Name: microdissection of mouse brain into functionally and anatomically different regions
Uploaded: 2021-02-15T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Microdissection of Mouse Brain into Functionally and Anatomically Different Regions at JoVE.com

Мы благодарим г-жу Сешмалини Сринивасан, г-на Стивена Батлера и г-жу Памелу Спеллман за экспериментальную помощь и г-жу Дану Юсеф за редактирование рукописи. Финансовая поддержка со стороны USAMRDC благодарна. Женевский фонд внес свой вклад в эту работу и был поддержан средствами Из Управления исследований военной и оперативной медицины III через Исследовательское управление армии США.
Отказ:
Материал был рассмотрен Институтом исследований армии Уолтера Рида. Нет никаких возражений против его представления и/или публикации. Мнения или утверждения, содержащиеся в настоящем документе, являются частными взглядами автора и не должны толковаться как официальные или как отражающие истинные взгляды Министерства армии или Министерства обороны. Исследования проводились в соответствии с утвержденным протоколом использования животных в аккредитованном AAALAC учреждении в соответствии с Законом о благополучии животных и другими федеральными законами и правилами, касающимися животных и экспериментов с участием животных, и придерживаются принципов, изложенных в Руководстве по уходу и использованию лабораторных животных, публикация NRC, издание 2011 года.

Обработка животных и экспериментальные процедуры проводились в соответствии с европейскими, национальными и институциональными руководящими принципами по уходу за животными. Все эксперименты на животных были одобрены Институциональным комитетом по уходу за животными и их использо?...

