Name: fertility preservation through oocyte vitrification: clinical and laboratory perspectives
Uploaded: 2021-09-16T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives at JoVE.com

1. Work-up en klinische counseling
OPMERKING: In het geval van patiënten die om oncologische redenen vruchtbaarheidsbehoud nodig hebben, zorg er dan voor dat er geen wachtlijst is voor het plannen van overleg en dat de afspraak zo snel mogelijk wordt verstrekt.
<ol><li>Bekijk de medische geschiedenis en eerdere documentatie en beoordeel de algemene gezondheidstoestand van de patiënt.</li>
	<li>Noteer alle informatie (inclusief de toestemming van de oncoloog om eierstokstimulatie te onderga...

Klinische overwegingen 
Hoewel de opkomende strategieën, zoals ovariële weefsel cryopreservatie en in vitro rijping zijn onderzocht, is oöcyt vitrification na COS de gouden standaardtechniek voor vruchtbaarheidsbehoud. In dit scenario moet het aantal teruggewonnen oöcyten en cryopreserved in de kortst mogelijke tijd worden gemaximaliseerd, omdat de meeste kankerpatiënten slechts baat kunnen hebben bij één eierstokcyclus voordat ze met hun kankerbehandeling(en) moeten be...

De ontwikkeling en implementatie van een efficiënt cryopreservatieprogramma voor menselijke oöcyten is een belangrijke doorbraak geweest in de reproductieve geneeskunde. Volgens recent bewijs is vitrificatie de meest effectieve strategie om cryopreserve metaphase II (MII) oöcyten te cryopreserve, omdat het resulteert in statistisch hogere overlevingspercentages in vergelijking met langzaam bevriezen, onafhankelijk van de patiëntenpopulatie (onvruchtbare patiënten of oöcytdonatieprogramma)1,2,3. De opmerkelijke verwezenlijkingen van oöcyt vitrification leidden de Praktijkcommissies van de Amerikaanse Maatschappij voor Reproductieve Geneeskunde (ASRM) en de Maatschappij voor Geassisteerde Reproductieve Technologie (SART) om deze techniek uit te spreken om het meest efficiënt voor electieve vruchtbaarheidsbehoud in postpubertal vrouwen, voor zowel medische als niet-medische aanwijzingen4,5,6uit te spreken . Medische indicaties voor vruchtbaarheidsbehoud omvatten (i) kanker en auto-immuunziekten die therapieën7 vereisen, zoals radiotherapie, cytotoxische chemotherapie en endocriene therapie (waarvan het schadelijke effect op de eierstokreserve geassocieerd is met de leeftijd van de moeder, evenals het type en de dosis van de behandeling); ii) eierstokaandoeningen waarvoor herhaalde of radicale chirurgie nodig is (zoals endometriose)8; en iii) genetische aandoeningen (bijv. X-fragile) of voortijdig eierstokfalen. Bovendien is vruchtbaarheidsbehoud een waardevolle optie geworden voor alle vrouwen die hun ouderlijke doelstelling om niet-medische redenen (ook bekend als sociale bevriezing) niet hebben bereikt.
Ongeacht de indicatie voor vruchtbaarheidsbehoud en volgens de belangrijkste internationale richtlijnen voor vruchtbaarheidsbehoud, moeten alle patiënten die bereid zijn hun oöcyten te vitriferen, passende begeleiding krijgen om te worden geïnformeerd over hun realistische kans op succes, de kosten, risico's en beperkingen van de procedure9,10,11,12,13. Het belangrijkste is dat het duidelijk moet zijn dat het vitrificeren van een cohort MII-oöcyten geen zwangerschap garandeert, maar dat het een grotere kans van slagen biedt voor toekomstige in-vitrofertilisatiebehandeling (IVF), indien nodig14. In dit opzicht is de leeftijd van de vrouw op het moment van oöcyt vitrificatie zeker de belangrijkste beperkende factor15, aangezien gevorderde moederleeftijd (AMA; >35 jaar) de belangrijkste oorzaak is van vrouwelijke onvruchtbaarheid16. Naast een progressieve vermindering van de ovariële reserve, ama wordt geassocieerd met een aantasting van oöcyt competentie als gevolg van defecte fysiologische paden zoals metabolisme, epigenetische regulatie, celcyclus checkpoints, en meiotische segregatie17. Daarom hangt het redelijke aantal eieren tot vitrify voornamelijk af van de leeftijd van de moeder. Bij vrouwen jonger dan 36 jaar zijn ten minste 8-10 MII-oöcyten18 nodig om de kans op succes te maximaliseren. Over het algemeen geldt: hoe hoger het aantal verglaasde oöcyten, hoe groter de kans op succes. Daarom is het aanpassen van ovariële stimulatie op basis van ovariële reservemarkers zoals anti-Mülleriaanse hormoonspiegels (AMH) of antrale follikeltelling (AFC) cruciaal om de ovariële reserve in de kortst mogelijke tijd volledig te benutten.
De veiligheid van de gehele procedure is het andere belangrijke punt bij het inschrijven van patiënten voor vruchtbaarheidsbehoud. Clinici moeten de beste strategieën gebruiken om de risico's te minimaliseren en (i)ovariële hyperstimulatiesyndroom (OHSS) te voorkomen door veilige benaderingen te gebruiken, zoals het gonadotrofine-releasing hormone (GnRH) antagonistprotocol gevolgd door een GnRH-agonist trigger19 en (ii) het afgelegen, maar mogelijk, risico op peritoneale bloedingen, letsel aan de bekkenstructuren (ureter, darm, appendix, zenuwen) of bekkeninfectie tijdens het ophalen van oöcyten. Ten slotte worden (iii) traditionele stimulatieschema's geassocieerd met suprafysiologisch serumestradiol en worden daarom niet aanbevolen bij oestrogeengevoelige ziekten zoals borstkanker. Protocollen met aromataseremmers (zoals letrozol of tamoxifen) zijn in deze gevallen geschikter20,21. In de laboratoriumomgeving is het meest wijdverspreide protocol voor oöcyt vitrificatie nog steeds het protocol dat voor het eerst werd beschreven door Kuwayama en collega's2,23, dat bestaat uit een stapsgewijze procedure waarbij cryoprotectiva (CPA's) geleidelijk worden toegevoegd. In de eerste fase (evenwicht/uitdroging) worden oöcyten blootgesteld in een CPA-oplossing die 7,5% v/v ethyleenglycol en 7,5% v/v dimethylsulfoxide (DMSO) bevat, terwijl in de tweede fase oöcyten worden verplaatst naar een vitrificatieoplossing met 15% v/v ethyleenglycol en 15% v/v DMSO, plus 0,5 mol/L-sucrose. Na een korte incubatie in het medium vitrificatie kunnen de oöcyten in speciaal ontworpen, open cryodevicen worden geplaatst en uiteindelijk in vloeibare stikstof bij -196 °C worden gedompeld om tot gebruik te worden opgeslagen.
Hier is het gehele klinische en laboratoriumwerk van een vruchtbaarheidsbehoudsbehandeling beschreven door (i) aanbevelingen voor objectieve en evidence-based counseling, (ii) gericht op de kosteneffectiviteit van de procedure, en (iii) het beschrijven van de meest geschikte strategieën om de ovariële reserve volledig te benutten en het aantal teruggewonnen oöcyten in de kortst mogelijke tijd te maximaliseren. De evaluatie van de ovariële reserve, de definitie van een ideaal stimulatieprotocol, evenals het ophalen van oöcyten, denudatie en vitrificatieprocedures zullen worden gedetailleerd, samen met benaderingen om hun effectiviteit, efficiëntie en veiligheid te maximaliseren. Aangezien er andere protocollen of aanpassingen van dit protocol in de literatuur bestaan, zijn de representatieve resultaten en de discussiesecties van dit manuscript alleen van toepassing op deze procedure.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Collection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermometer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test tube Warmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tri-gas incubator</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td>MCO-5M-PE</td>
