Name: functionalized spirocyclic heterocycle synthesis and cytotoxicity assay
Uploaded: 2021-02-09T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Functionalized Spirocyclic Heterocycle Synthesis and Cytotoxicity Assay at JoVE.com

Dette arbeidet ble finansiert av et stipend fra fakultetets forskningsråd til K.S.H. (Office of Research and Grants, Azusa Pacific University-USA). A.N.G. og J.F.M. er mottakere av Scholarly Undergraduate Research Experience (SURE) Fellowship. S.K.M. og B.M.R. er mottakere av STEM Research Fellowship Grants (Center for Research in Science, Azusa Pacific University-USA). Vi er takknemlige for Dr. Matthew Berezuk og Dr. Philip Cox for veiledning om bioassays.

MERK: Flere kjemikalier og biologiske reagenser som brukes i denne protokollen er giftige og kreftfremkallende. Rådfør deg med relevante sikkerhetsdatablad (MSDS) før bruk. Bruk passende personlig verneutstyr (sikkerhetsbriller godkjent av Arbeids- og helsedirektoratet, riktige hansker, laboratoriefrakker, bukser i full lengde og sko med lukket tå) før du starter eksperimentet. I tillegg vedta passende sikkerhetspraksis når du utfører syntese og håndtering av giftige kjemikalier og reagenser (avtrekksvifte).
...

<ol>
	<li>Shangary, S., Wang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small-molecule+inhibitors+of+the+MDM2-p53+protein-protein+interaction+to+reactivate+p53+function:+a+novel+approach+for+cancer+therapy.">Small-molecule inhibitors of the MDM2-p53 protein-protein interaction to reactivate p53 function: a novel approach for cancer therapy.</a> Annual Review of Pharmacology and Toxicology. 49, 223-241 (2009).</li><li>Zhao, Y., Aguilar, A., Bernard, D., Wang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small-molecule+inhibitors+of+the+MDM2-p53+protein-protein+interaction+(MDM2+inhibitors)+in+clinical+trials+for+cancer+treatment.">Small-molecule inhibitors of the MDM2-p53 protein-protein interaction (MDM2 inhibitors) in clinical trials for cancer treatment.</a> Journal of Medicinal Chemistry. 58 (3), 1038-1052 (2015).</li><li>Paolo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+effective+virtual+screening+protocol+to+identify+promising+p53-MDM2+inhibitors.">An effective virtual screening protocol to identify promising p53-MDM2 inhibitors.</a> Journal of Chemical Information and Modeling. 56 (6), 1216-1227 (2016).</li><li>Shieh, S. Y., Ikeda, M., Taya, Y., Prives, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+damage-induced+phosphorylation+of+p53+alleviates+inhibition+by+MDM2.">DNA damage-induced phosphorylation of p53 alleviates inhibition by MDM2.</a> Cell. 91 (3), 325-334 (1997).</li><li>Hwang, B. J., Ford, J. M., Hanawalt, P. C., Chu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+the+p48+xeroderma+pigmentosum+gene+is+p53+dependent+and+is+involved+in+global+genomic+repair.">Expression of the p48 xeroderma pigmentosum gene is p53 dependent and is involved in global genomic repair.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 96 (2), 424-428 (1999).</li><li>Oliner, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oncoprotein+MDM2+conceals+the+activation+domain+of+tumor+suppressor+p53.">Oncoprotein MDM2 conceals the activation domain of tumor suppressor p53.</a> Nature. 362, 857-860 (1993).</li><li>Nag, S., Qin, J., Srivenugopal, K. S., Wang, M., Zhang, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+MDM2-p53+pathway+revisited.">The MDM2-p53 pathway revisited.</a> Journal of Biomedical Research. 27 (4), 254-271 (2013).</li><li>Bond, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+nucleotide+polymorphism+in+the+MDM2+promoter+attenuates+the+p53+tumor+suppressor+pathway+and+accelerates+tumor+formation+in+humans.">A single nucleotide polymorphism in the MDM2 promoter attenuates the p53 tumor suppressor pathway and accelerates tumor formation in humans.</a> Cell. 119 (5), 591-602 (2004).</li><li>Isobe, M., Emanuel, B. S., Givol, D., Oren, M., Croce, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+gene+for+human+p53+tumor+antigen+to+band+17p13.">Localization of gene for human p53 tumor antigen to band 17p13.</a> Nature. 320 (6057), 84-85 (1986).</li><li>Gupta, A. K., Bharadwaj, M., Kumar, A., Mehrotra, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spiro-oxindoles+as+a+promising+class+of+small+molecules+inhibitors+of+p53-MDM2+interaction+useful+in+targeted+cancer+therapy.">Spiro-oxindoles as a promising class of small molecules inhibitors of p53-MDM2 interaction useful in targeted cancer therapy.</a> Topics in Current Chemistry. 375 (1), 1-25 (2017).</li><li>Griffin, S. A., Drisko, C. R., Huang, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tricyclic+heterocycles+as+precursors+to+functionalized+spirocyclic+oximes.">Tricyclic heterocycles as precursors to functionalized spirocyclic oximes.</a> Tetrahedron Letters. 58, 4551-4553 (2017).</li><li>Drisko, C. R., Griffin, S. A., Huang, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solid-phase+synthesis+of+[4.4]spirocyclic+oximes.">Solid-phase synthesis of [4.4]spirocyclic oximes.</a> Journal of Visualized Experiments. (144), e58508 (2019).</li><li>Lawrence, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Linked+parallel+synthesis+and+MTT+bioassay+screening+of+substituted+chalcones.">Linked parallel synthesis and MTT bioassay screening of substituted chalcones.</a> Journal of Combinatorial Chemistry. 3 (5), 421-426 (2001).</li><li>. MTT assay protocol Available from: <a target="_blank" href="https://www.abcam.com/kits/mtt-assay-protocol">https://www.abcam.com/kits/mtt-assay-protocol</a> (2020)</li></ol>

