Name: fertility preservation through oocyte vitrification: clinical and laboratory perspectives
Uploaded: 2021-09-16T15:00:00
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1. Aufarbeitung und klinische Beratung
HINWEIS: Im Falle von Patienten, die aus onkologischen Gründen eine Erhaltung der Fruchtbarkeit benötigen, stellen Sie sicher, dass es keine Warteliste für die Planung der Konsultation gibt und der Termin so schnell wie möglich zur Verfügung gestellt wird.
<ol><li>Untersuchen Sie die Krankengeschichte und die vorherige Dokumentation und beurteilen Sie den allgemeinen Gesundheitszustand des Patienten.</li>
	<li>Zeichnen Sie alle Informationen (einsc...

Klinische Überlegungen 
Obwohl neue Strategien wie die Kryokonservierung von Eierstockgewebe und die In-vitro-Reifung erforscht wurden, ist die Vitrifikation von Eizellen nach COS die Goldstandardtechnik zur Erhaltung der Fruchtbarkeit. In diesem Szenario sollte die Anzahl der entnommenen und kryokonservierten Eizellen in kürzester Zeit maximiert werden, da die meisten Krebspatientinnen möglicherweise nur von einem Eierstockzyklus profitieren, bevor sie mit ihrer Krebsbehan...

Die Entwicklung und Implementierung eines effizienten Kryokonservierungsprogramms für menschliche Eizellen war ein bedeutender Durchbruch in der Reproduktionsmedizin. Jüngsten Erkenntnissen zufolge ist die Vitrifikation die effektivste Strategie zur Kryokonservierung von Eizellen der Metaphase II (MII), da sie unabhängig von der Patientenpopulation (unfruchtbare Patientinnen oder Eizellspendeprogramm) zu statistisch höheren Überlebensraten im Vergleich zum langsamen Einfrieren führt1,2,3. Die bemerkenswerten Errungenschaften der Eizellvitrifikation veranlassten die Praxiskomitees der American Society for Reproductive Medicine (ASRM) und der Society for Assisted Reproductive Technology (SART), diese Technik als die effektivste für die elektive Fruchtbarkeitserhaltung bei postpubertären Frauen zu erklären, sowohl für medizinische als auch für nicht-medizinische Indikationen4,5,6. Medizinische Indikationen zur Erhaltung der Fruchtbarkeit umfassen (i) Krebs und Autoimmunerkrankungen, die Therapien7 wie Strahlentherapie, zytotoxische Chemotherapie und endokrine Therapie erfordern (deren schädliche Wirkung auf die Eierstockreserve mit dem Alter der Mutter sowie art und dosis der Behandlung verbunden ist); ii) Eierstockerkrankungen, die eine wiederholte oder radikale Operation erfordern (z. B. Endometriose)8; und (iii) genetische Erkrankungen (z. B. X-fragile) oder vorzeitiges Ovarialversagen. Darüber hinaus ist die Erhaltung der Fruchtbarkeit zu einer wertvollen Option für alle Frauen geworden, die ihr elterliches Ziel aus nicht-medizinischen Gründen nicht erreicht haben (auch bekannt als Social Freezing).
Unabhängig von der Indikation zur Erhaltung der Fruchtbarkeit und gemäß den wichtigsten internationalen Richtlinien zur Erhaltung der Fruchtbarkeit sollten alle Patientinnen, die bereit sind, ihre Eizellen zu vitrifizieren, eine angemessene Beratung erhalten, um über ihre realistischen Erfolgschancen, die Kosten, Risiken und Einschränkungen des Verfahrens informiert zu werden9,10,11,12,13. Am wichtigsten ist, dass klar sein sollte, dass die Vitrifizierung einer Kohorte von MII-Eizellen keine Schwangerschaft gewährleistet, sondern dass sie eine höhere Erfolgschance für die zukünftige In-vitro-Fertilisation (IVF) bietet, falls erforderlich14. In dieser Hinsicht ist das Alter der Frau zum Zeitpunkt der Vitrifizierung der Eizellen sicherlich der wichtigste limitierende Faktor15, da das fortgeschrittene mütterliche Alter (AMA; >35 Jahre) die Hauptursache für weibliche Unfruchtbarkeit ist16. Neben einer fortschreitenden Verringerung der Ovarialreserve ist AMA mit einer Beeinträchtigung der Eizellkompetenz aufgrund defekter physiologischer Wege wie Stoffwechsel, epigenetische Regulation, Zellzyklus-Checkpoints und meiotische Segregation verbunden17. Daher hängt die angemessene Anzahl der zu vitrifizierenden Eier hauptsächlich vom Alter der Mutter ab. Bei Frauen unter 36 Jahren sind mindestens 8-10 MII-Eizellen18 erforderlich, um die Erfolgschancen zu maximieren. Im Allgemeinen gilt: Je höher die Anzahl der vitrifizierten Eizellen, desto höher ist die Erfolgswahrscheinlichkeit. Daher ist die Anpassung der ovariellen Stimulation an ovariellen Reservemarkern wie Anti-Müller-Hormon (AMH) oder Antralfollikelzahl (AFC) entscheidend, um die Eierstockreserve in kürzester Zeit voll auszuschöpfen.
Die Sicherheit des gesamten Verfahrens ist das andere Schlüsselthema bei der Aufnahme von Patienten zur Erhaltung der Fruchtbarkeit. Kliniker sollten die besten Strategien anwenden, um die Risiken zu minimieren und (i) das ovarielle Hyperstimulationssyndrom (OHSS) zu verhindern, indem sie sichere Ansätze wie das Gonadotrophin-Releasing-Hormon (GnRH) -Antagonistenprotokoll verwenden, gefolgt von einem GnRH-Agonistenauslöser19 und (ii) den entfernten, aber möglichen Risiken von Peritonealblutungen, Verletzungen der Beckenstrukturen (Harnleiter, Darm, Blinddarm, Nerven) oder Beckeninfektionen während der Eizellentnahme. Schließlich (iii) traditionelle Stimulationsschemata sind mit supraphysiologischem Serumestradiol verbunden und werden daher bei östrogenempfindlichen Erkrankungen wie Brustkrebs nicht empfohlen. Protokolle mit Aromatasehemmern (wie Letrozol oder Tamoxifen) sind in diesen Fällen besser geeignet20,21. Im Labor ist das am weitesten verbreitete Protokoll zur Vitrifikation von Eizellen immer noch das von Kuwayama und Kollegen 2,23beschriebene Protokoll, das auseinemschrittweisen Verfahren besteht, bei dem Kryoprotektoren (CPAs) schrittweise hinzugefügt werden. In der ersten Phase (Gleichgewicht/Dehydratation) werden Eizellen in einer CPA-Lösung exponiert, die 7,5% v/v Ethylenglykol und 7,5% v/v Dimethylsulfoxid (DMSO) enthält, während in der zweiten Phase Eizellen in eine Vitrifikationslösung mit 15% v/v Ethylenglykol und 15% v/v DMSO plus 0,5 mol/L Saccharose bewegt werden. Nach einer kurzen Inkubation im Medium der Vitrifikation können die Eizellen in speziell entwickelte, offene Kryodevices gelegt und schließlich bei -196 °C in flüssigen Stickstoff getaucht werden, um bis zur Verwendung gelagert zu werden.
Hier wurde die gesamte klinische und Laboraufarbeitung einer Fruchtbarkeitserhaltungsbehandlung beschrieben, indem (i) Empfehlungen für eine objektive und evidenzbasierte Beratung skizziert wurden, (ii) die Kosteneffizienz des Verfahrens im Mittelpunkt stand und (iii) die am besten geeigneten Strategien beschrieben wurden, um die Eierstockreserve vollständig auszuschöpfen und die Anzahl der in kürzester Zeit entnommenen Eizellen zu maximieren. Die Bewertung der Eierstockreserve, die Definition eines idealen Stimulationsprotokolls sowie die Verfahren zur Entnahme, Denudation und Vitrifikation von Eizellen werden zusammen mit Ansätzen zur Maximierung ihrer Wirksamkeit, Effizienz und Sicherheit detailliert beschrieben. Da andere Protokolle oder Anpassungen dieses Protokolls in der Literatur existieren, gelten die repräsentativen Ergebnisse und die Diskussionsabschnitte dieses Manuskripts nur für dieses Verfahren.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Collection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermometer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Test tube Warmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tri-gas incubator</td>
			<td>Panasonic</td>
			<td>MCO-5M-PE</td>
