Name: fertility preservation through oocyte vitrification: clinical and laboratory perspectives
Uploaded: 2021-09-16T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives at JoVE.com

1. Op- og 1.3.1992
BEMÆRK: Hvis patienter, der har brug for fertilitetsbevarelse af onkologiske årsager, skal du sikre dig, at der ikke er nogen venteliste til planlægningskonsultation, og at udnævnelsen leveres så hurtigt som muligt.
<ol><li>Undersøg sygehistorien og tidligere dokumentation, og vurder patientens generelle sundhedstilstand.</li>
	<li>Registrer alle oplysninger (herunder onkologens godkendelse til at gennemgå stimulering i æggestokkene i tilfælde af kræftpatienter) ...

Kliniske overvejelser 
Selv om nye strategier, såsom æggestokkene væv cryopreservation og in vitro modning, er blevet undersøgt, oocyt vitrification efter COS er guld standard teknik til fertilitet bevarelse. I dette scenario, antallet af oocytter hentet og cryopreserved bør maksimeres på kortest mulig tid, da de fleste kræftpatienter kan drage fordel udelukkende af en æggestokkene cyklus, før de er nødt til at påbegynde deres kræftbehandling (r). Således er en or...

Udviklingen og implementeringen af et effektivt kryopræserveringsprogram for humane oocytter har været et betydeligt gennembrud inden for reproduktiv medicin. Ifølge de seneste beviser, vitrification er den mest effektive strategi til cryopreserve metafase II (MII) oocytter, da det resulterer i statistisk højere overlevelsesrater i forhold til langsom frysning, uafhængigt af patientpopulationen (ufrugtbare patienter eller oocyt donation program)1,2,3. De bemærkelsesværdige resultater af oocyt vitrificering førte praksis udvalg American Society for Reproductive Medicine (ASRM) og Society for Assisted Reproductive Technology (SART) til at udtale denne teknik til at være den mest effektive til elektiv fertilitet bevarelse hos postpubertal kvinder, for både medicinske og ikke-medicinske indikationer4,5,6. Medicinske indikationer for fertilitetsbevarelse omfatter (i) kræft og autoimmune sygdomme, der kræver behandlinger7 såsom strålebehandling, cytotoksisk kemoterapi og endokrine terapi (hvis skadelige virkning på æggestokkene reserve er forbundet med moderens alder samt type og dosis af behandlingen); — sygdomme i æggestokkene, der kræver gentagen eller radikal kirurgi (f.eks. endometriose)8 og (iii) genetiske tilstande (f.eks. X-skrøbelige) eller for tidlig ovariesvigt. Derudover er fertilitetsbevarelse blevet en værdifuld mulighed for alle kvinder, der ikke har nået deres forældremål af ikke-medicinske årsager (også kendt som social indefrysning).
Uanset indikationen for fertilitetsbevarelse og i henhold til de store internationale retningslinjer for fertilitetsbevarelse bør alle patienter , der er villige til at vitrificere deres oocytter, modtage passende rådgivning for at blive informeret om deres realistiske chance for succes, omkostninger, risici og begrænsninger ved proceduren9,10,11,12,13. Vigtigst er det, bør det være klart, at vitrifying en kohorte af MII oocytter ikke sikrer en graviditet, men at det giver en større chance for succes for fremtidig in vitro befrugtning (IVF) behandling, hvis det er nødvendigt14. I denne henseende er kvindens alder på tidspunktet for oocyt vitrifikation helt sikkert den vigtigste begrænsende faktor15 som avanceret mødrealder (AMA; > 35 år) er hovedårsagen til kvindelig infertilitet16. Ud over en progressiv reduktion i æggestokkene reserve, AMA er forbundet med en svækkelse af oocyt kompetence på grund af defekte fysiologiske veje såsom stofskifte, epigenetisk regulering, celle cyklus checkpoints, og meiotisk adskillelse17. Derfor afhænger det rimelige antal æg, der skal vitrificeres, hovedsageligt af moderens alder. Hos kvinder yngre end 36 år, mindst 8-10 MII oocytes18 er forpligtet til at maksimere chancen for succes. Generelt gælder det, at jo højere antallet af forglassede oocytter er, jo højere er sandsynligheden for succes. Derfor er skræddersy æggestokkene stimulation i henhold til æggestokkene reserve markører såsom anti-Müllerian hormon (AMH) niveauer eller antral follikeltal (AFC) er afgørende for fuldt ud at udnytte æggestokkene reserve på kortest mulig tid.
Sikkerheden ved hele proceduren er det andet centrale spørgsmål, når du tilmelder patienter til fertilitetsbevarelse. Klinikere bør anvende de bedste strategier til at minimere risici og forebygge (i) ovarie hyperstimulation syndrom (OHSS) ved hjælp af sikre tilgange såsom gonadotrophin-frigive hormon (GnRH) antagonist protokol efterfulgt af en GnRH agonist udløse19 og (ii) fjernbetjeningen, endnu muligt, risiko for peritoneal blødning, skade på bækken strukturer (ureter, tarm, tillæg, nerver), eller bækken infektion under oocyt hentning. Endelig (iii) traditionelle regimer til stimulering er forbundet med supraphysiologic serum østradiol og derfor ikke anbefales i østrogen-følsomme sygdomme som brystkræft. Protokoller, der involverer aromatasehæmmere (f.eks. letrozofødder eller tamoxifen), er mere velegnede i disse tilfælde20,21. I laboratoriet indstilling, den mest udbredte protokol for oocyt vitrification er stadig den første beskrevet af Kuwayama og kolleger2,23, som består af en trinvis procedure, der involverer gradvis tilsætning af kryoprotectants (CPA'er). I første fase (ligevægt/dehydrering) eksponeres oocytter i en CPA-opløsning, der indeholder 7,5% v/v ethylenglycol og 7,5% v/v dimethylsulfoxid (DMSO), mens de i anden fase oocytter flyttes til en vitrifikationsopløsning med 15% v/v ethylenglycol og 15% v/v DMSO plus 0,5 mol/L saccharose. Efter en kort inkubation i vitrifikationsmediet kan oocytterne placeres i specielt designede, åbne kryodevices og til sidst kastes i flydende nitrogen ved -196 °C, der skal opbevares indtil brug.
Her er hele det kliniske og laboratoriemæssige arbejde med en fertilitetsbevarelsesbehandling blevet beskrevet ved (i) at skitsere anbefalinger til objektiv og evidensbaseret rådgivning, (ii) med fokus på procedurens omkostningseffektivitet og (iii) beskrive de mest hensigtsmæssige strategier til fuldt ud at udnytte æggestokkene og maksimere antallet af oocytter hentet på kortest mulig tid. Evalueringen af æggestokkene reserve, definitionen af en ideel stimulation protokol, samt oocyte hentning, denudation, og vitrification procedurer vil blive detaljeret sammen med tilgange til at maksimere deres effektivitet, effektivitet og sikkerhed. Da der findes andre protokoller eller tilpasninger af denne protokol i litteraturen, gælder de repræsentative resultater og diskussionsafsnittene i dette manuskript kun for denne procedure.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Collection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermometer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test tube Warmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tri-gas incubator</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td>MCO-5M-PE</td>