			<td>02/CO2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum Pump</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-MAR-5200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSCM (Continuos single culture complete) medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90165</td>
			<td>IVF culture medium supplemented with HSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ovum Aspiration Needle (Single lumen)</td>
			<td>Cook</td>
			<td colspan="2">K-OSN-1730-B-60</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primaria Dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353803</td>
			<td>Corning Primaria Dish 100x20 mm style standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round- bottom tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352001</td>
			<td>Falcon 14ml Round Bottom Polystyrene Test tube with snap cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round- bottom tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352003</td>
			<td>Oocyte collection tubes/ Falcon 5ml 12x75 Round Bottom Polipropilene Test tube with snap cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber Bulb</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z111589-12EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass Pasteur pipettes</td>
			<td>Hunter Scientific</td>
			<td>PPB150-100PL</td>
			<td>Pipette Pasteur Cotonate, 150mm, MEA e CE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Denudation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 incubator</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>Galaxy 14S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>66003</td>
			<td>p20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>k-System Incubator</td>
			<td>Coopersurgical</td>
			<td>G210Invicell</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;l</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin</td>
			<td>thermoFisher Scietific</td>
			<td>9988</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90101</td>
			<td>80 IU/mL of hyaluronidase enzyme in HEPES-buffered HTF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 4-well plate with sliding lid</td>
			<td>ThermoFisher Scietific</td>
			<td>176740</td>
			<td>Multidishes 4 wells (Nunc)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF One well dish</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353653</td>
			<td>Falcon 60 x 15 mm TC treated center-well IVF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified HTF Medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90126</td>
			<td>HEPES-Buffered medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber Bulb</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z111589-12EA</td>
			<td>1 mL for pasteur pipettes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass Pasteur pipettes</td>
			<td>Hunter Scientific</td>
			<td>PPB150-100PL</td>
			<td>Pipette Pasteur Cotonate, 150 mm, MEA e CE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette&#160; tips (140 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1140-10BS-6</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (130 &#181;m )</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1130-10BS-7</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (170 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1170-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Timer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>p200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Container for Cooling Rack</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td></td>
			<td>Liquid nitrogen container for vitrification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9988</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15 mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60 x 15 mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 6-well</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-SW02</td>
			<td>OOSAFE&#160;6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified HTF Medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90126</td>
			<td>HEPES-Buffered medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (170 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1170-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Freeze kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90133-so</td>
			<td>2 Vials of ES (Equilibration Solution, 2 x 1 mL) and 2 Vials of VS (Vitrification Solution, 2 x 1 mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrifit</td>
			<td>Coopersurgical Origio</td>
			<td>42782001A</td>
			<td>VitriFit&#160; Box</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Timer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>p200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>k-System Incubator</td>
			<td>Coopersurgical</td>
			<td>G210Invicell</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Container for Cooling Rack</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td></td>
			<td>Liquid nitrogen container for vitrification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSCM (Continuos single culture complete) medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90165</td>
			<td>IVF culture medium supplemented with HSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15 mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 4-well plate with sliding lid</td>
			<td>ThermoFisher Scietific</td>
			<td>176740</td>
			<td>Multidishes 4 wells (Nunc)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 6-well</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-SW02</td>
			<td>OOSAFE&#174;&#160;6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SAtripping pipette tips (300&#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1300-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Thaw kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90137-so</td>
			<td>4 Vials of TS (Thawing Solution, 4 x 2 mL) + 1 Vial of DS (Dilution Solution, 1 x 2 mL) +1 Vial of WS (Washing Solution, 1 x 2 mL)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fertility preservation through oocyte vitrification: clinical and laboratory perspectives

