Name: fertility preservation through oocyte vitrification: clinical and laboratory perspectives
Uploaded: 2021-09-16T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives at JoVE.com

1. العمل والمشورة السريرية
ملاحظة: في حالة المرضى الذين يحتاجون إلى الحفاظ على الخصوبة لأسباب تتعلق بالأورام، تأكد من عدم وجود قائمة انتظار للتشاور الجدولة، ويتم توفير الموعد في أقرب وقت ممكن.
<ol><li>فحص التاريخ الطبي والوثائق السابقة، وتقييم الحالة الصحية العامة للمريض.</li>
...

الاعتبارات السريرية 
على الرغم من أن الاستراتيجيات الناشئة، مثل الحفاظ على التبريد أنسجة المبيض والنضج في المختبر، وقد تم استكشاف، تزجيج البويضات بعد COS هو تقنية معيار الذهب للحفاظ على الخصوبة. في هذا السيناريو، ينبغي تعظيم عدد البويضات التي تم استرجاعها والتبري?...

كان تطوير وتنفيذ برنامج فعال لالتبريد للبويضات البشرية طفرة كبيرة في الطب التناسلي. وفقا للأدلة الحديثة، التزجيج هو الاستراتيجية الأكثر فعالية للحفاظ على البرد ميتافيزي الثاني (MII) البويضات، كما أنه يؤدي إلى معدلات البقاء على قيد الحياة أعلى إحصائيا بالمقارنة مع تجميد بطيء، بشكل مستقل عن السكان المرضى (المرضى الذين يعانون من العقم أو برنامج التبرع بالبويضات)1،2،3. أدت الإنجازات الملحوظة لتزجيج البويضات إلى أن تنطق لجان الممارسة التابعة للجمعية الأمريكية للطب التناسلي (ASRM) وجمعية التكنولوجيا الإنجابية المساعدة (SART) بأن تكون هذه التقنية الأكثر فعالية للحفاظ على الخصوبة الاختيارية لدى النساء بعد الولادة ، لكل من المؤشرات الطبية وغير الطبية4و5و6. وتشمل المؤشرات الطبية للحفاظ على الخصوبة (1) السرطان وأمراض المناعة الذاتية التي تتطلب العلاجات7 مثل العلاج الإشعاعي، والعلاج الكيميائي السام للخلايا، والعلاج بالغدد الصماء (الذي يرتبط تأثيره الضار على احتياطي المبيض بعمر الأم وكذلك نوع وجرعة العلاج)؛ و(2) الأمراض التي تؤثر تأثيرا ضارا على الخصوبة. '2' أمراض المبيض التي تتطلب جراحة متكررة أو جذرية (مثل بطانة الرحم)8؛ و(3) الحالات الوراثية (مثل X-الهشة) أو فشل المبيض المبكر. وبالإضافة إلى ذلك، أصبح الحفاظ على الخصوبة خيارا قيما لجميع النساء اللاتي لم يحققن هدفهن الأبوي لأسباب غير طبية (تعرف أيضا باسم التجميد الاجتماعي).
بغض النظر عن الإشارة إلى الحفاظ على الخصوبة ووفقا للمبادئ التوجيهية الدولية الرئيسية بشأن الحفاظ على الخصوبة، يجب أن يتلقى جميع المرضى الراغبين في vitrify البويضات الخاصة بهم المشورة المناسبة لإعلامهم بفرصتهم الواقعية للنجاح، والتكاليف، والمخاطر، والقيود المفروضة على الإجراء9،10،11،12،13. الأهم من ذلك، ينبغي أن يكون واضحا أن التزجيج مجموعة من البويضات MII لا يضمن الحمل، ولكن أنه يوفر فرصة أكبر للنجاح في المستقبل في علاج الإخصاب في المختبر (IVF)، إذا لزم الأمر14. في هذا الصدد، فإن عمر المرأة في وقت التزجيج البويضات هو بالتأكيد العامل الأكثر أهمية الحد15 كما سن الأمومة المتقدمة (AMA؛ >35 سنة) هو السبب الرئيسي للعقم الإناث16. إلى جانب انخفاض تدريجي في احتياطي المبيض، ويرتبط AMA مع ضعف كفاءة البويضات بسبب المسارات الفسيولوجية المعيبة مثل التمثيل الغذائي، والتنظيم اللاجيني، ونقاط التفتيش دورة الخلية، والفصل المريوتيكي17. لذلك ، فإن العدد المعقول للبويضات إلى الفيتريف يعتمد بشكل رئيسي على عمر الأم. في النساء الأصغر من 36 سنة، مطلوب ما لا يقل عن 8-10 البويضات MII18 لتحقيق أقصى قدر من فرصة النجاح. بشكل عام ، كلما ارتفع عدد البويضات الزهية ، كلما زاد احتمال النجاح. لذلك، فإن تكييف تحفيز المبيض وفقا لعلامات احتياطي المبيض مثل مستويات الهرمون المضاد للمولريان (AMH) أو عدد الجريبات النملية (AFC) أمر بالغ الأهمية لاستغلال احتياطي المبيض بشكل كامل في أقصر وقت ممكن.
سلامة الإجراء كله هو القضية الرئيسية الأخرى عند تسجيل المرضى للحفاظ على الخصوبة. يجب على الأطباء استخدام أفضل الاستراتيجيات لتقليل المخاطر ومنع (i) متلازمة فرط تحفيز المبيض (OHSS) باستخدام نهج آمنة مثل بروتوكول خصم هرمون إطلاق الغدد التناسلية (GnRH) يليه مشغل ناهض GnRH19 و (2) جهاز التحكم عن بعد ، ولكن من الممكن، مخاطر النزيف البريتوني، إصابة هياكل الحوض (الحالب، الأمعاء، الزائدة الدودية، الأعصاب)، أو عدوى الحوض أثناء استرجاع البويضات. وأخيرا، (3) ترتبط الأنظمة التقليدية للتحفيز مع استراديول مصل فوق الفيزيائية، وبالتالي، لا ينصح في الأمراض الحساسة للاستروجين مثل سرطان الثدي. بروتوكولات تنطوي على مثبطات الأروماتاز (مثل ليتروزول أو تاموكسيفين) هي أكثر ملاءمة في هذه الحالات20,21. في الإعداد المختبري ، لا يزال البروتوكول الأكثر انتشارا لتزجيج البويضات هو البروتوكول الذي وصفه كواياما وزملاؤه2،23، والذي يتكون من إجراء تدريجي يتضمن إضافة تدريجية لمضادات التبريد (CPAs). في المرحلة الأولى (التوازن / الجفاف) ، تتعرض البويضات في محلول CPA يحتوي على 7.5٪ v / v جلايكول الإيثيلين و 7.5٪ v /v ثنائي ميثيل سلفوسيد (DMSO) ، بينما في المرحلة الثانية ، يتم نقل البويضات إلى حل التزجيج مع 15٪ v/v جلايكول الإيثيلين و 15٪ v/v DMSO، بالإضافة إلى 0.5 مول / لتر السكروز. بعد حضانة قصيرة في وسط التزجيج ، يمكن وضع البويضات في مبردات مفتوحة مصممة خصيصا وسقطت أخيرا في النيتروجين السائل عند -196 درجة مئوية ليتم تخزينها حتى الاستخدام.
هنا، تم وصف العمل السريري والمختبري بأكمله لعلاج الحفاظ على الخصوبة من خلال (1) تحديد التوصيات للحصول على المشورة الموضوعية والقائمة على الأدلة، (2) مع التركيز على فعالية تكلفة الإجراء، و (3) وصف الاستراتيجيات الأكثر ملاءمة لاستغلال احتياطي المبيض بشكل كامل وتعظيم عدد البويضات التي تم استرجاعها في أقصر وقت ممكن. سيتم تفصيل تقييم احتياطي المبيض ، وتعريف بروتوكول التحفيز المثالي ، وكذلك إجراءات استرجاع البويضات والتكريد والتزجيج جنبا إلى جنب مع النهج لتحقيق أقصى قدر من فعاليتها وكفاءتها وسلامتها. وبما أن البروتوكولات أو التعديلات الأخرى لهذا البروتوكول موجودة في المؤلفات، فإن النتائج التمثيلية وأقسام المناقشة في هذه المخطوطة تنطبق فقط على هذا الإجراء.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Collection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermometer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test tube Warmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tri-gas incubator</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td>MCO-5M-PE</td>
			<td>02/CO2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum Pump</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-MAR-5200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSCM (Continuos single culture complete) medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90165</td>
