Name: applications of immobilization of drosophila tissues with fibrin clots for live imaging
Uploaded: 2020-12-22T14:00:00
Duration: 8 min 52 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Applications of Immobilization of Drosophila Tissues with Fibrin Clots for Live Imaging at JoVE.com

Het werk in het Januschke laboratorium wordt ondersteund door Wellcome trust grants 100031/Z/12/A en 1000032/Z/12/A. De weefselbeeldvormingsfaciliteit wordt ondersteund door de subsidie WT101468 van Wellcome.

<ol>
	<li>Restrepo, S., Zartman, J. J., Basler, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cultivation+and+live+imaging+of+Drosophila+imaginal+discs.">Cultivation and live imaging of Drosophila imaginal discs.</a> Methods in Molecular Biology. 11478, 203-213 (2016).</li><li>Tsao, C. K., Ku, H. Y., Lee, Y. M., Huang, Y. F., Sun, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+term+ex+vivo+culture+and+live+imaging+of+Drosophila+larval+imaginal+discs.">Long term ex vivo culture and live imaging of Drosophila larval imaginal discs.</a> PloS One. 11 (9), 0163744 (2016).</li><li>Cabernard, C., Doe, C. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apical/basal+spindle+orientation+is+required+for+neuroblast+homeostasis+and+neuronal+differentiation+in+Drosophila.">Apical/basal spindle orientation is required for neuroblast homeostasis and neuronal differentiation in Drosophila.</a> Developmental Cell. 17 (1), 134-141 (2009).</li><li>Basto, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flies+without+centrioles.">Flies without centrioles.</a> Cell. 125 (7), 1375-1386 (2006).</li><li>Januschke, J., Gonzalez, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+interphase+microtubule+aster+is+a+determinant+of+asymmetric+division+orientation+in+Drosophila+neuroblasts.">The interphase microtubule aster is a determinant of asymmetric division orientation in Drosophila neuroblasts.</a> The Journal of Cell Biology. 188 (5), 693-706 (2010).</li><li>Rusan, N. M., Peifer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+a+novel+centrosome+cycle+in+asymmetric+cell+division.">A role for a novel centrosome cycle in asymmetric cell division.</a> Journal of Cell Biology. 177 (1), 13-20 (2007).</li><li>Dai, W., Montell, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+of+border+cell+migration+in+Drosophila.">Live imaging of border cell migration in Drosophila.</a> Methods in Molecular Biology. 1407, 153-168 (2016).</li><li>Haigo, S. L., Bilder, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+tissue+revolutions+in+a+morphogenetic+movement+controlling+elongation.">Global tissue revolutions in a morphogenetic movement controlling elongation.</a> Science. 331 (6020), 1071-1074 (2011).</li><li>Tissot, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+molecular+cues+ensure+a+robust+microtubule-dependent+nuclear+positioning+in+the+Drosophila+oocyte.">Distinct molecular cues ensure a robust microtubule-dependent nuclear positioning in the Drosophila oocyte.</a> Nature Communications. 8, 15168 (2017).</li><li>Martin, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+live+imaging+of+the+Drosophila+adult+midgut+reveals+real-time+dynamics+of+division,+differentiation+and+loss.">Long-term live imaging of the Drosophila adult midgut reveals real-time dynamics of division, differentiation and loss.</a> eLife. , (2018).</li><li>Cabernard, C., Doe, C. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+of+neuroblast+lineages+within+intact+larval+brains+in+Drosophila.">Live imaging of neuroblast lineages within intact larval brains in Drosophila.</a> Cold Spring Harbor Protocols. 2013 (10), 970-977 (2013).</li><li>Sabado, V., Nagoshi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+resolution+fluorescence+live+imaging+of+Drosophila+circadian+clocks+in+larval+brain+culture.">Single-cell resolution fluorescence live imaging of Drosophila circadian clocks in larval brain culture.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (131), (2018).</li><li>Lerit, D. A., Plevock, K. M., Rusan, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+of+Drosophila+larval+neuroblasts.">Live imaging of Drosophila larval neuroblasts.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (89), (2014).</li><li>Egger, B., van Giesen, L., Moraru, M., Sprecher, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+imaging+of+primary+neural+cell+culture+from+Drosophila.">In vitro imaging of primary neural cell culture from Drosophila.</a> Nature Protocols. 8 (5), 958-965 (2013).</li><li>Homem, C. C., Reichardt, I., Berger, C., Lendl, T., Knoblich, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+live+cell+imaging+and+automated+4D+analysis+of+drosophila+neuroblast+lineages.">Long-term live cell imaging and automated 4D analysis of drosophila neuroblast lineages.</a> PloS One. 8 (11), 79588 (2013).</li><li>Forer, A., Pickett-Heaps, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytochalasin+D+and+latrunculin+affect+chromosome+behaviour+during+meiosis+in+crane-fly+spermatocytes.">Cytochalasin D and latrunculin affect chromosome behaviour during meiosis in crane-fly spermatocytes.</a> Chromosome Research: An iIternational Journal On the Molecular, Supramolecular and Evolutionary Aspects of Chromosome Biology. 6 (7), 533-549 (1998).</li><li>Pampalona, J., Januschke, J., Sampaio, P., Gonzalez, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-lapse+recording+of+centrosomes+and+other+organelles+in+Drosophila+neuroblasts.">Time-lapse recording of centrosomes and other organelles in Drosophila neuroblasts.</a> Methods in Cell Biology. 129, 301-315 (2015).</li><li>Ramat, A., Hannaford, M., Januschke, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+miranda+localization+in+Drosophila+neuroblasts+involves+interaction+with+the+cognate+mRNA.">Maintenance of miranda localization in Drosophila neuroblasts involves interaction with the cognate mRNA.</a> Current Biology: CB. 27 (14), 2101-2111 (2017).</li><li>Rebollo, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functionally+unequal+centrosomes+drive+spindle+orientation+in+asymmetrically+dividing+drosophila+neural+stem+cells.">Functionally unequal centrosomes drive spindle orientation in asymmetrically dividing drosophila neural stem cells.</a> Developmental Cell. 12 (3), 467-474 (2007).</li><li>Hannaford, M. R., Ramat, A., Loyer, N., Januschke, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=aPKC-mediated+displacement+and+actomyosin-mediated+retention+polarize+Miranda+in+Drosophila+neuroblasts.">aPKC-mediated displacement and actomyosin-mediated retention polarize Miranda in Drosophila neuroblasts.</a> eLife. 7, 166 (2018).</li><li>Hannaford, M., Loyer, N., Tonelli, F., Zoltner, M., Januschke, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+chemical-genetics+approach+to+study+the+role+of+atypical+Protein+Kinase+C+in+Drosophila.">A chemical-genetics approach to study the role of atypical Protein Kinase C in Drosophila.</a> Development. 146 (2), (2019).</li><li>Loyer, N., Januschke, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+last-born+daughter+cell+contributes+to+division+orientation+of+Drosophila+larval+neuroblasts.">The last-born daughter cell contributes to division orientation of Drosophila larval neuroblasts.</a> Nature Communications. 9 (1), 3745 (2018).</li><li>Wilcockson, S. G., Ashe, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+ovarian+germline+stem+cell+cytocensor+projections+dynamically+receive+and+attenuate+BMP+signaling.">Drosophila ovarian germline stem cell cytocensor projections dynamically receive and attenuate BMP signaling.</a> Developmental Cell. 50 (3), 296-312 (2019).</li><li>Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NIH+Image+to+ImageJ:+25+years+of+image+analysis.">NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis.</a> Nature methods. 9 (7), 671-675 (2012).</li><li>Thevenaz, P., Ruttimann, U. E., Unser, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+pyramid+approach+to+subpixel+registration+based+on+intensity.">A pyramid approach to subpixel registration based on intensity.</a> IEEE Transactions on Image Processing. 7 (1), 27-41 (1998).</li><li>Prasad, M., Montell, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+molecular+mechanisms+of+border+cell+migration+analyzed+using+time-lapse+live-cell+imaging.">Cellular and molecular mechanisms of border cell migration analyzed using time-lapse live-cell imaging.</a> Developmental Cell. 12 (6), 997-1005 (2007).</li><li>Chernysh, I. N., Nagaswami, C., Purohit, P. K., Weisel, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrin+clots+are+equilibrium+polymers+that+can+be+remodeled+without+proteolytic+digestion.">Fibrin clots are equilibrium polymers that can be remodeled without proteolytic digestion.</a> Scientific Reports. 2, 879 (2012).</li><li>Liss, V., Barlag, B., Nietschke, M., Hensel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-labelling+enzymes+as+universal+tags+for+fluorescence+microscopy,+super-resolution+microscopy+and+electron+microscopy.">Self-labelling enzymes as universal tags for fluorescence microscopy, super-resolution microscopy and electron microscopy.</a> Scientific Reports. 5, 17740 (2015).</li><li>. ImageJ macros [software] Available from: <a target="_blank" href="https://github.com/nicolasloyer?tab=repositories">https://github.com/nicolasloyer?tab=repositories</a> (2020)</li></ol>