			<td>02/CO2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacuum Pump</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-MAR-5200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSCM (Continuos single culture complete) medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90165</td>
			<td>IVF culture medium supplemented with HSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ovum Aspiration Needle (Single lumen)</td>
			<td>Cook</td>
			<td colspan="2">K-OSN-1730-B-60</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primaria Dish</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353803</td>
			<td>Corning Primaria Dish 100x20 mm style standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round- bottom tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352001</td>
			<td>Falcon 14ml Round Bottom Polystyrene Test tube with snap cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round- bottom tubes</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352003</td>
			<td>Oocyte collection tubes/ Falcon 5ml 12x75 Round Bottom Polipropilene Test tube with snap cap</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber Bulb</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z111589-12EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass Pasteur pipettes</td>
			<td>Hunter Scientific</td>
			<td>PPB150-100PL</td>
			<td>Pipette Pasteur Cotonate, 150mm, MEA e CE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Denudation</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO2 incubator</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>Galaxy 14S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>66003</td>
			<td>p20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>k-System Incubator</td>
			<td>Coopersurgical</td>
			<td>G210Invicell</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;l</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin</td>
			<td>thermoFisher Scietific</td>
			<td>9988</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hyaluronidase</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90101</td>
			<td>80 IU/mL of hyaluronidase enzyme in HEPES-buffered HTF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 4-well plate with sliding lid</td>
			<td>ThermoFisher Scietific</td>
			<td>176740</td>
			<td>Multidishes 4 wells (Nunc)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF One well dish</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353653</td>
			<td>Falcon 60 x 15 mm TC treated center-well IVF</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified HTF Medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90126</td>
			<td>HEPES-Buffered medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rubber Bulb</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>Z111589-12EA</td>
			<td>1 mL for pasteur pipettes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile glass Pasteur pipettes</td>
			<td>Hunter Scientific</td>
			<td>PPB150-100PL</td>
			<td>Pipette Pasteur Cotonate, 150 mm, MEA e CE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette&#160; tips (140 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1140-10BS-6</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (130 &#181;m )</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1130-10BS-7</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (170 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1170-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Timer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>p200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Container for Cooling Rack</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td></td>
			<td>Liquid nitrogen container for vitrification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Serum Albumin</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9988</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15 mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60 x 15 mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 6-well</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-SW02</td>
			<td>OOSAFE&#160;6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Modified HTF Medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90126</td>
			<td>HEPES-Buffered medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stripping pipette tips (170 &#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1170-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Freeze kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90133-so</td>
			<td>2 Vials of ES (Equilibration Solution, 2 x 1 mL) and 2 Vials of VS (Vitrification Solution, 2 x 1 mL)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrifit</td>
			<td>Coopersurgical Origio</td>
			<td>42782001A</td>
			<td>VitriFit&#160; Box</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Warming</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electronic Timer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flexipet adjustable handle set</td>
			<td>Cook</td>
			<td>G18674</td>
			<td>Stripper&#160; holder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gilson Pipetman</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td>p200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>k-System Incubator</td>
			<td>Coopersurgical</td>
			<td>G210Invicell</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Markers</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminar Flow Hood</td>
			<td>IVF TECH</td>
			<td></td>
			<td>Grade A air flow</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Container for Cooling Rack</td>
			<td>Kitazato</td>
			<td></td>
			<td>Liquid nitrogen container for vitrification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Leica M80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopur epTIPS Rack</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30075331</td>
			<td>Micropipettes epTIPS Biopur 2-200 &#181;L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CSCM (Continuos single culture complete) medium</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90165</td>
			<td>IVF culture medium supplemented with HSA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF culture dish (60 x 15 mm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>353802</td>
			<td>Corning Primaria Falcon Dish 60X15mm TC Primaria standard cell culture dish</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 4-well plate with sliding lid</td>
			<td>ThermoFisher Scietific</td>
			<td>176740</td>
			<td>Multidishes 4 wells (Nunc)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVF dish 6-well</td>
			<td>Oosafe</td>
			<td>OOPW-SW02</td>
			<td>OOSAFE&#174;&#160;6 WELL DISH WITH STRAW HOLDER</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mineral Oil for embryo culture</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>9305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SAtripping pipette tips (300&#181;m)</td>
			<td>Cook</td>
			<td>K-FPIP-1300-10BS-5</td>
			<td>PIPETTE FLEXIPETS PER DENUDING</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrification Thaw kit</td>
			<td>Fujifilm Irvine Scientific</td>
			<td>90137-so</td>
			<td>4 Vials of TS (Thawing Solution, 4 x 2 mL) + 1 Vial of DS (Dilution Solution, 1 x 2 mL) +1 Vial of WS (Washing Solution, 1 x 2 mL)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fertility preservation through oocyte vitrification: clinical and laboratory perspectives

