Name: fertility preservation through oocyte vitrification: clinical and laboratory perspectives
Uploaded: 2021-09-16T15:00:00
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1. Travail et counseling clinique
REMARQUE: Dans le cas de patients nécessitant une préservation de la fertilité pour des raisons oncologiques, assurez-vous qu’il n’y a pas de liste d’attente pour planifier la consultation et que le rendez-vous est fourni dès que possible.
<ol><li>Examinez les antécédents médicaux et la documentation antérieure et évaluez l’état de santé général du patient.</li>
	<li>Enregistrer toutes les informations (y compris l’approbation de l’o...

Considérations cliniques 
Bien que des stratégies émergentes, telles que la cryoconservation du tissu ovarien et la maturation in vitro, aient été explorées, la vitrification des ovocytes après COS est la technique de référence pour la préservation de la fertilité. Dans ce scénario, le nombre d’ovocytes prélevés et cryoconservés devrait être maximisé dans les plus brefs délais, car la plupart des patientes atteintes de cancer pourraient bénéficier uniquem...

Le développement et la mise en œuvre d’un programme efficace de cryoconservation des ovocytes humains ont été une percée importante en médecine de la reproduction. Selon des preuves récentes, la vitrification est la stratégie la plus efficace pour cryoconserver les ovocytes de la métaphase II (MII), car elle entraîne des taux de survie statistiquement plus élevés par rapport à la congélation lente, indépendamment de la population de patients (patients infertiles ou programme de don d’ovocytes)1,2,3. Les réalisations remarquables de la vitrification ovocytaire ont conduit les comités de pratique de l’American Society for Reproductive Medicine (ASRM) et de la Society for Assisted Reproductive Technology (SART) à déclarer que cette technique était la plus efficace pour la préservation élective de la fertilité chez les femmes postpubères, tant pour les indications médicales que non médicales4,5,6. Les indications médicales pour la préservation de la fertilité comprennent (i) le cancer et les maladies auto-immunes qui nécessitent des thérapies7 telles que la radiothérapie, la chimiothérapie cytotoxique et la thérapie endocrinienne (dont l’effet néfaste sur la réserve ovarienne est associé à l’âge maternel ainsi qu’au type et à la dose du traitement); ii) les maladies de l’ovaire nécessitant une chirurgie répétée ou radicale (comme l’endométriose)8; et (iii) des affections génétiques (p. ex., X-fragile) ou une insuffisance ovarienne prématurée. En outre, la préservation de la fertilité est devenue une option précieuse pour toutes les femmes qui n’ont pas atteint leur objectif parental pour des raisons non médicales (également connu sous le nom de gel social).
Quelle que soit l’indication pour la préservation de la fertilité et conformément aux principales directives internationales sur la préservation de la fertilité, tous les patients désireux de vitrifier leurs ovocytes doivent recevoir des conseils appropriés pour être informés de leurs chances réalistes de succès, des coûts, des risques et des limites de la procédure9,10 , 11,12,13. Plus important encore, il devrait être clair que la vitrification d’une cohorte d’ovocytes MII n’assure pas une grossesse, mais qu’elle offre une plus grande chance de succès pour le futur traitement de fécondation in vitro (FIV), si nécessaire14. À cet égard, l’âge de la femme au moment de la vitrification ovocytaire est certainement le facteur limitant le plus important15 car l’âge maternel avancé (AMA; >35 ans) est la principale cause d’infertilité féminine16. Outre une réduction progressive de la réserve ovarienne, l’AMA est associée à une altération de la compétence ovocytaire due à des voies physiologiques défectueuses telles que le métabolisme, la régulation épigénétique, les points de contrôle du cycle cellulaire et la ségrégation méiotique17. Par conséquent, le nombre raisonnable d’ovules à vitrifier dépend principalement de l’âge de la mère. Chez les femmes de moins de 36 ans, au moins 8 à 10 ovocytes MII18 sont nécessaires pour maximiser les chances de succès. En général, plus le nombre d’ovocytes vitrifiés est élevé, plus la probabilité de succès est élevée. Par conséquent, l’adaptation de la stimulation ovarienne en fonction de marqueurs de réserve ovarienne tels que les niveaux d’hormone anti-müllérienne (AMH) ou le nombre de follicules antraux (AFC) est cruciale pour exploiter pleinement la réserve ovarienne dans les plus brefs délais.
La sécurité de l’ensemble de la procédure est l’autre question clé lors de l’inscription de patients pour la préservation de la fertilité. Les cliniciens devraient employer les meilleures stratégies pour minimiser les risques et prévenir (i) le syndrome d’hyperstimulation ovarienne (SHO) en utilisant des approches sûres telles que le protocole d’antagoniste de l’hormone de libération des gonadotrophines (GnRH) suivi d’un déclencheur agoniste de la GnRH19 et (ii) les risques éloignés, mais possibles, de saignement péritonéal, de lésion des structures pelviennes (uretère, intestin, appendice, nerfs) ou d’infection pelvienne lors du prélèvement d’ovocytes. Enfin, (iii) les schémas thérapeutiques traditionnels de stimulation sont associés à l’œstradiol sérique supraphysiologique et ne sont donc pas recommandés dans les maladies sensibles aux œstrogènes telles que le cancer du sein. Les protocoles impliquant des inhibiteurs de l’aromatase (tels que le létrozole ou le tamoxifène) sont plus appropriés dans ces cas20,21. En laboratoire, le protocole le plus répandu pour la vitrification ovocytaire est encore celui décrit pour la première fois par Kuwayama et ses collègues2,23, qui consiste en une procédure par étapes impliquant l’ajout progressif de cryoprotecteurs (CPA). Dans la première phase (équilibre/déshydratation), les ovocytes sont exposés dans une solution de CPA contenant 7,5 % v/v d’éthylène glycol et 7,5 % v/v de diméthylsulfoxyde (DMSO), tandis que dans la deuxième phase, les ovocytes sont déplacés vers une solution de vitrification avec 15 % v/v d’éthylène glycol et 15 % v/v de DMSO, plus 0,5 mol/L de saccharose. Après une courte incubation dans le milieu de la vitrification, les ovocytes peuvent être placés dans des cryodispositifs ouverts spécialement conçus et finalement plongés dans de l’azote liquide à -196 °C pour être conservés jusqu’à utilisation.