De auteurs hebben niets bekend te maken.

Live beeldvorming van hele mount D. melanogaster larvale hersenen biedt de mogelijkheid om asymmetrische neurale stamceldelingen te observeren in omstandigheden die dicht bij een fysiologische context liggen. Het eerste deel van ons protocol introduceert onze aanpak van de dissectie van larvale hersenen. Zoals reeds vermeld13, een kritiek aspect van de voorbereiding is om te voorkomen dat de hersenen beschadigen. Het meest uitdagende aspect hiervan is om de hersenen te scheiden van de naburige fantasieschijven zonder overmatig aan de hersenen te trekken. Onze benadering van "snijden zonder trekken" is om ofwel een slijpbeweging uit te voeren met de uiteinden van een paar tangen, of om een tangpunten langs twee andere tangpunten te schuiven die de verbinding tussen weefsels vasthouden (figuur 1A) terwijl Lerit et al. zaagachtige bewegingen beschrijven met een ontleedpen. We raden de experimenteerder aan om alle benaderingen uit te proberen en de meest geschikte voor zichzelf te gebruiken. We raden ook aan om BSA- of FCS-gecoate pipettips te gebruiken in plaats van dissectietools om geïsoleerde hersenen over te dragen. De coating voorkomt dat weefsels aan het plastic blijven plakken en maakt de veilige overdracht van weefsels mogelijk terwijl ze altijd volledig ondergedompeld blijven, zonder ze te onderwerpen aan een mogelijke voorbijgaande vervorming terwijl ze tijdens de overdracht aan het dissectiegereedschap blijven plakken. Gecoate tips hebben andere voordelen om de overdracht van meerdere hersenen tegelijk mogelijk te maken, wat vooral handig is wanneer het van cruciaal belang is om de verblijfstijd van de monsters binnen een bepaald medium te regelen; ze zijn geschikt voor de overdracht van andere weefsels, zelfs kwetsbare als bijvoorbeeld dikke lichamen; ze zijn geschikt voor een breed scala aan verschillende monstergroottes door grotere uiteinden te gebruiken of het uiteinde van de punt te snijden.
Vervolgens beschrijft dit protocol het gebruik van Fibrinogeenstolling om larvale hersenen op de coverslip van een kweekschaal te immobiliseren. Een hersenen is georiënteerd binnen een daling van cultuurmedium + Fibrinogeen, waarna de stolling wordt geïnduceerd door de toevoeging van Trombine. De vorming van fibrines is geleidelijk en biedt een tijdvenster waarin de oriëntatie van het monster kan worden verfijnd, indien nodig (figuur 2C). Als een lichte compressie van het monster vereist is - wat we afraden in het geval van larvale hersenen - kan het ook fijn worden aangepast door het stolsel min of meer dicht bij het monster te drukken tijdens stap 3.4.4 en 3.5.2. Het belangrijkste voordeel van deze Fibrinogeenstolling ten opzichte van het protocol beschreven in Lerit et al., waarin hersenen zijn gemonteerd tussen een gasdoorlatend membraan en een deklip, is het vermogen om het cultuurmedium te vervangen tijdens live beeldvorming. Een mogelijk voordeel van het gebruik van een gasdoorlatend membraan ten opzichte van ons protocol zou kunnen zijn dat het een optimale oxygenatie van de monsters biedt, wat met onze aanpak beperkter zou kunnen zijn omdat hersenen van de lucht worden gescheiden door het stolsel en een medium. Om deze reden, hoewel we het effect van de hoeveelheid kweekmedium binnen het kweekgerecht niet hebben beoordeeld, stellen we voor om de hoeveelheid kweekmedium bovenop de stolsels te beperken terwijl de stolsels volledig ondergedompeld blijven.
Omdat de manipulatie van de stolsels experimenteel moeilijk en tijdrovend kan zijn, raden we de experimenteerder aan om eerst stolsels zonder monsters te manipuleren. Het moduleren van het volume van de druppel kweekmedium + Fibrinogeen op de deklip, de concentratie van Fibrinogeen of het volume en de concentratie trombine kan helpen de voorbereiding gemakkelijker te maken en kan belangrijk zijn bij het aanpassen van het protocol aan andere soorten weefsels. Met voldoende ervaring met het manipuleren van de stolsels, kunnen verschillende hersenen indien nodig in één stolsel worden geïmmobiliseerd, hoewel het de fijnafstelling van de oriëntatie bemoeilijkt. Op de coverslip kunnen verschillende stolsels worden gevormd, waardoor bijvoorbeeld monsters van verschillende genotypen kunnen worden gebeeldomd. Het is ook mogelijk om verschillende stolsels op dezelfde coverslip bloot te stellen aan verschillende cultuurmedia, hoewel er nooit voor moet worden gezorgd dat de druppels kweekmedium de verschillende stolsels bedekken. Zodra larvale hersenen zijn geïmmobiliseerd en klaar zijn voor live beeldvorming, raden we aan om de aanbevelingen van Lerit et al.13 op te volgen om overmatige fotodamage te voorkomen. We voegen alleen aan deze aanbevelingen toe om niet alleen de hersenen op 25 °C te houden tijdens live beeldvorming met een stadium-incubator, maar ook om deze fase minstens 30 minuten voor te verwarmen voor het begin van de beeldvorming. In onze handen resulteert het niet systematisch doen in een sterke focusdrift.