			<td>02/CO2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum Pump</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-MAR-5200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSCM (Continuos single culture complete) medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90165</td>
			<td>IVF culture medium supplemented with HSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ovum Aspiration Needle (Single lumen)</td>
			<td>Cook</td>
			<td colspan="2">K-OSN-1730-B-60</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primaria Dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353803</td>
			<td>Corning Primaria Dish 100x20 mm style standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round- bottom tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352001</td>
			<td>Falcon 14ml Round Bottom Polystyrene Test tube with snap cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round- bottom tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352003</td>
			<td>Oocyte collection tubes/ Falcon 5ml 12x75 Round Bottom Polipropilene Test tube with snap cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber Bulb</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z111589-12EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass Pasteur pipettes</td>
			<td>Hunter Scientific</td>
			<td>PPB150-100PL</td>
			<td>Pipette Pasteur Cotonate, 150mm, MEA e CE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Denudation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 incubator</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>Galaxy 14S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>66003</td>
			<td>p20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>k-System Incubator</td>
			<td>Coopersurgical</td>
			<td>G210Invicell</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;l</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin</td>
			<td>thermoFisher Scietific</td>
			<td>9988</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90101</td>
			<td>80 IU/mL of hyaluronidase enzyme in HEPES-buffered HTF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 4-well plate with sliding lid</td>
			<td>ThermoFisher Scietific</td>
			<td>176740</td>
			<td>Multidishes 4 wells (Nunc)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF One well dish</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353653</td>
			<td>Falcon 60 x 15 mm TC treated center-well IVF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified HTF Medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90126</td>
			<td>HEPES-Buffered medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber Bulb</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z111589-12EA</td>
			<td>1 mL for pasteur pipettes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass Pasteur pipettes</td>
			<td>Hunter Scientific</td>
			<td>PPB150-100PL</td>
			<td>Pipette Pasteur Cotonate, 150 mm, MEA e CE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette&#160; tips (140 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1140-10BS-6</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (130 &#181;m )</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1130-10BS-7</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (170 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1170-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Timer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>p200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Container for Cooling Rack</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td></td>
			<td>Liquid nitrogen container for vitrification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9988</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15 mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60 x 15 mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 6-well</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-SW02</td>
			<td>OOSAFE&#160;6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified HTF Medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90126</td>
			<td>HEPES-Buffered medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (170 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1170-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Freeze kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90133-so</td>
			<td>2 Vials of ES (Equilibration Solution, 2 x 1 mL) and 2 Vials of VS (Vitrification Solution, 2 x 1 mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrifit</td>
			<td>Coopersurgical Origio</td>
			<td>42782001A</td>
			<td>VitriFit&#160; Box</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Timer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>p200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>k-System Incubator</td>
			<td>Coopersurgical</td>
			<td>G210Invicell</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Container for Cooling Rack</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td></td>
			<td>Liquid nitrogen container for vitrification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSCM (Continuos single culture complete) medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90165</td>
			<td>IVF culture medium supplemented with HSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15 mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 4-well plate with sliding lid</td>
			<td>ThermoFisher Scietific</td>
			<td>176740</td>
			<td>Multidishes 4 wells (Nunc)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 6-well</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-SW02</td>
			<td>OOSAFE&#174;&#160;6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SAtripping pipette tips (300&#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1300-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Thaw kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90137-so</td>
			<td>4 Vials of TS (Thawing Solution, 4 x 2 mL) + 1 Vial of DS (Dilution Solution, 1 x 2 mL) +1 Vial of WS (Washing Solution, 1 x 2 mL)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fertility preservation through oocyte vitrification: clinical and laboratory perspectives