<ol>
	<li>Zeisel, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+Architecture+of+the+Mouse+Nervous+System.">Molecular Architecture of the Mouse Nervous System.</a> Cell. 174 (4), 999-1014 (2018).</li><li>Ackerman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Major Structures and Functions of the Brain. 2, (1992).</li><li>P, T. L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> StatPearls. , (2019).</li><li>Paramvir, T. L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> StatPearls. , (2019).</li><li>Javed, K., Reddy, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Neuroanatomy, Cerebral Cortex. , (2020).</li><li>Rakic, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evolution+of+the+neocortex:+a+perspective+from+developmental+biology.">Evolution of the neocortex: a perspective from developmental biology.</a> Nature Reviews Neuroscience. 10 (10), 724-735 (2009).</li><li>Fern&#225;ndez, V., Llinares-Benadero, C., Borrell, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cerebral+cortex+expansion+and+folding:+what+have+we+learned.">Cerebral cortex expansion and folding: what have we learned.</a> The EMBO Journal. 35 (10), 1021-1044 (2016).</li><li>Pessoa, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+brain+networks+and+brain+organization.">Understanding brain networks and brain organization.</a> Physics of Life Reviews. 11 (3), 400-435 (2014).</li><li>Mu, Q., Chen, Y., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deciphering+Brain+Complexity+Using+Single-cell+Sequencing.">Deciphering Brain Complexity Using Single-cell Sequencing.</a> Genomics, Proteomics &amp; Bioinformatics. 17 (4), 344-366 (2019).</li><li>Darmanis, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+survey+of+human+brain+transcriptome+diversity+at+the+single+cell+level.">A survey of human brain transcriptome diversity at the single cell level.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (23), 7285-7290 (2015).</li><li>Hodge, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conserved+cell+types+with+divergent+features+in+human+versus+mouse+cortex.">Conserved cell types with divergent features in human versus mouse cortex.</a> Nature. 573 (7772), 61-68 (2019).</li><li>Winrow, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Refined+anatomical+isolation+of+functional+sleep+circuits+exhibits+distinctive+regional+and+circadian+gene+transcriptional+profiles.">Refined anatomical isolation of functional sleep circuits exhibits distinctive regional and circadian gene transcriptional profiles.</a> Brain Research. 1271, 1-17 (2009).</li><li>Atkins, N., Miller, C. M., Owens, J. R., Turek, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-Laser+Capture+Microscopy+Approach+for+the+Microdissection+of+Discrete+Mouse+Brain+Regions+for+Total+RNA+Isolation+and+Downstream+Next-Generation+Sequencing+and+Gene+Expression+Profiling.">Non-Laser Capture Microscopy Approach for the Microdissection of Discrete Mouse Brain Regions for Total RNA Isolation and Downstream Next-Generation Sequencing and Gene Expression Profiling.</a> Journal of Visualized Experiments. (57), e3125 (2011).</li><li>Wager-Miller, J., Murphy Green, M., Shafique, H., Mackie, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collection+of+Frozen+Rodent+Brain+Regions+for+Downstream+Analyses.">Collection of Frozen Rodent Brain Regions for Downstream Analyses.</a> Journal of Visualized Experiments. (158), e60474 (2020).</li><li>Muhie, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+transcriptome+profiles+in+mouse+model+simulating+features+of+post-traumatic+stress+disorder.">Brain transcriptome profiles in mouse model simulating features of post-traumatic stress disorder.</a> Molecular Brain. 8, 14 (2015).</li><li>Hammamieh, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+model+of+repeated+exposures+to+conspecific+trained+aggressors+simulates+features+of+post-traumatic+stress+disorder.">Murine model of repeated exposures to conspecific trained aggressors simulates features of post-traumatic stress disorder.</a> Behavioural Brain Research. 235 (1), 55-66 (2012).</li><li>Paxinos, G., Franklin, K. B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The mouse brain in stereotaxic coordinates. Compact 3rd edn. , (2008).</li><li>Franklin, K., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Coronal Plates and Diagrams. , (2019).</li><li>Slotnick, B. M., Leonard, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereotaxic+atlas+of+the+albino+mouse+forebrain.+Rockville,+MD,+Alcohol,+Drug+Abuse+and+Mental+Health+Administration,+1975.">Stereotaxic atlas of the albino mouse forebrain. Rockville, MD, Alcohol, Drug Abuse and Mental Health Administration, 1975.</a> Annals of Neurology. 10 (4), 403-403 (1981).</li><li>Cajal, S. R., Swanson, N., Swanson, L. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Histologie Du Syst&#232;me Nerveux de L'homme Et Des Vert&#233;br&#233;s. Anglais. , (1995).</li><li>Spijker, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+Rodent+Brain+Regions.">Dissection of Rodent Brain Regions.</a> Neuromethods. 57, 13-26 (2011).</li><li>Wager-Miller, J., Murphy Green, M., Shafique, H., Mackie, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collection+of+Frozen+Rodent+Brain+Regions+for+Downstream+Analyses.">Collection of Frozen Rodent Brain Regions for Downstream Analyses.</a> Journal of Visualized Experiments. (158), e60474 (2020).</li><li>Sultan, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+Different+Areas+from+Mouse+Hippocampus.">Dissection of Different Areas from Mouse Hippocampus.</a> Bio Protocols. 3 (21), (2013).</li><li>Chakraborty, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+and+stress+history+interplay+in+emergence+of+PTSD-like+features.">Gene and stress history interplay in emergence of PTSD-like features.</a> Behavioural Brain Research. 292, 266-277 (2015).</li><li>Chiu, K., Lau, W. M., Lau, H. T., So, K. -. F., Chang, R. C. -. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micro-dissection+of+rat+brain+for+RNA+or+protein+extraction+from+specific+brain+region.">Micro-dissection of rat brain for RNA or protein extraction from specific brain region.</a> Journal of Visualized Experiments. (7), (2007).</li><li>Rajmohan, V., Mohandas, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+limbic+system.">The limbic system.</a> Indian Journal of Psychiatry. 49 (2), 132-139 (2007).</li></ol>

Мозг млекопитающих представляет собой сложный орган, состоящий из массива морфологически различных и функционально уникальных клеток с разнообразными молекулярными сигнатурами и несколькими областями, которые выполняют специализированные и дискретные функции. Процедура вскрытия, ...

