Name: functionalized spirocyclic heterocycle synthesis and cytotoxicity assay
Uploaded: 2021-02-09T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Functionalized Spirocyclic Heterocycle Synthesis and Cytotoxicity Assay at JoVE.com

Dette arbejde blev finansieret af et tilskud fra fakultetets forskningsråd til KSH (Office of Research and Grants, Azusa Pacific University-USA). A.N.G. og J.F.M. er modtagere af Scholarly Undergraduate Research Experience (SURE) Fellowship. S.K.M. og B.M.R. er modtagere af STEM Research Fellowship Grants (Center for Research in Science, Azusa Pacific University-USA). Vi er taknemmelige for Dr. Matthew Berezuk og Dr. Philip Cox for vejledning om bioassays.

BEMÆRK: Flere kemikalier og biologiske reagenser, der anvendes i denne protokol, er giftige og kræftfremkaldende. Se relevante sikkerhedsdatablade (MSDS) inden brug. Brug passende personlige beskyttelsesudstyr (sikkerheds- og sundhedsadministrationsgodkendte sikkerhedsbriller, korrekte handsker, laboratoriefrakker, bukser i fuld længde og sko med lukket tå), inden eksperimentet startes. Derudover skal du vedtage passende sikkerhedspraksis ved udførelse af syntese og håndtering af giftige kemikalier og reagenser (r?...

<ol>
	<li>Shangary, S., Wang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small-molecule+inhibitors+of+the+MDM2-p53+protein-protein+interaction+to+reactivate+p53+function:+a+novel+approach+for+cancer+therapy.">Small-molecule inhibitors of the MDM2-p53 protein-protein interaction to reactivate p53 function: a novel approach for cancer therapy.</a> Annual Review of Pharmacology and Toxicology. 49, 223-241 (2009).</li><li>Zhao, Y., Aguilar, A., Bernard, D., Wang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small-molecule+inhibitors+of+the+MDM2-p53+protein-protein+interaction+(MDM2+inhibitors)+in+clinical+trials+for+cancer+treatment.">Small-molecule inhibitors of the MDM2-p53 protein-protein interaction (MDM2 inhibitors) in clinical trials for cancer treatment.</a> Journal of Medicinal Chemistry. 58 (3), 1038-1052 (2015).</li><li>Paolo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+effective+virtual+screening+protocol+to+identify+promising+p53-MDM2+inhibitors.">An effective virtual screening protocol to identify promising p53-MDM2 inhibitors.</a> Journal of Chemical Information and Modeling. 56 (6), 1216-1227 (2016).</li><li>Shieh, S. Y., Ikeda, M., Taya, Y., Prives, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+damage-induced+phosphorylation+of+p53+alleviates+inhibition+by+MDM2.">DNA damage-induced phosphorylation of p53 alleviates inhibition by MDM2.</a> Cell. 91 (3), 325-334 (1997).</li><li>Hwang, B. J., Ford, J. M., Hanawalt, P. C., Chu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+the+p48+xeroderma+pigmentosum+gene+is+p53+dependent+and+is+involved+in+global+genomic+repair.">Expression of the p48 xeroderma pigmentosum gene is p53 dependent and is involved in global genomic repair.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 96 (2), 424-428 (1999).</li><li>Oliner, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oncoprotein+MDM2+conceals+the+activation+domain+of+tumor+suppressor+p53.">Oncoprotein MDM2 conceals the activation domain of tumor suppressor p53.</a> Nature. 362, 857-860 (1993).</li><li>Nag, S., Qin, J., Srivenugopal, K. S., Wang, M., Zhang, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+MDM2-p53+pathway+revisited.">The MDM2-p53 pathway revisited.</a> Journal of Biomedical Research. 27 (4), 254-271 (2013).</li><li>Bond, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+nucleotide+polymorphism+in+the+MDM2+promoter+attenuates+the+p53+tumor+suppressor+pathway+and+accelerates+tumor+formation+in+humans.">A single nucleotide polymorphism in the MDM2 promoter attenuates the p53 tumor suppressor pathway and accelerates tumor formation in humans.</a> Cell. 119 (5), 591-602 (2004).</li><li>Isobe, M., Emanuel, B. S., Givol, D., Oren, M., Croce, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+gene+for+human+p53+tumor+antigen+to+band+17p13.">Localization of gene for human p53 tumor antigen to band 17p13.</a> Nature. 320 (6057), 84-85 (1986).</li><li>Gupta, A. K., Bharadwaj, M., Kumar, A., Mehrotra, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spiro-oxindoles+as+a+promising+class+of+small+molecules+inhibitors+of+p53-MDM2+interaction+useful+in+targeted+cancer+therapy.">Spiro-oxindoles as a promising class of small molecules inhibitors of p53-MDM2 interaction useful in targeted cancer therapy.</a> Topics in Current Chemistry. 375 (1), 1-25 (2017).</li><li>Griffin, S. A., Drisko, C. R., Huang, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tricyclic+heterocycles+as+precursors+to+functionalized+spirocyclic+oximes.">Tricyclic heterocycles as precursors to functionalized spirocyclic oximes.</a> Tetrahedron Letters. 58, 4551-4553 (2017).</li><li>Drisko, C. R., Griffin, S. A., Huang, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solid-phase+synthesis+of+[4.4]spirocyclic+oximes.">Solid-phase synthesis of [4.4]spirocyclic oximes.</a> Journal of Visualized Experiments. (144), e58508 (2019).</li><li>Lawrence, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Linked+parallel+synthesis+and+MTT+bioassay+screening+of+substituted+chalcones.">Linked parallel synthesis and MTT bioassay screening of substituted chalcones.</a> Journal of Combinatorial Chemistry. 3 (5), 421-426 (2001).</li><li>. MTT assay protocol Available from: <a target="_blank" href="https://www.abcam.com/kits/mtt-assay-protocol">https://www.abcam.com/kits/mtt-assay-protocol</a> (2020)</li></ol>