Bevarelse af kvinders fertilitet er afgørende i et multifunktionelt sundhedssystem, der tager sig af patienternes fremtidige livskvalitet. Oocyte cryopreservation er anerkendt af flere internationale videnskabelige selskaber som guldstandarden for fertilitetsbevarelse hos postpubertale kvinder, for både medicinske og ikke-medicinske indikationer. De vigtigste medicinske indikationer er onkologiske sygdomme, gynækologiske sygdomme som svær endometriose, systemiske sygdomme, der kompromitterer æggestokkenes reserve, og genetiske tilstande, der involverer for tidlig overgangsalder. Dette papir beskriver hele det kliniske og laboratoriemæssige arbejde med en fertilitetsbevarelsesbehandling ved at skitsere anbefalinger til objektiv og evidensbaseret rådgivning. Desuden fokuserer den på effektiviteten af proceduren og beskriver de mest hensigtsmæssige strategier til fuldt ud at udnytte æggestokkene reserve og maksimere antallet af oocytter hentet på kortest mulig tid. Evalueringen af æggestokkene reserve, definitionen af en ideel stimulation protokol, samt oocyte hentning, denudation, og vitrification procedurer er blevet detaljeret sammen med tilgange til at maksimere deres effektivitet, effektivitet og sikkerhed.