Головной мозг, наряду со спинным мозгом и сетчаткой, составляет центральную нервную систему, которая выполняет сложное поведение, контролируемое специализированными, точно расположенными и взаимодействующими типами клеток по всему телу1. Мозг представляет собой сложный орган с миллиардами взаимосвязанных нейронов и глии с точной схемой, выполняющей многочисленные функции. Это двусторонняя структура с двумя различными долями и разнообразными клеточными компонентами2. Спинной мозг соединяет головной мозг с внешним миром и защищен костью, мозговыми оболочками и спинномозговой жидкостью и направляет сообщения в мозг и из него 2,3,4. Поверхность мозга, кора головного мозга, неровная и имеет отчетливые складки, называемые извилинами, и бороздки, называемые бороздами, которые разделяют мозг на функциональные центры5. Кора гладкая у млекопитающих с небольшим мозгом 6,7. Важно охарактеризовать и изучить архитектуру человеческого мозга, чтобы понять расстройства, связанные с различными областями мозга, а также его функциональными схемами. В последние годы исследования в области неврологии расширились, и для изучения структуры и функции мозга используются различные экспериментальные методы. Разработки в области молекулярной и системной биологии открыли новую эру изучения сложных отношений между структурами мозга и функционированием молекул. Кроме того, молекулярная биология, генетика и эпигенетика быстро расширяются, что позволяет нам продвигать наши знания об основных механизмах, связанных с функционированием систем. Эти анализы могут проводиться на гораздо более локализованной основе, чтобы помочь целенаправленно исследовать и разработать более эффективные методы лечения.
Мозг млекопитающих структурно определен в четко идентифицируемые дискретные области; однако функциональные и молекулярные сложности этих дискретных структур еще не ясно поняты. Многомерность и многослойность мозговой ткани затрудняет изучение этого ландшафта на функциональном уровне. Кроме того, тот факт, что несколько функций выполняются одной и той же структурой и наоборот, еще больше усложняет понимание мозга8. Крайне важно, чтобы экспериментальный подход, выполненный для структурной и функциональной характеристики областей мозга, использовал точные исследовательские методологии для достижения согласованности в выборке для корреляции нейроанатомической архитектуры с функцией. Сложность мозга была недавно объяснена с использованием секвенирования одиночных клеток 9,10, таких как височная извилина человеческого мозга, которая состоит из 75 различных типов клеток11. Сравнивая эти данные с данными из аналогичной области мозга мыши, исследование не только выявляет сходство в их архитектуре и типах клеток, но и представляет различия. Чтобы разгадать сложные механизмы, важно изучать различные области мозга с полной точностью. Сохраненные структуры и функции между мозгом человека и мыши позволяют использовать мышь в качестве предварительного суррогата для выяснения функции человеческого мозга и поведенческих результатов.
С развитием подходов системной биологии получение информации из дискретных областей мозга у грызунов стало ключевой процедурой в исследованиях нейробиологии. В то время как некоторые протоколы, такие как микродиссекция12 лазерного захвата, могут быть дорогостоящими, механические протоколы недороги и выполняются с использованием общедоступных инструментов13,14. Мы использовали несколько областей мозга для транскриптомных анализов15 и разработали практическую и быструю процедуру для пошагового рассечения областей мозга мыши шаг за шагом за короткое время. После вскрытия эти образцы могут быть сохранены сразу в холодных условиях для сохранения нуклеиновых кислот и белков этих тканей. Наш подход может быть выполнен быстрее, что приводит к высокой эффективности и позволяет снизить вероятность ухудшения состояния тканей. Это, в конечном счете, увеличивает шансы на создание высококачественных, воспроизводимых экспериментов с использованием тканей мозга.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Brain Removal</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deaver scissors</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-6762</td>
			<td>5.5&#34; straight sharp/sharp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deaver scissors</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-6763</td>
			<td>5.5&#34; curved sharp/sharp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delicate operating scissors</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-6703</td>
			<td>4.75&#34; curved sharp/sharp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Delicate operating scissors</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-6702</td>
			<td>4.75&#34; straight sharp/sharp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light operating scissors</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-6753</td>
			<td>5&#34; curved Sharp/Sharp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro spatula, radius and tapered flat ends</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>stainless steel mirror finish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating scissors 6.5&#34;</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-6846</td>
			<td>curved sharp/sharp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue forceps</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-8160</td>
			<td>4.5&#8221; 1X2 teeth 2mm tip width</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rongeur (optional)</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-8321 many styles to choose</td>
			<td>Lempert Rongeur 6.5&#34; 2X8mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pituitary Dissection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel handle</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-9843</td>
			<td>Scalpel Handle #3 Solid 4&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>and blades</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-9801-11</td>
			<td>Sterile Scalpel Blades:#11 Box 100 40mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Super fine forceps Inox</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-4955</td>
			<td>tip size 0.025 X 0.005 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain Dissection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>A magnification visor</td>
			<td>Penn Tool Col</td>
			<td>40-178-6</td>
			<td>2.2x Outer and 3.3x Inner Lens Magnification, Rectangular Magnifier</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection cold plate</td>
			<td>Cellpath.com</td>
			<td>JRI-0100-00A</td>
			<td>Iceberg cold plate &#38; base</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graefe forceps, full curve extra delicate</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-5138</td>
			<td>0.5 mm Tip 4&#8221; (10 cm) long</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light operating scissors</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-6753</td>
			<td>5&#34; curved sharp/sharp</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel handle</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-9843 (repeated above)</td>
			<td>Scalpel Handle #3 Solid 4&#34;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>and blades (especially #11)</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-9801-11 (repeated above)</td>
			<td>Sterile Scalpel Blades:#11 Box 100 40mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spatula</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>MS-SQRD9-4</td>
			<td>Double Ended Spatula Square AND Round End</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue forceps</td>
			<td>Roboz Surgical Store</td>
			<td>RS-8160 (repeated above)</td>
			<td>4.5&#8221; 1X2 teeth</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

