Name: functionalized spirocyclic heterocycle synthesis and cytotoxicity assay
Uploaded: 2021-02-09T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Functionalized Spirocyclic Heterocycle Synthesis and Cytotoxicity Assay at JoVE.com

Detta arbete finansierades av ett bidrag från fakultetsforskningsrådet till K.S.H. (Office of Research and Grants, Azusa Pacific University-USA). A.N.G. och J.F.M. är mottagare av Scholarly Undergraduate Research Experience (SURE) Fellowship. S.K.M. och B.M.R. är mottagare av STEM Research Fellowship Grants (Center for Research in Science, Azusa Pacific University-USA). Vi är tacksamma mot Dr. Matthew Berezuk och Dr. Philip Cox för vägledning om bioassays.

OBS: Flera kemikalier och biologiska reagenser som används i detta protokoll är giftiga och cancerframkallande. Konsultera relevanta säkerhetsdatablad (MSDS) före användning. Använd lämpliga personliga skyddsutrustningar (skyddsglasögon som godkänts av Occupational Safety and Health Administration, ordentliga handskar, labbrockar, byxor i full längd och skor med stängd tå) innan du startar experimentet. Dessutom anta lämpliga säkerhetsrutiner vid syntes och hantering av giftiga kemikalier och reagenser (dra...

<ol>
	<li>Shangary, S., Wang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small-molecule+inhibitors+of+the+MDM2-p53+protein-protein+interaction+to+reactivate+p53+function:+a+novel+approach+for+cancer+therapy.">Small-molecule inhibitors of the MDM2-p53 protein-protein interaction to reactivate p53 function: a novel approach for cancer therapy.</a> Annual Review of Pharmacology and Toxicology. 49, 223-241 (2009).</li><li>Zhao, Y., Aguilar, A., Bernard, D., Wang, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Small-molecule+inhibitors+of+the+MDM2-p53+protein-protein+interaction+(MDM2+inhibitors)+in+clinical+trials+for+cancer+treatment.">Small-molecule inhibitors of the MDM2-p53 protein-protein interaction (MDM2 inhibitors) in clinical trials for cancer treatment.</a> Journal of Medicinal Chemistry. 58 (3), 1038-1052 (2015).</li><li>Paolo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+effective+virtual+screening+protocol+to+identify+promising+p53-MDM2+inhibitors.">An effective virtual screening protocol to identify promising p53-MDM2 inhibitors.</a> Journal of Chemical Information and Modeling. 56 (6), 1216-1227 (2016).</li><li>Shieh, S. Y., Ikeda, M., Taya, Y., Prives, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+damage-induced+phosphorylation+of+p53+alleviates+inhibition+by+MDM2.">DNA damage-induced phosphorylation of p53 alleviates inhibition by MDM2.</a> Cell. 91 (3), 325-334 (1997).</li><li>Hwang, B. J., Ford, J. M., Hanawalt, P. C., Chu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+the+p48+xeroderma+pigmentosum+gene+is+p53+dependent+and+is+involved+in+global+genomic+repair.">Expression of the p48 xeroderma pigmentosum gene is p53 dependent and is involved in global genomic repair.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 96 (2), 424-428 (1999).</li><li>Oliner, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oncoprotein+MDM2+conceals+the+activation+domain+of+tumor+suppressor+p53.">Oncoprotein MDM2 conceals the activation domain of tumor suppressor p53.</a> Nature. 362, 857-860 (1993).</li><li>Nag, S., Qin, J., Srivenugopal, K. S., Wang, M., Zhang, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+MDM2-p53+pathway+revisited.">The MDM2-p53 pathway revisited.</a> Journal of Biomedical Research. 27 (4), 254-271 (2013).</li><li>Bond, G. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+nucleotide+polymorphism+in+the+MDM2+promoter+attenuates+the+p53+tumor+suppressor+pathway+and+accelerates+tumor+formation+in+humans.">A single nucleotide polymorphism in the MDM2 promoter attenuates the p53 tumor suppressor pathway and accelerates tumor formation in humans.</a> Cell. 119 (5), 591-602 (2004).</li><li>Isobe, M., Emanuel, B. S., Givol, D., Oren, M., Croce, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Localization+of+gene+for+human+p53+tumor+antigen+to+band+17p13.">Localization of gene for human p53 tumor antigen to band 17p13.</a> Nature. 320 (6057), 84-85 (1986).</li><li>Gupta, A. K., Bharadwaj, M., Kumar, A., Mehrotra, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spiro-oxindoles+as+a+promising+class+of+small+molecules+inhibitors+of+p53-MDM2+interaction+useful+in+targeted+cancer+therapy.">Spiro-oxindoles as a promising class of small molecules inhibitors of p53-MDM2 interaction useful in targeted cancer therapy.</a> Topics in Current Chemistry. 375 (1), 1-25 (2017).</li><li>Griffin, S. A., Drisko, C. R., Huang, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tricyclic+heterocycles+as+precursors+to+functionalized+spirocyclic+oximes.">Tricyclic heterocycles as precursors to functionalized spirocyclic oximes.</a> Tetrahedron Letters. 58, 4551-4553 (2017).</li><li>Drisko, C. R., Griffin, S. A., Huang, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Solid-phase+synthesis+of+[4.4]spirocyclic+oximes.">Solid-phase synthesis of [4.4]spirocyclic oximes.</a> Journal of Visualized Experiments. (144), e58508 (2019).</li><li>Lawrence, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Linked+parallel+synthesis+and+MTT+bioassay+screening+of+substituted+chalcones.">Linked parallel synthesis and MTT bioassay screening of substituted chalcones.</a> Journal of Combinatorial Chemistry. 3 (5), 421-426 (2001).</li><li>. MTT assay protocol Available from: <a target="_blank" href="https://www.abcam.com/kits/mtt-assay-protocol">https://www.abcam.com/kits/mtt-assay-protocol</a> (2020)</li></ol>