Oversigt over fertilitetsbevarelsesprogrammet på centret
Over en 12-årig periode (2008-2020) gennemgik 285 kvinder mindst én oocytudtagning, der indebar vitrificering af hele kohorten af modne æg indsamlet. De fleste af disse kvinder (n= 250) gennemgik en enkelt genfinding, og 35 gennemgik flere henninger. Årsagerne til at gennemgå oocyt hentning for æg vitrification er sammenfattet i 4 kategorier: medicinsk (bortset fra kræft), kræft, ikke-medicinsk, og andre. Blandt...

Watch this Scientific Journal Video about Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives at JoVE.com

Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives

Oocyte cryopreservation er anerkendt af flere internationale videnskabelige samfund som guldstandarden for fertilitetsbevarelse hos postpubertale kvinder. Passende kliniske strategier og laboratoriestrategier sikrer maksimal effektivitet, effektivitet og sikkerhed ved fertilitetsbevarelsesbehandlinger.

Fertilitetsbevarelse gennem Oocyte Vitrification: Kliniske og laboratorieperspektiver

Preserving female fertility is crucial in a multifunctional healthcare system that takes care of patients' future quality of life. Oocyte cryopreservation ...

Oocyt vitrificeringen og opvarmningsprocedurerne er afgørende for fertilitetsbevarelse. Efter denne protokol som demonstreret giver en bruger mulighed for at maksimere effektiviteten af disse procedurer. Fertilitetsbevarelse til oocyt vitrificering er i dag en etableret og etisk acceptabel tilgang.Det gør det muligt at opnå effektive og konsekvente kliniske resultater og overvinde den moralske og juridiske begrænsning, der er forbundet med embryo-kryopræservering. For at opnå færdigheder i vitrificeringsprocessen er det vigtigt at blive fortrolig med alle de kritiske punkter i protokollen med særlig vægt på prøvernes eksponeringstid for kryoprotectanterne. Inden for 38 timer efter hentning og umiddelbart efter denudation, mærke alle plastforsyninger med patientens navn, ID, og type løsning, og bede et vidne til at bekræfte patientens oplysninger om cryo enheden.Når alle forsyningerne er mærket, skal du omhyggeligt vende hvert hætteglas oocytter flere gange for at blande og placere en 30 mikroliter dråbe HEPES buffer medium suppleret med human serum albumin og en 30 mikroliter tilstødende dråbe ækvilibreringsopløsning på en petriskål. Brug stripperpipetten til at placere oocytterne i det første fald og opret en bro af medium til en 30 mikroliter dråbe ekvilibreringsopløsning for at opnå en gradvis stigning i koncentrationen af kryoprotectanterne. Efter tre minutter tilsættes en anden 30 mikroliter dråbe ækvilibreringsopløsning til pladen og brug pipetten til at skabe en medium bro mellem opløsningsdråberne.Mens oocytterne er ekvilibrerende, tilsættes en 30 mikroliter dråbe ækvilibreringsopløsning for hver kryoanordning, der skal bruges på pladen. Efter tre minutter skal oocytterne flyttes ind i den rene ekvilibreringsopløsning i seks til ni minutter, så oocytterne kan vende tilbage til deres oprindelige størrelse. Når oocytterne er kommet sig, skal du tilberede en central brønd IVF-skål, der indeholder en milliliter vitrifikationsopløsning.Overfør oocytterne til skålen i så lidt medium som muligt, og flyt dem forsigtigt for at fjerne overskydende ekvilibreringsopløsning. Ca. 10 sekunder før afslutningen af inkubationen skal du placere en kryoenhed mærket med patientens oplysninger under mikroskopet og justere fokus på spidsen af kryoenheden. Anfør oocytterne på kryoanordningen ved siden af spidsen i den minimale mængde vitrifikationsopløsning, og flyt stripperpipetten væk fra oocytterne for at fjerne overskydende vitrifikationsopløsning, så oocytterne er dækket af et tyndt lag medium.Sy kryoenheden hurtigt ned i flydende nitrogen, og ryst hurtigt enheden for at fjerne luftbobler fra overfladen. Hold kryoapparatets beskyttelseshætte med