microdissection of mouse brain into functionally and anatomically different regions

Мозг является командным центром нервной системы млекопитающих и органом с огромной структурной сложностью. Защищенный внутри черепа, мозг состоит из внешнего покрытия серого вещества над полушариями, известного как кора головного мозга. Под этим слоем находятся многие другие специализированные структуры, которые необходимы для множественных явлений, важных для существования. Получение образцов конкретных грубых областей мозга требует быстрых и точных этапов рассечения. Понятно, что на микроскопическом уровне существует много субрегионов и, вероятно, пересекают произвольные региональные границы, которые мы налагаем с целью этого вскрытия.
Мышиные модели обычно используются для изучения функций и заболеваний человеческого мозга. Изменения в паттернах экспрессии генов могут быть ограничены конкретными областями мозга, нацеленными на определенный фенотип в зависимости от болезненного состояния. Таким образом, большое значение имеет изучение регуляции транскрипции в отношении ее четко определенной структурной организации. Полное понимание мозга требует изучения различных областей мозга, определения связей и выявления ключевых различий в деятельности каждой из этих областей мозга. Более полное понимание каждой из этих отдельных областей может проложить путь для новых и улучшенных методов лечения в области неврологии. Здесь мы обсуждаем пошаговую методологию рассечения мозга мыши на шестнадцать различных областей. В этой процедуре мы сосредоточились на удалении и рассечении мозга самцов мышей C57Bl / 6J (6-8 недель) на несколько областей с использованием нейроанатомических ориентиров для выявления и выборки дискретных функционально значимых и поведенчески значимых областей мозга. Эта работа поможет заложить прочный фундамент в области нейробиологии, что приведет к более целенаправленным подходам в более глубоком понимании функции мозга.

