行でき、高効率を実現し、組織劣化の可能性を低く抑えることができます。これは最終的に、脳組織を使用して高品質で再現可能な実験を生成する可能性を高めます。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Brain Removal</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deaver scissors</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-6762</td>
			<td>5.5&#34; straight sharp/sharp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deaver scissors</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-6763</td>
			<td>5.5&#34; curved sharp/sharp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delicate operating scissors</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-6703</td>
			<td>4.75&#34; curved sharp/sharp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delicate operating scissors</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-6702</td>
			<td>4.75&#34; straight sharp/sharp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light operating scissors</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-6753</td>
			<td>5&#34; curved Sharp/Sharp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro spatula, radius and tapered flat ends</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>stainless steel mirror finish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating scissors 6.5&#34;</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-6846</td>
			<td>curved sharp/sharp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue forceps</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-8160</td>
			<td>4.5&#8221; 1X2 teeth 2mm tip width</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rongeur (optional)</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-8321 many styles to choose</td>
			<td>Lempert Rongeur 6.5&#34; 2X8mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pituitary Dissection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel handle</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-9843</td>
			<td>Scalpel Handle #3 Solid 4&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>and blades</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-9801-11</td>
			<td>Sterile Scalpel Blades:#11 Box 100 40mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super fine forceps Inox</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-4955</td>
			<td>tip size 0.025 X 0.005 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain Dissection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A magnification visor</td>
			<td>Penn Tool Col</td>
			<td>40-178-6</td>
			<td>2.2x Outer and 3.3x Inner Lens Magnification, Rectangular Magnifier</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection cold plate</td>
			<td>Cellpath.com</td>
			<td>JRI-0100-00A</td>
			<td>Iceberg cold plate &#38; base</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe forceps, full curve extra delicate</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-5138</td>
			<td>0.5 mm Tip 4&#8221; (10 cm) long</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light operating scissors</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-6753</td>
			<td>5&#34; curved sharp/sharp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel handle</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-9843 (repeated above)</td>
			<td>Scalpel Handle #3 Solid 4&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>and blades (especially #11)</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-9801-11 (repeated above)</td>
			<td>Sterile Scalpel Blades:#11 Box 100 40mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spatula</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>MS-SQRD9-4</td>
			<td>Double Ended Spatula Square AND Round End</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue forceps</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-8160 (repeated above)</td>
			<td>4.5&#8221; 1X2 teeth</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microdissection of mouse brain into functionally and anatomically different regions

脳は哺乳類の神経系の司令センターであり、構造的に非常に複雑な器官です。頭蓋骨内で保護された脳は、大脳皮質として知られる半球上の灰白質の外側の覆いで構成されています。この層の下には、存在にとって重要な複数の現象に不可欠な他の多くの特殊な構造があります。特定の総脳領域のサンプルを取得するには、迅速かつ正確な解剖手順が必要です。微視的なレベルでは、多くのサブ領域が存在し、この解剖の目的のために課す任意の地域の境界を越える可能性が高いことが理解される。
マウスモデルは、ヒトの脳機能および疾患を研究するために日常的に使用されている。遺伝子発現パターンの変化は、罹患状態に応じて特定の表現型を標的とする特定の脳領域に限定され得る。したがって、その明確に定義された構造組織に関して転写の調節を研究することは非常に重要です。脳を完全に理解するには、異なる脳領域を研究し、接続を定義し、これらの各脳領域の活動における主要な違いを特定する必要があります。これらの異なる領域のそれぞれをより包括的に理解することは、神経科学の分野における新しく改善された治療への道を開くかもしれない。ここでは、マウスの脳を16の異なる領域に解剖するための段階的な方法論について説明します。この手順では、オスマウスC57Bl/6J(6-8週齢)の脳摘出と、神経解剖学的ランドマークを用いた複数の領域への解剖に焦点を当て、機能的に関連する脳領域と行動的に関連する個別の脳領域を同定し、サンプリングしました。この研究は、神経科学の分野で強力な基盤を築くのに役立ち、脳機能のより深い理解におけるより焦点を絞ったアプローチにつながります。

複雑な脳の構造と機能に関する私たちの理解は急速に進化し、改善されています。脳には複数の異なる領域が含まれており、分子マップを構築することは、脳がどのように機能するかをよりよく理解するのに役立ちます。この方法論文では、マウスの脳を複数の異なる領域に解剖することについて議論しました(表1)。このプロトコルでは、構造は重要なランドマークに基づいて?...

Watch this Scientific Journal Video about Microdissection of Mouse Brain into Functionally and Anatomically Different Regions at JoVE.com

Microdissection of Mouse Brain into Functionally and Anatomically Different Regions

我々は、新鮮な脳組織からの離散領域のマウス脳除去および解剖のための実践的な、段階的、迅速なプロトコルを提示する。分子解析のために脳領域を取得することは、多くの神経科学研究室で日常的になっています。これらの脳領域は直ちに凍結され、システムレベルの解析のための高品質のトランスクリプトームデータが得られます。

機能的および解剖学的に異なる領域へのマウス脳の微小解剖

The brain is the command center for the mammalian nervous system and an organ with enormous structural complexity. Protected within the skull, the brain ...