pincet, fyld hætten med flydende nitrogen, før du sætter enheden i hætten, mens propylenstrimlerne opbevares i flydende nitrogen. Gem derefter kryoenheden i et visotube mærket med patientens oplysninger og opdater laboratoriearket.For oocytopvarmning skal du forsigtigt vende hvert hætteglas med optøning, fortynding og vaskeopløsning opvarmet til stuetemperatur og tilføje en milliliter optøningsopløsning til den centrale brønd i en petriskål i mindst en times inkubation ved 37 grader Celsius. Mærk alle plastforsyninger med patientens navn og ID og typen af opløsning, og bed et vidne om at bekræfte patientens oplysninger på kryoenheden. For hver anordning, der skal opvarmes, tilsættes 200 mikroliter fortyndingsopløsning til den første brønd af en seksbrøndplade og tilsæt et lige stort vaskeopløsning til pladens andet og tredje brønde.Tilsæt PBS til området på ydersiden af brøndene for at forhindre fordampning af opløsningen. Placer skålen med optøningsopløsning under stereomikroskopet, og juster fokus til midten af skålen. Drej forsigtigt for at fjerne beskyttelseshætten på en kryoanordning, mens propylenstrimlerne opbevares i flydende nitrogen, og kryoanordningen overføres fra det flydende nitrogen til optøningsopløsningen så hurtigt som muligt for at undgå risikoen for afvitrificering.Efter et minut skal du fokusere på spidsen af cryo-enheden for at finde oocytterne og til sidst bruge en stripperpipette til forsigtigt at frigive oocytterne fra enheden. Brug en stripperpipette med en diameter på 170 mikron til at overføre oocytterne og et lille volumen optøningsopløsning til fortyndingsopløsningen i den første brønd af de seks brøndplader. Efter tre minutter skal du flytte oocytterne ind i den første brønd af vaskeopløsning i fem minutter.Ved afslutningen af inkubationen overføres oocytterne til den anden brønd af vaskeopløsning og inkuberes ved 37 grader Celsius i et minut, før oocytterne overføres til et passende volumen af præekvilibreret IVF-dyrkningsmedium i en time og opdaterer laboratoriearket. Over en 12-årig periode gennemgik 285 kvinder mindst én oocytudtagning, der medførte vitrificering af hele kohorten af modne æg indsamlet. De fleste af disse kvinder gennemgik en enkelt genfinding.35 gennemgik flere hentning. Årsagerne til at gennemgå oocyt hentning for æg vitrification var generelt karakteriseret som medicinsk andet end kræft, kræft, nonmedical, og andre. Patienter med en medicinsk grund til æg vitrifikation og patienter, der gennemgår fertilitetsbevarelse på grund af kræft var yngre og viste højere antral follikulær tæller end patienter med nonmedical eller andre årsager.Men da den gennemsnitlige modning var lidt lavere i de medicinske årsager patienter, antallet af oocytter vitrified i gennemsnit var ens mellem grupperne. Omkring halvdelen af patienterne med andre medicinske årsager end kræft, og de fleste patienter med andre årsager til æg vitrification faktisk vendte tilbage til opvarmning. Omvendt, meget få patienter, der gennemgik fertilitetsbevarelse for kræft eller ikke-medicinske årsager brugte deres vitrificeret oocytter til IVF.På trods af forskelle i den tid, der gik mellem vitrificering og opvarmning, var overlevelsesraten for oocytterne ens mellem patientgrupper, hvilket bekræftede effektiviteten og sikkerheden af oocyt vitrificerings- og opvarmningsprotokollerne. Desuden var overlevelsesraten uafhængig af vitrificerings- og opvarmningsoperatørens erfaring. De mest afgørende skridt, der kan påvirke sammenhængen i resultaterne er den, der er relateret til opvarmning.Derfor er det virkelig vigtigt at omhyggeligt kontrollere volumen og temperaturen på optøningsopløsningerne. Æggestokkene væv cryopreservation den eneste strategi i øjeblikket undersøges som en mulighed for præ-pubertale patienter. Selv om denne fremgangsmåde er lovende, har den en vigtig begrænsning, som begrænsede dens anvendelse.