			<td>IVF culture medium supplemented with HSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ovum Aspiration Needle (Single lumen)</td>
			<td>Cook</td>
			<td colspan="2">K-OSN-1730-B-60</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primaria Dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353803</td>
			<td>Corning Primaria Dish 100x20 mm style standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round- bottom tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352001</td>
			<td>Falcon 14ml Round Bottom Polystyrene Test tube with snap cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round- bottom tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352003</td>
			<td>Oocyte collection tubes/ Falcon 5ml 12x75 Round Bottom Polipropilene Test tube with snap cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber Bulb</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z111589-12EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass Pasteur pipettes</td>
			<td>Hunter Scientific</td>
			<td>PPB150-100PL</td>
			<td>Pipette Pasteur Cotonate, 150mm, MEA e CE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Denudation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 incubator</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>Galaxy 14S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>66003</td>
			<td>p20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>k-System Incubator</td>
			<td>Coopersurgical</td>
			<td>G210Invicell</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;l</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin</td>
			<td>thermoFisher Scietific</td>
			<td>9988</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90101</td>
			<td>80 IU/mL of hyaluronidase enzyme in HEPES-buffered HTF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 4-well plate with sliding lid</td>
			<td>ThermoFisher Scietific</td>
			<td>176740</td>
			<td>Multidishes 4 wells (Nunc)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF One well dish</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353653</td>
			<td>Falcon 60 x 15 mm TC treated center-well IVF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified HTF Medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90126</td>
			<td>HEPES-Buffered medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber Bulb</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z111589-12EA</td>
			<td>1 mL for pasteur pipettes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass Pasteur pipettes</td>
			<td>Hunter Scientific</td>
			<td>PPB150-100PL</td>
			<td>Pipette Pasteur Cotonate, 150 mm, MEA e CE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette&#160; tips (140 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1140-10BS-6</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (130 &#181;m )</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1130-10BS-7</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (170 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1170-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Timer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>p200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Container for Cooling Rack</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td></td>
			<td>Liquid nitrogen container for vitrification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9988</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15 mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60 x 15 mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 6-well</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-SW02</td>
			<td>OOSAFE&#160;6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified HTF Medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90126</td>
			<td>HEPES-Buffered medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (170 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1170-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Freeze kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90133-so</td>
			<td>2 Vials of ES (Equilibration Solution, 2 x 1 mL) and 2 Vials of VS (Vitrification Solution, 2 x 1 mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrifit</td>
			<td>Coopersurgical Origio</td>
			<td>42782001A</td>
			<td>VitriFit&#160; Box</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Timer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>p200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>k-System Incubator</td>
			<td>Coopersurgical</td>
			<td>G210Invicell</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Container for Cooling Rack</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td></td>
			<td>Liquid nitrogen container for vitrification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSCM (Continuos single culture complete) medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90165</td>
			<td>IVF culture medium supplemented with HSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15 mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 4-well plate with sliding lid</td>
			<td>ThermoFisher Scietific</td>
			<td>176740</td>
			<td>Multidishes 4 wells (Nunc)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 6-well</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-SW02</td>
			<td>OOSAFE&#174;&#160;6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SAtripping pipette tips (300&#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1300-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Thaw kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90137-so</td>
			<td>4 Vials of TS (Thawing Solution, 4 x 2 mL) + 1 Vial of DS (Dilution Solution, 1 x 2 mL) +1 Vial of WS (Washing Solution, 1 x 2 mL)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fertility preservation through oocyte vitrification: clinical and laboratory perspectives