Die Erhaltung der weiblichen Fruchtbarkeit ist in einem multifunktionalen Gesundheitssystem, das sich um die zukünftige Lebensqualität der Patienten kümmert, von entscheidender Bedeutung. Die Kryokonservierung von Eizellen wird von mehreren internationalen wissenschaftlichen Gesellschaften als Goldstandard für die Erhaltung der Fruchtbarkeit bei postpubertären Frauen anerkannt, sowohl für medizinische als auch für nicht-medizinische Indikationen. Die wichtigsten medizinischen Indikationen sind onkologische Erkrankungen, gynäkologische Erkrankungen wie schwere Endometriose, systemische Erkrankungen, die die Eierstockreserve beeinträchtigen, und genetische Erkrankungen mit vorzeitiger Menopause. Dieses Papier beschreibt die gesamte klinische und Laboraufarbeitung einer Fruchtbarkeitserhaltungsbehandlung, indem es Empfehlungen für eine objektive und evidenzbasierte Beratung skizziert. Darüber hinaus konzentriert es sich auf die Wirksamkeit des Verfahrens und beschreibt die am besten geeigneten Strategien, um die Eierstockreserve vollständig auszuschöpfen und die Anzahl der in kürzester Zeit entnommenen Eizellen zu maximieren. Die Bewertung der Eierstockreserve, die Definition eines idealen Stimulationsprotokolls sowie die Verfahren zur Entnahme, Denudation und Vitrifikation von Eizellen wurden zusammen mit Ansätzen zur Maximierung ihrer Wirksamkeit, Effizienz und Sicherheit detailliert beschrieben.