Het behoud van de vruchtbaarheid van vrouwen is cruciaal in een multifunctioneel gezondheidszorgsysteem dat zorgt voor de toekomstige kwaliteit van leven van patiënten. Oöcyt cryopreservatie wordt erkend door verschillende internationale wetenschappelijke verenigingen als de gouden standaard voor vruchtbaarheidsbehoud bij postpubertale vrouwen, voor zowel medische als niet-medische indicaties. De belangrijkste medische indicaties zijn oncologische ziekten, gynaecologische ziekten zoals ernstige endometriose, systemische ziekten die de eierstokreserve in gevaar brengen en genetische aandoeningen met voortijdige menopauze. Dit document beschrijft het gehele klinische en laboratoriumwerk van een behandeling van het vruchtbaarheidsbehoud door aanbevelingen voor objectieve en bewijsmateriaal-gebaseerde begeleiding te beschrijven. Bovendien richt het zich op de effectiviteit van de procedure en beschrijft het de meest geschikte strategieën om de ovariële reserve volledig te benutten en het aantal teruggewonnen oöcyten in de kortst mogelijke tijd te maximaliseren. De evaluatie van de ovariële reserve, de definitie van een ideaal stimulatieprotocol, evenals het ophalen van oöcyten, denudatie en vitrificatieprocedures zijn gedetailleerd, samen met benaderingen om hun effectiviteit, efficiëntie en veiligheid te maximaliseren.