Наше понимание сложной структуры и функции мозга быстро развивается и улучшается. Мозг содержит несколько различных областей, и построение молекулярной карты может помочь нам лучше понять, как работает мозг. В этой статье мы обсудили рассечение мозга мыши на несколько различных облас?...

Watch this Scientific Journal Video about Microdissection of Mouse Brain into Functionally and Anatomically Different Regions at JoVE.com

Microdissection of Mouse Brain into Functionally and Anatomically Different Regions

Мы представляем практический, пошаговый, быстрый протокол для удаления мозга мыши и рассечения дискретных областей из свежей мозговой ткани. Получение областей мозга для молекулярного анализа стало рутиной во многих лабораториях нейробиологии. Эти области мозга немедленно замораживаются для получения высококачественных транскриптомных данных для анализа на системном уровне.

Микродиссекция мозга мыши на функционально и анатомически различные области

The brain is the command center for the mammalian nervous system and an organ with enormous structural complexity. Protected within the skull, the brain ...

Изучение различных областей мозга является ступенькой к пониманию молекулярной и структурной сложности мозга. Этот протокол описывает систематическое рассечение мозга мыши для выделения отдельных областей мозга. С точки зрения анатомии мозга, это нисходящий подход, который можно легко воспроизвести.Преимущества этого протокола двоякие. Во-первых, такой подход дает возможность понять молекулярные основы небольших, но критических областей мозга. Во-вторых, весь этот процесс рассечения достаточно короткий, чтобы обеспечить сохранение молекулярной целостности, что является критической предпосылкой обратного и молекулярного анализа.Эта процедура включает в себя практику и деликатное обращение. Время здесь очень важно для поддержания структурных ориентиров и может быть достигнуто при надлежащем обучении и практике. Продемонстрировать процедуру удаления мозга мыши будет Сейд Мухи, химик-исследователь и биоинформатик из нашей лаборатории.Дальнейшую демонстрацию процедуры рассечения мозга мыши будет Джеймс Мейерхофф, нейробиолог из нашей лаборатории. Для начала очистите и удалите кожу для хорошего захвата. Зажмите верхнюю челюсть обезглавленной головы гемостатом и используйте марлю, чтобы отразить кожу головы рострально.Вставьте тонкие изогнутые ножницы в отверстие magnum, чтобы отделить прилипшие мозговые оболочки. Затем вставьте ножницы в отверстие основания черепа, где проходит спинной мозг с лезвием, направленным вертикально, но параллельным и прижимающимся к внутренней поверхности базальной пластинчатой кости, вращая лезвие на 45 градусов в левую сторону, а затем в правую сторону. Удалите затылочную кость во внутритеменной кости, чтобы обнажить мозжечок.Выдвинуть ножницы рострально вдоль среднего сагиттального шва до брегмы и разрезать его, подняв вверх, чтобы избежать разрыва коры головного мозга. По мере того, как теменные кости поднимаются, определите и отрежьте оставшиеся менингеальные прикрепления. Сделайте два параллельных разреза в сагиттальной плоскости и удалите фрагменты лобной кости, избегая разрыва мозговой поверхности.Разрезая менингеальные прикрепления и черепные нервы, переверните череп, чтобы гравитация помогла в удалении мозга в небольшую чашку, предварительно заполненную солевым раствором. Держите слуховую буллу нетронутой, чтобы анатомия гипофиза была идентифицируемой. Сделайте крайне маленький парасаггитальный разрез с обеих сторон в гребне мембранной палатки, удерживающей гипофиз на своем месте, и поднимите заднюю долю гипофиза ультратонкими щипцами.Делают сагиттальный разрез между боковыми краями передней доли гипофиза в ближайшем тройничном нерве, затем вынимают переднюю долю гипофиза. Направьте источник белого света на ткань. Поместите мозг на предварительно охлажденный блок из нержавеющей стали и держите блок холодным, окружив его льдом в ледяном солевом растворе.