Syntesen av de spirocykliska föreningarna baserades på tidigare forskning utförd av detta laboratorium, men med vissa modifieringar (Figur 1)11,12. Förloppet för varje reaktionssteg övervakades med IR-spektroskopi. Michael tillägg av REM-länkaren 1 med furfurylamin som gav polymerbunden 2 (IR 1722 cm-1 → 1731 cm-1). Från föregående r...

Småmolekylär hämning av interaktionen mellan E3 ubiquitin-ligas mus dubbel minut 2 homolog (MDM2) med p53 är känd för att återställa p53-medierad induktion av tumörcellsapoptos 1,2,3. MDM2 är en negativ regulator av p53-vägen och är ofta överuttryckt i cancerceller 4,5,6,7,8,9. Nya kristallografiska och biokemiska studier har visat att små molekyler som innehåller ett spirocykliskt ramverk effektivt kan hämma MDM2-p53-interaktioner10. Den spirocykliska ramen (figur 1, skuggad i blått) anses vara ett privilegierat motiv eftersom derivatisering av detta styva ortogonala ringsystem har lett till upptäckten av nya terapeutiska läkemedel. Att få tillgång till denna intressanta arkitektur utgör en utmaning när man använder traditionella organiska syntestekniker. Även om de terapeutiska effekterna av spirocykliska molekyler i biologiska system har undersökts, är syntesen av dessa molekyler fortfarande en besvärlig process. Oönskade sidoprodukter, med hårda förhållanden och farliga övergångsmetaller är ofta problematiska.
Den potentiella användningen av det spirocykliska motivet i läkemedelsutveckling ledde till utvecklingen av ett protokoll som använder fastfassyntes för att generera ett bibliotek av molekyler med motivet utöver andra utbytbara funktionella grupper11,12. Separationen av produkter och reaktanter mellan steg kan uppnås genom att helt enkelt använda en REM-länkare fäst vid en hartspärla och ett fastfasfilterkärl. Detta skulle minska stegen och potentiellt öka avkastningen. Detta syntetiska tillvägagångssätt skulle kunna ge upphov till ett stort antal potentiella läkemedelskandidater. Effektiviteten hos dessa molekyler i ett biologiskt system skulle dock kräva ytterligare undersökning.
För att bestämma cytotoxiciteten hos dessa spirocykliska föreningar användes MTT-analys13,14. Denna metod mäter cellviabilitet och kan användas för att indirekt bestämma cellcytotoxicitet. Olika koncentrationer av hämmarna tillsattes till odlade celler i en 96-brunnsplatta, och andelen levande celler mättes genom kolorimetrisk analys av omfattningen av reduktionen av gul MTT med mitokondriella dehydrogenaser till den lila formazanföreningen (figur 2). Aktiviteten rapporteras oftast som ett IC 50-värde - den koncentration vid vilken celltillväxt hämmas med50% i förhållande till en obehandlad kontroll. Detta dokument beskriver protokollet för MTT-analysen och de preliminära resultaten av dessa nya spirocykliska molekyler.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>CELLS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>COS-7 cells (ATCC CRL-1651)</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1651</td>
			<td>African green monkey kidney cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHEMICALS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1-Bromooctane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>152951</td>
			<td>Alkyl-halide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Allylbromide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>337528</td>
			<td>Alkyl-halide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benzylbromide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>B17905</td>
			<td>Alkyl-halide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cisplatin</td>
			<td>Cayman Chemical</td>
			<td>13119</td>
			<td>Cytotoxicity control</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dichloromethane (DCM)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>270997</td>
			<td>Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethylformamide (DMF)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>227056</td>
			<td>Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethylsulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>276855</td>