Overzicht van het vruchtbaarheidsbehoudsprogramma in het centrum
Over een periode van 12 jaar (2008-2020) ondergingen 285 vrouwen ten minste één oöcytterugwinning die de vitrificatie van het hele cohort van verzamelde volwassen eieren met zich meebracht. De meeste van deze vrouwen (n =250) ondergingen een enkele retrieval, en 35 ondergingen meerdere retrievals. De redenen voor het ophalen van oöcyten voor eier vitrificatie zijn samengevat in 4 categorieën: medisch (behalv...

Watch this Scientific Journal Video about Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives at JoVE.com

Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives

Oöcyt cryopreservatie wordt erkend door verschillende internationale wetenschappelijke verenigingen als de gouden standaard voor vruchtbaarheidsbehoud bij postpubertale vrouwen. De aangewezen klinische en laboratoriumstrategieën verzekeren maximumeffectiviteit, efficiency, en veiligheid van vruchtbaarheidsbehoudsbehandelingen.

Vruchtbaarheidsbehoud door oöcyt vitrificatie: klinische en laboratoriumperspectieven

Preserving female fertility is crucial in a multifunctional healthcare system that takes care of patients' future quality of life. Oocyte cryopreservation ...

De oöcyt vitrificatie en de opwarmingsprocedures zijn essentieel voor vruchtbaarheidsbehoud. Door dit protocol te volgen zoals aangetoond, kan een gebruiker de effectiviteit van deze procedures maximaliseren. Vruchtbaarheidsbehoud voor oöcyt vitrificatie is vandaag een gevestigde en ethisch aanvaardbare aanpak.Het maakt het mogelijk om effectieve en consistente klinische resultaten te bereiken en de morele en wettelijke beperking in verband met embryo cryopreservatie te overwinnen. Om vaardigheid met het vitrificatieproces te bereiken, is het belangrijk om vertrouwd te raken met alle kritieke punten van het protocol, met bijzondere aandacht voor de blootstellingstijd van de monsters aan de cryoprotectiva. Binnen 38 uur na het ophalen en onmiddellijk na de denudatie, label alle plastic benodigdheden met de naam, ID en het type oplossing van de patiënt en vraag een getuige om de informatie van de patiënt over het cryo-apparaat te bevestigen.Wanneer alle benodigdheden zijn geëtiketteerd, moet u elke flacon met oöcyten meerdere keren voorzichtig omkeren om een 30 microliter druppel HEPES-buffermedium aangevuld met menselijk serumalbumine en een aangrenzende druppel equilibratieoplossing van 30 microliter op een petrischaaltje te mengen en te plaatsen. Gebruik de stripperpipet om de oöcyten in de eerste druppel te plaatsen en een brug van medium naar een 30 microliter druppel equilibratieoplossing te creëren om een geleidelijke toename van de concentratie van de cryoprotectanten te verkrijgen. Voeg na drie minuten een tweede druppel van 30 microliter equilibratieoplossing toe aan de plaat en gebruik de pipet om een middelgrote brug tussen de druppels oplossing te creëren.Terwijl de oöcyten op elkaar zijn, voegt u één druppel equilibratieoplossing van 30 microliter toe voor elk cryo-apparaat dat op de plaat moet worden gebruikt. Verplaats de oöcyten na drie minuten gedurende zes tot negen minuten in de pure equilibratieoplossing, zodat de oöcyten weer op hun oorspronkelijke grootte kunnen terugkeren. Wanneer de oöcyten zijn hersteld, bereidt u een centrale ivf-schotel met één milliliter vitrificatieoplossing.Breng de oöcyten in zo min mogelijk medium over op de schaal en verplaats ze voorzichtig om eventuele overtollige equilibratieoplossing te verwijderen. Plaats ongeveer 10 seconden voor het einde van de incubatie een cryo-apparaat met het etiket met de informatie van de patiënt onder de microscoop en pas de focus op de punt van het cryo-apparaat aan. Plaats de oöcyten op het cryo-apparaat naast de punt in de minimale hoeveelheid vitrificatieoplossing en verplaats de stripperpipet uit de buurt van de oöcyten om overtollige vitrificatieoplossing te verwijderen, waardoor de oöcyten bedekt blijven met een dunne laag medium.Dompel het cryo-apparaat snel in vloeibare stikstof en schud het apparaat snel om eventuele luchtbellen van het oppervlak te verwijderen. Houd de beschermkap van het cryo-apparaat vast met een pincet en vul