Het kan in sommige contexten voordelig zijn om gecorreleerde microscopie uit te voeren en een monster te repareren en te immunostaineren na live beeldvorming. Een beperking van het gebruik van Fibrin-stolsels is echter dat het bijna onmogelijk is om een brein mechanisch te isoleren van een stolsel zonder het te beschadigen. Een mogelijke manier om deze beperking te overwinnen zou kunnen zijn om methoden te ontwikkelen om Fibrine-stolsels met Plasmin af te afbraak of om stolseldemontage te induceren door toevoeging van een peptide dat de knoppen nabootst waardoor Fibrin-polymerisatie28mogelijk is. We gebruiken meestal Fibrine-stolsels op monsters variërend van enkele cellen tot 200 μM lange weefsels, maar we kunnen ook met succes immobiliseren in stolsels en beeldhersenen van volwassen hommels van meer dan 3 mm breed. De bovengrens van de steekproefgrootte die in stolsels kan worden geïmmobiliseerd, moet nog worden bepaald. Evenzo, hoewel we meestal geïmmobiliseerde monsters gedurende 4 tot 5 uur in beeld brengen, hebben we neuroblasten in primaire cultuur met succes gedurende maximaal 3 dagen in beeld brengen, wat aangeeft dat het stolsel op zijn minst de levensvatbaarheid op langere termijn niet verstoort. Integendeel, stolsels kunnen de regelmatige vervanging van het medium vergemakkelijken, een vereiste voor beeldvorming op langere termijn, zonder dat hiervoor apparaten zoals peristaltische pompen nodig zijn. Hoewel we de permeabiliteitsparameters van fibrinestolsels niet hebben gemeten, lijkt de vezelige gelachtige aard van de stolsels doordringbaar te zijn door celdoorlatende moleculen. We ontdekten dat Latrunculine A, Colcemid of 1-NAPP1, HALO-tag liganden en andere standaardkleurstoffen die in de celbiologie worden gebruikt, zonder problemen de cellen in het fibrinestolsel bereiken en tot nu toe geen moleculen zijn tegengekomen die door het stolsel zouden worden vastgehouden, wat echter een mogelijkheid is die empirisch moet worden getest.
Kortom, het gebruik van Fibrin-stolsels biedt een betrouwbare en relatief eenvoudig te implementeren manier om levende weefsels te immobiliseren voor live beeldvorming. Afgezien van het nut ervan bij het beperken van laterale drifting, is het vermogen om het cultuurmedium te veranderen tijdens live beeldvorming van onschatbare waarde gebleken voor onze chemische geneticabenadering voor het bestuderen van de asymmetrische celdeling van D. melanogaster neuroblasten21. We verwachten dat deze techniek gunstig zal zijn voor studies in een breed scala van verschillende weefsels, met name als het gaat om chemische genetica of bijvoorbeeld eiwitzelfetikettering29.
Onze MultiHyperStackReg macro is afhankelijk van de TurboReg ImageJ plugin, die opeenvolgende frames of segmenten van een stack uitlijnt, en de MultiStackReg ImageJ plugin, waarmee de transformaties op andere stacks kunnen worden toegepast. MultiHyperStackReg maakt het eenvoudig mogelijk om deze transformaties toe te passen op hyperstacks (stacks met ten minste vier dimensies). Omdat het gebruik van MultiHyperStackReg, zoals we het beschrijven, veel acties vereist en behoorlijk tijdrovend kan worden, hebben we ook de AutoHyperStackReg-macro geschreven, die automatisch alle stappen uitvoert die worden beschreven in stap 6.2 en 6.3. In tegenstelling tot MultiHyperStackReg mist AutoHyperStackReg momenteel echter de mogelijkheid om de uitlijning van een stack te berekenen op basis van een subregio van deze stack, een optie die we soms cruciaal vonden voor een bevredigende uitlijning. Een andere beperking van AutoHyperStackReg is dat het gebruik ervan beperkt is tot vertalingen en niet tot de andere transformaties die worden voorgesteld door TurboReg en MultiStackReg, terwijl MultiHyperStackReg op een hyperstack elk transformatietype kan toepassen als de gebruiker het nodig heeft. Toekomstige releases implementeren deze functies en zijn beschikbaar op GitHub30. Ten slotte biedt onze roterende linescan macro een eenvoudige manier om snel corticale signalen te meten in timelapses, zelfs als de cortex in de loop van de tijd van positie of oriëntatie verandert. Of de trackingmodus of de niet-trackingmodus het meest geschikt is voor analyse, hangt af van de kwaliteit en consistentie van het corticale signaal. De trackingmodus is gemakkelijker te gebruiken omdat de gebruiker niet hoeft te overwegen waar de cortex zal zijn voor elk tijdspunt en in de loop van de tijd grote veranderingen in positie en oriëntatie kan opvangen. Het is echter alleen geschikt als het corticale signaal sterk genoeg blijft voor detectie tijdens de hele film: een falen om iets anders dan de cortex te detecteren (bijv. een helder cytoplasmatisch compartiment dicht bij de cortex) kan de detectie voor elk volgend tijdspunt in gevaar brengen (bijv. het cytoplasmatische compartiment beweegt weg van de cortex en de corticale linescan volgt het voor de rest van de time-lapse). De niet-trackingmodus heeft deze valkuil niet, omdat de detectie beperkt is tot de lijn die oorspronkelijk door de gebruiker werd getrokken (een helder cytoplasmatisch compartiment kan er bijvoorbeeld voor zorgen dat de detectie een paar keer mislukt, maar naarmate het cytoplasmatische compartiment zich van de detectiezone verplaatst, wordt de juiste detectie van de cortex hervat), maar gedraagt zich niet goed als de cortexpositie of oriëntatie in de loop van de tijd veel verandert. De volgende functie (die beschikbaar zal zijn op GitHub30) die moet worden ontwikkeld voor de trackingmodus, is de optie om alleen opgegeven tijdspunten te analyseren en een referentietijdpunt te definiëren (in plaats van het eerste tijdspunt) waarvoor en waarna de detectie zal worden uitgevoerd, waardoor de gebruiker op zijn minst problematische tijdspunten kan voorkomen.