Периодически увлажняйте ткани ледяным солевым раствором для сохранения структур. Расположите мозг так, чтобы кора головного мозга была обращена вверх. Используя небольшие изогнутые щипцы, удалите мозжечок.Используя дорсальный подход, сдвиньте закрытые лопасти небольших изогнутых щипцов под мозолистым телом и осторожно распределите его, чтобы втянуть неокортекс двусторонне, чтобы сохранить критически заметные ориентиры средней линии. Конечная сторона вверх, такие структуры, как оптический хиазм, гипоталамус, обонятельные луковицы, продолговатый мозг, гипофиз и мост понтина будут видны. Попробуйте разделить полушария.Переверните вентральный участок мозга вверх и сделайте средний сагиттальный разрез, начиная с дорсума между обонятельными луковицами в полушариях головного мозга. Удалите продолговатый мозг, а затем аккуратно разделите два полушария. Затем сделайте корональный разрез на внутренней окраине пруда, чтобы получить задний мозг и отделить продолговатый мозг на заднем краю прудов.Переверните ткани мозга для тщательного разделения двух полушарий головного мозга. Удалите обонятельную луковицу на этом этапе. Делают корональный разрез на один миллиметр впереди гену мозолистого тела и удаляют вспомогательные обонятельные луковицы с последующим разделением медиальной и латеральной префронтальной коры.Частично разрезать горизонтально или коронально через поперечную часть передней комиссуры от средней линии под передним рогом бокового желудочка, чтобы освободить септальное ядро дорсально и вентральное полосатое вентральное. Удалите небольшое количество коры с боковой поверхности, чтобы удалить ядро и обонятельный бугорок. Отделите ростральную часть полосатого тела от вышележащей коры с помощью изогнутого скальпеля, разрезанного сразу за внешней капсулой.Определите ядра перегородки или перегородки и выделите их из этого отдела. Сделайте изогнутый разрез, чтобы отделить гипоталамус на этом этапе. Это будет сделано с использованием частичного коронального разреза сзади к маммиллярным телам, простирающегося только так далеко, как гипоталамическая борозда.Затем освободите поперечное сечение гипоталамуса с парасагиттальным срезом по длине гипоталамической борозды. Выявить боковые желудочки для выявления дополнительных внутрилимбических связей в остальных компонентах лимбической системы. На внутренней части внутренней коры наблюдается веерообразная структура после вскрытия желудочка.Используйте веерообразную структуру в энторинальной коре, чтобы определить края с целью рассечения, а затем идентифицировать и удалить миндалину, энторинальную кору, заднюю поясную кору и гиппокамп. Подтвердить идентификацию таламуса можно визуализацией stria medullaris на его дорсальной поверхности, простирающейся в средней линии ростральной кортикальной плоскости. Отделите таламус полностью от среднего мозга корональным разрезом.Этот протокол может быть использован для немедленного удаления мозга из черепа с последующим рассечением. Рассеченные ткани могут быть сохранены и обработаны позже в зависимости от требований исследования. Извлеченная РНК из нескольких рассеченных тканей может быть проанализирована на экспрессию генов.Репрезентативные результаты были получены с использованием собранного мозга, который хранился при минус 80 градусах Цельсия в течение нескольких месяцев до извлечения РНК. Различные области мозга вместе с данными о весе были собраны в рамках модели ПТСР, подвергшейся воздействию социального стресса агрессора. Здесь показаны концентрации РНК и спектрофотометрические показания.Следуя этому протоколу, убедитесь, что ткани постоянно охлаждаются, удерживая мозг на ледяной стальной блоке и периодически обливая ткань ледяным физиологическим раствором. Как только ткани собраны и немедленно заморожены, их можно использовать для анализов, таких как транскриптомика, метаболомика и протеомика в более позднее время.