Ici, l’ensemble du bilan clinique et de laboratoire d’un traitement de préservation de la fertilité a été décrit en (i) décrivant des recommandations pour un conseil objectif et fondé sur des preuves, (ii) en se concentrant sur le rapport coût-efficacité de la procédure et (iii) en décrivant les stratégies les plus appropriées pour exploiter pleinement la réserve ovarienne et maximiser le nombre d’ovocytes prélevés dans les plus brefs délais. L’évaluation de la réserve ovarienne, la définition d’un protocole de stimulation idéal, ainsi que les procédures de prélèvement d’ovocytes, de dénudation et de vitrification seront détaillées ainsi que des approches visant à maximiser leur efficacité, leur efficience et leur innocuité. Comme d’autres protocoles ou adaptations de ce protocole existent dans la littérature, les résultats représentatifs et les sections de discussion de ce manuscrit ne s’appliquent qu’à cette procédure.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Collection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermometer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test tube Warmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tri-gas incubator</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td>MCO-5M-PE</td>
			<td>02/CO2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum Pump</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-MAR-5200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSCM (Continuos single culture complete) medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90165</td>
			<td>IVF culture medium supplemented with HSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ovum Aspiration Needle (Single lumen)</td>
			<td>Cook</td>
			<td colspan="2">K-OSN-1730-B-60</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primaria Dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353803</td>
			<td>Corning Primaria Dish 100x20 mm style standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round- bottom tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352001</td>
			<td>Falcon 14ml Round Bottom Polystyrene Test tube with snap cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round- bottom tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352003</td>
			<td>Oocyte collection tubes/ Falcon 5ml 12x75 Round Bottom Polipropilene Test tube with snap cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber Bulb</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z111589-12EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass Pasteur pipettes</td>
			<td>Hunter Scientific</td>
			<td>PPB150-100PL</td>
			<td>Pipette Pasteur Cotonate, 150mm, MEA e CE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Denudation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 incubator</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>Galaxy 14S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>66003</td>
			<td>p20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>k-System Incubator</td>
			<td>Coopersurgical</td>
			<td>G210Invicell</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;l</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin</td>
			<td>thermoFisher Scietific</td>
			<td>9988</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90101</td>
			<td>80 IU/mL of hyaluronidase enzyme in HEPES-buffered HTF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 4-well plate with sliding lid</td>
			<td>ThermoFisher Scietific</td>
			<td>176740</td>
			<td>Multidishes 4 wells (Nunc)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF One well dish</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353653</td>
			<td>Falcon 60 x 15 mm TC treated center-well IVF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified HTF Medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90126</td>
			<td>HEPES-Buffered medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber Bulb</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z111589-12EA</td>
			<td>1 mL for pasteur pipettes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass Pasteur pipettes</td>
			<td>Hunter Scientific</td>
			<td>PPB150-100PL</td>
			<td>Pipette Pasteur Cotonate, 150 mm, MEA e CE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette&#160; tips (140 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1140-10BS-6</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (130 &#181;m )</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1130-10BS-7</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (170 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1170-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Timer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>p200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Container for Cooling Rack</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td></td>
			<td>Liquid nitrogen container for vitrification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9988</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15 mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60 x 15 mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 6-well</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-SW02</td>
			<td>OOSAFE&#160;6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified HTF Medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90126</td>
			<td>HEPES-Buffered medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (170 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1170-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Freeze kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90133-so</td>
			<td>2 Vials of ES (Equilibration Solution, 2 x 1 mL) and 2 Vials of VS (Vitrification Solution, 2 x 1 mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrifit</td>
			<td>Coopersurgical Origio</td>
			<td>42782001A</td>
			<td>VitriFit&#160; Box</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Timer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>p200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>k-System Incubator</td>
			<td>Coopersurgical</td>
			<td>G210Invicell</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Container for Cooling Rack</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td></td>
			<td>Liquid nitrogen container for vitrification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSCM (Continuos single culture complete) medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90165</td>
			<td>IVF culture medium supplemented with HSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15 mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 4-well plate with sliding lid</td>
			<td>ThermoFisher Scietific</td>
			<td>176740</td>
			<td>Multidishes 4 wells (Nunc)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 6-well</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-SW02</td>
			<td>OOSAFE&#174;&#160;6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SAtripping pipette tips (300&#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1300-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Thaw kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90137-so</td>
			<td>4 Vials of TS (Thawing Solution, 4 x 2 mL) + 1 Vial of DS (Dilution Solution, 1 x 2 mL) +1 Vial of WS (Washing Solution, 1 x 2 mL)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fertility preservation through oocyte vitrification: clinical and laboratory perspectives