de dop met vloeibare stikstof voordat u het apparaat in de dop steekt terwijl u de propyleenstrips in vloeibare stikstof houdt. Bewaar het cryo-apparaat vervolgens in een visotube met de informatie van de patiënt en werk het laboratoriumblad bij.Voor het opwarmen van oöcyten, draai elke flacon ontdooi-, verdunnings- en wasoplossing voorzichtig om die op kamertemperatuur is opgewarmd en voeg een milliliter ontdooioplossing toe aan de centrale put van een petrischaal gedurende een incubatietijd van ten minste een uur bij 37 graden Celsius. Label alle plastic benodigdheden met de naam en ID van de patiënt en het type oplossing en vraag een getuige om de informatie van de patiënt over het cryo-apparaat te bevestigen. Voeg voor elk te verwarmen apparaat 200 microliter verdunningsoplossing toe aan de eerste put van een plaat met zes putten en voeg een gelijk volume wasoplossing toe aan de tweede en derde put van de plaat.Voeg PBS toe aan het gebied aan de buitenkant van de putten om verdamping van de oplossing te voorkomen. Plaats de schotel van ontdooioplossing onder de stereomicroscoop en stel de scherpstelling in op het midden van de schotel. Draai voorzichtig om de beschermkap van een cryo-apparaat te verwijderen terwijl u de propyleenstrips in vloeibare stikstof houdt en breng het cryo-apparaat zo snel mogelijk van de vloeibare stikstof in de ontdooioplossing over om het risico van devitrificatie te voorkomen.Concentreer je na één minuut op de punt van het cryo-apparaat om de oöcyten te lokaliseren en gebruik uiteindelijk een stripperpipet om de oöcyten voorzichtig van het apparaat los te maken. Gebruik een stripperpipet met een diameter van 170 micron om de oöcyten en een klein volume ontdooioplossing over te brengen in de verdunningsoplossing in de eerste put van de zes putplaat. Na drie minuten verplaatst u de oöcyten gedurende vijf minuten in de eerste wasput.Breng aan het einde van de incubatie de oöcyten over naar de tweede wasput en incubeer gedurende één minuut bij 37 graden Celsius voordat u de oöcyten gedurende een uur in een geschikt volume van het voorgeëlibreerde IVF-kweekmedium brengt en het laboratoriumblad bijwerkt. Gedurende een periode van 12 jaar ondergingen 285 vrouwen ten minste één oöcytterugwinning die de vitrificatie van het hele cohort van verzamelde volwassen eieren met zich meebracht. De meeste van deze vrouwen ondergingen een enkele terugwinning.35 ondergingen meerdere retrievals. De redenen voor het ondergaan van oöcyt ophalen voor ei vitrification werden over het algemeen gekenmerkt als medisch anders dan kanker, kanker, niet-medisch, en andere. Patiënten met een medische reden voor ei vitrificatie en patiënten die vruchtbaarheidsbehoud ondergaan vanwege kanker waren jonger en vertoonden hogere antrale folliculaire tellingen dan patiënten met niet-medische of andere redenen.Aangezien de gemiddelde rijpingspercentages echter iets lager waren in de medische redenen patiënten, was het aantal oöcyten dat gemiddeld werd gesyreerd vergelijkbaar tussen de groepen. Ongeveer de helft van de patiënten met andere medische redenen dan kanker, en de meerderheid van de patiënten met andere redenen voor eier vitrificatie daadwerkelijk teruggekeerd voor opwarming. Omgekeerd gebruikten zeer weinig patiënten die vruchtbaarheidsbehoud ondergingen voor kanker of niet-medische redenen hun verglaasde oöcyten voor IVF.Ondanks verschillen in de verstreken tijd tussen vitrificatie en opwarming, was de overlevingskans van de oöcyten vergelijkbaar tussen patiëntengroepen, wat de werkzaamheid en veiligheid van de oöcyt vitrificatie en opwarmingsprotocollen bevestigde. Bovendien was de overlevingskans onafhankelijk van de ervaring van de vitrificatie- en opwarmingsoperator. De meest cruciale stappen die de consistentie van de resultaten kunnen beïnvloeden, zijn die met betrekking tot opwarming.Daarom is het erg belangrijk om het volume en de temperatuur van de ontdooioplossingen zorgvuldig te regelen. Ovariële weefsel cryopreservatie de enige strategie die momenteel wordt onderzocht als een optie voor pre-puberale patiënten. Hoewel veelbelovend, heeft deze aanpak een belangrijke beperking die de toepassing ervan beperkt.