異なる脳領域を研究することは、脳の分子的および構造的複雑さを理解するための足がかりです。このプロトコルは、異なる脳領域を分離するためのマウス脳の体系的な解剖を記述します。脳の解剖学の観点からは、簡単に再現できるトップダウンアプローチです。このプロトコルの利点は2つあります。まず、このアプローチは、小さいながらも重要な脳領域の分子基盤を理解する機会を提供します。第二に、この解剖プロセス全体は、バックアッセイおよび分子アッセイの重要な前提条件である分子完全性の維持を確実にするために十分に短いです。この手順には、練習と繊細な取り扱いが含まれます。ここでは、構造上のランドマークを維持するためにタイミングが非常に重要であり、適切なトレーニングと練習で達成できます。マウスの脳除去の手順を実証するのは、私たちの研究室の研究化学者でありバイオインフォマティシャンであるSeid Muhieです。マウスの脳解剖の手順をさらに実証するのは、私たちの研究室の神経科学者であるジェームズ・マイヤーホフです。まず、しっかりと握るために皮膚をきれいにして取り除きます。斬首された頭の上顎を止血剤で固定し、ガーゼを使用して頭皮を吻側に反射させます。細かい湾曲したハサミを大孔に挿入して、付着した髄膜を分離します。次に、脊髄が通過する頭蓋骨の基部の開口部にハサミを挿入し、刃を垂直に向けますが、基底板骨の内面に平行に押し付け、刃を左側に45度回転させ、次に右側に回転させます。頭頂内骨の後頭骨を取り除き、小脳を露出させます。はさみを矢状縫合糸の中央に沿って吻側方向にブレグマまで進め、大脳皮質の裂傷を避けるために上方に持ち上げて切ります。頭頂骨が持ち上げられたら、残りの髄膜付着物を特定して切断します。矢状面に2つの平行な切り込みを入れ、脳表面の裂傷を避けて前頭骨の断片を取り除きます。髄膜の付着物と脳神経を切断しながら、頭蓋骨を反転させて、重力が生理食塩水で事前に満たされた小さなカップへの脳の除去を支援できるようにします。下垂体の解剖学的構造が識別できるように、聴覚ブラを無傷に保ちます。下垂体をその場所に保持している膜テントの尾根の両側に非常に小さな傍矢状切り込みを入れ、超微細鉗子で下垂体の後葉を持ち上げます。最も近い三叉神経の下垂体前葉の外側縁の間に矢状切開を行い、下垂体の前葉を持ち上げます。白色光源を組織に向けます。脳を予冷したステンレス鋼ブロックに置き、氷冷生理食塩水に氷で囲んでブロックを冷たく保ちます。構造を保存するために、氷冷食塩水で組織を定期的に湿らせます。大脳皮質が上を向くように脳を配置します。小さな湾曲した鉗子を使用して、小脳を取り除きます。背側アプローチを使用して、小さな湾曲した鉗子の閉じたブレードを脳梁の下に滑り込ませ、それを穏やかに広げて新皮質を両側に引っ込め、非常に顕著な正中線のランドマークを保存します。最終的には、視交叉、視床下部、嗅球、延髄、下垂体ストック、橋橋などの構造が見えます。半球を分離してみてください。脳の腹側部位を上にひっくり返し、大脳半球の嗅球の間の背側から矢状中央の切り込みを入れます。髄質を取り除き、2つの半球を静かに分離します。次に、池の内側の縁に冠状に切り込みを入れて後脳を取得し、池の後縁で髄質を分離します。2つの大脳半球を注意深く分離するために脳組織を反転させます。このステップで嗅球を取り外します。脳梁の属の1ミリメートル前方に冠状動脈を切断し、副嗅球を取り除き、続いて内側と外側の前頭前野を分離します。側脳室の前角の下の正中線から前交連の横方向部分を水平または冠状に部分的に切断し、中隔核を背側に、腹側線条体を腹側に解放する。側側面から少量の皮質を取り除き、屈生核と嗅結節を取り除きます。線条体の吻側部分を、外部カプセルのすぐ外側にカットされた湾曲したメスを介して、上にある皮質から分離します。中隔核または中隔を特定し、このセクションから分離します。このステップで視床下部を分離するために湾曲したカットを作成します。これは、乳頭体の後方にある部分的な冠状切断を使用して行われます 視床下部溝まで横方向にのみ伸びています。次に、視床下部溝の長さに沿って傍矢状カットで視床下部の断面を解放します。側脳室をエバートして、残りの大脳辺縁系コンポーネントに追加の辺縁系接続を明らかにします。内皮質の内側部分では、心室を開いた後に扇状構造が観察される。嗅内皮質の扇状構造を使用して解剖用の縁を定義し、扁桃体、嗅内皮質、後帯状皮質、海馬を特定して除去します。正中線吻側皮質面に延びる背側表面の髄脈を可視化することで視床の識別を確認します。冠状動脈切断によって視床を中脳から完全に分離する。このプロトコルは、頭蓋骨から脳を即座に除去し、その後解剖するために使用できます。解剖された組織は、研究の要件に応じて保存し、後で処理することができます。複数の解剖組織から抽出されたRNAは、遺伝子発現についてアッセイすることができる。代表的な結果は、RNA抽出前に摂氏マイナス80度で数ヶ月間保存された収穫された脳を使用して得られた。PTSDの侵略者曝露社会的ストレスモデルの下で、体重データとともに異なる脳領域が収集された。RNA濃度と分光光度測定値がここに示されています。このプロトコルに従うときは、脳を氷のスチールブロックに保ち、定期的に組織に氷の生理食塩水をまき散らすことで、組織が常に冷えていることを確認してください。組織を採取してすぐに凍結すると、後でトランスクリプトミクス、メタボロミクス、プロテオミクスなどのアッセイに使用できます。