الحفاظ على خصوبة الإناث أمر بالغ الأهمية في نظام الرعاية الصحية متعدد الوظائف الذي يعتني بنوعية حياة المرضى في المستقبل. يعترف العديد من الجمعيات العلمية الدولية بالتبريد البويضات كمعيار ذهبي للحفاظ على الخصوبة لدى النساء بعد الولادة ، لكل من المؤشرات الطبية وغير الطبية. المؤشرات الطبية الرئيسية هي أمراض الأورام، وأمراض النساء مثل بطانة الرحم الحادة، والأمراض الجهازية التي تعرض احتياطي المبيض للخطر، والظروف الوراثية التي تنطوي على انقطاع الطمث المبكر. تصف هذه الورقة مجمل العمل السريري والمختبري لعلاج الحفاظ على الخصوبة من خلال تحديد توصيات لتقديم المشورة الموضوعية والقائمة على الأدلة. وعلاوة على ذلك، فإنه يركز على فعالية الإجراء ويصف الاستراتيجيات الأنسب لاستغلال احتياطي المبيض بشكل كامل وتعظيم عدد البويضات التي تم استرجاعها في أقصر وقت ممكن. وقد تم تقييم احتياطي المبيض، وتعريف بروتوكول التحفيز المثالي، فضلا عن استرجاع البويضات، والتقييم، وإجراءات التزجيج مفصلة جنبا إلى جنب مع النهج لتحقيق أقصى قدر من الكفاءة والكفاءة والسلامة.