Syntesen av spirocykliske forbindelser var basert på tidligere forskning utført av dette laboratoriet, men med noen modifikasjoner (figur 1) 11,12. Fremdriften for hvert reaksjonstrinn ble overvåket av IR-spektroskopi. Michael tillegg av REM linker 1 med furfurylamin gitt polymer-bundet 2 (IR 1722 cm-1 → 1731 cm-1). Fra forrige rapport produ...

Småmolekylær hemming av interaksjonen mellom E3 ubiquitin-ligase mus dobbelt minutt 2 homolog (MDM2) med p53 er kjent for å gjenopprette p53-mediert induksjon av tumorcelleapoptose 1,2,3. MDM2 er en negativ regulator av p53-banen og er ofte overuttrykket i kreftceller 4,5,6,7,8,9. Nylige krystallografiske og biokjemiske studier har vist at små molekyler som inneholder et spirocyklisk rammeverk, effektivt kan hemme MDM2-p53-interaksjoner10. Det spirocykliske rammeverket (figur 1, skyggelagt i blått) regnes som et privilegert motiv da avledning av dette stive ortogonale ringsystemet har ført til oppdagelsen av nye terapeutiske legemidler. Å få tilgang til denne interessante arkitekturen utgjør en utfordring ved bruk av tradisjonelle organiske synteseteknikker. Selv om de terapeutiske effektene av spirocykliske molekyler i biologiske systemer har blitt undersøkt, er syntese av disse molekylene fortsatt en tungvint prosess. Uønskede sideprodukter, under tøffe forhold og farlige overgangsmetaller er ofte problematiske.
Den potensielle bruken av spirocyklisk motiv i legemiddelutvikling førte til utvikling av en protokoll som benytter fastfasesyntese for å generere et bibliotek av molekyler med motivet i tillegg til andre utskiftbare funksjonelle grupper11,12. Separasjonen av produkter og reaktanter mellom trinn kan oppnås ved ganske enkelt å bruke en REM-kobling festet til en harpiksperle og en solidfasefilterbeholder. Dette vil kutte ned trinnene og potensielt øke utbyttet. Denne syntetiske tilnærmingen kan produsere et stort utvalg av potensielle narkotikakandidater. Imidlertid vil effektiviteten av disse molekylene i et biologisk system kreve ytterligere undersøkelser.
For å bestemme cytotoksisiteten til disse spirocykliske forbindelsene, ble MTT-analysen13,14 ansatt. Denne metoden måler cellens levedyktighet og kan brukes til indirekte å bestemme cellecytotoksisitet. Ulike konsentrasjoner av hemmerne ble tilsatt dyrkede celler i en 96-brønnsplate, og andelen levende celler ble målt ved kolorimetrisk analyse av graden av reduksjon av gul MTT av mitokondrielle dehydrogenaser til den lilla formazanforbindelsen (figur 2). Aktiviteten rapporteres oftest som en IC 50-verdi - konsentrasjonen der celleveksten hemmes med50% i forhold til en ubehandlet kontroll. Dette papiret beskriver protokollen for MTT-analysen og de foreløpige resultatene av disse nye spirocykliske molekylene.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>CELLS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>COS-7 cells (ATCC CRL-1651)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1651</td>
			<td>African green monkey kidney cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHEMICALS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-Bromooctane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>152951</td>
			<td>Alkyl-halide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Allylbromide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>337528</td>
			<td>Alkyl-halide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benzylbromide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B17905</td>
			<td>Alkyl-halide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cisplatin</td>
			<td>Cayman Chemical</td>
			<td>13119</td>
			<td>Cytotoxicity control</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichloromethane (DCM)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>270997</td>
			<td>Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethylformamide (DMF)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>227056</td>
			<td>Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethylsulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>276855</td>