Syntesen af de spirocykliske forbindelser var baseret på tidligere forskning udført af dette laboratorium, men med nogle ændringer (figur 1)11,12. Forløbet af hvert reaktionstrin blev overvåget ved IR-spektroskopi. Michael tilføjelse af REM-linker 1 med furfurylamin gav polymerbundet 2 (IR 1722 cm-1 → 1731 cm-1). Fra den foregående rappo...

Småmolekylehæmning af interaktionen mellem E3 ubiquitin-ligase mus dobbelt minut 2 homolog (MDM2) med p53 er kendt for at genoprette p53-medieret induktion af tumorcelleapoptose 1,2,3. MDM2 er en negativ regulator af p53-vejen og er ofte overudtrykt i kræftceller 4,5,6,7,8,9. Nylige krystallografiske og biokemiske undersøgelser har afsløret, at små molekyler indeholdende en spirocyklisk ramme effektivt kan hæmme MDM2-p53-interaktioner10. Den spirocykliske ramme (figur 1, skraveret i blåt) betragtes som et privilegeret motiv, da derivatisering af dette stive ortogonale ringsystem har ført til opdagelsen af nye terapeutiske lægemidler. Adgang til denne interessante arkitektur udgør en udfordring, når man bruger traditionelle organiske synteseteknikker. Selvom de terapeutiske virkninger af spirocykliske molekyler i biologiske systemer er blevet undersøgt, er syntese af disse molekyler stadig en besværlig proces. Uønskede sideprodukter, brug af barske forhold og farlige overgangsmetaller er ofte problematiske.
Den potentielle anvendelse af det spirocykliske motiv i lægemiddeludvikling førte til udviklingen af en protokol, der anvendte fastfasesyntese til at generere et bibliotek af molekyler med motivet ud over andre udskiftelige funktionelle grupper11,12. Adskillelsen af produkter og reaktanter mellem trin kunne opnås ved blot at anvende en REM-linker fastgjort til en harpiksperle og en fastfasefilterbeholder. Dette ville reducere trin og potentielt øge udbyttet. Denne syntetiske tilgang kan producere en lang række potentielle lægemiddelkandidater. Imidlertid ville effektiviteten af disse molekyler i et biologisk system kræve yderligere undersøgelse.
For at bestemme cytotoksiciteten af disse spirocykliske forbindelser blev MTT-assayet13,14 anvendt. Denne metode måler cellelevedygtighed og kan bruges til indirekte at bestemme cellecytotoksicitet. Forskellige koncentrationer af hæmmerne blev tilsat til dyrkede celler i en 96-brøndsplade, og andelen af levende celler blev målt ved kolorimetrisk analyse af omfanget af reduktion af gul MTT ved mitokondrie dehydrogenaser til den lilla formazanforbindelse (figur 2). Aktiviteten rapporteres oftest som en IC 50-værdi - den koncentration, hvor cellevækst hæmmes med50% i forhold til en ubehandlet kontrol. Dette papir beskriver protokollen for MTT-analysen og de foreløbige resultater af disse nye spirocykliske molekyler.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>CELLS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>COS-7 cells (ATCC CRL-1651)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1651</td>
			<td>African green monkey kidney cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHEMICALS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-Bromooctane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>152951</td>
			<td>Alkyl-halide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Allylbromide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>337528</td>
			<td>Alkyl-halide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benzylbromide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B17905</td>
			<td>Alkyl-halide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cisplatin</td>
			<td>Cayman Chemical</td>
			<td>13119</td>
			<td>Cytotoxicity control</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichloromethane (DCM)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>270997</td>
			<td>Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethylformamide (DMF)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>227056</td>
			<td>Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethylsulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>276855</td>