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Anatomy and Physiology

Neuroscience

Unit 1

Anatomy of the Central and Peripheral Nervous System

SCIENTISTS IN ACTION

Non-Laser Capture Microscopy Approach for the Microdissection of Discrete Mouse Brain Regions for Total RNA Isolation and Downstream Next-Generation Sequencing and Gene Expression Profiling

Non-Laser Capture Microscopy Approach for the Microdissection of Discrete Mouse Brain Regions for Total RNA Isolation and Downstream Next-Generation Sequencing and Gene Expression Profiling  |

Номера для лазерной микроскопии Захват подход к микродиссекция дискретных областей мозга мыши для полной изоляции РНК и переработки нового поколения Секвенирование и профилирование экспрессии генов

As technological platforms, approaches such as next-generation sequencing, microarray, and qRT-PCR have great promise for expanding our understanding of ...

Optimized Analysis of DNA Methylation and Gene Expression from Small, Anatomically-defined Areas of the Brain

Оптимизирован анализ метилирования ДНК и экспрессии генов с малым, Анатомически определенных областях мозга

Exposure to diet, drugs and early life adversity during sensitive windows of life 1,2 can lead to lasting changes in gene expression that contribute to ...

Mapping Cortical Dynamics Using Simultaneous MEG/EEG and Anatomically-constrained Minimum-norm Estimates: an Auditory Attention Example

Сопоставление корковой динамики Одновременное использование MEG / ЭЭГ и анатомически ограничен минимальной нормой Оценки: Пример слухового внимания

Magneto- and electroencephalography (MEG/EEG) are neuroimaging techniques that provide a high temporal resolution particularly suitable to investigate the ...

Growing Neural Stem Cells from Conventional and Nonconventional Regions of the Adult Rodent Brain

Выращивание нервные стволовые клетки из обычных и нетрадиционных областях мозга взрослых грызунов

Recent work demonstrates that central nervous system (CNS) regeneration and tumorigenesis involves populations of stem cells (SCs) resident within the ...

Telomerase Activity in the Various Regions of Mouse Brain: Non-Radioactive Telomerase Repeat Amplification Protocol (TRAP) Assay

Telomerase Activity in the Various Regions of Mouse Brain: Non-Radioactive Telomerase Repeat Amplification Protocol TRAP Assay

Активности теломеразы в различных регионах мозга мыши: нерадиоактивный теломеразы повторить Amplification протокол (TRAP) Анализ

Telomerase, a ribonucleoprotein, is responsible for maintaining the telomere length and therefore promoting genomic integrity, proliferation, and ...

Design, Surface Treatment, Cellular Plating, and Culturing of Modular Neuronal Networks Composed of Functionally Inter-connected Circuits

Дизайн, обработка поверхности, сотовая Покрытие и культивированию модульных нейронных сетей, состоящих из Функционально взаимосвязанных схем

The brain operates through the coordinated activation and the dynamic communication of neuronal assemblies. A major open question is how a vast repertoire ...

Stereotaxic Infusion of Oligomeric Amyloid-beta into the Mouse Hippocampus

Стереотаксическая Настой олигомерных бета-амилоида в гиппокампе мыши

Alzheimer&#8217;s disease is a neurodegenerative disease affecting the aging population. A key neuropathological feature of the disease is the ...

High Resolution Quantitative Synaptic Proteome Profiling of Mouse Brain Regions After Auditory Discrimination Learning

High Resolution Количественный Synaptic Протеом профилирование мозга мыши регионов После обучения Слуховые дискриминации

The molecular synaptic mechanisms underlying auditory learning and memory remain largely unknown. Here, the workflow of a proteomic study on auditory ...

Anatomically Inspired Three-dimensional Micro-tissue Engineered Neural Networks for Nervous System Reconstruction, Modulation, and Modeling

Анатомически вдохновленные трехмерные микротамовые инженерные нейронные сети для восстановления, модуляции и моделирования нервной системы

Functional recovery rarely occurs&#160;following injury or disease-induced degeneration within the central nervous system (CNS)&#160;due to the inhibitory ...