			<td>Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, high glucose, with L-glutamine</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>25-500</td>
			<td>Cell culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS (Fetal bovine serum)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F4135</td>
			<td>Cell culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Furfurylamine</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>119800050</td>
			<td>reagent&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodomethane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>289566</td>
			<td>Alkyl-halide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>34860</td>
			<td>Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTT ((3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-Diphenyltetrazolium Bromide)</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>Calbiochem 475989-1GM</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>25-507</td>
			<td>Cell culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>REM Resin</td>
			<td>Nova Biochem</td>
			<td>8551010005</td>
			<td>Polymer support; 0.500 mmol/g loading</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>trans-&#946;-nitrostyrene</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N26806</td>
			<td>Nitro-olefin reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toluene</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>244511</td>
			<td>Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triethylamine (TEA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T0886</td>
			<td>Reagent for beta-elimination</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trimethylsilyl chloride (TMSCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>386529</td>
			<td>Reagent; CAUTION - highly volatile; creates HCl gas</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GLASSWARE/INSTRUMENTATION</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 mL solid-phase reaction vessel</td>
			<td>Chemglass</td>
			<td>CG-1861-02</td>
			<td>Glassware with filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 Well plate reader</td>
			<td>Promega (Turner Biosystems)</td>
			<td>9310-011</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AVANCE III NMR Spectrometer</td>
			<td>Bruker</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Instrument; 300 MHz; Solvents: CDCl3 and CD3OH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific Nicole iS5</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>IQLAADGAAGFAHDMAZA</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wrist-Action Shaker</td>
			<td>Burrell Scientific</td>
			<td>757950819</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

functionalized spirocyclic heterocycle synthesis and cytotoxicity assay

Spirocykliske heterocykliske sykluser har nylig blitt rapportert i litteraturen for å være potensielle legemidler for kreftbehandling. Syntesen av disse nye ortogonale ringsystemene er utfordrende. En effektiv metode for å syntetisere disse forbindelsene ble nylig publisert som beskrev fastfasesyntesen i fire trinn i stedet for de tidligere rapporterte fem trinnene. Fordelen med denne kortere syntesen er eliminering av bruk av giftige reagenser. Lavlastende regenererende Michael (REM) linkerbasert harpiks ble funnet å være avgjørende i syntesen, da høybelastningsversjoner forhindret tilsetning av reagenser som inneholder store fenyl- og aromatiske sidekjeder. Den kolorimetriske 3-(4′,5′-dimetyltiazol-2′-yl)-2,5-difenyltetrazoliumbromid (MTT)-analysen ble brukt til å undersøke cytotoksisiteten av mikromolære konsentrasjoner av disse nye spirocykliske molekylene in vitro. MTT er lett tilgjengelig kommersielt og gir relativt raske, pålitelige resultater, noe som gjør denne analysen ideell for disse spirocykliske heterocyklene. Ortogonale ringstrukturer samt furfurylamin (en forløper i syntesemetoden som inneholder et lignende 5-medlems ringmotiv) ble testet.