			<td>Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, high glucose, with L-glutamine</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>25-500</td>
			<td>Cell culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS (Fetal bovine serum)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F4135</td>
			<td>Cell culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Furfurylamine</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>119800050</td>
			<td>reagent&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodomethane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>289566</td>
			<td>Alkyl-halide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>34860</td>
			<td>Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTT ((3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-Diphenyltetrazolium Bromide)</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>Calbiochem 475989-1GM</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>25-507</td>
			<td>Cell culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>REM Resin</td>
			<td>Nova Biochem</td>
			<td>8551010005</td>
			<td>Polymer support; 0.500 mmol/g loading</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>trans-&#946;-nitrostyrene</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N26806</td>
			<td>Nitro-olefin reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toluene</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>244511</td>
			<td>Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triethylamine (TEA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T0886</td>
			<td>Reagent for beta-elimination</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trimethylsilyl chloride (TMSCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>386529</td>
			<td>Reagent; CAUTION - highly volatile; creates HCl gas</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GLASSWARE/INSTRUMENTATION</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 mL solid-phase reaction vessel</td>
			<td>Chemglass</td>
			<td>CG-1861-02</td>
			<td>Glassware with filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 Well plate reader</td>
			<td>Promega (Turner Biosystems)</td>
			<td>9310-011</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AVANCE III NMR Spectrometer</td>
			<td>Bruker</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Instrument; 300 MHz; Solvents: CDCl3 and CD3OH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific Nicole iS5</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>IQLAADGAAGFAHDMAZA</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wrist-Action Shaker</td>
			<td>Burrell Scientific</td>
			<td>757950819</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

functionalized spirocyclic heterocycle synthesis and cytotoxicity assay

Spirocykliske heterocykler er for nylig blevet rapporteret i litteraturen for at være potentielle lægemidler til kræftbehandling. Syntesen af disse nye ortogonale ringsystemer er udfordrende. En effektiv metode til syntetisering af disse forbindelser blev for nylig offentliggjort, der beskrev fastfasesyntesen i fire trin snarere end de tidligere rapporterede fem trin. Fordelen ved denne kortere syntese er eliminering af brugen af giftige reagenser. Regenererende Michael (REM) linkerbaseret harpiks med lav belastning viste sig at være afgørende i syntesen, da versioner med høj belastning forhindrede tilsætning af reagenser indeholdende omfangsrige phenyl- og aromatiske sidekæder. Det kolorimetriske 3-(4′,5′-dimethylthiazol-2′-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromid (MTT) assay blev anvendt til at undersøge cytotoksiciteten af mikromolære koncentrationer af disse nye spirocykliske molekyler in vitro. MTT er let tilgængelig kommercielt og producerer relativt hurtige, pålidelige resultater, hvilket gør dette assay ideelt til disse spirocykliske heterocykler. Ortogonale ringstrukturer samt furfurylamin (en forløber i syntesemetoden indeholdende et lignende 5-mands ringmotiv) blev testet.