Drosophila blijft een belangrijk modelsysteem om een breed scala aan biologische vragen te bestuderen en blinkt al tientallen jaren uit in het bevorderen van kennis in vele disciplines. Een functie die het bijzonder opvalt, is dat het bijzonder geschikt is voor live beeldvorming. Het vermogen om subcellulaire processen of het gedrag van cellen en weefsels in realtime te volgen, blijft bijdragen aan het genereren van sleutelbegrippen die relevant zijn voor cel- en ontwikkelingsbiologie. Veel succesvolle protocollen zijn ontwikkeld door verschillende groepen om dergelijke Drosophila-monsters levend en gezond te houden om het gedrag van het monster en fluorescerende moleculen te bestuderen. Organen en weefsels van de vlieg, zoals fantasieschijven1,2,de larvale hersenen3,4,5, 6of eierkamers van volwassen vrouwtjes7,8,9,of de volwassen darm10 kunnen bijvoorbeeld worden geëxtraheerd en in cultuur worden gehouden voor beeldvorming met time-lapse microscopie. Een belangrijke uitdaging voor live beeldvorming is ervoor te zorgen dat het monster dicht bij het beeldoppervlak wordt gehouden voor een optimale resolutie en onbeweeglijk zonder afbreuk te doen aan de integriteit van het monster dat gevoelig kan zijn voor mechanische schokken. Om neurale stamcellen te bestuderen, neuroblasten of neuronen genoemd in de drosophila larvale hersenen, bijvoorbeeld, kan het houden van monsters dicht bij het beeldvormingsoppervlak worden bereikt door ze te bedekken met kweekmedia in verzegelde beeldvormingskamers11,12,13. Deze aanpak maakt media-uitwisseling echter niet gemakkelijk mogelijk, waardoor de experimentele manoeuvreerruimte wordt beperkt. Als alternatief kunnen monsters worden bereid en op afdeklips worden geplaatst die worden behandeld om de hechting van cellen te verhogen en multi-point bezoekende microscopie en uitgebreide live-cell imaging in open kweekgerechten mogelijk te maken, die media-uitwisseling mogelijk maken, maar geen gemakkelijke middelen bieden om monsterdrift of verlies tijdens media-uitwisseling te voorkomen14,15.
De Fibrin-stolselmethode die oorspronkelijk is ontwikkeld om meiose in levende kraanvlieg spermatocyten16 te bestuderen, is specifiek geschikt om deze problemen te overwinnen. Fibrinogeen wordt opgelost in een relevant kweekmedium, de monsters worden in een druppel van deze oplossing op een geschikte beeldkamer voor het glasoppervlak geplaatst en georiënteerd voordat trombine wordt toegevoegd, wat resulteert in de snelle vorming van een onoplosbaar Fibrine-stolsel, een kleverig vezelig gaas dat zich hecht aan het glasoppervlak en de monsters en tegelijkertijd de toegang van het monster tot het kweekmedium garandeert. Het medium kan vervolgens worden verwisseld zonder de stolsel- of monsterpositie te storen. Uitwisseling van kweekmedia tijdens beeldvorming is bijvoorbeeld wenselijk wanneer remmers moeten worden toegevoegd zoals in de oorspronkelijke methode of voor uitwas- of pulsachtervolgingsexperimenten of wanneer fluorescerende kleurstoffen moeten worden toegevoegd tijdens live cell imaging terwijl cellen en weefsels op hun plaats blijven. Fibrinestolsels zijn geschikt voor beeldvorming van Drosophila-weefsels en individuele cellen13,17. Fibrinestolsels kunnen verder worden gebruikt om monsters te helpen oriënteren, die vanwege hun vorm of andere eigenschappen normaal gesproken niet op de gewenste manier zouden worden georiënteerd door de monsterpositie binnen het Fibrin-stolsel en de vorm van het stolsel zelf te moduleren.
Hier geven we een update over onze huidige Fibrin-stolselgebaseerde beeldvormingsmethoden en bieden we tools voor segmentatiegebaseerde beeldanalyse en richten we ons op het gebruik van deze methode om neuroblastafdelingen in het zich ontwikkelende vliegbrein te bestuderen. We gebruiken routinematig de Fibrin-stolselmethode om meerdere monsters in verschillende stolsels in hetzelfde kweekgerecht te volgen. Dit maakt i) beeldvorming van subcellulaire gebeurtenissen zoals centrosoomgedrag of mRNA-lokalisatie live18,19, ii) het monitoren van het gedrag van monsters bij farmacologische behandeling van verschillende genotypen onder dezelfde beeldvormingsinstellingen met behulp van meerpuntsbezoekmicroscopie20, iii) het bestuderen van de effecten van acute remming van enzymen21 en iv) het minimaliseren van driften om veranderingen in de oriëntatie van celdeling van cellen binnen hun fysiologische omgeving te bestuderen bij gerichte laserablatie2. Hoewel ongewenste effecten van Trombine en Fibrinogeen en het Fibrine-stolsel empirisch moeten worden getest voor elk monster, is deze methode in principe geschikt om elk type monster te immobiliseren dat moet worden geanalyseerd door live cell imaging en in Drosophila is met succes gebruikt om meerdere aspecten van neuroblastenbiologie5,19,20te bestuderen , maar ook de dynamiek van cytosensorprojecties van vrouwelijke kiemlijnstamcellen23 en veranderingen in polariteit bij acuteaP.
Time-lapse fluorescerende beeldvorming resulteert in het genereren van complexe tijd-opgeloste 3D-gegevens sets die methoden vereisen om deze kwantitatieve informatie te extraheren. Hier beschrijven we onze verdere ontwikkeling van imagej-gebaseerde24 macro's die kunnen worden gebruikt om te corrigeren voor drifting in hyperstacks en op maat gemaakte ImageJ-macro's die semi-geautomatiseerde kwantificering van multi-channel fluorescentie in de celschors mogelijk maken, ontwikkeld om corticale eiwitten te kwantificeren in neuroblasten van Drosophila larvale hersenen of van individuele neuroblasten in primaire celcultuur.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Albumin bovine serum, BSA</td>
			<td>Merck</td>
			<td>5470</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G7021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D2650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont #55 Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11255-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovie Serum, suitable for cell culture</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F7524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibrinogen from human plasma</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F3879</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FluoroDish Cell Culture Dish - 35mm, 23 mm well</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>FD35-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PP1 Analog (1NA-PP1)</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td>529579</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyrex spot plate with nine depressions</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>CLS722085-18EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schneider&#39;s Insect Medium</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S0146</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thrombin from bovine plasma</td>
			<td>Merck</td>
			<td>T4648</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