Überblick über das Fruchtbarkeitserhaltungsprogramm im Zentrum
Über einen Zeitraum von 12 Jahren (2008-2020) wurden 285 Frauen mindestens einer Eizellentnahme unterzogen, was die Vitrifizierung der gesamten Kohorte der gesammelten reifen Eizellen beinhaltete. Die meisten dieser Frauen (n = 250) wurden einer einzigen Entnahme unterzogen, und 35 wurden mehreren Abrufen unterzogen. Die Gründe für die Eizellentnahme zur Vitrifizierung von Eizellen sind in 4 Kategorien zusamme...

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Fertility Preservation Through Oocyte Vitrification: Clinical and Laboratory Perspectives

Die Kryokonservierung von Eizellen wird von mehreren internationalen wissenschaftlichen Gesellschaften als Goldstandard für die Erhaltung der Fruchtbarkeit bei postpubertären Frauen anerkannt. Geeignete klinische und Laborstrategien gewährleisten maximale Wirksamkeit, Effizienz und Sicherheit von Fruchtbarkeitserhaltungsbehandlungen.

Fruchtbarkeitserhaltung durch Eizellvitrifikation: Klinische und Laborperspektiven

Preserving female fertility is crucial in a multifunctional healthcare system that takes care of patients' future quality of life. Oocyte cryopreservation ...