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Anatomy and Physiology

Neuroscience

Unit 1

Anatomy of the Central and Peripheral Nervous System

SCIENTISTS IN ACTION

Non-Laser Capture Microscopy Approach for the Microdissection of Discrete Mouse Brain Regions for Total RNA Isolation and Downstream Next-Generation Sequencing and Gene Expression Profiling

Non-Laser Capture Microscopy Approach for the Microdissection of Discrete Mouse Brain Regions for Total RNA Isolation and Downstream Next-Generation Sequencing and Gene Expression Profiling  |

トータルRNAの単離およびダウンストリーム次世代シーケンシングと遺伝子発現プロファイリングのための離散マウスの脳領域のマイクロダイセクションのための非レーザーキャプチャー顕微鏡のアプローチ

As technological platforms, approaches such as next-generation sequencing, microarray, and qRT-PCR have great promise for expanding our understanding of ...

Optimized Analysis of DNA Methylation and Gene Expression from Small, Anatomically-defined Areas of the Brain

脳の小、解剖学的に定義された領域からのDNAメチル化と遺伝子発現の最適化分析

Exposure to diet, drugs and early life adversity during sensitive windows of life 1,2 can lead to lasting changes in gene expression that contribute to ...

Mapping Cortical Dynamics Using Simultaneous MEG/EEG and Anatomically-constrained Minimum-norm Estimates: an Auditory Attention Example

同時MEG / EEGおよび解剖学的に制約のある最小ノルム推定値を使用してマッピング皮質ダイナミクス：聴覚注意の例

Magneto- and electroencephalography (MEG/EEG) are neuroimaging techniques that provide a high temporal resolution particularly suitable to investigate the ...

Growing Neural Stem Cells from Conventional and Nonconventional Regions of the Adult Rodent Brain

大人の齧歯類の脳の従来の従来にない地域から神経幹細胞を増殖させる

Recent work demonstrates that central nervous system (CNS) regeneration and tumorigenesis involves populations of stem cells (SCs) resident within the ...

Telomerase Activity in the Various Regions of Mouse Brain: Non-Radioactive Telomerase Repeat Amplification Protocol (TRAP) Assay

Telomerase Activity in the Various Regions of Mouse Brain: Non-Radioactive Telomerase Repeat Amplification Protocol TRAP Assay

マウス脳のさまざまな領域におけるテロメラーゼ活性：非放射性テロメラーゼリピート増幅プロトコル（TRAP）アッセイ

Telomerase, a ribonucleoprotein, is responsible for maintaining the telomere length and therefore promoting genomic integrity, proliferation, and ...

Design, Surface Treatment, Cellular Plating, and Culturing of Modular Neuronal Networks Composed of Functionally Inter-connected Circuits

デザイン、治療、セルラーめっき、機能的に相互接続された回路で構成モジュラー神経回路網の培養表面

The brain operates through the coordinated activation and the dynamic communication of neuronal assemblies. A major open question is how a vast repertoire ...

Stereotaxic Infusion of Oligomeric Amyloid-beta into the Mouse Hippocampus

マウス海馬にオリゴマーアミロイドベータの定位注入

Alzheimer&#8217;s disease is a neurodegenerative disease affecting the aging population. A key neuropathological feature of the disease is the ...

High Resolution Quantitative Synaptic Proteome Profiling of Mouse Brain Regions After Auditory Discrimination Learning

聴覚弁別学習した後、マウス脳領域の高分解能定量的シナプスプロテオームプロファイリング

The molecular synaptic mechanisms underlying auditory learning and memory remain largely unknown. Here, the workflow of a proteomic study on auditory ...

Anatomically Inspired Three-dimensional Micro-tissue Engineered Neural Networks for Nervous System Reconstruction, Modulation, and Modeling

神経系の再構築、変調、モデリングのための解剖学的にインスパイアされた3次元マイクロ組織工学ニューラルネットワーク

Functional recovery rarely occurs&#160;following injury or disease-induced degeneration within the central nervous system (CNS)&#160;due to the inhibitory ...