Research

JoVE Journal

Medicine

Imaging Glioma Initiation In Vivo Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window

Imaging Glioma Initiation In Vivo Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window

Imaging glioom Initiatie<em&gt; In Vivo</em&gt; Door middel van een gepolijst en versterkte Thin-schedel Schedel Window

Glioma is the one of the most lethal forms of human cancer. The most effective glioma therapy to date-surgery followed by radiation treatment-offers ...

Clinical Assessment of Spatiotemporal Gait Parameters in Patients and Older Adults

Clinical Assessment van Spatiotemporal gangbeeld bij patiënten en oudere volwassenen

Spatial and temporal characteristics of human walking are frequently evaluated to identify possible gait impairments, mainly in orthopedic and ...

Functional Human Liver Preservation and Recovery by Means of Subnormothermic Machine Perfusion

Functionele menselijke lever behoud en herstel door middel van Subnormothermic Machine perfusie

There is currently a severe shortage of liver grafts available for transplantation.  Novel organ preservation techniques are needed to expand the pool of ...

Methodology for Sputum Induction and Laboratory Processing

Methodologie voor Sputum inductie en laboratorium Processing

The technique of sputum induction and processing is a recognized non-invasive method allowing the collection and analysis of cells from the airways, which ...

Introduction of Intracapsular Rotary-cut Procedures (IRCP): A Modified Hysteromyomectomy Procedures Facilitating Fertility Preservation

Introduction of Intracapsular Rotary-cut Procedures IRCP: A Modified Hysteromyomectomy Procedures Facilitating Fertility Preservation

Invoering van Intracapsular Rotary-cut Procedures (IRCP): A bewerkt Hysteromyomectomy Procedures vergemakkelijken van behoud van de vruchtbaarheid

Uterine fibroids are common benign tumors in the female reproductive system. A hysterectomy is the most effective treatment for symptomatic fibroids. For ...

Learning Modern Laryngeal Surgery in a Dissection Laboratory

Het leren van moderne laryngeale chirurgie in een Dissection Laboratory

Surgery for laryngeal malignancies requires millimetric accuracy from the different endoscopic and open techniques available. Practice of this surgery is ...

Orthotopic Kidney Auto-Transplantation in a Porcine Model Using 24 Hours Organ Preservation And Continuous Telemetry

Orthotopische nier auto-transplantatie in een varkensmodel met behulp van 24 uur orgaanbehoud en continue telemetrie

In the present era of organ transplantation with critical organ shortage, various strategies are employed to expand the pool of available allografts for ...

OP-IVM: Combining In vitro Maturation after Oocyte Retrieval with Gynecological Surgery

OP-IVM: In vitro rijping combineren na oöcyten ophalen met gynaecologische chirurgie

The use of in vitro maturation (IVM) before gynecological operation (OP-IVM) is an extension of conventional IVM that combines IVM following oocyte ...

Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction

Vruchtbaarheidsbehoud bij patiënten met ernstige ovariële disfunctie

Ovarian function progressively declines during aging and in some pathophysiological conditions including karyotype abnormality, autoimmune diseases, ...

Improved Rodent Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion Injury

Verbeterd knaagdiermodel van myocardiale ischemie en reperfusieletsel

Myocardial ischemia and reperfusion injury (MIRI), induced by coronary heart disease (CHD), causes damage to the cardiomyocytes. Furthermore, evidence ...