			<td>Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, high glucose, with L-glutamine</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>25-500</td>
			<td>Cell culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS (Fetal bovine serum)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>F4135</td>
			<td>Cell culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Furfurylamine</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>119800050</td>
			<td>reagent&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodomethane</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>289566</td>
			<td>Alkyl-halide</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>34860</td>
			<td>Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTT ((3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-Diphenyltetrazolium Bromide)</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>Calbiochem 475989-1GM</td>
			<td>Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Genesee Scientific</td>
			<td>25-507</td>
			<td>Cell culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>REM Resin</td>
			<td>Nova Biochem</td>
			<td>8551010005</td>
			<td>Polymer support; 0.500 mmol/g loading</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>trans-&#946;-nitrostyrene</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N26806</td>
			<td>Nitro-olefin reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toluene</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>244511</td>
			<td>Solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triethylamine (TEA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T0886</td>
			<td>Reagent for beta-elimination</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trimethylsilyl chloride (TMSCl)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>386529</td>
			<td>Reagent; CAUTION - highly volatile; creates HCl gas</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GLASSWARE/INSTRUMENTATION</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 mL solid-phase reaction vessel</td>
			<td>Chemglass</td>
			<td>CG-1861-02</td>
			<td>Glassware with filter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 Well plate reader</td>
			<td>Promega (Turner Biosystems)</td>
			<td>9310-011</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AVANCE III NMR Spectrometer</td>
			<td>Bruker</td>
			<td>N/A</td>
			<td>Instrument; 300 MHz; Solvents: CDCl3 and CD3OH</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Scientific Nicole iS5</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>IQLAADGAAGFAHDMAZA</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wrist-Action Shaker</td>
			<td>Burrell Scientific</td>
			<td>757950819</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

functionalized spirocyclic heterocycle synthesis and cytotoxicity assay

Spirocykliska heterocykler har nyligen rapporterats i litteraturen vara potentiella läkemedel för cancerbehandling. Syntesen av dessa nya ortogonala ringsystem är utmanande. En effektiv metod för att syntetisera dessa föreningar publicerades nyligen som beskrev den fasta fassyntesen i fyra steg snarare än de tidigare rapporterade fem stegen. Fördelen med denna kortare syntes är eliminering av användningen av giftiga reagenser. Låglastande regenererande Michael (REM) länkbaserat harts visade sig vara avgörande för syntesen eftersom höglastande versioner förhindrade tillsats av reagenser som innehöll skrymmande fenyl och aromatiska sidokedjor. Den kolorimetriska 3-(4′,5′-dimetyltiazol-2′-yl)-2,5- difenyltetrazoliumbromid (MTT)-analysen användes för att undersöka cytotoxiciteten hos mikromolära koncentrationer av dessa nya spirocykliska molekyler in vitro. MTT är lättillgängligt kommersiellt och ger relativt snabba, tillförlitliga resultat, vilket gör denna analys idealisk för dessa spirocykliska heterocykler. Ortogonala ringstrukturer samt furfurylamin (en föregångare i syntesmetoden innehållande ett liknande 5-manna ringmotiv) testades.