La préservation de la fertilité féminine est cruciale dans un système de santé multifonctionnel qui prend soin de la qualité de vie future des patients. La cryoconservation des ovocytes est reconnue par plusieurs sociétés scientifiques internationales comme la référence en matière de préservation de la fertilité chez les femmes postpubères, tant pour des indications médicales que non médicales. Les principales indications médicales sont les maladies oncologiques, les maladies gynécologiques telles que l’endométriose sévère, les maladies systémiques compromettant la réserve ovarienne et les conditions génétiques impliquant une ménopause prématurée. Cet article décrit l’ensemble du bilan clinique et de laboratoire d’un traitement de préservation de la fertilité en décrivant des recommandations pour des conseils objectifs et fondés sur des preuves. En outre, il se concentre sur l’efficacité de la procédure et décrit les stratégies les plus appropriées pour exploiter pleinement la réserve ovarienne et maximiser le nombre d’ovocytes prélevés dans les plus brefs délais. L’évaluation de la réserve ovarienne, la définition d’un protocole de stimulation idéal, ainsi que les procédures de prélèvement d’ovocytes, de dénudation et de vitrification ont été détaillées ainsi que des approches visant à maximiser leur efficacité, leur efficience et leur innocuité.

Aperçu du programme de préservation de la fertilité au centre
Sur une période de 12 ans (2008-2020), 285 femmes ont subi au moins un prélèvement d’ovocytes impliquant la vitrification de toute la cohorte d’ovules matures collectés. La plupart de ces femmes (n = 250) ont subi une seule récupération, et 35 ont subi plusieurs récupérations. Les raisons de subir un prélèvement d’ovocytes pour la vitrification des ovules sont résumées en 4 catégories: médical...

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Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives

La cryoconservation des ovocytes est reconnue par plusieurs sociétés scientifiques internationales comme la norme d’or pour la préservation de la fertilité chez les femmes postpubères. Des stratégies cliniques et de laboratoire appropriées garantissent une efficacité, une efficience et une sécurité maximales des traitements de préservation de la fertilité.

Préservation de la fertilité par vitrification des ovocytes : perspectives cliniques et de laboratoire

Preserving female fertility is crucial in a multifunctional healthcare system that takes care of patients' future quality of life. Oocyte cryopreservation ...