نظرة عامة على برنامج الحفاظ على الخصوبة في المركز
وعلى مدى فترة 12 عاما (2008-2020)، خضعت 285 امرأة لاسترجاع بويضات واحدة على الأقل، مما انطوى على تزجيج مجموعة كاملة من البويضات الناضجة التي تم جمعها. وخضع معظم هؤلاء النساء (ن= 250) لاسترجاع واحد، وخضعت 35 امرأة لعمليات استرج?...

Watch this Scientific Journal Video about Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives at JoVE.com

Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives

يعترف العديد من الجمعيات العلمية الدولية بالتبريد البويضات كمعيار ذهبي للحفاظ على الخصوبة لدى النساء بعد الولادة. تضمن الاستراتيجيات السريرية والمختبرية المناسبة أقصى قدر من الفعالية والكفاءة والسلامة لعلاجات الحفاظ على الخصوبة.

الحفاظ على الخصوبة من خلال التزجيج Oocyte: المنظورات السريرية والمختبرية

Preserving female fertility is crucial in a multifunctional healthcare system that takes care of patients' future quality of life. Oocyte cryopreservation ...

التزجيج البويضات وإجراءات الاحترار ضرورية للحفاظ على الخصوبة. اتباع هذا البروتوكول كما هو موضح يسمح للمستخدم لتحقيق أقصى قدر من فعالية هذه الإجراءات. الحفاظ على الخصوبة لتزجيج البويضات هو اليوم نهج راسخ ومقبول أخلاقيا.فهي تسمح بتحقيق نتائج سريرية فعالة ومتسقة والتغلب على القيود الأخلاقية والقانونية المرتبطة بالتبريد الجنيني. لتحقيق الكفاءة في عملية التزجيج ، من المهم أن تصبح على دراية بجميع النقاط الحرجة للبروتوكول ، مع إيلاء اهتمام خاص لوقت تعرض العينات لمضادات البروتين المبرد. في غضون 38 ساعة من الاسترجاع وبعد التكفير مباشرة، قم بتسمية جميع الإمدادات البلاستيكية باسم المريض وهويه ونوع محلوله، واطلب من الشاهد تأكيد معلومات المريض على جهاز التبريد.عندما تم تسمية جميع الإمدادات ، عكس بعناية كل قارورة من البويضات عدة مرات لخلط ووضع قطرة 30 ميكرولتر من HEPES العازلة المتوسطة تكملها الألبومين المصل البشري و30 ميكرولتر قطرة مجاورة من محلول الاعتدال على طبق بتري. استخدام ماصة متجرد لوضع البويضات في أول قطرة وإنشاء جسر متوسط إلى قطرة 30 ميكرولتر من محلول التوازن للحصول على زيادة تدريجية في تركيز المبردات. بعد ثلاث دقائق، إضافة ثانية 30 ميكرولتر قطرة من محلول التوازن إلى لوحة واستخدام ماصة لإنشاء جسر متوسط بين قطرات من الحل.في حين أن البويضات هي equilibrating، إضافة قطرة واحدة 30 ميكرولتر من محلول التوازن لكل جهاز التبريد لاستخدامها على لوحة. بعد ثلاث دقائق، قم بتحريك البويضات إلى محلول التوازن النقي لمدة ست إلى تسع دقائق للسماح للبويضات بالعودة إلى حجمها الأولي. عندما تتعافى البويضات، قم بإعداد طبق التلقيح الاصطناعي المركزي الذي يحتوي على ملليلتر واحد من محلول التزجيج.نقل البويضات إلى الطبق في أقل قدر ممكن من المتوسطة ونقلها بعناية لإزالة أي حل التوازن الزائد. قبل حوالي 10 ثوان من نهاية الحضانة ، ضع جهازا بالتبريد يحمل معلومات المريض تحت المجهر وضبط التركيز على طرف جهاز التبريد. ضع البويضات على جهاز cryo بجانب الطرف في الحد الأدنى من محلول التزجيج ونقل ماصة التعري بعيدا عن البويضات لإزالة أي محلول تزجيج زائد ، تاركا البويضات مغطاة بطبقة رقيقة من الوسط.يغرق بسرعة جهاز التبريد في النيتروجين السائل ويهز الجهاز بسرعة لإزالة أي فقاعات الهواء من سطحه. عقد الغطاء الواقي لجهاز التبريد مع ملاقط، وملء الغطاء مع النيتروجين السائل قبل إدراج الجهاز في الغطاء مع الحفاظ على شرائط البروبيلين في النيتروجين السائل. ثم تخزين جهاز التبريد في visotube المسمى مع معلومات المريض وتحديث ورقة المختبر.