Spirocykliska oximer 6 och 7 syntetiserades med användning av ett modifierat protokoll (Figur 1). Michael tillägg av furfurylamin till en REM-linker 1b gav polymerbundet harts 2. Reaktionens framsteg övervakades genom infraröd (IR) spektroskopi genom att detektera försvinnandet av den α,β-omättade estern vid 1722 cm-1 (figur 3). Spirocykliskt bundet harts 4 bildades från 2 via en övergående mellanliggande 3. Metanolhydrolys av 4 producerade...

Watch this Scientific Journal Video about Functionalized Spirocyclic Heterocycle Synthesis and Cytotoxicity Assay at JoVE.com

Functionalized Spirocyclic Heterocycle Synthesis and Cytotoxicity Assay

Här beskriver vi en bioassay med användning av 3-(4′,5′-dimetyltiazol-2′-yl)-2,5- difenyltetrazoliumbromid (MTT) för att testa tidigare syntetiserade spirocykliska oximer.

Funktionaliserad spirocyklisk heterocykelsyntes och cytotoxicitetsanalys

Spirocyclic heterocycles have recently been reported in literature to be potential drugs for cancer therapy. The synthesis of these novel orthogonal ring ...

Detta protokoll använder en återvinningsbar och modifierad metod för att producera spirocykliska föreningar. MTT-analysen hjälper till att svara på frågan om cytotoxiciteten hos dessa nya molekyler. Denna teknik producerar nya modifierbara molekyler med hjälp av ett regenererande utgångsmaterial.MTT-analysen ger relativt snabba och enkla att analysera biologiska resultat Börja med att utföra fast fassyntes av spirocykliska heterocykler sex och sju, som tidigare visats. Förbered 20 ml av en fem milligram per milliliter MTT-lösning med steril PBS som utspädningsmedel. Filtrera och förvara lösningen vid minus 20 grader Celsius.Bered sedan en en-till-en-utspädning av MTT-lösningen i DMEM. Bered en milliliter vardera stamlösningar i 1,5 ml mikrocentrifugrör av testföreningar i DMSO. Förvara dem vid minus 20 grader Celsius.Bered 200 mikroliter per dos av arbetslösningarna av testföreningar genom att späda ut stamkoncentrationerna. En till 1000 i serumfritt medium. I vävnadsodlingsfröna behandlade COS sju celler i komplett medium på platt botten vävnadsodling 96 brunnsplattor i en koncentration av 4 000 celler per 200 mikroliter per brunn.Använda en flerkanalig pipeter. Inkubera cellerna i 24 timmar vid 37 grader Celsius i en atmosfär som innehåller 5% koldioxid. Nästa dag, aspirera supernatanten från brunnarna med hjälp av en glaspipett fäst vid en vakuumpump.Dosera cellerna i tre exemplar med testföreningarna med hjälp av de tidigare beredda arbetslösningarna. Sätt sedan tillbaka cellerna till inkubatorn. Efter 24 timmar, aspirera supernatanten från brunnarna och tillsätt 200 mikroliter MTT-lösning till varje brunn.Inkubera plattan i fyra timmar. Aspirera försiktigt supernatanten från brunnarna utan att störa de lila formazankristallerna. Tillsätt 200 mikroliter DMSO till varje brunn för att lösa upp kristallerna.Inkubera sedan plattan vid rumstemperatur i 15 minuter. Mät absorbansen för varje brunn vid 590 eller 600 nanometer med en 96-brunnsplattläsare. Använd brunnar utan celler som bakgrund och medelvärde för absorbansvärdet.Spirocykliska goxsömmar sex och sju syntetiserades med hjälp av ett modifierat protokoll. Reaktionens framsteg övervakades genom att detektera försvinnandet av alfa beta omättad Ester med hjälp av infraröd spektroskopi. MTT-analysen användes för att bestämma cellviabilitet.Cisplatin, som är känt för att inducera celldöd vid höga koncentrationer, fungerade som en positiv kontroll. Som förväntat, ju högre koncentrationen av cisplatin desto lägre är cellviabiliteten. MTT-analysen användes sedan för att testa de spirocykliska föreningarna sex och sju och furfurylamin.Furfurylamin och spirocyklisk gox söm sex visade liknande cytotoxicitet. Toxiciteten hos spirocyklisk förening sju var emellertid märkbart större än för furfurylamin och sex. När du försöker detta protokoll, kom ihåg att N-alkylering utförd med skrymmande acylhalogenider visade sig minska graden av beta-eliminering och därmed minska produktutbytet.