Spirocykliske oksimer 6 og 7 ble syntetisert ved hjelp av en modifisert protokoll (figur 1). Michael tillegg av furfurylamin til en REM linker 1b gitt polymer-bundet harpiks 2. Fremdriften av reaksjonen ble overvåket ved infrarød (IR) spektroskopi ved å oppdage forsvinningen av den α β-umettede esteren ved 1722 cm-1 (figur 3). Spirocyklisk bundet harpiks 4 ble dannet fra 2 via et forbigående mellomprodukt 3. Metanolisk hydrolyse av 4 produsert 3...

Watch this Scientific Journal Video about Functionalized Spirocyclic Heterocycle Synthesis and Cytotoxicity Assay at JoVE.com

Functionalized Spirocyclic Heterocycle Synthesis and Cytotoxicity Assay

Her beskriver vi et bioassay ved bruk av 3-(4′,5′-dimethylthiazol-2′-yl)-2,5- difenyltetrazoliumbromid (MTT) for å teste tidligere syntetiserte spirocykliske oksimer.

Funksjonalisert spirocyklisk heterosyklussyntese og cytotoksisitetsanalyse

Spirocyclic heterocycles have recently been reported in literature to be potential drugs for cancer therapy. The synthesis of these novel orthogonal ring ...

Denne protokollen benytter en resirkulerbar og modifisert metode for fremstilling av spirokykliske forbindelser. MTT-analysen bidrar til å svare på spørsmålet knyttet til cytotoksisiteten til disse nye molekylene. Denne teknikken produserer nye modifiserbare molekyler ved hjelp av et regenererende utgangsmateriale.MTT-analysen gir relativt raske og enkle å analysere biologiske resultater Begynn med å utføre fastfasesyntese av spirocykliske hetero sykluser seks og syv, som tidligere demonstrert. Forbered 20 milliliter av en fem milligram per milliliter MTT-løsning ved bruk av steril PBS som fortynningsmiddel. Filtrer og oppbevar løsningen ved minus 20 grader Celsius.Deretter forbereder du en en-til-en-fortynning av MTT-løsningen i DMEM. Forbered en milliliter hver av lagerløsninger i 1,5 milliliter mikrosentrifugerrør av testforbindelser i DMSO. Oppbevar dem ved minus 20 grader Celsius.Forbered 200 mikroliter per dose av arbeidsløsningene til testforbindelser ved å fortynne lagerkonsentrasjoner. En til 1000 i serumfritt medium. I vevskulturfrøene behandlet COS syv celler i komplett medium på flatbunnsvevskultur 96 brønnplater i en konsentrasjon på 4.000 celler per 200 mikroliter per brønn.Ved hjelp av en flerkanals pipetter. Inkuber cellene i 24 timer ved 37 grader Celsius i en atmosfære som inneholder 5% karbondioksid. Neste dag aspirerer du supernatanten fra brønnene ved hjelp av en glassbeitrepipette festet til en vakuumpumpe.Doser cellene i tre eksemplarer med testforbindelsene ved hjelp av de tidligere tilberedte arbeidsløsningene. Deretter returnerer cellene til inkubatoren. Etter 24 timer, aspirer supernatanten fra brønnene og tilsett 200 mikroliter MTT-løsning til hver brønn.Inkuber platen i fire timer. Aspirer supernatanten forsiktig fra brønnene uten å forstyrre de lilla formazankrystallene. Tilsett 200 mikroliter DMSO til hver brønn for å oppløse krystallene.Inkuber deretter platen ved romtemperatur i 15 minutter. Mål absorbans for hver brønn ved 590 eller 600 nanometer ved hjelp av en 96 brønnplateleser. Bruk brønner uten celler som bakgrunn og gjennomsnittlig absorbansverdi.Spirocyclic gox sømmer seks og syv ble syntetisert ved hjelp av en modifisert protokoll. Fremdriften av reaksjonen ble overvåket ved å oppdage forsvinningen av alfa beta umettet Esther ved hjelp av infrarød spektroskopi. MTT-analysen ble brukt til å bestemme cellens levedyktighet.Cisplatin, som er kjent for å indusere celledød ved høye konsentrasjoner, fungerte som en positiv kontroll. Som forventet, jo høyere konsentrasjonen av cisplatin jo lavere er cellens levedyktighet. MTT-analysen ble deretter brukt til å teste spirocykliske forbindelser seks og syv og furfurylamin.Furfurylamin og spirocyklisk gox søm seks viste lignende cytotoksisitet. Imidlertid var toksisiteten av spirocyklisk forbindelse syv merkbart større enn for furfurylamin og seks. Når du prøver denne protokollen, husk at N-alkylering utført ved bruk av store acylhalogenider ble funnet å redusere hastigheten på beta-eliminering og dermed redusere produktutbyttet.