لارتفاع درجة حرارة البويضات، عكس بعناية كل قارورة من ذوبان، تمييع، وغسل حل تسخينها إلى درجة حرارة الغرفة، وإضافة ملليلتر واحد من محلول ذوبان إلى البئر المركزي للطبق بتري لمدة ساعة واحدة على الأقل حضانة في 37 درجة مئوية. قم بتسمية جميع الإمدادات البلاستيكية باسم المريض وهوية ونوع المحلول، واطلب من الشاهد تأكيد معلومات المريض على جهاز التبريد. لكل جهاز ليتم تسخينه، إضافة 200 ميكرولتر من محلول التخفيف إلى البئر الأول من لوحة بئر ستة وإضافة حجم متساو من محلول الغسيل إلى الآبار الثانية والثالثة من لوحة.إضافة برنامج تلفزيوني إلى المنطقة على السطح الخارجي للأبار لمنع تبخر الحل. ضع طبق محلول الذوبان تحت مجهر الاستريو وضبط التركيز على وسط الطبق. تطور بعناية لإزالة الغطاء الواقي لجهاز التبريد مع الحفاظ على شرائط البروبيلين في النيتروجين السائل ونقل جهاز التبريد من النيتروجين السائل إلى محلول الذوبان في أسرع وقت ممكن لتجنب خطر التخلص.بعد دقيقة واحدة، والتركيز على غيض من جهاز التبريد لتحديد موقع البويضات واستخدام ماصة متجرد في نهاية المطاف للافراج بلطف البويضات من الجهاز. استخدام ماصة متجرد قطرها 170 ميكرون لنقل البويضات وحجم صغير من محلول ذوبان الجليد في محلول التخفيف في البئر الأول من لوحة البئر الستة. بعد ثلاث دقائق، نقل البويضات إلى البئر الأول من محلول الغسيل لمدة خمس دقائق.في نهاية الحضانة، نقل البويضات إلى البئر الثاني من محلول الغسيل واحتضان في 37 درجة مئوية لمدة دقيقة واحدة قبل نقل البويضات إلى حجم مناسب من المتوسط ثقافة التلقيح الاصطناعي قبل متساوية لمدة ساعة واحدة وتحديث ورقة المختبر. وعلى مدى فترة 12 عاما، خضعت 285 امرأة لاسترجاع بويضات واحدة على الأقل، مما استتبع تزجيج مجموعة كاملة من البويضات الناضجة التي تم جمعها. وخضع معظم هؤلاء النساء لعملية استرجاع واحدة.خضع 35 استرجاع متعددة. كانت أسباب الخضوع لاسترجاع البويضات لتزجيج البويضات توصف بشكل عام بأنها طبية بخلاف السرطان والسرطان وغير الطبي وغيرها. كان المرضى الذين يعانون من سبب طبي لتزجيج البويضات والمرضى الذين يخضعون للحفاظ على الخصوبة بسبب السرطان أصغر سنا وأظهروا عددا أكبر من الجريبات النملية من المرضى الذين يعانون من أسباب غير طبية أو أسباب أخرى.ومع ذلك ، حيث كانت معدلات النضج المتوسطة أقل قليلا في الأسباب الطبية للمرضى ، كان عدد البويضات المهزوم في المتوسط متشابها بين المجموعات. ما يقرب من نصف المرضى الذين يعانون من أسباب طبية أخرى غير السرطان، وغالبية المرضى الذين يعانون من أسباب أخرى لتزجيج البيض عاد فعلا لارتفاع درجة الحرارة. وعلى العكس من ذلك، فإن عددا قليلا جدا من المرضى الذين خضعوا للحفاظ على الخصوبة لأسباب السرطان أو غير الطبية استخدموا البويضات الزفيرة للتلقيح الاصطناعي.على الرغم من الاختلافات في الوقت المنقضي بين التزجيج والاحترار ، كان معدل بقاء البويضات متشابها بين مجموعات المرضى ، مما يؤكد فعالية وسلامة بروتوكولات تزجيج البويضات والاحترار. وعلاوة على ذلك، فإن معدل البقاء على قيد الحياة مستقل عن تجربة المشغل في التزجيج والاحترار. وأهم الخطوات التي قد تؤثر على اتساق النتائج هي تلك المتعلقة بالاحترار.لذلك ، من المهم حقا التحكم بعناية في حجم ودرجة حرارة حلول الذوبان. أنسجة المبيض cryopreservation الاستراتيجية الوحيدة قيد التحقيق حاليا كخيار لمرضى ما قبل البلوغ. ورغم أن هذا النهج يبشر بالخير، فإن له حدودا هامة تحد من تطبيقه.