Research

JoVE Journal

Biology

Optimization of the Ugi Reaction Using Parallel Synthesis and Automated Liquid Handling

Optimering av Ugi Reaktion Använda Parallell Syntes och automatiserade Vätskehantering

The optimization of a Ugi reaction involving the mixing of furfurylamine, benzaldehyde, boc-glycine and t-butylisocyanide is described.  Triplicate runs ...

RNA Isolation from Embryonic Zebrafish and cDNA Synthesis for Gene Expression Analysis

RNA Isolering från embryonala Zebrafish och cDNA syntes för Gene Expression Analysis

Many important and complex laboratory procedures require an input of high quality, intact RNA.  A degraded sample or the presence of impurities can lead ...

Synthesis and Calibration of Phosphorescent Nanoprobes for Oxygen Imaging in Biological Systems

Syntes och kalibrering av Phosphorescent Nanoprobes för Oxygen Imaging i biologiska system

Oxygen measurement by phosphorescence quenching [1, 2] consists of the following steps: 1) the probe is delivered into the medium of interest (e.g. blood ...

Microwave-assisted One-pot Synthesis of N-succinimidyl-4-[18F]fluorobenzoate ([18F]SFB)

Microwave-assisted One-pot Synthesis of N-succinimidyl-4-[18F]fluorobenzoate [18F]SFB

Microwave-assisted En pott Syntes av N-Succinimidyl-4-[ 18 F] fluorobenzoate ([ 18 F] SFB)

Biomolecules, including peptides,1-9 proteins,10,11 and antibodies and their engineered fragments,12-14 are gaining importance as both potential ...

Intracellular Refolding Assay

Intracellulär vika analys

This protocol describes a method to measure the enzymatic activity of molecular chaperones in a cell-based system and the possible effects of compounds ...

Solid Phase Synthesis of a Functionalized Bis-Peptide Using "Safety Catch" Methodology

Fastfassyntes av en funktionaliserad Bis-peptid Använda &quot;Safety Catch&quot; Metodik

In 1962, R.B. Merrifield published the first procedure using solid-phase peptide synthesis as a novel route to efficiently synthesize peptides. This ...

Autonomously Bioluminescent Mammalian Cells for Continuous and Real-time Monitoring of Cytotoxicity

Autonomt Bioluminescent däggdjursceller för kontinuerlig och övervakning i realtid av cytotoxicitet

Mammalian  cell-based in vitro assays have been  widely employed as alternatives to animal testing for toxicological studies but  have been limited due to ...

Rapid Synthesis and Screening of Chemically Activated Transcription Factors with GFP-based Reporters

Snabb Syntes och Screening av kemiskt aktiverade transkriptionsfaktorer med GFP-baserade Reportrar

Synthetic biology aims to rationally design and build synthetic circuits with desired quantitative properties, as well as provide tools to interrogate the ...

Analysis of Global RNA Synthesis at the Single Cell Level following Hypoxia

Analys av global RNA syntes vid den inre cellnivå efter Hypoxi

Hypoxia or lowering of the oxygen availability is involved in many physiological and pathological processes. At the molecular level, cells initiate a ...

Measurement of Heme Synthesis Levels in Mammalian Cells

Mätning av hemsyntesen nivåer i däggdjursceller

Heme serves as the prosthetic group for a wide variety of proteins known as hemoproteins, such as hemoglobin, myoglobin and cytochromes. It is involved in ...