Research

JoVE Journal

Biology

Optimization of the Ugi Reaction Using Parallel Synthesis and Automated Liquid Handling

The optimization of a Ugi reaction involving the mixing of furfurylamine, benzaldehyde, boc-glycine and t-butylisocyanide is described.  Triplicate runs ...

RNA Isolation from Embryonic Zebrafish and cDNA Synthesis for Gene Expression Analysis

Many important and complex laboratory procedures require an input of high quality, intact RNA.  A degraded sample or the presence of impurities can lead ...

Synthesis and Calibration of Phosphorescent Nanoprobes for Oxygen Imaging in Biological Systems

Oxygen measurement by phosphorescence quenching [1, 2] consists of the following steps: 1) the probe is delivered into the medium of interest (e.g. blood ...

Microwave-assisted One-pot Synthesis of N-succinimidyl-4-[18F]fluorobenzoate ([18F]SFB)

Microwave-assisted One-pot Synthesis of N-succinimidyl-4-[18F]fluorobenzoate [18F]SFB

Biomolecules, including peptides,1-9 proteins,10,11 and antibodies and their engineered fragments,12-14 are gaining importance as both potential ...

Intracellular Refolding Assay

Intracellulære Refolding Assay

This protocol describes a method to measure the enzymatic activity of molecular chaperones in a cell-based system and the possible effects of compounds ...

Solid Phase Synthesis of a Functionalized Bis-Peptide Using "Safety Catch" Methodology

Solid Phase Syntese av en functionalized Bis-Peptide bruke &quot;Safety Catch&quot; Metode

In 1962, R.B. Merrifield published the first procedure using solid-phase peptide synthesis as a novel route to efficiently synthesize peptides. This ...

Autonomously Bioluminescent Mammalian Cells for Continuous and Real-time Monitoring of Cytotoxicity

Autonomt Bioluminescent mammalieceller for Kontinuerlig og sanntids overvåking av Cytotoksisitet

Mammalian  cell-based in vitro assays have been  widely employed as alternatives to animal testing for toxicological studies but  have been limited due to ...

Rapid Synthesis and Screening of Chemically Activated Transcription Factors with GFP-based Reporters

Rapid Syntese og Screening av kjemisk Aktivert transkripsjonsfaktorer med GFP baserte Reportere

Synthetic biology aims to rationally design and build synthetic circuits with desired quantitative properties, as well as provide tools to interrogate the ...

Analysis of Global RNA Synthesis at the Single Cell Level following Hypoxia

Analyse av global RNA syntese på celle-nivå etter Hypoksi

Hypoxia or lowering of the oxygen availability is involved in many physiological and pathological processes. At the molecular level, cells initiate a ...

Measurement of Heme Synthesis Levels in Mammalian Cells

Måling av Heme Synthesis Levels i pattedyrceller

Heme serves as the prosthetic group for a wide variety of proteins known as hemoproteins, such as hemoglobin, myoglobin and cytochromes. It is involved in ...