Research

JoVE Journal

Medicine

Imaging Glioma Initiation In Vivo Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window

Imaging Glioma Initiation In Vivo Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window

Imaging gliom Indledning<em&gt; In Vivo</em&gt; Gennem en poleret og Reinforced Thin-kranium Cranial Window

Glioma is the one of the most lethal forms of human cancer. The most effective glioma therapy to date-surgery followed by radiation treatment-offers ...

Clinical Assessment of Spatiotemporal Gait Parameters in Patients and Older Adults

Klinisk vurdering af Spatiotemporal gangparametre i patienter og ældre voksne

Spatial and temporal characteristics of human walking are frequently evaluated to identify possible gait impairments, mainly in orthopedic and ...

Functional Human Liver Preservation and Recovery by Means of Subnormothermic Machine Perfusion

Funktionel Human Liver Beskyttelse og inddrivelse af beløb ved Subnormothermic Machine Perfusion

There is currently a severe shortage of liver grafts available for transplantation.  Novel organ preservation techniques are needed to expand the pool of ...

Methodology for Sputum Induction and Laboratory Processing

Metodologi for Sputum induktion og laboratorium behandling

The technique of sputum induction and processing is a recognized non-invasive method allowing the collection and analysis of cells from the airways, which ...

Introduction of Intracapsular Rotary-cut Procedures (IRCP): A Modified Hysteromyomectomy Procedures Facilitating Fertility Preservation

Introduction of Intracapsular Rotary-cut Procedures IRCP: A Modified Hysteromyomectomy Procedures Facilitating Fertility Preservation

Indførelsen af Intracapsular Rotary-cut procedurer (IRCP): en modificeret Hysteromyomectomy procedurer at lette fertilitet bevarelse

Uterine fibroids are common benign tumors in the female reproductive system. A hysterectomy is the most effective treatment for symptomatic fibroids. For ...

Learning Modern Laryngeal Surgery in a Dissection Laboratory

Læring Moderne larynx kirurgi i en dissektion Laboratory

Surgery for laryngeal malignancies requires millimetric accuracy from the different endoscopic and open techniques available. Practice of this surgery is ...

Orthotopic Kidney Auto-Transplantation in a Porcine Model Using 24 Hours Organ Preservation And Continuous Telemetry

Ortopisk nyre auto-transplantation i en porcine model ved hjælp af 24 timers organbevarelse og kontinuerlig telemetri

In the present era of organ transplantation with critical organ shortage, various strategies are employed to expand the pool of available allografts for ...

OP-IVM: Combining In vitro Maturation after Oocyte Retrieval with Gynecological Surgery

OP-IVM: Kombination af in vitromodning efter oocyt-hentning med gynækologisk kirurgi

The use of in vitro maturation (IVM) before gynecological operation (OP-IVM) is an extension of conventional IVM that combines IVM following oocyte ...

Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction

Fertilitetsbevarelse hos patienter med svær dysfunktion i æggestokkene

Ovarian function progressively declines during aging and in some pathophysiological conditions including karyotype abnormality, autoimmune diseases, ...

Improved Rodent Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion Injury

Forbedret gnavermodel af myokardieiskæmi og reperfusionsskade

Myocardial ischemia and reperfusion injury (MIRI), induced by coronary heart disease (CHD), causes damage to the cardiomyocytes. Furthermore, evidence ...