Spirocykliske oximer 6 og 7 blev syntetiseret ved hjælp af en modificeret protokol (figur 1). Michael tilsætning af furfurylamin til en REM-linker 1b gav polymerbundet harpiks 2. Reaktionens forløb blev overvåget ved infrarød (IR) spektroskopi ved at detektere forsvinden af den α,β-umættede ester ved 1722 cm-1 (figur 3). Spirocyklisk bundet harpiks 4 blev dannet fra 2 via et forbigående mellemprodukt 3. Methanolhydrolyse af 4 producerede 3-[(...

Watch this Scientific Journal Video about Functionalized Spirocyclic Heterocycle Synthesis and Cytotoxicity Assay at JoVE.com

Functionalized Spirocyclic Heterocycle Synthesis and Cytotoxicity Assay

Her beskriver vi et bioassay ved hjælp af 3-(4′,5′-dimethylthiazol-2′-yl)-2,5- diphenyltetrazoliumbromid (MTT) for at teste tidligere syntetiserede spirocykliske oximer.

Funktionaliseret spirosyklisk heterocyklussyntese og cytotoksicitetsanalyse

Spirocyclic heterocycles have recently been reported in literature to be potential drugs for cancer therapy. The synthesis of these novel orthogonal ring ...

Denne protokol anvender en genanvendelig og modificeret metode til fremstilling af spirocykliske forbindelser. MTT-analysen hjælper med at besvare spørgsmålet vedrørende cytotoksiciteten af disse nye molekyler. Denne teknik fremstiller nye modificerbare molekyler ved hjælp af et regenererende udgangsmateriale.MTT-analysen giver relativt hurtig og let at analysere biologiske resultater Begynd med at udføre fastfasesyntese af spirocykliske heterocyklusser seks og syv, som tidligere demonstreret. Forbered 20 ml af en fem milligram per milliliter MTT-opløsning ved hjælp af steril PBS som fortyndingsmiddel. Filtrer og opbevar opløsningen ved minus 20 grader Celsius.Forbered derefter en en-til-en-fortynding af MTT-opløsningen i DMEM. Der fremstilles en milliliter hver af stamopløsningerne i 1,5 ml mikrocentrifugerør af testforbindelser i DMSO. Opbevar dem ved minus 20 grader Celsius.Der fremstilles 200 mikroliter pr. dosis af arbejdsopløsningerne af testforbindelser ved fortynding af stamkoncentrationer. En til 1000 i serumfrit medium. I vævskulturen behandlede COS syv celler i komplet medium på fladbundet vævskultur 96 brøndplader i en koncentration på 4.000 celler pr. 200 mikroliter pr. Brønd.Brug af en flerkanals pipeter. Inkuber cellerne i 24 timer ved 37 grader Celsius i en atmosfære indeholdende 5% kuldioxid. Den næste dag aspireres supernatanten fra brøndene ved hjælp af en glasgræspipette fastgjort til en vakuumpumpe.Doser cellerne i tre eksemplarer med testforbindelserne ved hjælp af de tidligere fremstillede arbejdsopløsninger. Returner derefter cellerne til inkubatoren. Efter 24 timer opsuges supernatanten fra brøndene og tilsættes 200 mikroliter MTT-opløsning til hver brønd.Inkuber pladen i fire timer. Opsug forsigtigt supernatanten fra brøndene uden at forstyrre de lilla formazane krystaller. Tilsæt 200 mikroliter DMSO til hver brønd for at opløse krystallerne.Derefter inkuberes pladen ved stuetemperatur i 15 minutter. Absorbansen for hver brønd måles ved 590 eller 600 nanometer ved hjælp af en 96 brøndpladelæser. Brug brønde uden celler som baggrund og gennemsnit absorbansværdien.Spirocykliske goxsømme seks og syv blev syntetiseret ved hjælp af en modificeret protokol. Reaktionens forløb blev overvåget ved at detektere forsvinden af alfa beta umættet Esther ved hjælp af infrarød spektroskopi. MTT-analysen blev brugt til bestemmelse af cellelevedygtighed.Cisplatin, som er kendt for at fremkalde celledød ved høje koncentrationer, tjente som en positiv kontrol. Som forventet, jo højere koncentration af cisplatin, jo lavere er cellelevedygtigheden. MTT-analysen blev derefter brugt til at teste de spirocykliske forbindelser seks og syv og furfurylamin.Furfurylamin og spirocyklisk gox-søm seks viste lignende cytotoksicitet. Imidlertid var toksiciteten af spirocyklisk forbindelse syv mærkbart større end for furfurylamin og seks. Når du forsøger denne protokol, skal du huske på, at N-alkylering udført ved hjælp af omfangsrige acylhalogenider viste sig at reducere hastigheden af beta-eliminering og dermed reducere produktudbyttet.