applications of immobilization of drosophila tissues with fibrin clots for live imaging

Drosophila is een belangrijk modelsysteem om een breed scala aan biologische vragen te bestuderen. Verschillende organen en weefsels uit verschillende ontwikkelingsstadia van de vlieg, zoals imaginaire schijven, de larvale hersenen of eikamers van volwassen vrouwtjes of de volwassen darm, kunnen worden geëxtraheerd en in cultuur worden gehouden voor beeldvorming met time-lapse microscopie, wat waardevolle inzichten biedt in cel- en ontwikkelingsbiologie. Hier beschrijven we in detail ons huidige protocol voor de dissectie van Drosophila larvale hersenen, en presenteren we vervolgens onze huidige aanpak voor het immobiliseren en oriënteren van larvale hersenen en andere weefsels op een glazen hoeslip met behulp van Fibrine-stolsels. Deze immobilisatiemethode vereist alleen de toevoeging van Fibrinogeen en Trombine aan het cultuurmedium. Het is geschikt voor timelapse-beeldvorming met hoge resolutie op omgekeerde microscopen van meerdere monsters in dezelfde kweekschaal, minimaliseert het laterale driften dat vaak wordt veroorzaakt door bewegingen van het microscoopstadium in meerpuntsbezoekmicroscopie en maakt het mogelijk om reagentia toe te passen en te verwijderen tijdens de beeldvorming. We presenteren ook op maat gemaakte macro's die we routinematig gebruiken om te corrigeren voor driften en om specifieke kwantitatieve informatie uit time-lapse-analyse te extraheren en te verwerken.