Die Vitrifikation der Eizellen und die Erwärmungsverfahren sind für den Erhalt der Fruchtbarkeit unerlässlich. Die Befolge einhaltung dieses Protokolls ermöglicht es einem Benutzer, die Wirksamkeit dieser Verfahren zu maximieren. Die Erhaltung der Fruchtbarkeit für die Vitrifikation von Eizellen ist heute ein etablierter und ethisch akzeptabler Ansatz.Es ermöglicht, effektive und konsistente klinische Ergebnisse zu erzielen und die moralischen und rechtlichen Einschränkungen zu überwinden, die mit der Kryokonservierung von Embryonen verbunden sind. Um den Vitrifikationsprozess zu beherrschen, ist es wichtig, sich mit allen kritischen Punkten des Protokolls vertraut zu machen und dabei besonders auf die Expositionszeit der Proben gegenüber den Kryoprotektoren zu achten. Beschriften Sie innerhalb von 38 Stunden nach der Entnahme und unmittelbar nach der Entleerung alle Kunststoffvorräte mit dem Namen, der ID und der Art der Lösung des Patienten und bitten Sie einen Zeugen, die Informationen des Patienten auf dem Kryogerät zu bestätigen.Wenn alle Vorräte markiert sind, kehren Sie jede Durchstechflasche mit Eizellen mehrmals vorsichtig um, um sie zu mischen und einen 30-Mikroliter-Tropfen HEPES-Puffermedium, ergänzt mit humanem Serumalbumin und einem 30-Mikroliter-benachbarten Tropfen Gleichgewichtslösung, auf eine Petrischale zu legen. Verwenden Sie die Stripperpipette, um die Eizellen in den ersten Tropfen zu legen und eine Brücke aus Medium zu einem 30-Mikroliter-Tropfen Gleichgewichtslösung zu schaffen, um eine allmähliche Erhöhung der Konzentration der Kryoprotektoren zu erhalten. Nach drei Minuten einen zweiten 30-Mikroliter-Tropfen Gleichgewichtslösung auf die Platte geben und mit der Pipette eine mittlere Brücke zwischen den Lösungstropfen schaffen.Während die Eizellen im Gleichgewicht sind, fügen Sie einen 30-Mikroliter-Tropfen Gleichgewichtslösung für jedes Kryogerät hinzu, das auf der Platte verwendet werden soll. Nach drei Minuten die Eizellen für sechs bis neun Minuten in die reine Gleichgewichtslösung bringen, damit die Eizellen wieder ihre ursprüngliche Größe erreichen können. Wenn sich die Eizellen erholt haben, bereiten Sie eine zentrale IVF-Schale mit einem Milliliter Vitrifikationslösung vor.Übertragen Sie die Eizellen in so wenig Medium wie möglich in die Schüssel und bewegen Sie sie vorsichtig, um überschüssige Gleichgewichtslösung zu entfernen. Legen Sie etwa 10 Sekunden vor dem Ende der Inkubation ein kryoiges Gerät mit den Informationen des Patienten unter das Mikroskop und stellen Sie den Fokus auf die Spitze des Kryogeräts ein. Legen Sie die Eizellen auf das Kryogerät neben der Spitze in der minimalen Menge an Vitrifikationslösung und bewegen Sie die Stripperpipette von den Eizellen weg, um überschüssige Vitrifikationslösung zu entfernen, wobei die Eizellen mit einer dünnen Mediumschicht bedeckt bleiben.Tauchen Sie das Kryogerät schnell in flüssigen Stickstoff und schütteln Sie das Gerät schnell, um Luftblasen von seiner Oberfläche zu entfernen. Halten Sie die Schutzkappe des Kryogeräts mit einer Pinzette, füllen Sie die Kappe mit flüssigem Stickstoff, bevor Sie das Gerät in die Kappe einführen, während Sie die Propylenstreifen in flüssigem Stickstoff halten. Bewahren Sie dann das Kryogerät in einem Visotube auf, das mit den Informationen des Patienten beschriftet ist, und aktualisieren Sie das Laborblatt.Zur Erwärmung der Eizellen jede auf Raumtemperatur erwärmte Durchstechflasche mit Auftau-, Verdünnungs- und Waschlösung vorsichtig umkehren und einen Milliliter Auftaulösung in den zentralen Brunnen einer Petrischale für eine mindestens einstündige Inkubation bei 37 Grad Celsius geben. Beschriften Sie alle Kunststoffvorräte mit dem Namen und der ID des Patienten und der Art der Lösung und bitten Sie einen Zeugen, die Informationen des Patienten auf dem Kryogerät zu bestätigen. Für jedes zu erwärmenden Gerät fügen Sie 200 Mikroliter Verdünnungslösung in die erste Vertiefung einer Sechs-Well-Platte hinzu und fügen Sie ein gleiches Volumen an Waschlösung in die zweite und dritte Vertiefung der Platte hinzu.Fügen Sie PBS in den Bereich an der Außenseite der Brunnen hinzu, um die Verdunstung der Lösung zu verhindern. Legen Sie die Schale der Auftaulösung unter das Stereomikroskop und stellen Sie den Fokus auf die Mitte der Schüssel ein. Drehen Sie vorsichtig, um die Schutzkappe eines Kryogeräts zu entfernen, während die Propylenstreifen in flüssigem Stickstoff gehalten werden, und übertragen Sie das Kryogerät so schnell wie möglich vom flüssigen Stickstoff in die Auftaulösung, um das Risiko einer Devitrifizierung zu vermeiden.Konzentrieren Sie sich nach einer Minute auf die Spitze des Kryogeräts, um die Eizellen zu lokalisieren, und verwenden Sie schließlich eine Stripperpipette, um die Eizellen sanft aus dem Gerät zu lösen. Verwenden Sie eine Stripperpipette mit einem Durchmesser von 170 Mikron, um die Eizellen und ein kleines Volumen Auftaulösung in die Verdünnungslösung in der ersten Vertiefung der sechs Bohrplatten zu übertragen. Nach drei Minuten die Eizellen für fünf Minuten in die erste Vertiefung der Waschlösung bringen.Am Ende der Inkubation die Eizellen in die zweite Waschlösungsanlage übertragen und eine Minute lang bei 37 Grad Celsius inkubieren, bevor die Eizellen für eine Stunde in ein geeignetes Volumen des vorgleichgewichteten IVF-Kulturmediums überführt und das Laborblatt aktualisiert werden. Über einen Zeitraum von 12 Jahren wurden 285 Frauen mindestens einer Eizellentnahme unterzogen, was die Vitrifizierung der gesamten Kohorte der gesammelten reifen Eizellen beinhaltete. Die meisten dieser Frauen wurden einer einzigen Rückholung unterzogen.35 wurden mehrfach abzurufen. Die Gründe für die Eizellentnahme zur Vitrifizierung von Eizellen wurden im Allgemeinen als andere medizinische als Krebs, Krebs, nichtmedizinische und andere beschrieben. Patienten mit einem medizinischen Grund für die Vitrifikation von Eizellen und Patienten, die sich aufgrund von Krebs einer Fruchtbarkeitserhaltung unterzogen, waren jünger und zeigten höhere antrale Follikelzahlen als Patienten mit nichtmedizinischen oder anderen Gründen.Da die mittleren Reiferaten bei den medizinischen Gründen jedoch etwas niedriger waren, war die Anzahl der im Durchschnitt verglasten Eizellen zwischen den Gruppen ähnlich. Etwa die Hälfte der Patienten mit anderen medizinischen Gründen als Krebs und die Mehrheit der Patienten mit anderen Gründen für die Vitrifikation der Eizellen kehrten tatsächlich zur Erwärmung zurück. Umgekehrt verwendeten nur sehr wenige Patientinnen, die sich aus Krebs oder nichtmedizinischen Gründen einer Fruchtbarkeitserhaltung unterzogen hatten, ihre vitrifizierten Eizellen für die IVF.Trotz der Unterschiede in der Zeit zwischen Vitrifikation und Erwärmung war die Überlebensrate der Eizellen zwischen den Patientengruppen ähnlich, was die Wirksamkeit und Sicherheit der Vitrifikations- und Erwärmungsprotokolle der Eizellen bestätigte. Darüber hinaus war die Überlebensrate unabhängig von der Erfahrung des Vitrifikations- und Erwärmungsoperators. Die wichtigsten Schritte, die die Konsistenz der Ergebnisse beeinflussen können, sind diejenigen, die mit der Erwärmung zusammenhängen.Daher ist es wirklich wichtig, das Volumen und die Temperatur der Auftaulösungen sorgfältig zu kontrollieren. Die Kryokonservierung von Eierstockgewebe ist die einzige Strategie, die derzeit als Option für präpubertäre Patientinnen untersucht wird. Obwohl vielversprechend, hat dieser Ansatz wichtige Einschränkungen, die seine Anwendung einschränkten.