La vitrification des ovocytes et les procédures de réchauffement sont essentielles à la préservation de la fertilité. Le respect de ce protocole tel que démontré permet à un utilisateur de maximiser l’efficacité de ces procédures. La préservation de la fertilité pour la vitrification des ovocytes est aujourd’hui une approche établie et éthiquement acceptable.Il permet d’obtenir des résultats cliniques efficaces et cohérents et de surmonter les limites morales et juridiques associées à la cryoconservation des embryons. Pour maîtriser le processus de vitrification, il est important de se familiariser avec tous les points critiques du protocole, en accordant une attention particulière au temps d’exposition des échantillons aux cryoprotecteurs. Dans les 38 heures suivant la récupération et immédiatement après la dénudation, étiquetez toutes les fournitures en plastique avec le nom, la pièce d’identité et le type de solution du patient, et demandez à un témoin de confirmer les informations du patient sur le dispositif cryogénique.Lorsque toutes les fournitures ont été étiquetées, inverser soigneusement chaque flacon d’ovocytes plusieurs fois pour mélanger et placer une goutte de 30 microlitres de milieu tampon HEPES complétée par de l’albumine sérique humaine et une goutte adjacente de 30 microlitres de solution d’équilibrage sur une boîte de Pétri. Utilisez la pipette décapante pour placer les ovocytes dans la première goutte et créer un pont de milieu à une goutte de 30 microlitres de solution d’équilibrage pour obtenir une augmentation progressive de la concentration des cryoprotecteurs. Après trois minutes, ajoutez une deuxième goutte de 30 microlitres de solution d’équilibrage à la plaque et utilisez la pipette pour créer un pont moyen entre les gouttes de solution.Pendant que les ovocytes s’équilibrent, ajoutez une goutte de 30 microlitres de solution d’équilibrage pour chaque dispositif cryogénique à utiliser sur la plaque. Après trois minutes, déplacez les ovocytes dans la solution d’équilibrage pure pendant six à neuf minutes pour permettre aux ovocytes de retrouver leur taille initiale. Lorsque les ovocytes se sont rétablis, préparez un plat de FIV de puits central contenant un millilitre de solution de vitrification.Transférer les ovocytes dans le plat dans le moins de milieu possible et les déplacer soigneusement pour éliminer tout excès de solution d’équilibrage. Environ 10 secondes avant la fin de l’incubation, placez un dispositif cryogénique étiqueté avec les informations du patient sous le microscope et ajustez la mise au point sur la pointe du dispositif cryogénique. Placez les ovocytes sur le dispositif cryogénique à côté de la pointe dans la quantité minimale de solution de vitrification et éloignez la pipette du décapant des ovocytes pour éliminer tout excès de solution de vitrification, laissant les ovocytes recouverts d’une fine couche de milieu.Plongez rapidement le dispositif cryogénique dans de l’azote liquide et secouez rapidement l’appareil pour éliminer les bulles d’air de sa surface. En tenant le capuchon protecteur du dispositif cryogénique avec une pince à épiler, remplissez le bouchon d’azote liquide avant d’insérer le dispositif dans le bouchon tout en gardant les bandes de propylène dans l’azote liquide. Ensuite, stockez le dispositif cryogénique dans un visotube étiqueté avec les informations du patient et mettez à jour la fiche de laboratoire.Pour le réchauffement des ovocytes, inverser soigneusement chaque flacon de décongelation, de dilution et de solution de lavage réchauffé à température ambiante, et ajouter un millilitre de solution de décongélation au puits central d’une boîte de Pétri pour une incubation d’au moins une heure à 37 degrés Celsius. Étiquetez toutes les fournitures en plastique avec le nom et la pièce d’identité du patient et le type de solution, et demandez à un témoin de confirmer les informations du patient sur le dispositif cryogénique. Pour chaque dispositif à réchauffer, ajouter 200 microlitres de solution de dilution au premier puits d’une plaque de six puits et ajouter un volume égal de solution de lavage aux deuxième et troisième puits de la plaque.Ajouter le PBS à la zone située à l’extérieur des puits pour éviter l’évaporation de la solution. Placez la boîte de solution de décongélation sous le stéréomicroscope et ajustez la mise au point au centre de la parabole. Tournez soigneusement pour retirer le capuchon protecteur d’un dispositif cryogénique tout en maintenant les bandes de propylène dans de l’azote liquide et transférez le dispositif cryogénique de l’azote liquide dans la solution de décongélation le plus rapidement possible pour éviter le risque de dévitrification.Après une minute, concentrez-vous sur la pointe du dispositif cryogénique pour localiser les ovocytes et éventuellement utilisez une pipette décapante pour libérer doucement les ovocytes de l’appareil. Utilisez une pipette décapante de 170 microns de diamètre pour transférer les ovocytes et un petit volume de solution de décongélation dans la solution de dilution dans le premier puits de la plaque de six puits. Après trois minutes, déplacez les ovocytes dans le premier puits de la solution de lavage pendant cinq minutes.À la fin de l’incubation, transférer les ovocytes dans le deuxième puits de la solution de lavage et incuber à 37 degrés Celsius pendant une minute avant de transférer les ovocytes dans un volume approprié de milieu de culture de FIV préébibli pendant une heure et de mettre à jour la feuille de laboratoire. Sur une période de 12 ans, 285 femmes ont subi au moins un prélèvement d’ovocytes impliquant la vitrification de toute la cohorte d’ovules matures collectés. La plupart de ces femmes ont subi une seule récupération.35 ont subi de multiples récupérations. Les raisons du prélèvement d’ovocytes pour la vitrification des ovules étaient généralement caractérisées comme médicales autres que le cancer, le cancer, les produits non médicaux et autres. Les patients ayant une raison médicale pour la vitrification des ovules et les patients subissant une préservation de la fertilité en raison d’un cancer étaient plus jeunes et présentaient un nombre folliculaire antral plus élevé que les patients ayant des raisons non médicales ou autres.Cependant, comme les taux de maturation moyens étaient légèrement inférieurs chez les patients pour raisons médicales, le nombre d’ovocytes vitrifiés en moyenne était similaire entre les groupes. Environ la moitié des patients ayant des raisons médicales autres que le cancer, et la majorité des patients ayant d’autres raisons de vitrification des œufs sont en fait revenus pour se réchauffer. Inversement, très peu de patients qui ont subi une préservation de la fertilité pour des raisons cancéreuses ou non médicamenteuses ont utilisé leurs ovocytes vitrifiés pour la FIV.Malgré les différences dans le temps écoulé entre la vitrification et le réchauffement, le taux de survie des ovocytes était similaire entre les groupes de patients, confirmant l’efficacité et l’innocuité des protocoles de vitrification et de réchauffement des ovocytes. De plus, le taux de survie était indépendant de l’expérience de l’opérateur de vitrification et de réchauffement. Les étapes les plus cruciales qui peuvent affecter la cohérence des résultats sont celles liées au réchauffement.Par conséquent, il est vraiment important de contrôler soigneusement le volume et la température des solutions de décongélation. La cryoconservation du tissu ovarien est la seule stratégie actuellement à l’étude en tant qu’option pour les patientes pré-pubères. Bien que prometteuse, cette approche présente d’importantes limites qui ont limité son application.