Immobilisatie van Drosophila weefsels met Fibrine stolsels en uitwisseling van kweekmedia tijdens live beeldvorming. Na te zijn ontleed volgens de procedure gepresenteerd in stap 2 (figuur 1) en geïmmobiliseerd in Fibrin-stolsels op dezelfde coverslip na de procedure gepresenteerd in stap 3 (figuur 2), werden larvale hersenen die GFP-gelabelde Bazooka (Baz::GFP), de vliegenortholoog van het polariteitseiwit Par-3, uitdrukken gedurende 30 minuten afgebeeld in time-lapse confocale beeldvorming met meerdere standen. Baz::GFP wordt gecombineerd met apkcas4, een allel dat acute remming van atypische eiwitkinase C (aPKC) mogelijk maakt door de toevoeging van de kleine ATP analoge 1-NAPP120. 1-NAPP1 werd daarom toegevoegd aan het cultuurmedium na de procedure in stap 4 en live beeldvorming werd gedurende 2,5 uur hervat. Controlehersenen met een wild-achtige versie van de kinase-aPKC reageerden niet op de ATP-analoog, terwijl hersenen met bovendien een analoog-gevoelige mutatie van aPKC (apkcas4) een samentrekking van het neuro-epitheel en heldere clusters van Baz in neuroblasten en hun nageslacht vertoonden ( Figuur6, Video 1). Neuroblasten blijven zich gedurende de time-lapse verdelen, wat aangeeft dat het weefsel gezond blijft, en hersenen vertonen weinig drift ondanks de verandering van het cultuurmedium, wat aangeeft dat ze goed geïmmobiliseerd zijn. Evenzo, na te zijn ontleed na de procedure gepresenteerd in27, ovarioles uitdrukken Baz::GFP werden geïmmobiliseerd in Fibrin stolsels op dezelfde coverslip en afgebeeld gedurende 8 min, waarna toepassing van 1-NAPP1 veroorzaakte de samentrekking van apkcas4 mutant folliculaire cellen, maar niet van controles (Figuur 7, Video 2).
Correctie van laterale en focus drift met behulp van MultiHyperstackReg. Een hyperstack met zowel laterale als focus drift(Video 3,linker paneel) werd eerst gecorrigeerd voor laterale drift (stap 6.2, Figuur 3, Video 3, middenpaneel), vervolgens focus drift (stap 6.3, Figuur 4, Video 3, rechter paneel) met behulp van de MultiStackReg plugin en de MultiHyperstackReg macro, wat resulteerde in een aanzienlijke vermindering van de bewegingen waargenomen in de oorspronkelijke hyperstack.
Corticale signaalmeting met behulp van roterende linescans Een neuroblast die Baz uitdrukt::GFP (groen) en het transmembrane-eiwit CD4 gelabeld met een infrarood fluorescerend eiwit (CD4::mIFP, rood) werd afgebeeld tijdens één mitose. Het CD4::mIFP-signaal werd gebruikt als referentie om de cortex op verschillende delen van de neuroblast te detecteren met linescans (stap 7, figuur 5, figuur 8A–C) en het Baz::GFP-signaal werd gemeten op de gedetecteerde posities Figuur 8D). Tijdens hun deling polariseerden neuroblasten tijdelijk door verschillende en tegenovergestelde corticale domeinen vast te stellen: de apicale pool en de basale pool. Baz definieert de apicale pool en, consequent, het Baz::GFP-signaal verhoogd bij de apicale pool van de neuroblast en verlaagd aan de basale pool tijdens de deling (Figuur 8C,D). De positie van de cortex werd bevredigend bijgehouden gedurende de time-lapse (Figuur 8C, Video 4). De Drosophila-lijnen en genotypen worden genoemd in aanvullende tabel 1–2.
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61954/61954fig06.jpg"> Figuur 6: Toepassing van een ATP analoog op geïmmobiliseerde larvale hersenen tijdens live beeldvorming. (A) Levende beeldvorming van twee larvale hersenen die Baz uitdrukken::GFP geïmmobiliseerd op dezelfde coverslip. Het kweekmedium wordt na 0 min veranderd in een concentratie van 10 μM van de ATP analoge 1-NAPP1. Controlehersenen reageren niet zichtbaar op het ATP-analoog, terwijl hersenen met een analoge gevoelige mutatie van aPKC (aPKCAS4) een samentrekking van het neuro-epitheel (pijlpunten) en heldere clusters van Baz in neuroblasten en hun nakomelingen vertonen. Maximale intensiteitsprojectie van 33 plakjes voor een diepte van 23 μM. Schaalbalk: 20 μM. (B) Vergroting van het neuro-epitheel. Schaalbalk: 10 μM. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61954/61954fig06large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61954/61954fig07.jpg"> Figuur 7: Toepassing van een ATP-analoog op geïmmobiliseerde eierkamers tijdens live beeldvorming. Live beeldvorming van twee ovarioles die Baz uitdrukken::GFP geïmmobiliseerd op dezelfde coverslip. Het kweekmedium wordt na 0 min veranderd in een concentratie van 10 μM van de ATP analoge 1-NAPP1. Controle-eierkamers reageren niet zichtbaar op de ATP-analoog, terwijl eierkamers met een analoge gevoelige mutatie van aPKC (aPKCAS4) een samentrekking van het epitheel (pijlpunten) vertonen, wat uiteindelijk leidt tot de schijnbare afbraak van aanhangverbindingen. Maximale intensiteitsprojectie van 33 plakjes voor een diepte van 27 μM. Schaalbalk: 20 μM. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61954/61954fig07large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/61954/61954fig08.jpg"> Figuur 8: Meting van het corticale signaal met behulp van roterende linescans. (A) Live D. melanogaster neuroblast met Baz::GFP (groen) en CD4::mIFP (rood). Cyaanlijnen: initiële scanlijnen loodrecht getraceerd naar verschillende corticale zones om te meten. Schaalbalk: 5 μM. (B) Identificatie van de cortex (donkerblauwe lijn) met behulp van corticale linescans en CD4::mIFP (rood) als referentiekanaal. Cyaanlijn: gebied gedefinieerd door de parameter "Meten rond" (hier 2 pixels), waarbij het signaal wordt gemeten na cortexdetectie. Schaalbalk: 2 μm. (C) Cyaan: corticale gebieden die tijdens een neuroblastdeling zijn geïdentificeerd door de roterende linescans-methode vanaf de eerste scanlijnen die in (A) worden weergegeven, met CD4::mIFP (rood) als referentiekanaal. Schaalbalk: 5 μM. Pijl: apicale pool. Pijlpunt: basale pool. (D) Meting van de Baz::GFP-signaalintensiteit in de loop van de tijd in de twee overeenkomstige zones die worden geïdentificeerd door roterende linescans weergegeven in (C). Tijdens mitose wordt Baz::GFP tijdelijk verrijkt aan de apicale pool van de neuroblast en is uitgeput van de tegenoverliggende basale pool. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/61954/61954fig08large.jpg" target="_blank">Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.</a>
Video 1: Toepassing van media-uitwisseling op geïmmobiliseerde larvale hersenen tijdens live beeldvorming om een remmer toe te voegen, gepresenteerd in figuur 6, schaalbalk: 20 μm. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/61954/MOV_1_Loyer_Januschke.mp4" target="_blank">Klik hier om deze video te downloaden.</a>
Video 2: Toepassing van media-uitwisseling op geïmmobiliseerde eierkamers tijdens live beeldvorming om een remmer toe te voegen, weergegeven in figuur 7, schaalbalk: 20 μm. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/61954/MOV_2_Loyer_Januschke.mp4" target="_blank">Klik hier om deze video te downloaden.</a>
Video 3: Correctie van laterale en focus drift met behulp van MultiHyperStackReg. Live beeldvorming van een neuroblast die de membraansonde PH::GFP uitdrukt. Xy: enkel brandpuntsvlak. Xz: orthogonale reslice. Links: voor correctie van de drift. Midden: na correctie van de laterale drift. Rechts: na correctie de laterale en focus drift, schaalbalk: 10 μm. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/61954/MOV_3_Loyer_Januschke.mp4" target="_blank">Klik hier om deze video te downloaden.</a>
Video 4: Detectie van de cortex met behulp van roterende linescans, weergegeven in figuur 8, schaalbalk: 5 μm. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/61954/MOV_4_Loyer_Januschke.mp4" target="_blank">Klik hier om deze video te downloaden.</a>
Aanvullende tabel 1: Genotypen van afgebeelde Drosophila weefsels. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/61954/Supplemental_Table_1_genotypes.xlsx" target="_blank">Klik hier om deze tabel te downloaden.</a>
Aanvullende tabel 2: Oorsprong van gebruikte transgenen. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/61954/Supplemental_Table_2_origine_of_transgenes.xlsx" target="_blank">Klik hier om deze tabel te downloaden.</a>
Aanvullend coderingsbestand 1: Oorsprong van gebruikte transgenen. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/61954/Code1_MultiHyperstackReg.ijm" target="_blank">Klik hier om dit bestand te downloaden.</a>
Aanvullend coderingsbestand 2: Oorsprong van gebruikte transgenen. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/61954/Code2_AutoHyperstackReg.ijm" target="_blank">Klik hier om dit bestand te downloaden.</a>
Aanvullend coderingsbestand 3: Oorsprong van gebruikte transgenen. <a href="https://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/61954/Code3_RotatingLineScan.ijm" target="_blank">Klik hier om dit bestand te downloaden.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Applications of Immobilization of Drosophila Tissues with Fibrin Clots for Live Imaging at JoVE.com