Research

JoVE Journal

Medicine

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Surgery for laryngeal malignancies requires millimetric accuracy from the different endoscopic and open techniques available. Practice of this surgery is ...

Orthotopic Kidney Auto-Transplantation in a Porcine Model Using 24 Hours Organ Preservation And Continuous Telemetry

Orthotopische Nieren-Autotransplantation in einem Schweinemodell mit 24 Stunden Organkonservierung und kontinuierlicher Telemetrie

In the present era of organ transplantation with critical organ shortage, various strategies are employed to expand the pool of available allografts for ...

OP-IVM: Combining In vitro Maturation after Oocyte Retrieval with Gynecological Surgery

OP-IVM: Kombination der In-vitro-Reifung nach Eizellentnahme mit gynäkologischer Chirurgie

The use of in vitro maturation (IVM) before gynecological operation (OP-IVM) is an extension of conventional IVM that combines IVM following oocyte ...

Fertility Preservation in Patients with Severe Ovarian Dysfunction

Fruchtbarkeitserhaltung bei Patientinnen mit schwerer Ovarialfunktionsstörung

Ovarian function progressively declines during aging and in some pathophysiological conditions including karyotype abnormality, autoimmune diseases, ...

Improved Rodent Model of Myocardial Ischemia and Reperfusion Injury

Verbessertes Nagetiermodell der Myokardischämie und Reperfusionsverletzung

Myocardial ischemia and reperfusion injury (MIRI), induced by coronary heart disease (CHD), causes damage to the cardiomyocytes. Furthermore, evidence ...