Research

JoVE Journal

Medicine

Imaging Glioma Initiation In Vivo Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window

Imaging Glioma Initiation In Vivo Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window

بدء تصوير دبقي<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; من خلال نافذة رقيقة الجمجمة ملمع وعززت القحف

Glioma is the one of the most lethal forms of human cancer. The most effective glioma therapy to date-surgery followed by radiation treatment-offers ...

Clinical Assessment of Spatiotemporal Gait Parameters in Patients and Older Adults

التقييم السريري للالزماني المكاني المشية معلمات في المرضى وكبار السن

Spatial and temporal characteristics of human walking are frequently evaluated to identify possible gait impairments, mainly in orthopedic and ...

Functional Human Liver Preservation and Recovery by Means of Subnormothermic Machine Perfusion

المحافظة على الكبد وظيفية الإنسان والاسترداد من قبل وسائل Subnormothermic آلة الإرواء

There is currently a severe shortage of liver grafts available for transplantation.  Novel organ preservation techniques are needed to expand the pool of ...

Methodology for Sputum Induction and Laboratory Processing

منهجية الاستقراء البصاق وتجهيز المختبرات

The technique of sputum induction and processing is a recognized non-invasive method allowing the collection and analysis of cells from the airways, which ...

Introduction of Intracapsular Rotary-cut Procedures (IRCP): A Modified Hysteromyomectomy Procedures Facilitating Fertility Preservation

Introduction of Intracapsular Rotary-cut Procedures IRCP: A Modified Hysteromyomectomy Procedures Facilitating Fertility Preservation

الأخذ بإجراءات قطع الدوارة إينتراكابسولار (إيركب): بتعديل إجراءات هيستيروميوميكتومي تيسير الحفاظ على الخصوبة

Uterine fibroids are common benign tumors in the female reproductive system. A hysterectomy is the most effective treatment for symptomatic fibroids. For ...

Learning Modern Laryngeal Surgery in a Dissection Laboratory

تعلم جراحة الحنجرة الحديثة في مختبر تشريح

Surgery for laryngeal malignancies requires millimetric accuracy from the different endoscopic and open techniques available. Practice of this surgery is ...

Orthotopic Kidney Auto-Transplantation in a Porcine Model Using 24 Hours Organ Preservation And Continuous Telemetry

عملية زرع الكلى التلقائية في نموذج بورسين باستخدام 24 ساعة لحفظ الأعضاء والقياس المستمر عن بعد

In the present era of organ transplantation with critical organ shortage, various strategies are employed to expand the pool of available allografts for ...

OP-IVM: Combining In vitro Maturation after Oocyte Retrieval with Gynecological Surgery

OP-IVM: الجمع بين النضوج في المختبر بعد استرجاع البويضات مع جراحة أمراض النساء

The use of in vitro maturation (IVM) before gynecological operation (OP-IVM) is an extension of conventional IVM that combines IVM following oocyte ...

Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction

الحفاظ على الخصوبة في المرضى الذين يعانون من خلل حاد في المبيض

Ovarian function progressively declines during aging and in some pathophysiological conditions including karyotype abnormality, autoimmune diseases, ...

Improved Rodent Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion Injury

تحسين نموذج القوارض من نقص تروية عضلة القلب وإصابة التروية

Myocardial ischemia and reperfusion injury (MIRI), induced by coronary heart disease (CHD), causes damage to the cardiomyocytes. Furthermore, evidence ...