Applications of Immobilization of Drosophila Tissues with Fibrin Clots for Live Imaging

Dit protocol beschrijft toepassingen van monsterimmobilisatie met behulp van Fibrine-stolsels, waardoor driften worden beperkt en de toevoeging en washout van reagentia tijdens live beeldvorming mogelijk is. Monsters worden overgebracht naar een druppel Fibrinogeen met kweekmedium op het oppervlak van een afdeklip, waarna polymerisatie wordt geïnduceerd door toevoeging van trombine.

Toepassingen van immobilisatie van Drosophila-weefsels met fibrinestolsels voor live beeldvorming

Drosophila is an important model system to study a vast range of biological questions. Various organs and tissues from different developmental stages of ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Applications of Immobilization of Drosophila Tissues with Fibrin Clots for Live Imaging

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

Live-imaging of the Drosophila Pupal Eye

Live-beeldvorming van de<em&gt; Drosophila</em&gt; Pupal Eye

Inherent processes of Drosophila pupal development can shift and distort the eye epithelium in ways that make individual cell behavior difficult to track ...

Long-term Live Imaging of Drosophila Eye Disc

Long-term Live Imaging of Drosophila Eye Disc

Langdurige Live-Imaging van<em&gt; Drosophila</em&gt; Disc Eye

Live imaging provides the ability to continuously track dynamic cellular and developmental processes in real time. Drosophila larval imaginal discs have ...

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

In Vitro Ovule Cultivation for Live-cell Imaging of Zygote Polarization and Embryo Patterning in Arabidopsis thaliana

In Vitro Zaadknop teelt voor Live-cel Imaging van Zygote polarisatie en Embryo patronen in Arabidopsis thaliana

In most flowering plants, the zygote and embryo are hidden deep in the mother tissue, and thus it has long been a mystery of how they develop dynamically; ...

Live Imaging of Mouse Secondary Palate Fusion

The fusion of the secondary palatal shelves to form the intact secondary palate is a key process in mammalian development and its disruption can lead to ...

Methods for Imaging Intracellular pH of the Follicle Stem Cell Lineage in Live Drosophila Ovarian Tissue

Methods for Imaging Intracellular pH of the Follicle Stem Cell Lineage in Live Drosophila Ovarian Tissue

Methoden voor Imaging intracellulaire pH van de follikel stamcel overdrachtslijn in Live Drosophila eierstokweefsel

Changes in intracellular pH (pHi) play important roles in the regulation of many cellular functions, including metabolism, proliferation, and ...

Live Cell Imaging of Chromosome Segregation During Mitosis

Levende cel beeldvorming van chromosoom segregatie tijdens de mitose

Chromosomes must be reliably and uniformly segregated into daughter cells during mitotic cell division. Fidelity of chromosomal segregation is controlled ...

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Live Imaging and Analysis of Muscle Contractions in Drosophila Embryo

Live beeldvorming en analyse van spiercontracties in Drosophila embryo

Coordinated muscle contractions are a form of rhythmic behavior seen early during development in Drosophila embryos. Neuronal sensory feedback circuits ...

Imaging Intranuclear Actin Rods in Live Heat Stressed Drosophila Embryos

Imaging Intranuclear Actin Rods in Live Heat Stressed Drosophila Embryos

Beeldvorming Intranucleaire Actin Staven in Live Heat Stressed Drosophila Embryo's

The purpose of this protocol is to visualize intranuclear actin rods that assemble in live Drosophila melanogaster embryos following heat stress. Actin ...

Dissection and Live-Imaging of the Late Embryonic Drosophila Gonad

Dissection and Live-Imaging of the Late Embryonic Drosophila Gonad

Dissectie en live-imaging van de late embryonale drosophila gonad

The Drosophila melanogaster male embryonic gonad is an advantageous model to study various aspects of developmental biology including, but not limited to, ...

Visualizing the Effects of Oxidative Damage on Drosophila Egg Chambers using Live Imaging

Visualiseren van de effecten van oxidatieve schade op Drosophila Egg Chambers met behulp van Live Imaging

Live imaging of Drosophila melanogaster ovaries has been instrumental in understanding a variety of basic cellular processes during development, including ...