Research

JoVE Journal

Biology

Optimization of the Ugi Reaction Using Parallel Synthesis and Automated Liquid Handling

The optimization of a Ugi reaction involving the mixing of furfurylamine, benzaldehyde, boc-glycine and t-butylisocyanide is described.  Triplicate runs ...

RNA Isolation from Embryonic Zebrafish and cDNA Synthesis for Gene Expression Analysis

Many important and complex laboratory procedures require an input of high quality, intact RNA.  A degraded sample or the presence of impurities can lead ...

Synthesis and Calibration of Phosphorescent Nanoprobes for Oxygen Imaging in Biological Systems

Oxygen measurement by phosphorescence quenching [1, 2] consists of the following steps: 1) the probe is delivered into the medium of interest (e.g. blood ...

Microwave-assisted One-pot Synthesis of N-succinimidyl-4-[18F]fluorobenzoate ([18F]SFB)

Microwave-assisted One-pot Synthesis of N-succinimidyl-4-[18F]fluorobenzoate [18F]SFB

Biomolecules, including peptides,1-9 proteins,10,11 and antibodies and their engineered fragments,12-14 are gaining importance as both potential ...

Intracellular Refolding Assay

Intracellulære hvorved man genfolder Assay

This protocol describes a method to measure the enzymatic activity of molecular chaperones in a cell-based system and the possible effects of compounds ...

Solid Phase Synthesis of a Functionalized Bis-Peptide Using "Safety Catch" Methodology

Fastfase-syntese af en funktionaliseret Bis-peptid ved anvendelse af &quot;sikkerheds&quot; Metode

In 1962, R.B. Merrifield published the first procedure using solid-phase peptide synthesis as a novel route to efficiently synthesize peptides. This ...

Autonomously Bioluminescent Mammalian Cells for Continuous and Real-time Monitoring of Cytotoxicity

Autonomt Bioluminescent pattedvrceller for vedvarende og Real-time overvågning af cytotoksicitet

Mammalian  cell-based in vitro assays have been  widely employed as alternatives to animal testing for toxicological studies but  have been limited due to ...

Rapid Synthesis and Screening of Chemically Activated Transcription Factors with GFP-based Reporters

Hurtig Syntese og Screening af kemisk aktiveret transkriptionsfaktorer med GFP-baserede Journalister

Synthetic biology aims to rationally design and build synthetic circuits with desired quantitative properties, as well as provide tools to interrogate the ...

Analysis of Global RNA Synthesis at the Single Cell Level following Hypoxia

Analyse af Global RNA-syntese på enkelt celle niveau efter Hypoxia

Hypoxia or lowering of the oxygen availability is involved in many physiological and pathological processes. At the molecular level, cells initiate a ...

Measurement of Heme Synthesis Levels in Mammalian Cells

Måling af hæmoglobinsyntese Niveauer i pattedyrceller

Heme serves as the prosthetic group for a wide variety of proteins known as hemoproteins, such as hemoglobin, myoglobin and cytochromes. It is involved in ...