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Foie conservation et de récupération fonctionnelle humaine par des moyens de Subnormothermic machine à perfusion

There is currently a severe shortage of liver grafts available for transplantation.  Novel organ preservation techniques are needed to expand the pool of ...

Methodology for Sputum Induction and Laboratory Processing

Méthodologie pour l’Induction de l’expectoration et traitement en laboratoire

The technique of sputum induction and processing is a recognized non-invasive method allowing the collection and analysis of cells from the airways, which ...

Introduction of Intracapsular Rotary-cut Procedures (IRCP): A Modified Hysteromyomectomy Procedures Facilitating Fertility Preservation

Introduction of Intracapsular Rotary-cut Procedures IRCP: A Modified Hysteromyomectomy Procedures Facilitating Fertility Preservation

Introduction de procédures de coupe rotatif intracapsulaires (PIRC) : A modifié Hysteromyomectomy procédures facilitant la préservation de la fertilité

Uterine fibroids are common benign tumors in the female reproductive system. A hysterectomy is the most effective treatment for symptomatic fibroids. For ...

Learning Modern Laryngeal Surgery in a Dissection Laboratory

Apprendre la chirurgie laryngeale moderne dans un laboratoire de dissection

Surgery for laryngeal malignancies requires millimetric accuracy from the different endoscopic and open techniques available. Practice of this surgery is ...

Orthotopic Kidney Auto-Transplantation in a Porcine Model Using 24 Hours Organ Preservation And Continuous Telemetry

Auto-transplantation orthotopique de rein dans un modèle porcin utilisant la conservation d’organe de 24 heures et la télémétrie continue

In the present era of organ transplantation with critical organ shortage, various strategies are employed to expand the pool of available allografts for ...

OP-IVM: Combining In vitro Maturation after Oocyte Retrieval with Gynecological Surgery

OP-IVM: Combiner la maturation in vitro après le prélèvement d’ovocytes avec la chirurgie gynécologique

The use of in vitro maturation (IVM) before gynecological operation (OP-IVM) is an extension of conventional IVM that combines IVM following oocyte ...

Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction

Préservation de la fertilité chez les patientes présentant un dysfonctionnement ovarien sévère

Ovarian function progressively declines during aging and in some pathophysiological conditions including karyotype abnormality, autoimmune diseases, ...

Improved Rodent Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion Injury

Modèle de rongeur amélioré de l’ischémie myocardique et de la lésion de reperfusion

Myocardial ischemia and reperfusion injury (MIRI), induced by coronary heart disease (CHD), causes damage to the cardiomyocytes. Furthermore, evidence ...